專利名稱：豆粕中提取大豆異黃酮的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于保健食品技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種豆柏中提取大豆異黃酮的方法。
背景技術(shù)：
豆柏是大豆在用于食用油加工中產(chǎn)生的副產(chǎn)品，這些豆柏除少部分用于發(fā)酵醬油、生產(chǎn)大豆?jié)饪s蛋白或分離蛋白外，絕大多數(shù)被用作飼料，大豆中含有的生理活性物質(zhì)大豆異黃酮留在豆柏中未被利用。大量的試驗研究表明，大豆異黃酮具有降低膽固醇、減少心血管疾病、預(yù)防骨質(zhì)疏松及緩解更年期綜合癥的保健作用，而豆柏常作為飼料產(chǎn)量巨大，從豆柏中提取大豆異黃酮具有很大的開發(fā)前景。在現(xiàn)有的提取方法中，發(fā)明專利《大豆異黃酮主要單體組分的分離方法》(申請?zhí)?03135952. 3，公開號CN1528758A)公開了以甲醇為提取液，以硅膠為吸附劑，以氯仿_甲醇溶液為洗脫體系，得到染料木黃酮、大豆苷元、染料木苷及大豆苷四種大豆異黃酮單體組分，該方法得到的是單體化合物，不能當(dāng)作保健食品原料使用，另外，該方法要求原料中大豆異黃酮含量不低于40%。發(fā)明專利《提取大豆中異黃酮的方法》(申請?zhí)?8119864. 3，公開號CN1211573A)公開了全脂大豆粉經(jīng)脫脂、溶劑提取、過濾、濾液水解、柱層析分離、減壓濃縮和純化精制7個步驟得到大豆異黃酮，其中濾液水解采用二步水解法，該方法分離步驟較繁瑣，生產(chǎn)產(chǎn)生的廢水對環(huán)境污染較大，成本較高。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種豆柏中提取大豆異黃酮的方法，解決了現(xiàn)有方法對原料中大豆異黃酮含量要求較高和分離步驟繁瑣的問題。本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是豆柏中提取大豆異黃酮的方法，首先用乙醇提取豆柏中的大豆異黃酮，然后經(jīng)過萃取、層析、重結(jié)晶，最終得到純度大于60%的大豆異黃酮。該方法的具體步驟如下( I)提取豆柏中加入濃度為70 80%的乙醇，在60°C下提取2 3小時后經(jīng)真空減壓濃縮，回收乙醇，直至濃縮液中無乙醇?xì)馕稙橹梗?2)萃取向步驟(I)得到的濃縮液中加入乙酸乙酯進(jìn)行萃取，得到乙酸乙酯相，經(jīng)真空減壓濃縮，得到大豆異黃酮浸膏；(3)硅膠層析柱上樣步驟(2)得到的大豆異黃酮浸膏用乙醇溶解后與硅膠混合，攪拌均勻分散，干燥后加入裝填有硅膠的層析柱；(4)層析柱洗脫步驟(3)中的層析柱用洗脫液洗脫后，薄層層析法254nm紫外燈下檢測分析，合并收集254nm紫外吸收相同的部分，減壓濃縮得到大豆異黃酮粗品；
(5)重結(jié)晶步驟(4)得到的大豆異黃酮粗品用丙酮或者乙醇溶解，重結(jié)晶得到大豆異黃酮。本發(fā)明的特點還在于，其中，步驟(I)中豆柏與乙醇的重量體積比為I :3 I :5。其中，步驟(2)中濃縮液與乙酸乙酯的體積比為I :1 I :3。其中，步驟(3)中大豆異黃酮浸膏使用干法上層析柱，具體操作為大豆異黃酮浸膏用乙醇溶解后與適量80 100目硅膠攪拌，均勻分散，干燥后加入裝填80 100目硅膠的層析柱。其中，步驟(3)中層析柱中裝填的硅膠與大豆異黃酮浸膏重量比為3 :1 5 :1。
其中，步驟(4)中層析柱洗脫液為氯仿甲醇、氯仿丙酮或乙酸乙酯甲醇，其中氯仿甲醇的體積比為5 :1，氯仿丙酮的體積比為I :3，乙酸乙酯甲醇的體積比為7 :1。其中，步驟(4)中洗脫液在層析柱中的流速為I 5ml/min。本發(fā)明的有益效果是，本發(fā)明經(jīng)過乙醇提取、萃取、層析和重結(jié)晶，能夠較快的得到純度大于60%大豆異黃酮，其工藝簡單，分離成本較低。
具體實施例方式下面結(jié)合具體實施方式
對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。豆柏中提取大豆異黃酮的方法，首先用乙醇提取豆柏中的大豆異黃酮，然后經(jīng)過萃取、層析、重結(jié)晶，最終得到純度大于60%的大豆異黃酮。該方法的具體步驟如下( I)提取豆柏中加入濃度為70 80%的乙醇，豆柏與乙醇的重量體積比為I :3 I :5，在60°C下提取2 3小時后經(jīng)真空減壓濃縮，回收乙醇，直至濃縮液中無乙醇?xì)馕稙橹梗?2)萃取向步驟(I)得到的濃縮液中加入乙酸乙酯進(jìn)行萃取，濃縮液與乙酸乙酯的體積比為I :1 I :3，得到乙酸乙酯相，經(jīng)真空減壓濃縮，得到大豆異黃酮浸膏；大豆異黃酮純化工藝中常用的萃取溶劑有石油醚和氯仿，由于大豆異黃酮極性較大，使用石油醚萃取率較低，只有乙酸乙酯萃取率的50%左右，另外石油醚在生產(chǎn)中易燃易爆，因此不建議使用；氯仿毒性較大，成本偏高，相比較而言，利用乙酸乙酯對大豆異黃酮進(jìn)行萃取，不僅萃取率高，而且成本較低。(3)硅膠層析柱上樣步驟(2)得到的大豆異黃酮浸膏用乙醇溶解后與粒度為80 100目的硅膠混合，攪拌均勻分散，干燥后加入裝填有粒度為80 100目硅膠的層析柱，其中層析柱中裝填的娃膠與大豆異黃酮浸膏重量比為3 :1 5 :1 ;大豆異黃酮硅膠層析純化工藝一般將樣品用有機溶劑溶解后，直接加入硅膠柱，本發(fā)明是將樣品先用乙醇溶解，再與硅膠混合干燥后，加入硅膠柱，與現(xiàn)有方法相比較，本發(fā)明中的樣品處理方法層析分離效果好，得到的大豆異黃酮純度一般達(dá)到40%以上，純度提高了 10%左右。另外，本發(fā)明層析柱中裝填的硅膠與大豆異黃酮浸膏重量比最小可以達(dá)到3 :1，一般大豆異黃酮硅膠層析純化工藝中硅膠與大豆異黃酮浸膏重量比為5 :1以上，明顯減少了硅膠的使用量，有效地降低硅膠的使用成本。(4)層析柱洗脫步驟(3)中的層析柱用洗脫液洗脫，其中洗脫液為氯仿甲醇(體積比為5 :1)、氯仿丙酮(體積比為I :3)或乙酸乙酯甲醇(體積比為7 :1)，洗脫液在層析柱中的流速為I 5ml/min,薄層層析法254nm紫外燈下檢測分析,合并收集254nm紫外吸收相同的部分，減壓濃縮得到大豆異黃酮粗品；(5)重結(jié)晶步驟(4)得到的大豆異黃酮粗品用丙酮或者乙醇溶解，重結(jié)晶便得到大豆異黃酮。 一般大孔樹脂純化工藝得到的大豆異黃酮純度不夠，需要采用多次重結(jié)晶工藝才能使大豆異黃酮達(dá)到純度60%以上，而本發(fā)明由于硅膠層析純化效率高，只需要一次重結(jié)晶即可得到純度大于60%的大豆異黃酮。實施例I(I)提取，Ikg豆柏加入3L濃度為70%的乙醇，在60°C下提取2. 5小時后，過濾得到提取液，真空減壓濃縮回收乙醇，直至濃縮液中無乙醇?xì)馕稙橹梗?2)萃取，向步驟(I)得到的濃縮液中加入3L乙酸乙酯進(jìn)行萃取，得到乙酸乙酯相，經(jīng)真空減壓濃縮，得到大豆異黃酮浸膏；(3)硅膠層析柱上樣，步驟(3)得到的大豆異黃酮浸膏用乙醇溶解后與適量粒度為80 100目的娃膠混合,攪拌均勻分散,干燥后加入裝填有粒度為80 100目娃膠的層析柱，層析柱中的硅膠與大豆異黃酮浸膏重量比為3 1 ；(4)層析柱洗脫，步驟(3)中的層析柱用洗脫液氯仿甲醇(5 :1)洗脫，洗脫液在層析柱中的流速為lml/min,薄層層析法254nm紫外燈下檢測分析,合并收集254nm紫外吸收相同的部分，減壓濃縮得到大豆異黃酮粗品；(5)重結(jié)晶，步驟(4)得到的大豆異黃酮粗品用丙酮溶解，重結(jié)晶得到大豆異黃酮。用紫外分光光度法對實施例I得到的大豆異黃酮進(jìn)行純度測定，測定所需要的材料、儀器和方法如下I.材料與方法( I)材料染料木素標(biāo)準(zhǔn)品(Sigma公司，純度為98%)，95%乙醇(分析純)，無水乙醇(分析純)，豆柏(榆林三豐油脂公司提供)。(2)儀器RE-2000A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器；USHB_ III型循環(huán)水工真空泵；TGL_16GB高速臺式離心機；BP211D十萬分之一天平；KQ5200B型超聲清洗儀；CH1030型恒溫水浴鍋；101-3_S型恒溫干燥箱；UV-160A SHIMADZU紫外分光光度計。( 3 )標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作精密稱取染料木素對照品2. Omg，置IOmL量瓶中，用甲醇溶解并定容，制得濃度為200 μ g/mL的對照品母液。按照紫外分光光度法操作，于200 400nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行掃描測定，最大吸收峰在260nm處。精密吸取一定量母液,加甲醇定容配制成濃度分別為6、8、10、12、14、16 μ g/mL的系列對照品溶液，以甲醇為空白對照，在260nm波長處分別測定其吸光度(A)，計算回歸方程，A=O. 0482C+0. 0282，其線性范圍為4 16 μ g/mL，相關(guān)系數(shù)(r)為O. 9993 ο2.樣品溶液的測定精密稱取經(jīng)提取、純化后的大豆異黃酮樣品I. lmg，置于250mL量瓶中，用甲醇溶解并定容，以甲醇為空白對照，在260nm波長處測定其吸光度(A)，代入回歸方程，計算其純度為68. 2%ο實施例2(I)提取，Ikg豆柏加入4L濃度為75%的乙醇，在60°C下提取2小時后，過濾得到提取液，真空減壓濃縮回收乙醇，直至濃縮液中無乙醇?xì)馕稙橹梗?2)萃取，向步驟(I)得到的濃縮液中加入5L乙酸乙酯進(jìn)行萃取，得到乙酸乙酯相，經(jīng)真空減壓濃縮，得到大豆異黃酮浸膏； (3)硅膠層析柱上樣，步驟(3)得到的大豆異黃酮浸膏用乙醇溶解后與適量粒度為80 100目的娃膠混合,攪拌均勻分散,干燥后加入裝填有粒度為80 100目娃膠的層析柱，層析柱中的硅膠與大豆異黃酮浸膏重量比為4 1 ；(4)層析柱洗脫，步驟(3)中的層析柱用洗脫液氯仿丙酮(I :3)洗脫，洗脫液在層析柱中的流速為2ml/min,薄層層析法254nm紫外燈下檢測分析,合并收集254nm紫外吸收相同的部分，減壓濃縮得到大豆異黃酮粗品；(5)重結(jié)晶，步驟(4)得到的大豆異黃酮粗品用丙酮溶解，重結(jié)晶得到大豆異黃酮。大豆異黃酮的純度測定方法同實施例1，測得其純度為63. 2%。實施例3(I)提取，Ikg豆柏加入5L濃度為80%的乙醇，在60°C下提取3小時后，過濾得到提取液，真空減壓濃縮回收乙醇，直至濃縮液中無乙醇?xì)馕稙橹梗?2)萃取，向步驟(I)得到的濃縮液中加入8L乙酸乙酯進(jìn)行萃取，得到乙酸乙酯相，經(jīng)真空減壓濃縮，得到大豆異黃酮浸膏；(3)硅膠層析柱上樣，步驟(3)得到的大豆異黃酮浸膏用乙醇溶解后與適量粒度為80 100目的娃膠混合,攪拌均勻分散,干燥后加入裝填有粒度為80 100目娃膠的層析柱，層析柱中的硅膠與大豆異黃酮浸膏重量比為5 1 ；(4)層析柱洗脫，步驟(3)中的層析柱用洗脫液乙酸乙酯甲醇(7 :1)洗脫，洗脫液在層析柱中的流速為5ml/min,薄層層析法254nm紫外燈下檢測分析,合并收集254nm紫外吸收相同的部分，減壓濃縮得到大豆異黃酮粗品；(5)重結(jié)晶，步驟(4)得到的大豆異黃酮粗品用丙酮溶解，重結(jié)晶得到大豆異黃酮。大豆異黃酮的純度測定方法同實施例1，測得其純度為65. 5%。
權(quán)利要求
1.豆柏中提取大豆異黃酮的方法，其特征在于，首先用乙醇提取豆柏中的大豆異黃酮，然后經(jīng)過萃取、層析、重結(jié)晶，最終得到純度大于60%的大豆異黃酮； 該方法的具體步驟如下 (1)提取 豆柏中加入濃度為70 80%的乙醇，在60°C下提取2 3小時后經(jīng)真空減壓濃縮，回收乙醇，直至濃縮液中無乙醇?xì)馕稙橹梗? (2)萃取 向步驟(I)得到的濃縮液中加入乙酸乙酯進(jìn)行萃取，得到乙酸乙酯相，經(jīng)真空減壓濃縮，得到大豆異黃酮浸膏； (3)硅膠層析柱上樣 步驟(2)得到的大豆異黃酮浸膏用乙醇溶解后與硅膠混合，攪拌均勻分散，干燥后加入裝填有硅膠的層析柱； (4)層析柱洗脫 步驟(3)中的層析柱用洗脫液洗脫，薄層層析法254nm紫外燈下檢測分析，合并收集254nm紫外吸收相同的部分，減壓濃縮得到大豆異黃酮粗品； (5)重結(jié)晶 步驟(4)得到的大豆異黃酮粗品用丙酮或者乙醇溶解，重結(jié)晶便得到大豆異黃酮。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的豆柏中提取大豆異黃酮的方法，其特征在于，所述豆柏與乙醇的重量體積比為I :3 I :5。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的豆柏中提取大豆異黃酮的方法，其特征在于，所述濃縮液與乙酸乙酯的體積比為I :1 I :3。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的豆柏中提取大豆異黃酮的方法，其特征在于，大豆異黃酮浸膏使用干法上層析柱，具體操作為大豆異黃酮浸膏用乙醇溶解后與適量80 100目硅膠攪拌，均勻分散，干燥后加入裝填80 100目硅膠的層析柱。
5.根據(jù)權(quán)利要求I或4所述的豆柏中提取大豆異黃酮的方法，其特征在于，所述層析柱中裝填的硅膠與大豆異黃酮浸膏重量比為3 :1 5 :1。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的豆柏中提取大豆異黃酮的方法，其特征在于，所述洗脫液為氯仿甲醇、氯仿丙酮或乙酸乙酯，所述甲醇，氯仿甲醇的體積比為5 :1，所述氯仿丙酮的體積比為I :3，所述乙酸乙酯甲醇的體積比為7 :1。
7.根據(jù)權(quán)利要求I或6所述的豆柏中提取大豆異黃酮的方法，其特征在于，所述洗脫液在層析柱中的流速為I 5ml/min。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種豆粕中提取大豆異黃酮的方法，首先用乙醇提取豆粕中的大豆異黃酮，然后利用乙酸乙酯進(jìn)行萃取后用硅膠層析柱純化，洗脫劑用氯仿甲醇(體積比為51)、氯仿丙酮(體積比為13)或乙酸乙酯甲醇(體積比為71)，最后經(jīng)過重結(jié)晶得到大豆異黃酮。本發(fā)明豆粕中提取大豆異黃酮的方法能夠較快的得到純度大于60%大豆異黃酮，無需多次重結(jié)晶，其工藝簡單，分離成本較低。
文檔編號C07D311/40GK102964327SQ20121048910
公開日2013年3月13日 申請日期2012年11月26日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月26日
發(fā)明者楊黎彬, 王多寧, 石明娟, 劉少靜, 賈敏 申請人:西安醫(yī)學(xué)院