一種石上柏多糖提取物制備方法及其應用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥理學領(lǐng)域，具體涉及一種石上柏多糖提取物制備方法及其應用。
【背景技術(shù)】
[0002] 石上柏（t/oeofer/eiflii Hieron)是常用中藥材，為蕨類植物門 (Pteridophyta)卷柏科（卷柏屬（植物的干燥全草。其又 名深綠卷柏、大葉菜、水柏枝等，主產(chǎn)于云南、貴州、廣西、浙江、福建、臺灣等地，其性味甘、 微苦、澀、涼。在傳統(tǒng)中藥中，共有六個卷柏屬植物有收入典籍，其中石上柏是常用于治療腫 瘤的藥材之一。傳統(tǒng)中醫(yī)認為石上柏具有"扶正祛邪"的雙重作用，以復方或單方用于腫瘤 的治療歷史悠久。到近代，石上柏的單方制劑中成藥石上柏片（石上柏醇提物為主要成分） 已經(jīng)用于咽喉癌、絨毛膜上皮癌、肺癌及消化道癌癥的治療，具有較好的抗癌作用。
[0003] 現(xiàn)代化學藥理研究表明，石上柏主要含有多糖類，黃酮類，生物堿類等活性物質(zhì)， 其中多糖類成分具有較好的體外抑制腫瘤，增強或恢復免疫功能等作用。目前石上柏多糖 的研究少見文獻及專利報道。而且，市面上也未見關(guān)于石上柏多糖的藥物或藥物組合物的 出現(xiàn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種石上柏多糖提取物制備方法及其應用，本發(fā)明的再一 目的是提供一種含有以上石上柏多糖提取物的藥物。還提供了含有該石上柏多糖提取物的 制劑及該提取物的用途。
[0005] 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案： 本發(fā)明的石上柏多糖提取物中主要含有多糖。其中，以重量百分比計，多糖的含量為 90%以上，優(yōu)選的，多糖的含量為95%_98%。
[0006] 本發(fā)明所述石上柏多糖的制備方法，包括以下步驟：（1)脫脂：取石上柏干燥全 草，用4-10倍量有機溶劑浸泡后回流1-3次，過濾，揮干有機溶劑得藥渣；（2)提?。荷?述藥渣加水浸泡后，水浴提取1-3次，每次1-3小時，過濾，濃縮濾液至每ml相當于含 生藥0. 5-2. 0g; (3)醇沉：向上述濃縮液中加入3-8倍體積乙醇，冰浴放置，過濾，沉淀 冷凍干燥后得多糖提取物粗品I; (4)除蛋白：將上述多糖提取物粗品I溶于水中配制 成0.01-0.lg/ml的粗品I溶液，加入1 一 4倍體積氯仿一正丁醇（V/V= 4:1)混合溶液， 攪拌后分層，上層重復操作4-8次后，加入3-8倍體積乙醇，冰浴放置，過濾，沉淀冷凍干 燥，得多糖提取物粗品II;(5)除單糖及寡糖：將上述多糖提取物粗品II溶于水中配制成 0. 01-0.lg/ml的粗品II溶液，用截止分子量：8000-14000的透析膜透析2天后，取出透析 袋內(nèi)液體加入3-8倍體積乙醇，冰浴放置，過濾，沉淀冷凍干燥后得多糖提取物粗品III;(6) 凝膠柱純化：將上述多糖提取物粗品III用凝膠色譜柱純化，用硫酸苯酚法跟蹤餾分，收集主 峰合并后，加入3-8倍體積乙醇，冰浴放置，過濾，沉淀冷凍干燥，得黃棕色石上柏多糖提取 物。
[0007] 所述步驟（1)中的有機溶劑為石油醚、乙酸乙酯、乙醇或95%乙醇水溶液中的一 種。
[0008] 所述步驟（2)中加水量為4-10倍量；提取溫度為20-90°C。
[0009] 所述步驟（3) - (6)中，加入乙醇后乙醇含量為50%-80%。
[0010] 所述步驟（4) - (6)中，冰浴放置12-36小時。
[0011] 本發(fā)明所述石上柏多糖提取物可以作為活性成分，加入藥劑學上可以接受的輔 料，按照藥劑學上記載的制劑的制備方法制成制劑。
[0012] 本發(fā)明所述石上柏多糖提取物還可以作為活性成分之一，加入藥劑學上接受的輔 料，按照藥劑學上記載的制劑的制備方法制成制劑。
[0013] 本發(fā)明的石上柏多糖提取物及其制劑可在制備治療和預防癌癥藥物中應用。
[0014] 本發(fā)明的優(yōu)點在于：石上柏為民間抗癌草藥，廣泛分布于我國南方地區(qū)，資源豐 富。石上柏多糖的研究少見文獻及專利報道。本發(fā)明首次提供一種石上柏多糖提取物制備 方法及其制劑制備方法，可為醫(yī)療領(lǐng)域新增一種廉價、藥效顯著的新型多糖類抗腫瘤藥物。
【具體實施方式】
[0015] 下面將結(jié)合實施例進一步說明本發(fā)明的實質(zhì)內(nèi)容和有益效果，該實施例僅用于說 明本發(fā)明而非對本發(fā)明的限制。
[0016] 實施例一石上柏多糖提取物的制備 (1)脫脂：取干燥的石上柏全草，用8倍量乙醇浸泡后回流2次，過濾，揮干有機溶劑得 藥渣；（2)提取：上述藥渣加水10倍量浸泡后，水浴提取3次，每次1小時，過濾，濃縮濾液至 每ml相當于含生藥1. 0g; (3)醇沉：向上述濃縮液中加入適量乙醇至乙醇含量為80%，冰浴 放置12小時，過濾，沉淀冷凍干燥后得多糖提取物粗品I; (4)除蛋白：將上述多糖提取物 粗品I溶于水中配制成〇. 05g/ml的粗品I溶液，加入1倍體積氯仿一正丁醇（V/V= 4:1) 混合溶液，攪拌后分層，攪拌后分層，上層重復操作4次后，冰浴放置12小時，過濾，沉淀冷 凍干燥，得多糖提取物粗品II; (5)除單糖及寡糖：將上述多糖提取物粗品II溶于水中配制 成0. 05g/ml的粗品II溶液，用透析膜(截止分子量：8000-14000)透析2天后，取出透析 袋內(nèi)液體加入適量乙醇至乙醇含量為70%，冰浴放置12小時，過濾，沉淀冷凍干燥后得多糖 提取物粗品III; (6)凝膠柱純化：將上述多糖提取物粗品III用凝膠色譜柱純化，用硫酸苯酚 法跟蹤餾分，收集主峰合并后，加入適量乙醇至乙醇含量為70%，冰浴放置，過濾，沉淀冷凍 干燥，得白色石上柏多糖提取物。苯酚硫酸法測定多糖得含量為91%，bradford法測定蛋 白分別為1. 0%。
[0017] 實施例二石上柏多糖提取物的制備 (1)脫脂：取干燥的石上柏全草，用10倍量80%乙醇浸泡后回流2次，過濾，揮干有機 溶劑得藥渣；（2)提?。荷鲜鏊幵铀?倍量浸泡后，水浴提取2次，每次1小時，過濾，濃 縮濾液至每ml相當于含生藥1. 5g; (3)醇沉：向上述濃縮液中加入適量乙醇至乙醇含量為 80%，冰浴放置24小時，過濾，沉淀冷凍干燥后得多糖提取物粗品I;(4)除蛋白：將上述多 糖提取物粗品I溶于水中配制成〇.lg/ml的粗品I溶液，加入3倍體積氯仿一正丁醇（V/V= 4:1)混合溶液，攪拌后分層，上層重復操作8次后，加入適量乙醇至乙醇含量為80%，冰浴放 置24小時，過濾，沉淀冷凍干燥，得多糖提取物粗品II; (5)除單糖及寡糖：取上述多糖提取 物粗品II適量溶于水中，用透析膜(截止分子量：8000-14000)透析2天后，取出透析袋內(nèi)液 體加入適量乙醇至乙醇含量為80%，冰浴放置24小時，過濾，沉淀冷凍干燥后得多糖提取物 粗品III; (6)凝膠柱純化：將上述多糖提取物粗品III用凝膠色譜柱純化，用硫酸苯酚法跟蹤 餾分，收集主峰合并后,加入適量乙醇至乙醇含量為80%，冰浴放置24小時，過濾，沉淀冷凍 干燥，得棕色多糖SDP1、SDP2精品。苯酚硫酸法測定多糖得含量為93%，bradford法測定 蛋白分別為1.0%