一種生姜多糖的提取工藝及其提取物的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種生姜提取物的制備方法及應(yīng)用，特別設(shè)及一種生姜多糖的提取工 藝及所得生姜多糖的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 傳染性疾病對(duì)畜牧生產(chǎn)具有極大危害，尤其是發(fā)生病毒性疾病，目前幾乎沒(méi)有有 效的治療藥物，故提高機(jī)體免疫力是防控病毒性疾病的關(guān)鍵和根本。自1925年法國(guó)免疫學(xué) 家兼獸醫(yī)Gaston Ramon發(fā)現(xiàn)在疫苗中加入某些與之無(wú)關(guān)的物質(zhì)可W特異地增強(qiáng)機(jī)體對(duì)白 喉和破傷風(fēng)毒素的抵抗反應(yīng)W來(lái)，免疫增強(qiáng)劑在醫(yī)學(xué)和獸醫(yī)學(xué)領(lǐng)域逐漸引起人們的關(guān)注。 實(shí)踐證實(shí)，當(dāng)前相當(dāng)數(shù)量的疫苗只有與免疫增強(qiáng)劑配合應(yīng)用才能具有良好的預(yù)防效果，近 年來(lái)，免疫增強(qiáng)劑的研究領(lǐng)域不斷拓寬，新成員、新劑型不斷發(fā)現(xiàn)，臨床應(yīng)用范圍越來(lái)越廣 泛，成為當(dāng)代免疫學(xué)研究的熱點(diǎn)。然而現(xiàn)存的免疫增強(qiáng)劑中，許多具有較好佐劑活性的同時(shí) 還存在許多弊端，例如粘滯性高、穩(wěn)定性差、注射局部反應(yīng)嚴(yán)重W及制作繁瑣、價(jià)格昂貴、效 果不穩(wěn)定等。因此，尋找具有高效的、低毒的和能廣泛應(yīng)用的免疫增強(qiáng)劑已成為當(dāng)務(wù)之急。
[0003] 多糖是單糖通過(guò)糖巧鏈連接而成的天然高分子化合物，是所有生命有機(jī)體的重要 組成部分，廣泛存在于動(dòng)植物和微生物的細(xì)胞壁中，具有增強(qiáng)機(jī)體免疫功能及抗腫瘤等藥 理作用，且?guī)缀鯖](méi)有毒性，是用于免疫增強(qiáng)劑的佳選。生姜是多年生草本姜的根莖，其營(yíng)養(yǎng) 豐富，當(dāng)前已確認(rèn)的化學(xué)成分達(dá)200余種，其具有廣譜抗菌、抗病毒、抗氧化等作用，藥用價(jià) 值高。由于生姜分布廣泛，營(yíng)養(yǎng)豐富，在其基礎(chǔ)上提取的多糖具有價(jià)格低廉、功效好、使用方 便等優(yōu)點(diǎn)。但是目前生姜多糖的提取工藝存在著提取率低，純度不高的問(wèn)題，該在一定程度 上限制了其推廣應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明提出一種生姜多糖的提取工藝，解決了現(xiàn)有提取工藝中生姜多糖提取率 低，純度不高的問(wèn)題。
[0005] 一種生姜多糖的提取工藝，包括如下步驟：
[0006] 步驟1 ;將生姜切片，60°C下烘干至恒重，粉碎，過(guò)80目篩，得生姜粉；
[0007] 步驟2 ;取步驟1中的生姜粉，加水，100°C水煮化，得水煮液；
[000引步驟3 ;將步驟2中的水煮液置于60°C的水浴中進(jìn)行濃縮，得濃縮液；
[0009] 步驟4 ;向步驟3中的濃縮液中加入氯仿-正了醇溶液，混合20min，3500巧m離屯、 5min，取上清液；
[0010] 步驟5 ;向步驟4中的上清液中加入無(wú)水己醇，邊加邊攬拌，至己醇濃度達(dá)到60%， 靜置，400化pm離屯、5min，取沉淀物，用水溶解，再用80%己醇沉淀，所得沉淀物于60°C下干 燥至質(zhì)量不再變化，得生姜多糖。
[0011] 優(yōu)選的，步驟2中生姜粉與水的質(zhì)量比為1:30。
[0012] 優(yōu)選的，步驟2具體為將生姜粉水煮兩次，并將兩次所得水煮液合并。
[0013] 優(yōu)選的，步驟4中氯仿-正了醇溶液的體積為濃縮液體積的1/4。
[0014] 優(yōu)選的，步驟4中離屯、操作2~3次。
[0015] 優(yōu)選的，步驟5中的靜置時(shí)間為12h。
[0016] 本發(fā)明還提供了一種生姜多糖的應(yīng)用，其步驟為；將生姜多糖配制成濃度為 lOmg/mL的生姜多糖水溶液。
[0017] 本發(fā)明的有益效果：
[0018] 本發(fā)明提出的生姜多糖的提取工藝，不僅步驟簡(jiǎn)單、操作方便，而且大大提高了生 姜多糖的提取率及純度。
[0019] 本發(fā)明所制備的生姜多糖可明顯促進(jìn)免疫器官發(fā)育，增強(qiáng)機(jī)體對(duì)抗原的免疫應(yīng) 答，有利于增強(qiáng)機(jī)體的抗病能力。
【附圖說(shuō)明】
[0020] 圖1為五個(gè)試驗(yàn)組維雞血清新城疫抗體滴度隨時(shí)間的變化曲線圖。
【具體實(shí)施方式】
[0021] 下面對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例 僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通 技術(shù)人員在沒(méi)有作出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范 圍。
[0022] 本發(fā)明提供一種生姜多糖的提取工藝。
[002引實(shí)施例1
[0024] 1材料和儀器
[0025] 材料；生姜；無(wú)水己醇、氯仿、正了醇、苯酪、濃硫酸、氨氧化鋼、濃鹽酸、硫酸銅、酒 石酸鐘鋼、=氯醋酸、碳酸氨鋼、侶片等（均為分析純）。
[0026] 儀器；紫外光譜儀（天美公司，UV1102PC型）；自動(dòng)平衡離屯、機(jī)（北京醫(yī)用離屯、機(jī) 廠，LD巧-2);數(shù)顯恒溫水浴鍋（國(guó)華，HH-4);生化培養(yǎng)箱（HPS-250,哈爾濱市東聯(lián)電子技術(shù) 開(kāi)發(fā)有限公司）；超凈工作臺(tái)（SW-CJ-1F，蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司）；手提式高壓蒸汽滅 菌鍋（YXQ，上海醫(yī)用核子儀器廠）；低溫冰箱（新飛，BCD-213KA);電子天平（上海天平儀 器廠，F(xiàn)A1104型）。
[0027] 2提取方法
[002引材料預(yù)處理；生姜使用前60°C烘干至恒重，粉碎過(guò)80目篩備用。
[0029] 熱水提?。环Q取備用的生姜粉，向其中加入30倍（質(zhì)量倍數(shù)）的水，100°C下水煮 3h，得水煮液，生姜粉可水煮一次，也可按上述條件水煮多次，并將每次所得水煮液合并，優(yōu) 選的，將生姜粉水煮2次。
[0030] 濃縮；將上述水煮液置于60°C的水浴中，進(jìn)行濃縮，得濃縮液。
[0031] 脫蛋白：向濃縮液中加入1/4倍體積的氯仿一正了醇溶液，混合20min，3500巧m離 屯、5min，中層白色絮狀沉淀為蛋白質(zhì)，故取上清，重復(fù)離屯、操作至中間沒(méi)有明顯沉淀為止， 優(yōu)選的，離屯、2~3次。
[0032] 醇沉；脫蛋白完畢，向提取液中緩緩加入無(wú)水己醇，邊加邊攬拌，使己醇濃度為 60%，靜置一段時(shí)間后，優(yōu)選為靜置1化后，400化pm離屯、5min，倒掉上清，將沉淀物用蒸饋 水溶解，再用80%己醇沉淀一次，沉淀物60°C下干燥直至質(zhì)量不再發(fā)生變化，即為生姜多 糖。
[0033] 試驗(yàn)重復(fù)3次，計(jì)算得到生姜多糖的提取率（提取率二多糖重量/生姜干 重 X100% )。
[0034] 3結(jié)果鑒定
[0035] 生姜多糖定性鑒定
[0036] a -蒙酪試驗(yàn)：取檢品的水溶液1111以加5% a -蒙酪試液數(shù)滴振蕩后，沿管壁滴入 5~6滴濃硫酸，使成兩層，待2~3min后，觀察液面分界處是否有紫紅色環(huán)出現(xiàn)。
[0037] 斐林試驗(yàn)：取檢品的水溶液1血，加入稀鹽酸5滴，置沸水浴中10~15min，用10% 氨氧化鋼溶液中和至中性，再加新配的堿性酒石酸銅試液4滴；另取檢液ImU不加酸直接 加入上述試液4滴，兩管同時(shí)置水浴上煮沸5~6min。如果水解后生成棟紅色沉淀物的量 比未經(jīng)水解的多，則示有多糖。
[003引氯仿-濃硫酸反應(yīng)；將檢品溶于氯仿，加入濃硫酸，氯仿層呈現(xiàn)紅或藍(lán)色，濃硫酸 層有綠色巧光，則示檢品中有皂武。
[0039] =氯醋酸反應(yīng)；將含檢品的氯仿溶液滴在紙上，滴=氯醋酸試劑，加熱，生成紅色 漸變紫色，說(shuō)明檢品中有皂武。
[0040] 巧S酬試驗(yàn)：取檢品的水溶液1血，加入巧S酬試液2~3滴，加熱煮沸4~5min， 待其冷卻，呈現(xiàn)紅色、棟色或藍(lán)紫色，則檢液中有蛋白質(zhì)、膚類及氨基酸。
[004U 鹽酸-儀粉試驗(yàn)；取檢品的己醇溶液1血，加放少量?jī)x粉，然后加濃鹽酸4~5滴， 置沸水浴加熱2~3min，如出現(xiàn)紅色，示有游離黃酬類（W不加儀粉做對(duì)照）。
[0042] 艦化餓鐘試驗(yàn)；取檢品水溶液ImL，加鹽酸酸化，滴加艦化餓鐘試劑，如有橘紅色 沉淀產(chǎn)生，示可能含有生物堿。
[0043] 多糖純度的測(cè)定
[0044] 多糖純度測(cè)定采用硫酸-苯酪法，其原理是多糖在高溫條件下被濃硫酸水解產(chǎn)生 單糖，單糖在強(qiáng)酸性條件下與苯酪反應(yīng)生成棟紅色物質(zhì)，其吸光度與單糖含量成正比。
[0045] 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制；精密稱取于105°C干燥至恒重的葡萄糖25mg于小燒杯中，加水 溶解并定量移至100血的容量瓶中，稀釋至刻度，混勻，得0.1 mg/血的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。分別精 密吸取該溶液1. 0血、2. 0血、3. 0血、4. 0血、5. 0血、6. OmL置于50血量瓶中，加蒸饋水至刻 度。分別吸取W上各濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液2mL于具塞試管中，加5%的苯酪試液ImU搖勻，迅速 加濃H2S〇45mL，振搖2min后，于沸水浴中加熱15min，取出置于冷水中冷卻。W苯酪-硫酸 溶液為空白，于487nm處測(cè)吸光度，經(jīng)回歸得線性方程A = 0. 0385C-0. 016 (r = 0. 9812)。
[0046] 純度的測(cè)定；精密稱取約0.1 g多糖樣品于小燒杯中，加水適量使溶解，定量轉(zhuǎn)移 至lOOmL容量瓶中，加水稀釋至刻度，混勻，得樣品溶液，吸取該溶液6. OmL置于100血容量 瓶中，加水至刻度，得供試品溶液。分別吸取該供試品溶液各2mL于具塞試管中（每組3個(gè) 重復(fù)），按標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下方法操作，W苯酪-硫酸溶液為空白，在487皿處進(jìn)行比色測(cè)定，按 回歸方程求得供試溶液中多糖的純度。
[0047] 4結(jié)果分析
[0048] 采用本發(fā)明提供的生姜多糖提取工藝得到的生姜多糖為黃色固體，極易溶于水， 對(duì)其進(jìn)行定性分析及定量鑒定所得結(jié)果分別如表1、表2所示：
[0049] 表1提取物定性鑒定結(jié)果
[(K)加]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種生姜多糖的提取工藝，其特征在于，包括如下步驟： 步驟1 :將生姜切片，60°C下烘干至恒重，粉碎，過(guò)80目篩，得生姜粉； 步驟2 :取步驟1中的生姜粉，加水，100°C水煮3h，得水煮液； 步驟3 :將步驟2中的水煮液置于60°C的水浴中進(jìn)行濃縮，得濃縮液； 步驟4 :向步驟3中的濃縮液中加入氯仿-正丁醇溶液，混合20min，3500rpm離心5min， 取上清液； 步驟5 :向步驟4中的上清液中加入無(wú)水乙醇，邊加邊攪拌，至乙醇濃度達(dá)到60%，靜 置，4000rpm離心5min，取沉淀物，用水溶解，再用80%乙醇沉淀，所得沉淀物于60°C下干燥 至質(zhì)量不再變化，得生姜多糖。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種生姜多糖的提取工藝，其特征在于，所述步驟2中生姜粉 與水的質(zhì)量比為1:30。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種生姜多糖的提取工藝，其特征在于，所述步驟2具體為將 生姜粉水煮兩次，并將兩次所得水煮液合并。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種生姜多糖的提取工藝，其特征在于，所述步驟4中氯 仿-正丁醇溶液的體積為濃縮液體積的1/4。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種生姜多糖的提取工藝，其熱證在于，所述步驟4中離心操 作2~3次。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種生姜多糖的提取工藝，其特征在于，所述步驟5中的靜置 時(shí)間為12h。
7. -種如權(quán)利要求1~6中任一項(xiàng)所述提取工藝提取的生姜多糖的應(yīng)用，其特征在于， 將生姜多糖配制成濃度為10mg/mL的生姜多糖水溶液。
【專利摘要】本發(fā)明提出了一種生姜多糖的提取工藝及其提取物的應(yīng)用方法，該提取工藝不僅步驟簡(jiǎn)單、操作方便，而且大大提高了生姜多糖的提取率及純度。所制備的生姜多糖可明顯促進(jìn)免疫器官發(fā)育，增強(qiáng)機(jī)體對(duì)抗原的免疫應(yīng)答，有利于增強(qiáng)機(jī)體抗病能力。
【IPC分類】A61P37-04, A61K31-715, C08B37-00
【公開(kāi)號(hào)】CN104672340
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510063808
【發(fā)明人】陳巨清
【申請(qǐng)人】石家莊石牧動(dòng)物藥業(yè)有限公司
【公開(kāi)日】2015年6月3日
【申請(qǐng)日】2015年2月6日