專利名稱：靈芝多糖和酸棗仁總黃酮在制備催眠藥物及保健品中的應用的制作方法
技術領域：
失眠是臨床上最常見的癥狀，發(fā)病率高。一些發(fā)達國家的調(diào)查表明，人群中的失眠發(fā)生率達15％-30％。我國失眠癥患者也相當普遍。2002年3月21日世界睡眠日前夕，衛(wèi)生部門公布的一次抽樣調(diào)查結(jié)果顯示，被調(diào)查者中，因難以入睡、易醒、醒得過早、睡眠時間不足、睡眠質(zhì)量不好等而存在睡眠障礙-失眠問題的達42.5％，由此而帶來的影響是一半以上的人會在白天精神不振、打瞌睡，27.7％的人情緒不佳，38.9％的人白天活動受限制。
在1990年美國睡眠協(xié)會制定的國際分類中，失眠屬于睡眠困難和伴精神神經(jīng)性疾病的睡眠障礙中的亞型，并且根據(jù)失眠時間的長短將失眠癥分為短期性失眠(持續(xù)時間＜3周)和長期性失眠(失眠存在時間＞3周)。
引起短期性失眠的生活事件有(1)心理、精神因素；(2)生理因素；(3)藥物因素；(4)不良的環(huán)境和習慣等因素。
長期性失眠可以由短期性失眠轉(zhuǎn)化而來。包括以下情況(1)阻塞性睡眠呼吸暫停綜合征，患者在睡眠過程中出現(xiàn)間歇性呼吸暫停而致失眠或覺醒；(2)睡眠中周期性肢體運動，其特點是睡眠期間歇出現(xiàn)腿部不自主運動，使睡眠被打斷；(3)睡眠時相前移/延遲綜合征，前者常見于老年人，夜間入睡和晨間覺醒時間均提前。而后者則常見于青年人，表現(xiàn)為入睡和覺醒時間后移；(4)心理生理性失眠，由于心情緊張、沮喪等原因引起，多表現(xiàn)為入睡困難和易醒；(5)伴有神經(jīng)精神疾病的失眠如神經(jīng)癥、情感障礙、精神分裂癥等。
免疫增強劑對失眠有明顯的改善作用。經(jīng)過深入追蹤分析，我們認為，免疫增強劑對失眠的作用是神經(jīng)免疫網(wǎng)絡調(diào)節(jié)的一個結(jié)果，其核心內(nèi)容是神經(jīng)系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)存在共同的物質(zhì)基礎，免疫增強劑通過調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)，使免疫細胞、免疫分子發(fā)生變化，而這些免疫分子同時也對神經(jīng)系統(tǒng)有調(diào)節(jié)作用。對人的免疫功能與睡眠關系研究結(jié)果表明，即使輕微的睡眠干擾也可引起NK細胞、T細胞和單核細胞功能急劇降低。目前研究認為，白細胞介素1(IL-1)、腫瘤壞死因子(TNF)和干擾素等免疫分子都有改善睡眠的作用。動物睡眠研究結(jié)果也表明，細胞因子改變睡眠深度和強度。IL-1，TNF，IFN，IL-6和IL-10都與睡眠的生理性調(diào)節(jié)有關。
IL-1作為一種具有多種生物學功能的細胞因子，在炎癥反應、免疫反應中發(fā)揮著重要的作用，是神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫三大系統(tǒng)的共同語言信號。體內(nèi)巨噬細胞是IL-1的主要來源，還有其它多種細胞也可以產(chǎn)生IL-1，如神經(jīng)膠質(zhì)細胞等。IL-1的產(chǎn)量與睡眠有關，在慢波睡眠(SWS)期間活性達峰值，在睡眠剝奪期間產(chǎn)量增多。外源性IL-1可在兔、大鼠、貓、猴等動物誘發(fā)睡眠，尤其是SWS。IL-1受體拮抗劑或抗IL-1抗體在抑制內(nèi)源性IL-1活性的同時，可抑制兔的自發(fā)睡眠，還可抑制睡眠剝奪后“反跳現(xiàn)象”的出現(xiàn)]。
IL-1增加非快動眼(NREM)睡眠，抑制快眼動(REM)睡眠，并活化5-HT能神經(jīng)系統(tǒng)，而腦內(nèi)5-HT的耗竭可以部分地抑制IL-1誘導的NREM睡眠增加效應。5-HT系統(tǒng)與IL-1之間的交互作用可能對調(diào)解睡眠-覺醒行為至關重要。大量的研究結(jié)果揭示了睡眠、晝夜節(jié)律和IL-6之間的存在著密切的關系。IL-6在循環(huán)血液中的濃度表現(xiàn)出周期性的變化，即日間低，而夜間達最大值。其他的研究者則發(fā)現(xiàn)患有夜間睡眠困擾的患者循環(huán)血液中的TNF和IL-6的濃度發(fā)生改變，靜脈注射外源性IL-6引起SWS睡眠和REM睡眠減少。外源性給與IL-6，與在睡眠的前半段減少REM睡眠和SWS睡眠量和在睡眠的后半段增加REM睡眠和SWS睡眠相關。睡眠具有促恢復功能。因而，在夜間睡眠的損失有可能是加劇那些經(jīng)受過心理壓力或承受過精神異常癥狀，并通常主訴具有失眠癥狀的人員的免疫學改變的一個因素。另外，攪擾睡眠結(jié)構有可能導致與睡眠相關聯(lián)的IL-6的異常分泌。
睡眠喪失通過影響免疫系統(tǒng)功能的完整性，足以降低夜間IL-6水平。而結(jié)合睡眠的不同階段和IL-6的水平之間關系去考慮，抑郁癥患者或老年人的REM睡眠量的增加和相對SWS睡眠喪失，有可能升高夜間IL-6的濃度并伴隨著炎性疾病風險(Redwine 2000)。
庫寶善等已證實，異丙肌苷、轉(zhuǎn)移因子、胞壁酰二肽等免疫增強劑在使腦內(nèi)IL-1、TNF分泌增加的同時，也延長了家兔的睡眠時間]；應用免疫抑制劑環(huán)磷酰胺降低家兔免疫功能的同時，可明顯抑制SWS。
國內(nèi)外學者也對這種作用的機制進行了深入研究，認為可能存在免疫增強——腫瘤壞死因子增多——5HT更新率增加——慢波睡眠增加這樣一條路徑。
神經(jīng)、免疫和內(nèi)分泌系統(tǒng)是機體三大調(diào)節(jié)系統(tǒng)，這三大系統(tǒng)在維護機體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定方面存在著內(nèi)在的統(tǒng)一性。20世紀80年代，隨著神經(jīng)肽和細胞因子的發(fā)現(xiàn)和相繼的深入研究，為人類解釋神經(jīng)、免疫調(diào)節(jié)的統(tǒng)一性問題提供了分子生物學的科學依據(jù)。人們發(fā)現(xiàn)，神經(jīng)肽和細胞因子不僅可以在本系統(tǒng)發(fā)揮調(diào)節(jié)作用，而且可以參與相對系統(tǒng)(神經(jīng)或免疫系統(tǒng))的功能調(diào)節(jié)，從而補充和協(xié)調(diào)相對系統(tǒng)的機體調(diào)節(jié)功能，共同維護內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定。目前已經(jīng)有大量實驗結(jié)果證明，細胞因子已經(jīng)成為聯(lián)系神經(jīng)、免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)的共同信息傳遞因子，其科學依據(jù)為神經(jīng)細胞和免疫細胞上存在共同的受體結(jié)構，細胞因子作用于神經(jīng)系統(tǒng)中樞，則具有調(diào)節(jié)睡眠等中樞神經(jīng)生理作用。近年來的許多證據(jù)表明，睡眠過程各免疫系統(tǒng)是可以相互影響的，人及動物在睡眠過程中，免疫功能出現(xiàn)規(guī)律性變化，免疫系統(tǒng)功能的改變也可影響睡眠過程，如某些免疫調(diào)節(jié)劑及細胞因子對睡眠也有一定的調(diào)節(jié)作用。
在此基礎上，我們又分別對目前的具有免疫增強作用和鎮(zhèn)靜、催眠作用的中藥，如靈芝、酸棗仁等進行了研究，發(fā)現(xiàn)二者在鎮(zhèn)靜、催眠效應方面具有良好的協(xié)同作用。
背景技術：
迄今，已從靈芝中分離得到150余種化合物，可分為10大類多糖類、核苷類、呋喃類、甾醇類、生物堿類、氨基酸蛋白質(zhì)類、三萜類、油脂類，還有無機離子、有機鍺等。藥理作用研究已經(jīng)深入到細胞、分子水平，并初步探討了靈芝扶正固本的機制。其中靈芝多糖的免疫促進作用是比較明確的。靈芝多糖GLB7能通過促進原代培養(yǎng)小鼠脾細胞促進合成和分泌IL-1及TNFα。而對靈芝多糖催眠作用研究尚未見報道。
酸棗仁用于鎮(zhèn)靜催眠已經(jīng)有很悠久的歷史。酸棗仁水提物的催眠作用主要是影響慢波睡眠的深睡階段，對慢波睡眠的淺睡階段和快波睡眠無影響，可使大鼠覺醒時間減少。酸棗仁水提物對多種鎮(zhèn)靜催眠藥也有明顯的協(xié)同作用。但對酸棗仁催眠作用活性成分或組分的研究尚不充分。尤其是對酸棗仁總黃酮的催眠作用尚有許多爭議。
綜合以上分析，我們初步對具有免疫增強作用和具有鎮(zhèn)靜、安神作用的的中藥中(中藥材、方劑)進行了篩選，結(jié)果發(fā)現(xiàn)了作用強、低毒副作用的靈芝多糖和酸棗仁總黃酮組合物能夠有效地促進睡眠，并完成了本發(fā)明。
本發(fā)明所涉及到的靈芝多糖和酸棗仁總黃酮樣品制備方法靈芝多糖以多孔菌科靈芝屬真菌紫芝Ganoderma sinense Zhao，Xu et Zhang和靈芝(赤芝)G.lucidum(Leyss.ex Fr.)Karst.為原材料，采取水提取-醇沉淀法制得粗多糖后，再經(jīng)脫蛋白、半透膜透析，硼酸型DE-52柱層析或DEA E-Sephadex柱層析等方法純化，即得靈芝多糖。以硫酸-苯酚法、丙烯酰胺盤電泳等分析方法鑒定多糖純度，使其多糖純度高于50％。所含的多糖(polysacchride)包括GL-1、2、3、4，靈芝多糖(ganoderan)A、B、C，和BN3A，BN3B，BN3C，赤芝多糖GLA，GLB，GLC等。
酸棗仁總黃酮以鼠李科植物酸棗Ziziphus jujuba Mill.var.spinosa(Bunge)Hu exH.F.Chow[Z.vulgaris Lam.Lam.var.spinosa Bunge的種子，即酸棗仁為原材料用乙醇提取，脫脂后，采用萃取法或大孔樹脂D101柱層析法或聚酰胺柱層析法分離、精致、純化而得酸棗仁總黃酮，以RP-HPLC法或紫外分光光度法進行純度控制，使其總黃酮含量高于50％。所含黃酮類成分包括斯皮諾素(spinosin)，2″-O-β-D-毗喃葡萄糖基當藥素(2″-O-β-D-glucopyranosylswertisin)，酸棗黃素(zivulgarin)，6-芥子酰斯皮諾素(6-sinapoylspinosin)，6-阿魏酰斯皮諾素(6-feruloylspinosin)，6-對香豆酰斯皮諾素(6-p-coumaroylspinosin)，當藥素(swertisin)，6，8-二-C-葡萄糖基芹菜素(vicenin II)，芹菜素-6-c[(6-O-對羥基苯甲酰)-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖甙(apigenin-6-c-[(6-O-p-hydroxybenzoyl)-β-D-glucopyranosyl(1→2)]-β-D-glucopyra-noside)等。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及，1.一種用于預防、改善或治療失眠的，包含靈芝多糖和酸棗仁總皂甙的組合物。
2.該藥物組合物中，靈芝多糖與酸棗仁總黃酮的組合比為8-100∶1-16。
3.靈芝多糖和酸棗仁總黃酮可分別采取通用的植物多糖或總黃酮的提取、分離、純化法制得，且二者的含量均高于50％。
4.該組合物中可加入各種鎮(zhèn)靜、催眠藥物或賦型劑制成臨床可接受的劑型，用于預防、改善或治療各種原因引起的睡眠障礙。
具體實施例方式
下列實驗例或?qū)嵤├糜谶M一步說明本發(fā)明。
實驗例一。靈芝多糖(L)及酸棗仁總黃酮(Z)對閾上劑量戊巴比妥鈉(40mg/kg)致小鼠睡眠的影響ICR小鼠按體重和性別隨機分組，對照組ig 0.2ml水/10g，其余各組ig給藥，給藥后1h腹腔注射閾上劑量的40mg/kg戊巴比妥鈉，以ip戊巴比妥鈉至小鼠翻正反射消失時間為睡眠潛伏期，以小鼠翻正反射消失至翻正反射再出現(xiàn)時間為睡眠時間。記錄各組小鼠的睡眠潛伏期和睡眠時間。
結(jié)果見表1。靈芝多糖(L)的劑量為62.5mg/kg時，顯著縮短入睡潛伏期，但對睡眠時間沒有影響；當靈芝多糖(L)的劑量為125及250mg/kg時，不僅能顯著縮短入睡潛伏期，還能明顯延長睡眠時間。酸棗仁總黃酮(Z)的劑量為20mg/kg時，能顯著縮短入睡潛伏期，但睡眠時間與對照組相比無顯著性差異；當劑量增至40和80mg/kg時，則不僅明顯縮短入睡潛伏期，而且也顯著地延長閾上劑量戊巴比妥鈉所致小鼠的睡眠時間。
結(jié)果提示，靈芝多糖和酸棗仁總黃酮均具有顯著的催眠作用，且呈劑量依賴關系表1.靈芝多糖(L)及酸棗仁總黃酮(Z)對閾上劑量戊巴比妥鈉致小鼠睡眠的影響

所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差(SD)表示；與對照組比*P＜0.05，**P＜0.01.
實驗例二。靈芝多糖和酸棗仁總黃酮兩者配伍的正交設計試驗由靈芝多糖和酸棗仁總黃酮的量-效睡眠實驗，設計了兩者配伍的二因素三水平的正交睡眠實驗。實驗方法同實驗例一。
經(jīng)正交分析表明(見表3)，入睡潛伏期的縮短與睡眠時間的延長均與L和Z的劑量有關。以62.5mg/kg+80mg/kg(L+Z)和250mg/kg+80mg/kg(L+Z)實驗組的結(jié)果最佳。也即L∶Z的最佳配比分別為62.5∶80和250∶80。綜合對縮短入睡潛伏期和增加睡眠時間的正交睡眠實驗結(jié)果分析，表明靈芝多糖與縮短入睡潛伏期密切相關，而酸棗仁總黃酮與增加睡眠時間密切相關，這與靈芝多糖的藥時關系研究及酸棗仁總黃酮的藥時關系研究結(jié)果(略)相一致。
表2.因素水平表

表3.正交睡眠實驗結(jié)果

注所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差(SD)表示；與對照組比*P＜0.05，**P＜0.01；
實驗例三。靈芝多糖和酸棗仁總黃酮兩者配伍應用對閾下劑量戊巴比妥鈉腹腔注射致小鼠入睡率的影響試驗。
實驗方法同實驗例一。以靈芝多糖和酸棗仁總黃酮組方的配比為62.5mg/kg+80mg/kg和250mg/kg+20mg/kg來進行實驗，連續(xù)給藥三天，結(jié)果見表4。由表4可見，兩者配伍使用有協(xié)同作用。
同時，從實驗例二及三的結(jié)果(表3及4)可知，靈脂多糖與酸棗仁總黃酮配伍使用，可產(chǎn)生協(xié)同催眠作用。
表4.靈芝多糖和酸棗仁總黃酮組合物對閾下劑量戊巴比妥鈉致小鼠入睡率的影響

與對照組比*P＜0.05，**P＜0.01。
權利要求
1.一種用于改善睡眠和治療失眠癥的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物包含靈芝多糖和酸棗仁總皂甙。
2.如權利要求1所述藥物組合物，其特征在于靈芝多糖與酸棗仁總黃酮的組合比為8-100∶1-16。優(yōu)選比例為25∶8
3.如權利要求1所述的藥物組合物，其特征是可加入各種鎮(zhèn)靜、催眠藥物或賦型劑制成臨床可接受的劑型，用于改善睡眠和治療原因引起的失眠癥。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種用于預防、改善或治療失眠癥靈芝多糖和酸棗仁總黃酮在制備催眠藥物及保健品中的應用的藥物組合物。該組合物包含靈芝多糖和酸棗仁總黃酮，并可加入各種鎮(zhèn)靜、催眠藥物或賦形劑制成臨床可接受的各種劑型。
文檔編號A61K31/715GK1666749SQ200410006198
公開日2005年9月14日 申請日期2004年3月8日 優(yōu)先權日2004年3月8日
發(fā)明者張永鶴 申請人:北京大學