一種利用環(huán)糊精水溶液提取大豆異黃酮的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及藥物提取工藝研究領(lǐng)域，具體涉及一種利用環(huán)糊精水溶液提取大豆異 黃酮的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 環(huán)糊精是直鏈淀粉在由芽孢桿菌產(chǎn)生的環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶作用下生成的一 系列環(huán)狀低聚糖的總稱(chēng)，通常含有6~12個(gè)D-吡喃葡萄糖單元。其中研究得較多并且具 有重要實(shí)際意義的是含有6、7、8個(gè)葡萄糖單元的分子，分別稱(chēng)為alpha-、beta_和gama-環(huán) 糊精。根據(jù)X-線晶體衍射、紅外光譜和核磁共振波譜分析的結(jié)果，確定構(gòu)成環(huán)糊精分子的 每個(gè)D(+)_吡喃葡萄糖都是椅式構(gòu)象，各葡萄糖單元均以1，4-糖苷鍵結(jié)合成環(huán)，由于連 接葡萄糖單元的糖苷鍵不能自由旋轉(zhuǎn)，環(huán)糊精不是圓筒狀分子而是略呈錐形的圓環(huán)，尤以 β-環(huán)糊精最為常用，β-環(huán)糊精結(jié)構(gòu)成環(huán)狀中空筒狀，環(huán)筒外部是親水性的表面，內(nèi)部的 非極性基團(tuán)形成一個(gè)具有一定尺寸的疏水空腔，當(dāng)β -環(huán)糊精上每個(gè)葡萄糖殘基的2_，3_， 6-位羥基中的氫原子被羥丙基取代時(shí)，形成了羥丙基β-環(huán)糊精，羥丙基β-環(huán)糊精在醫(yī)藥 領(lǐng)域的主要應(yīng)用體現(xiàn)在（1)增加難溶性藥物的水溶性；(2)增加藥物穩(wěn)定性、提高藥物生物 利用度；⑶降低藥物的毒副作用；同時(shí)，羥丙基-β-環(huán)糊精可用于口服藥物、注射劑、粘膜 給藥系統(tǒng)（包括鼻粘膜、直腸、角膜等）、透皮吸收給藥系統(tǒng)、親脂性靶向藥物的載體，還可 用做蛋白質(zhì)的保護(hù)劑和穩(wěn)定劑。
[0003] 大豆異黃酮是存在于大豆中的生物活性成分，是一種具有多種重要生理活性的天 然營(yíng)養(yǎng)因子，是純天然的植物雌激，近年來(lái)的研究表明，大豆異黃酮具有防治絕經(jīng)期綜合 癥、癌癥、骨質(zhì)疏松癥、心血管疾病和早老性癡呆癥，以及美容、延緩衰老等多方面的生理作 用，對(duì)于高雌激素水平者，表現(xiàn)為抗激素活性，可防治乳腺、子宮內(nèi)膜、結(jié)腸、前列腺、肺、皮 膚等癌細(xì)胞的生長(zhǎng)和白血病，及其它心血管疾病。大豆提取物作為營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充食品使用，此 外，大豆異黃酮還顯著的降低了乳腺癌的發(fā)病率，但大豆異黃酮的資源十分有限，在含量較 高的大豆莢中也僅含〇. 1%~0.5%，而豆柏作為大豆油生產(chǎn)工業(yè)的副產(chǎn)品，常常只用作畜 禽飼料，其中的大豆異黃酮沒(méi)有得到很好的開(kāi)發(fā)應(yīng)用，這些豆柏除少部分用于發(fā)酵醬油、生 產(chǎn)大豆?jié)饪s蛋白或分離蛋白外，絕大多數(shù)被用作飼料，大豆中含有的生理活性物質(zhì)大豆異 黃酮留在豆柏中未被利用。
[0004] 普通大豆異黃酮難溶于水，在現(xiàn)有技術(shù)中，多是以醇提法對(duì)豆柏中的大豆異黃酮 進(jìn)行提取分離，例如專(zhuān)利號(hào)為201010489101.0的專(zhuān)利，其解決了大豆異黃酮分離的問(wèn)題， 但是提取上依舊采取的是醇提法，并且提取的過(guò)程較繁瑣；由于其溶解性極差，也就限制 了其在食品藥品中的添加與使用，同時(shí)在進(jìn)入人體后在人體的吸收利用度也不能達(dá)到預(yù)期 的效果，所以在水溶液中對(duì)大豆異黃酮的提取就需要探索一套科學(xué)地提取大豆異黃酮的工 藝，有利于充分利用豆柏資源的同時(shí)，也提高其在水溶液中的溶解度及穩(wěn)定性，為進(jìn)一步開(kāi) 發(fā)和研究大豆異黃酮生理功能奠定基礎(chǔ)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明設(shè)計(jì)開(kāi)發(fā)了一種利用環(huán)糊精水溶液提取大豆異黃酮的方法，目的是解決大 豆異黃酮在水溶液條件下提取過(guò)程中能源浪費(fèi)，操作不便，提取效率低等問(wèn)題，通過(guò)利用羥 丙基β-環(huán)糊精與大豆異黃酮的包合作用，使水溶液下的豆柏中的大豆異黃酮能夠高效提 取，同時(shí)，也利用了羥丙基β-環(huán)糊精具有溶血性低，安全性高，增加難溶性藥物穩(wěn)定性等 特點(diǎn)，使羥丙基環(huán)糊精能夠高效可靠的用于本發(fā)明中。
[0006] 本發(fā)明提供的技術(shù)方案為：
[0007] -種利用環(huán)糊精水溶液提取大豆異黃酮的方法，包括如下步驟：
[0008] 步驟一：稱(chēng)取待實(shí)驗(yàn)干燥豆柏1. 5~2. 0g，將待實(shí)驗(yàn)干燥豆柏研磨至80目~100 目豆柏粗品；
[0009] 步驟二：將所述豆柏粗品加入到環(huán)糊精水溶液中浸泡2~4h;其中，環(huán)糊精的質(zhì) 量占所述豆柏粗品質(zhì)量的5%~20%，所述豆柏粗品的質(zhì)量與水溶液的體積的料液比為 1 : 50 ~1 : 100 ;
[0010] 步驟三：將所述豆柏粗品和所述環(huán)糊精水溶液的混合液加熱提取0. 5h~2. 5h，加 熱提取溫度50°C~90°C，提取結(jié)束后，述豆柏粗品和所述環(huán)糊精混合液自然冷卻至室溫； [0011] 步驟四：計(jì)算出大豆異黃酮的轉(zhuǎn)移提取率。
[0012] 優(yōu)選的是，所述豆柏為脫脂豆柏。
[0013] 優(yōu)選的是，所述環(huán)糊精為羥丙基β-環(huán)糊精。
[0014] 優(yōu)選的是，所述步驟一中，所述豆柏粗品質(zhì)量為0. 5g。
[0015] 優(yōu)選的是，所述步驟二中，所述環(huán)糊精的質(zhì)量占所述豆柏粗品質(zhì)量的10 %~ 17. 5%。
[0016] 優(yōu)選的是，所述步驟二中，所述豆柏粗品的質(zhì)量與所述水溶液的體積的料液比為 1 : 75。
[0017] 優(yōu)選的是，所述步驟二中，所述混合液加熱提取1~2h。
[0018] 優(yōu)選的是，所述步驟三中，所述提取溫度60°C~80°C。
[0019] 優(yōu)選的是，所述步驟三中，在所述豆柏粗品和所述環(huán)糊精水溶液的混合液回流狀 態(tài)下進(jìn)行提取。
[0020] 優(yōu)選的是，所述步驟四中，計(jì)算大豆異黃酮的轉(zhuǎn)移提取率的方法為：提取轉(zhuǎn)移率
其中，c為提取液中大豆異黃酮濃度；V為提取液體積；m為提取時(shí)稱(chēng)得的豆柏實(shí) 際質(zhì)量;w為豆柏中大豆異黃酮含量。
[0021] 本發(fā)明所述的有益效果：
[0022] 1、羥丙基β-環(huán)糊精能夠有效增加大豆異黃酮在水中的溶解度，有效提高其穩(wěn)定 性，從而有效的提高水溶液下大豆異黃酮從豆柏中的轉(zhuǎn)移提取率；
[0023] 2、實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)單，操作方便，只需水提取即可，節(jié)約能耗，沒(méi)有污染物的產(chǎn)生。
【具體實(shí)施方式】
[0024]下面對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明，以令本領(lǐng)域技術(shù)人員參照說(shuō)明書(shū)文字能夠據(jù) 以實(shí)施。
[0025] 本發(fā)明提供一種利用環(huán)糊精水溶液提取大豆異黃酮的方法，包括如下步驟：
[0026] 步驟一：將待實(shí)驗(yàn)豆柏進(jìn)行脫脂處理，首先粗略稱(chēng)取待實(shí)驗(yàn)脫脂豆柏1. 5g~2. 0g 數(shù)份，將待實(shí)驗(yàn)豆柏研磨至1〇〇目豆柏粗品，再分別取等質(zhì)量的豆柏粗品樣品；
[0027] 步驟二：將稱(chēng)好的豆柏粗品加入到環(huán)糊精水溶液中浸泡2h~4h;其中，環(huán)糊精 的質(zhì)量占豆柏粗品質(zhì)量量的5%~20%，豆柏粗品的質(zhì)量與水溶液的體積的料液比為 1 : 50 ~1 : 100,g/mL;
[0028] 步驟三：將豆柏粗品和環(huán)糊精水溶液的混合液置于到圓底燒瓶中進(jìn)行加熱提取實(shí) 驗(yàn)，加熱提取溫度為50°C~90°C，提取時(shí)間為0. 5~2. 5h;其中，當(dāng)溫度達(dá)到實(shí)驗(yàn)溫度開(kāi)始 計(jì)時(shí)，實(shí)驗(yàn)完成后提取液趁熱過(guò)濾，自然冷卻至室溫，量取提取液的體積；
[0029] 步驟四：移取lmL提取液置于10mL容量瓶中，以純甲醇稀釋定容，超聲30min，稀 釋液離心（12000rpm，10min)后取上清液過(guò)濾（0. 22μηι)，續(xù)濾液進(jìn)樣分析，計(jì)算出大豆異 黃酮濃度；其中，通過(guò)公式提取轉(zhuǎn)移
算提取轉(zhuǎn)移率，c為提取液中大豆異黃 酮濃度，mg/mL;V為提取液體積，mL;m為提取時(shí)稱(chēng)得的?柏實(shí)際質(zhì)量，g;w為?柏中大?異 黃酮含量，mg/g。
[0030] 在另一種實(shí)施例中，環(huán)糊精為羥丙基β-環(huán)糊精，由于羥丙基β-環(huán)糊精在醫(yī)藥領(lǐng) 域的具有以下幾種優(yōu)勢(shì)：（1)增加難溶性藥物的水溶性；（2)增加藥物穩(wěn)定性、提高藥物生 物利用度；⑶降低藥物的毒副作用；同時(shí)，羥丙基-β-環(huán)糊精可用于口服藥物、注射劑、粘 膜給藥系統(tǒng)（包括鼻粘膜、直腸、角膜等）、透皮吸收給藥系統(tǒng)、親脂性靶向藥物的載體，還 可用做蛋白質(zhì)的保護(hù)劑和穩(wěn)定劑，所以，在進(jìn)行本發(fā)明實(shí)驗(yàn)時(shí)，選擇羥丙基β-環(huán)糊精作為 一種優(yōu)選，進(jìn)行藥材有效成分的提取。
[0031] 在另一種實(shí)施例中，實(shí)驗(yàn)步驟一中，作為一種優(yōu)選，將研磨后的豆柏粗品質(zhì)量選擇 為0. 5g，在實(shí)驗(yàn)室的條件下，合理的選擇0. 5g作為實(shí)驗(yàn)室的提取質(zhì)量，能夠合理的去選擇 后續(xù)的實(shí)驗(yàn)條件。
[0032] 在另一種實(shí)施例中，實(shí)驗(yàn)步驟一中，羥丙基環(huán)糊精的質(zhì)量占待實(shí)驗(yàn)豆柏質(zhì)量 的 10%~17. 5%〇
[0033] 在另一種實(shí)施例中，實(shí)驗(yàn)步驟二中，研磨后的豆柏粗品質(zhì)量與加入水溶液的體積 比（料液比）為1 : 75,g/mL。
[0034] 在另一種實(shí)施例中，實(shí)驗(yàn)步驟二中，作為一種優(yōu)選，進(jìn)行提取實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)時(shí)間選擇 為lh~2h。
[0035] 在另一種實(shí)施例中，步驟三中，升溫至60°C~80°C進(jìn)行提取，作為一種優(yōu)選，還進(jìn) 行了回流提取實(shí)驗(yàn)，使提取溫度達(dá)到溶液回流狀態(tài)，此時(shí)提取時(shí)間的計(jì)算以冷凝管中有回 流液體滴下時(shí)開(kāi)始計(jì)時(shí)。
[0036] 在本發(fā)明中，首先通過(guò)對(duì)料液比、提取方法、提取時(shí)間、提取溫度、羥丙基β-環(huán)糊 精用量等進(jìn)行單因素考察，進(jìn)一步設(shè)計(jì)正交實(shí)驗(yàn)對(duì)羥丙基β-環(huán)糊精輔助性提取大豆異黃 酮工藝進(jìn)行研究，總結(jié)利用羥丙基β-環(huán)糊精對(duì)大豆異黃酮的選擇性提取規(guī)律以及各因素 對(duì)其選擇提取的影響。
[0037] 實(shí)施例1 [0038] 1、色譜條件