一種美洲大蠊提取物及其制備工藝的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種美洲大蠊提取物及其制備工藝，所述的制備工藝為通過濃度為60～79%的乙醇對美洲大蠊蟲體進行浸泡后，回流提取，濃縮，脫脂。本發(fā)明所述的制備工藝操作簡單，節(jié)約成本和能源。通過本發(fā)明所述的方法制備的美洲大蠊提取物具有以下優(yōu)點：活性成分含量高，其中游離氨基酸的含量可以達到3.54g/100g生藥或以上，對UC的治療效果顯著，無腥臭味，色澤淺。
【專利說明】
-種美洲大喊提取物及其制備工藝
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明設(shè)及中藥領(lǐng)域，特別設(shè)及一種美洲大賺提取物及其制備工藝。
【背景技術(shù)】
[0002] 消化道潰瘍，主要指發(fā)生在胃和十二指腸的慢性潰瘍，亦可發(fā)生于食管下段、胃空 腸吻合口周圍及含有異位胃粘膜的美克爾（MECKEL)憩室。大量研究充分證明，幽口螺桿菌 感染是消化性潰瘍的主要原因。其臨床表現(xiàn)為上腹部疼痛，常呈隱痛、純痛、脹痛、燒灼樣 痛。胃潰瘍的疼痛多在餐后1小時內(nèi)出現(xiàn)，經(jīng)1~2小時后逐漸緩解，直至下餐進食后再復(fù) 現(xiàn)上述節(jié)律。部分患者可無癥狀，或W出血、穿孔等并發(fā)癥作為首發(fā)癥狀。潰瘍病是一種慢 性常見病，治療難度較大，一旦罹患潰瘍病，會給患者帶來極大的痛苦。
[0003] 治療消化道潰瘍的西藥主要有硫酸侶、西米替下、奧美拉挫、克拉霉素、阿莫西林、 甲硝挫等。但西藥的副作用較大。相對于西藥，中藥具有更高的安全性。
[0004] 潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerative colitis, UC)，簡稱潰結(jié)，是一種結(jié)、直腸粘膜的彌漫 性炎癥，癥狀W腹瀉為主，排出含有血、脈和粘液的糞便，常伴有陣發(fā)性結(jié)腸疫李性疼痛，并 里急后重，排便后可獲緩解。
[0005] 目前臨床多采用氨基水楊酸類和皮質(zhì)類固酸類藥物治療潰瘍性結(jié)腸炎，但存在停 藥后反彈、療效不穩(wěn)定、長期用藥副作用較大等缺點；手術(shù)治療，就是切除整個結(jié)腸，但由于 手術(shù)的并發(fā)癥較多，嚴(yán)重影響術(shù)后患者的生命質(zhì)量。相對于西藥的副作用大，中藥具有更高 的安全性。
[0006] 當(dāng)前認(rèn)為腸道粘膜免疫系統(tǒng)中促炎細胞因子與抗炎細胞因子的失衡是UC的重要 發(fā)病機制，二者的平衡對于炎性反應(yīng)程度與臨床預(yù)后有重要的意義，大量的研究表明：在 UC的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸的過程中，細胞因子通過調(diào)節(jié)腸道炎癥免疫反應(yīng)而使炎癥加重并持 續(xù)存在，并引起腸組織慢性損傷。因此，對細胞因子的檢測可作為臨床判斷疾病嚴(yán)重程度及 療效的指標(biāo)。
[0007] 美洲大賺（Periplanetaamericana)為昆蟲綱有翅亞綱董賺目董賺科大賺屬昆蟲， 俗稱"蜂卿"，其入藥始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，其中把它列為中品，謂"味：咸、寒；治：血疲證堅 寒熱、破積聚、喉咽閉、內(nèi)寒無子"。"蜂卿"為其俗名首見于《本草綱目拾遺》，也稱其為石姜、 滑蟲；各地方有其不同的稱法，如：偷油婆、茶婆子、灶媽子等。美洲大賺提取的藥液能用于 口腔潰瘍、食道潰瘍、食道黏膜損傷、潰瘍性結(jié)腸炎，促進胃潰瘍及十二指腸潰瘍的愈合，另 外還可促進外傷、刀傷、燒燙傷的愈合。
[0008] 目前，采用現(xiàn)有的美洲大賺提取物制備工藝提取的美洲大賺提取物中小分子膚、 氨基酸等活性成分含量低，而且所得提取物色澤深、腥臭味重，使得部分患者在使用過程中 有抵觸情緒，甚至出現(xiàn)惡屯、、嘔吐等胃腸道不適的情況，導(dǎo)致不能繼續(xù)治療，延誤病情。因 此，尋找一種活性成分含量高、色澤淺、無腥臭味的美洲大賺提取物的制備工藝具有實在的 價值意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 本發(fā)明的目的在于提供一種美洲大賺提取物的制備工藝，所述的工藝過程簡單易 操作，通過所述的制備工藝制備的美洲大賺提取物中的活性成分含量高，色澤淺、無腥臭 味。
[0010] 所述的制備工藝是通過W下方案實現(xiàn)的： A. 浸泡：向稱好的美洲大賺蟲體中加入藥材干重的4~8倍量的體積分?jǐn)?shù)為60~79% 的乙醇冷浸，時間為7~10小時； B. 提?。簩⒉襟EA中得到的美洲大賺與乙醇的混合料液在70~80°C回流2~4次，第 一次回流時，回流時間為2~3小時；第二次W后每次回流，加藥材干重4~7倍量的體積 分?jǐn)?shù)為60~79%乙醇，回流時間為1~2小時；合并每次回流得到的提取液，50~100目 篩網(wǎng)過濾得到乙醇提取液； C. 濃縮：將步驟B得到的乙醇提取液緩慢不起泡的加入到雙效濃縮器中進行 濃縮，濃縮時在一效真空度為-0.02~-0.04Mpa，溫度為65~70 °C ;二效真空度 為-0. 06~-0. 04Mpa，溫度為60~65°C的條件下，濃縮至相對密度為1. 05~1. 15的稠 膏； 化脫脂：將步驟C所得的稠膏加入到已經(jīng)加熱至75~85°C的純化水，純化水的量為稠 膏重量的8~12倍，攬拌8~15分鐘，煮沸保溫30~90分鐘，冷卻后，在10°C W下保存 10~18小時，用濾紙過濾去除上層油脂，得美洲大賺提取物。
[0011] 進一步，所述的制備工藝是通過W下方案實現(xiàn)的： A. 浸泡：向稱好的美洲大賺蟲體中加入藥材干重的8倍量的體積分?jǐn)?shù)為75%的乙醇冷 浸，時間為8小時； B. 提取：將步驟A中得到的美洲大賺與乙醇的混合料液在70~80°C溫度下進行第一 次回流，回流時間為2. 5小時；藥渣中加入原藥材干重的6倍量的75%乙醇在70~80°C溫 度下進行第二次回流，回流時間為2小時；藥渣中繼續(xù)加入原藥材干重的6倍量的75%乙醇 在70~80°C溫度下進行第Ξ次回流，回流時間為2小時；合并Ξ次回流得到的提取液，100 目篩網(wǎng)過濾得到乙醇提取液； C. 濃縮：將步驟B得到的乙醇提取液緩慢不起泡的加入到雙效濃縮器中進行 濃縮，濃縮時在一效真空度為-0.04~-0.02Mpa，溫度為65~70 °C ;二效真空度 為-0. 06~-0. 04Mpa，溫度為60~65°C的條件下，濃縮至相對密度為1. 05~1. 15的稠 膏； 化脫脂：將步驟C所得的稠膏加入到已經(jīng)加熱至80°C的純化水中，純化水的量為稠膏 重量的10倍，攬拌10分鐘，煮沸保溫60分鐘，冷卻后，在10°CW下保存12小時，用濾紙過 濾去除上層油脂，得美洲大賺提取物。
[0012] 通過上述的制備工藝制得的美洲大賺提取物中游離氨基酸、低聚膚類等活性物質(zhì) 成分含量明顯增多，且無腥臭味、液體色澤淺，使用本發(fā)明制備的美洲大賺提取物制備的藥 物在口腔潰瘍、消化道潰瘍、潰瘍性結(jié)腸炎的治療作用上具有明顯的效果，特別是對潰瘍性 結(jié)腸炎的治療作用。具體技術(shù)具有的有益效果如下： (1)本發(fā)明所述的制備工藝中，直接采用美洲大賺的蟲體進行提取，省去了粉碎藥材的 步驟，節(jié)約了能源和成本。
[0013] (2)本發(fā)明所述的制備工藝中，只使用了一次濃縮，使得工藝操作更加簡單。
[0014] (3)通過本發(fā)明所述的制備工藝制備的美洲大賺提取物，無腥臭味，色澤淺。
[0015] (4)用濃度為60%~79%的乙醇提取的美洲大賺提取物中低聚膚的含量可W達到 3. 52g/100g生藥或W上，游離氨基酸含量可W達到3. 54g/100g生藥或W上，比使用80% W 上的乙醇提取的美洲大賺提取物中的游離氨基酸、低聚膚含量高，所W使用低濃度的乙醇 比使用高濃度的乙醇提取的美洲大賺提取物的質(zhì)量好，同時還節(jié)約了成本。
[001引（5)同過本發(fā)明所述的制備工藝得到的美洲大賺提取物，在治療UC上有顯著的效 果，具有實際的臨床意義。
[0017] W下將通過【具體實施方式】對本發(fā)明所述的美洲大賺制備工藝作進一步的說明。
【具體實施方式】
[0018] 本發(fā)明公開了一種美洲大賺提取物及其制備工藝，本領(lǐng)域技術(shù)人員可W借鑒本文 內(nèi)容，適當(dāng)改進工藝參數(shù)實現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領(lǐng)域技術(shù)人 員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明的方法及應(yīng)用已經(jīng)通過較佳實 施例進行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本
【發(fā)明內(nèi)容】
、精神和范圍內(nèi)對本文所述的方法 和應(yīng)用進行改動或適當(dāng)變更與組合，來實現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。
[001引實施例1 將稱好的10kg美洲大賺蟲體中加入藥材干重的8倍量的體積分?jǐn)?shù)為75%的乙醇冷浸 8小時后，進行第一次回流，回流時間為2. 5小時；藥渣中加入原藥材干重的6倍量的75% 乙醇進行第二次回流，回流時間為2小時；藥渣中繼續(xù)加入原藥材干重的6倍量的75%乙 醇進行第Ξ次回流，回流時間為2小時；回流溫度控制在70~80°C，合并Ξ次回流得到的 提取液，將100目篩網(wǎng)過濾得到乙醇提取液緩慢不起泡的加入到雙效濃縮器中進行濃縮， 雙效濃縮器設(shè)置條件為一效真空度為-0. 02~-0. 04Mpa，溫度為65~70°C ;二效真空度 為-0. 06~-0. 04Mpa，溫度為60~65°C，濃縮至相對密度為1. 10的稠膏，將得到的稠膏加 入到已經(jīng)加熱至80°C的純化水中，純化水的量為稠膏重量的10倍，攬拌10分鐘，煮沸保溫 60分鐘，冷卻后，在10°CW下保存12小時，用濾紙過濾去除上層油脂，得淺棟色的美洲大賺 提取物50L。
[0020] 實施例2 將稱好的10kg美洲大賺蟲體中加入藥材干重的8倍量的體積分?jǐn)?shù)為75%的乙醇冷浸8 小時后，進行第一次回流，回流時間為2. 5小時；藥渣中加入原藥材干重的4倍量的75%乙 醇進行第二次回流，回流時間為2小時；回流溫度控制在70~80°C，合并二次回流得到的 提取液，將100目篩網(wǎng)過濾得到乙醇提取液緩慢不起泡的加入到雙效濃縮器中進行濃縮， 雙效濃縮器設(shè)置條件為一效真空度為-0. 02~-0. 04Mpa，溫度為65~70°C ;二效真空度 為-0. 06~-0. 04Mpa，溫度為60~65°C，濃縮至相對密度為1. 08的稠膏，將得到的稠膏加 入到已經(jīng)加熱至80°C的純化水中，純化水的量為稠膏重量的10倍，攬拌10分鐘，煮沸保溫 60分鐘，冷卻后，在10°CW下保存12小時，用濾紙過濾去除上層油脂，得淺棟色的美洲大賺 提取物3化。
[00川 實施例3 將稱好的10kg美洲大賺蟲體中加入藥材干重的8倍量的體積分?jǐn)?shù)為75%的乙醇冷浸 8小時后，進行第一次回流，回流時間為2. 5小時，再將藥渣進行回流提取3次，每次藥渣中 加入原藥材干重的4倍量的75%乙醇進行回流提取，回流時間為2小時，回流溫度控制在 70~80°C，合并四次回流得到的提取液，將100目篩網(wǎng)過濾得到乙醇提取液緩慢不起泡的 加入到雙效濃縮器中進行濃縮，雙效濃縮器設(shè)置條件為一效真空度為-0. 02~-0. 04Mpa， 溫度為65~70°C ;二效真空度為-0. 06~-0. 04Mpa，溫度為60~65°C，濃縮至相對密度 為1. 15的稠膏，將得到的稠膏加入到已經(jīng)加熱至8(TC的純化水中，純化水的量為稠膏重量 的10倍，攬拌10分鐘，煮沸保溫60分鐘，冷卻后，在10°CW下保存12小時，用濾紙過濾去 除上層油脂，得淺棟色的美洲大賺提取物67L。
[00過實施例4 將稱好的5kg美洲大賺蟲體中加入藥材干重的6倍量的體積分?jǐn)?shù)為70%的乙醇冷浸 7小時后，進行第一次回流，回流時間為2小時；藥渣中加入原藥材干重的4倍量的70%乙 醇進行第二次回流，回流時間為1. 5小時；藥渣中繼續(xù)加入原藥材干重的4倍量的70%乙 醇進行第Ξ次回流，回流時間為1小時；回流溫度控制在70~80°C，合并Ξ次回流得到的 提取液，將50目篩網(wǎng)過濾得到乙醇提取液緩慢不起泡的加入到雙效濃縮器中進行濃縮， 雙效濃縮器設(shè)置條件為一效真空度為-0. 02~-0. 04Mpa，溫度為65~70°C ;二效真空度 為-0. 06~-0. 04Mpa，溫度為60~65°C，濃縮至相對密度為1. 12的稠膏，將得到的稠膏加 入到已經(jīng)加熱至85°C的純化水中，純化水的量為稠膏重量的8倍，攬拌15分鐘，煮沸保溫 30分鐘，冷卻后，在10°CW下保存18小時，用濾紙過濾去除上層油脂，得淺棟色的美洲大賺 提取物2化。
[002引 實施例5 將稱好的20kg美洲大賺蟲體中加入藥材干重的4倍量的體積分?jǐn)?shù)為79%的乙醇冷 浸9小時后，進行第一次回流，回流時間為3小時；藥渣中加入原藥材干重的4倍量的79% 乙醇進行第二次回流，回流時間為2小時；藥渣中繼續(xù)加入原藥材干重的4倍量的79%乙 醇進行第Ξ次回流，回流時間為1小時；回流溫度控制在70~80°C，合并Ξ次回流得到的 提取液，將80目篩網(wǎng)過濾得到乙醇提取液緩慢不起泡的加入到雙效濃縮器中進行濃縮， 雙效濃縮器設(shè)置條件為一效真空度為-0. 02~-0. 04Mpa，溫度為65~70°C ;二效真空度 為-0. 06~-0. 04Mpa，溫度為60~65°C，濃縮至相對密度為1. 05的稠膏，將得到的稠膏加 入到已經(jīng)加熱至75Γ的純化水中，純化水的量為稠膏重量的12倍，攬拌10分鐘，煮沸保溫 90分鐘，冷卻后，在10°CW下保存10小時，用濾紙過濾去除上層油脂，得淺棟色的美洲大賺 提取物89L。
[0024] 實施例6 將稱好的10kg美洲大賺蟲體中加入藥材干重的7倍量的體積分?jǐn)?shù)為65%的乙醇冷 浸10小時后，進行第一次回流，回流時間為3小時，藥渣中加入原藥材干重的4倍量的65% 乙醇進行第二次回流，回流時間為2小時，藥渣中加入原藥材干重的4倍量的65%的乙醇 進行第Ξ次回流，回流時間為2小時，回流溫度控制在70~80°C，合并Ξ次回流得到的 提取液；將150目篩網(wǎng)過濾得到乙醇提取液緩慢不起泡的加入到雙效濃縮器中進行濃縮， 雙效濃縮器設(shè)置條件為一效真空度為-0. 02~-0. 04Mpa，溫度為65~70°C ;二效真空度 為-0. 06~-0. 04Mpa，溫度為60~65°C，濃縮至相對密度為1. 08的稠膏，將得到的稠膏加 入到已經(jīng)加熱至80°C的純化水中，純化水的量為稠膏重量的10倍，攬拌8分鐘，煮沸保溫 45分鐘，冷卻后，在10°CW下保存16小時，用濾紙過濾去除上層油脂，得淺棟色的美洲大賺 提取物4化。
[00幼實施例7 將稱好的15kg美洲大賺蟲體中加入藥材干重的8倍量的體積分?jǐn)?shù)為60%的乙醇冷 浸8小時后，進行第一次回流，回流時間為2. 5小時，藥渣中加入原藥材干重的4倍量的 60%乙醇進行第二次回流，回流時間為2小時，藥渣中加入原藥材干重的4倍量的60%的乙 醇進行第Ξ次回流，回流時間為2小時，回流溫度控制在70~80°C，合并Ξ次回流得到的 提取液，將200目篩網(wǎng)過濾得到乙醇提取液緩慢不起泡的加入到雙效濃縮器中進行濃縮， 雙效濃縮器設(shè)置條件為一效真空度為-0. 02~-0. 04Mpa，溫度為65~70°C ;二效真空度 為-0. 06~-0. 04Mpa，溫度為60~65°C，濃縮至相對密度為1. 10的稠膏，將得到的稠膏加 入到已經(jīng)加熱至75°C的純化水中，純化水的量為稠膏重量的11倍，攬拌9分鐘，煮沸保溫 60分鐘，冷卻后，在10°CW下保存12小時，用濾紙過濾去除上層油脂，得淺棟色的美洲大賺 提取物61L。
[0026] 參比實施例1 "化201210446618. 1"實施例1所述的制備方法 A、 粉碎：將20kg干燥的美洲大賺蟲體粉碎，過24目篩，制得美洲大賺粗粉； B、 浸泡：將步驟A所得到美洲大賺粗粉用濃度為95%的乙醇浸泡，使乙醇液面高出粗粉 液面5cm密閉保存，制得粗粉混合液； C、 提?。簩⒉襟EB所得粗粉混合液投入提取罐內(nèi)，在70~85°C的溫度下進行3次回流 提取，對粗粉混合液進行第一次提取時，加100kg濃度95%的乙醇，提取時間為4小時；第二 次W后每次提取加60kg濃度95%的乙醇，提取時間為3小時；合并提取液，過濾得乙醇提取 液； D、 一級濃縮：將步驟C所得乙醇提取液放入單效濃縮器，在真空度-0. 05~-0. 06MPa、 溫度50~60°C的條件下減壓濃縮，至比重為1. 08時，得乙醇濃縮液； E、 脫脂：將步驟D所得乙醇濃縮液移入脫脂罐內(nèi)，加入38kg純化水，邊攬拌邊升溫至 85~95Γ后，攬拌10分鐘，攬拌速度為60轉(zhuǎn)/分，然后保溫靜置1小時使油水分層； F、 二級濃縮：將步驟E所得下層水液放出，經(jīng)濾紙過濾后，濾液移入濃縮器，在溫度 60-80°C、真空度-0. 05~-0. 06MPa條件下減壓濃縮，濃縮至比重為1. 28時，得美洲大賺提 取物8化。
[0027] 參比實施例2專利號"化201210446618. 1"實施例2所述制備方法 A、 粉碎：將20kg干燥的美洲大賺蟲體粉碎，過24目篩，制得美洲大賺粗粉； B、 浸泡：將步驟A所得到美洲大賺粗粉用濃度為92%的乙醇浸泡，使乙醇液面高出粗粉 液面8cm密閉保存，制得粗粉混合液； C、 提?。簩⒉襟EB所得粗粉混合液投入提取罐內(nèi)，在70~85°C的溫度下進行4次回流 提取，對粗粉混合液進行第一次提取時，加100kg濃度92%的乙醇，提取時間為5小時；第二 次W后每次提取加80kg濃度92%的乙醇，提取時間為4小時；合并提取液，過濾得乙醇提取 液； D、 一級濃縮：將步驟C所得乙醇提取液放入單效濃縮器，在真空度-0. 05~-0. 06MPa、 溫度50~60°C的條件下減壓濃縮，至比重為1. 11時，得乙醇濃縮液； E、 脫脂：將步驟D所得乙醇濃縮液移入脫脂罐內(nèi)，加入41. 6kg純化水，邊攬拌邊升溫至 85~95°C后，攬拌40分鐘，攬拌速度為40轉(zhuǎn)/分，然后保溫靜置4小時使油水分層； F、二級濃縮：將步驟E所得下層水液放出，經(jīng)濾紙過濾后，濾液移入濃縮器，在溫度 60~80°C、真空度-0. 05~-0. 06MPa條件下減壓濃縮，濃縮至比重為1. 32時，得美洲大賺 提取物9化。
[002引參比實施例3申請?zhí)?CN201410413571. 8"實施例3所述制備方法 取10kg美洲大賺(粗粉）置于80kg乙醇"（乙醇的體積百分濃度為85%)中浸泡1她， 在溫度為70°C、常壓的條件下浸提化，再在溫度為70°C的條件下加熱回流2.化，濃縮至無 醇味，獲得提取液。
[0029] 取上述制得的提取液加入200kg70°C的純凈水中，攬拌9min，混合均勻后， 自然冷卻至20°C，靜置2地。過濾后，進行真空濃縮，真空濃縮具體為：蒸發(fā)室的真空 表上降到-〇.〇5MPa W下時開始進料；濃縮時，蒸汽壓力不超過0. 15MPa，真空表上降 到-0. 05MPa~-0. 08MPa ;收膏時，目測濃縮液，藥液粘度增大，濃縮成稠膏，真空表壓力下 降時，暫停濃縮，關(guān)閉蒸汽閥和真空累，打開出料閥，放出濃縮液。再用紙漿抽濾，得美洲大 賺提取物54L。
[0030] 參比實施例4使用濃度為85%的乙醇進行提取 將稱好的10kg美洲大賺蟲體中加入藥材干重的8倍量的體積分?jǐn)?shù)為85%的乙醇冷浸 8小時后，進行第一次回流，回流時間為2. 5小時；藥渣中加入原藥材干重的6倍量的85% 乙醇進行第二次回流，回流時間為2小時；藥渣中繼續(xù)加入原藥材干重的6倍量的85%乙 醇進行第Ξ次回流，回流時間為2小時；回流溫度控制在70~80°C，合并Ξ次回流得到的 提取液，將100目篩網(wǎng)過濾得到乙醇提取液緩慢不起泡的加入到雙效濃縮器中進行濃縮， 雙效濃縮器設(shè)置條件為一效真空度為-0. 02~-0. 04Mpa，溫度為65~70°C ;二效真空度 為-0. 06~-0. 04Mpa，溫度為60~65°C，濃縮至相對密度為1. 10的稠膏，將得到的稠膏加 入到已經(jīng)加熱至80°C的純化水中，純化水的量為稠膏重量的10倍，攬拌10分鐘，煮沸保溫 60分鐘，冷卻后，在10°CW下保存12小時，用濾紙過濾去除上層油脂，得美洲大賺提取物 41L。
[0031] 參比實施例5使用濃度為90%的乙醇進行提取 將稱好的10kg美洲大賺蟲體中加入藥材干重的8倍量的體積分?jǐn)?shù)為90%的乙醇冷浸 8小時后，進行第一次回流，回流時間為2. 5小時；藥渣中加入原藥材干重的6倍量的90% 乙醇進行第二次回流，回流時間為2小時；藥渣中繼續(xù)加入原藥材干重的6倍量的90%乙 醇進行第Ξ次回流，回流時間為2小時；回流溫度控制在70~80°C，合并Ξ次回流得到的 提取液，將100目篩網(wǎng)過濾得到乙醇提取液緩慢不起泡的加入到雙效濃縮器中進行濃縮， 雙效濃縮器設(shè)置條件為一效真空度為-0. 02~-0. 04Mpa，溫度為65~70°C ;二效真空度 為-0. 06~-0. 04Mpa，溫度為60~65°C，濃縮至相對密度為1. 10的稠膏，將得到的稠膏加 入到已經(jīng)加熱至8(TC的純化水中，純化水的量為稠膏重量的10倍，攬拌10分鐘，煮沸保溫 60分鐘，冷卻后，在10°CW下保存12小時，用濾紙過濾去除上層油脂，得美洲大賺提取物 46L。
[0032] 參比實施例6使用濃度為95%的乙醇進行提取 將稱好的10kg美洲大賺蟲體中加入藥材干重的8倍量的體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇冷浸 8小時后，進行第一次回流，回流時間為2. 5小時；藥渣中加入原藥材干重的6倍量的95% 乙醇進行第二次回流，回流時間為2小時；藥渣中繼續(xù)加入原藥材干重的6倍量的95%乙 醇進行第Ξ次回流，回流時間為2小時；回流溫度控制在70~80°C，合并Ξ次回流得到的 提取液，將100目篩網(wǎng)過濾得到乙醇提取液緩慢不起泡的加入到雙效濃縮器中進行濃縮， 雙效濃縮器設(shè)置條件為一效真空度為-0. 02~-0. 04Mpa，溫度為65~70°C ;二效真空度 為-0. 06~-0. 04Mpa，溫度為60~65°C，濃縮至相對密度為1. 10的稠膏，將得到的稠膏加 入到已經(jīng)加熱至8(TC的純化水中，純化水的量為稠膏重量的10倍，攬拌10分鐘，煮沸保溫 60分鐘，冷卻后，在10°CW下保存12小時，用濾紙過濾去除上層油脂，得美洲大賺提取物 45L。
[003引 W上參比實施例1和參比實施例2是參照專利號為"ZL201210446618. 1"中 公開的美洲大賺提取物的制備工藝來進行實施的。參比實施例3是參照申請?zhí)枮?"201410413571. 8"公開的美洲大賺提取物的制備工藝來進行實施的。參比實施例4~6是 參照本發(fā)明中實施例1中的條件進行美洲大賺提取物的制備，與實施例1不同之處僅在于 所用乙醇的濃度不同，其余的條件都一樣。
[0034] 通過不同的人對本發(fā)明所述的美洲大賺提取物進行簡單的觀察評判，綜合得到本 發(fā)明所述的美洲大賺提取物基本無腥臭味且色澤淺。
[0035] W下將通過具體的實驗數(shù)據(jù)來對本發(fā)明所述的有益效果作進一步說明： 實驗例1本發(fā)明所述的美洲大賺提取物中活性物質(zhì)的檢測 1、本發(fā)明所述美洲大賺提取物中總低聚膚含量的檢測 (1)標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立 牛血清白蛋白2. 05mg，加水定容至10ml，搖勻，即得標(biāo)準(zhǔn)品溶液。作為母液，然后吸取 母液，加入堿性銅溶液5ml，搖勻。室溫放置10分鐘后，快速加入酪試劑0. 5ml，最后加水稀 釋成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液：〇mg/ml，0. 041mg/ml，0. 082mg/ml，0. 123mg/ml，0. 164mg/ml， 0. 205mg/ml。置30°C水浴鍋中恒溫30分鐘，放冷后在650nm波長處測定吸光度，建立標(biāo)準(zhǔn) 曲線方程。
[0036] ( 2 )供試品溶液的配制 精密量取試樣美洲大賺提取物2ml置于量瓶中，加入10% Ξ氯乙酸溶液至10ml，搖勻， 放置10分鐘，在4000r/min條件下離屯、15分鐘，精密量取上清液1ml至100ml量瓶中，加 水稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。
[0037] (3)含量測定 精密移取供試品1ml，置10ml具塞試管中，加堿性銅溶液5ml，搖勻。室溫放置10分鐘 后，快速加入酪試劑0. 5ml，搖勻，置30°C水浴鍋中恒溫30分鐘，放冷后于波長650皿處測 定吸光度，最終計算得到供試品中低聚膚的含量。
[003引所述的供試品溶液分別是由實施例1~7、參比實施例1~6中所述的美洲大賺提 取物配置而成。
[0039] (4)實驗結(jié)果 供試品中低聚膚的含量的計算公式為
X-樣品中膚的含量，單位為g/iooml ; 標(biāo)準(zhǔn)品中牛血清白蛋白的濃度，單位mg/ml ; 樣品的吸光度； 標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度； F-稀釋倍數(shù)。
[0040] 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的吸光度見表1 : 表1 :標(biāo)準(zhǔn)直線回歸方程
標(biāo)準(zhǔn)直線回歸方程巧=2. 606X+0. 070, R2=0. 996。
[0041] 最終計算得到供試品中低聚膚的含量，將單位換算成g/lOOg生藥后結(jié)果見表2 : 表2 :低聚膚含量_
由表2中數(shù)據(jù)得到胃，實施例1制備的美洲大賺提取物中的低聚膚含量最高，而參比實施 例中制備的美洲大賺提取物中的低聚膚含量在均低于實施例制備的美洲大賺提取物中低 聚膚的含量。由此說明通過本發(fā)明中所述的制備工藝得到的美洲大賺提取物中低聚膚的含 量高。
[0042] 2、本發(fā)明所述的美洲大賺提取物中游離氨基酸的含量測定 (1)標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配置 準(zhǔn)確吸取0. 200ml混合氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品，用抑2. 2的緩沖液稀釋到5ml，濃度為 5.OOnmol/50 μ 1。
[0043] 所述的混合氨基酸為天冬氨酸、蘇氨酸、絲氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、 鄉(xiāng)氨酸、蛋氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、組氨酸、賴氨酸、精氨酸。
[0044] ( 2 )供試品溶液的配置 準(zhǔn)確吸取美洲大賺提取物10ml置于水解管內(nèi)，加入等體積的濃鹽酸，再加入新蒸饋的 苯酪3~4滴，再將水解管放入冷凍劑中冷凍3~5分鐘，抽真空，然后充入高純氮氣，再 抽真空充氮氣，重復(fù)Ξ次后，在充氮氣的狀態(tài)下封口或梓緊螺絲蓋將已封口的水解管放在 110°C ± rC的恒溫干燥箱內(nèi)，水解22小時，取出冷卻。
[0045] 將水解液過濾后，水解液全部轉(zhuǎn)移到50ml容量瓶內(nèi)定容。吸取1ml于5ml容量瓶 內(nèi)，在40~50°C下真空干燥，殘留物用1~2ml水溶解，再干燥，反復(fù)進行2次，最后蒸干， 用2的緩沖溶液溶解，即得供試品溶液。
[0046] (3)最后用氨基酸自動分析儀W外標(biāo)法測定試樣測定液中氨基酸的含量。經(jīng)計算 后，結(jié)果如表3 : 表3游離氨基酸的含量_
由表3結(jié)果可W看出，實施例1中制備的美洲大賺提取物中游離氨基酸的含量最高，而 參比實施例所述的美洲大賺提取物中游離氨基酸的含量明顯低于本發(fā)明所述美洲大賺提 取物中的游離氨基酸的含量。
[0047] 綜上，由表2和表3中的結(jié)果可W看出，通過本發(fā)明所述的制備工藝制備的美洲大 賺提取物中的低聚膚、游離氨基酸的含量明顯高于參比實施例，說明本發(fā)明的制備工藝制 備得到的美洲大賺提取物中的活性成分含量高，同時說明本發(fā)明所述的制備工藝能夠明顯 的提高美洲大賺提取物中活性成分的含量。由上述結(jié)果還可W得到，使用濃度為75%的乙 醇對美洲大賺進行回流提取3次，得到的美洲大賺提取物中的活性成分含量最高，即實施 例1所述的美洲大賺提取物中的活性成分含量最高。
[0048] 實驗例2本發(fā)明所述美洲大賺提取物在潰瘍性結(jié)腸炎上的治療效果 1、建立大鼠 UC模型 取70只健康雄性SD大鼠，禁食不禁水4化后，將直徑2mm橡膠軟管給予石蠟油潤滑后 插入肛口約8cm，再用1ml的注射器將5%TNBS與無水乙醇配成體積比為1:1的混合液0. 6ml 緩慢的注入結(jié)腸，再注入0. 3ml的空氣，輕輕取出后，給予保持肛口高位5min，使藥液充分 到達全結(jié)腸后，放回籠內(nèi)進行飼養(yǎng)，正常對照組（10只）W等容積生理鹽水給予灌腸，1周 后，有66只大鼠 UC建模成功。
[0049] 將建模成功的UC大鼠隨機分為6組，每組11只。
[0050] 2、具體給藥方法 正常對照組（10只）：〇. 9%氯化鋼溶液（lml/200g)進行灌腸，每天1次，共25天； 實驗組： 模型組（11只）：〇. 9%氯化鋼溶液（lml/200g)進行灌腸，每天1次，共25天； 陽性對照組（11只）：美沙拉嗦腸溶片0. 0312g/200g進行灌腸，每天1次，共25天； 實施例1組（11只）：實施例1所述美洲大賺提取物（lml/200g)進行灌腸，每天1次， 共25天； 實施例4組（11只）：實施例4所述美洲大賺提取物（lml/200g)進行灌腸，每天1次， 共25天； 參比實施例2組（11只）：參比實施例2所述美洲大賺提取物（lml/200g)進行灌腸，每 天1次，共25天； 參比實施例3組（11只）：參比實施例3所述美洲大賺提取物（lml/200g)進行灌腸，每 天1次，共25天。
[005。 3、觀測指標(biāo)及方法 (1)肉眼觀察大鼠結(jié)腸情況：包括腸壁是否增厚，腸腔點膜是否充血、水腫、糜爛、饋 瘍、粘連等情況。
[0052] (2) ELISA法檢測大鼠血清中TNF-a、比-6、比-8、比-10的指標(biāo)。
[0053] 4、統(tǒng)計學(xué)處理 采用統(tǒng)計軟件SPSS17. 0進行統(tǒng)計分析，將檢驗資料檢驗，確認(rèn)正態(tài)分布時，結(jié)果W均 數(shù)+標(biāo)準(zhǔn)差（+S)表示，如不滿足正態(tài)分布則采用秩和檢驗。
[0054] 5、實驗結(jié)果 (一）肉眼觀察大鼠結(jié)腸情況 正常組：結(jié)腸粘膜顏色呈現(xiàn)淡粉色、點膜皺襲紋理清晰、表面光滑。
[00巧]模型組：結(jié)腸粘膜顏色發(fā)黑，腸壁增厚、腸腔點膜充血水腫，并有多處糜爛、潰瘍， 腸管外壁與周圍組織粘連，嚴(yán)重者可見腸穿孔。
[0056] 陽性對照組：結(jié)腸粘膜顏色變化、腸管擴張均不明顯，腸壁未見增厚，充血點散在、 少量糜爛，潰瘍消失，或可見潰瘍愈合的癒痕。
[0057] 實施例1組：結(jié)腸粘膜顏色變紅，腸壁未見增厚，充血點散在、少量糜爛，潰瘍消 失，或可見潰瘍愈合的癒痕。
[0058] 實施例4組：結(jié)腸粘膜顏色變紅，腸壁未見增厚，充血點散在、少量糜爛，潰瘍消 失，或可見潰瘍愈合的癒痕。
[0059] 參比實施例2組：結(jié)腸粘膜顏色較暗，呈灰黑色，腸壁增厚、腸腔點膜充血水腫、糜 爛、潰瘍?nèi)源嬖凇?br>[0060] 參比實施例3組：結(jié)腸粘膜顏色較暗，呈灰黑色，腸壁增厚、腸腔點膜充血水腫、糜 爛、潰瘍?nèi)源嬖凇?br>[0061] 從上述直接用肉眼觀察結(jié)腸形態(tài)的結(jié)果中可W初步得出，使用本發(fā)明所述的美洲 大賺提取物治療潰瘍性結(jié)腸炎的效果明顯好于參比實施例2和參比實施例3中所述的美洲 大賺提取物。
[0062] (二）各組大鼠血清中TNF-a、比-6、比-8、比-10的變化 1.各組大鼠血清TNF-a的變化 表4各組大鼠血清TNF-a的變化（+ S)(
pg/ml)_ 注:與正常對照組比較，*P<0.01，與模型組比較，午<0.05, ##P<0.01 ;與陽性對照組相 tt，中<0. 05 由表4中結(jié)果：與正常對照組相比，陽性對照組、實施例1組和實施例4組均無顯著差 異，參比實施例2組與參比實施例3組的TNF-a值均高于正常對照組的TNF-a值，具有統(tǒng)計 學(xué)意義（P<0. 01);與模型組相比，陽性對照組、實施例1組和實施例4組均具有顯著的差異 (P<0. 01);與陽性對照組相比，參比實施例2組與參比實施例3組的TNF-a值均明顯高于陽 性對照組，具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<〇. 05)，而實施例1組和實施例4組與陽性對照組相比均無顯 著差異（P〉〇. 05)。
[0063] 2.大鼠血清比-6的變化 表5各組大鼠血清比-6的變化（+S) (pg/ml)_
注：與正常對照組比較，*P<〇. 01 ;與模型組比較，午<0. 05, ##P<0. 01 ;與陽性對照組相 tt，中<0. 05 由表5結(jié)果：與正常對照組相比，實施例1組、實施4組均不具有顯著性差異；與模型組 相比，陽性對照組、實施例1組和實施例4組均具有顯著差異（P<0. 01)，參比實施例2組合 參比實施例3組均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0. 05);與陽性對照組相比，實施例1組與實施例4組 均無顯著差異（P〉〇. 05)，參比實施例2組與參比實施例3組均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0. 05)。
[0064] 3.大鼠血清比-8的變化 表6各組大鼠血清比-8的變化（+S) (pg/ml)
注:與正常對照組比較，*P<0.01 ;與模型組相比，午<0.05, ##P<0.01 ;與陽性對照組相 tt，中<0. 05 由表6的結(jié)果：與正常對照組比較，陽性對照組、實施例1組、實施例4組均無顯著 差異（P〉0. 05);與模型組相比，陽性對照組、實施例1組、實施例4組均具有顯著的差異 (P<0. 01 )，參比實施例2組和參比實施例3組均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0. 05);與陽性對照組相 比，實施例1組合實施例4組均無顯著差異（P〉0. 05)，參比實施例2組合參比實施例3組均 具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<〇. 05)。
[0065] 4.大鼠血清中比-10的變化 表7各組大鼠血清中比-10的變化（+S) (pg/ml)

注：與正常對照組比較，*P<〇. 01 ;與模型組相比，午<0. 05, ##P<0. 01 ;與陽性對照組相 tt，中<0. 05 由表7結(jié)果：與正常對照組相比，陽性對照組、實施例1組、實施例4組無顯著差異， 但是參比實施例2組和參比實施例3組的IL-10值均顯著低于正常對照組（P<0. 01);與 模型組相比，陽性對照組、實施例1組、實施例4組均具有顯著差異（P<0. 01)，而參比實施 例2組和參比實施例3組具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0. 05);與陽性對照組相比，實施例1組和實 施例4組均無顯著差異（P〉0. 05)，而參比實施例2組和參比實施例3組均具有統(tǒng)計學(xué)意義 (P<0. 05)。
[0066] 綜合表4、表5、表6、表7中的結(jié)果：與正常對照組比較，模型組大鼠血清中促炎細 胞因子（TNF-a、比-6、IL-8)水平升高，抗炎細胞因子IL-10下降，說明本實驗中大鼠 UC模 型建造是成功的。同時，4個表格中的數(shù)據(jù)都顯示，使用實施例1與實施例4中所述的美洲 大賺提取物與使用美沙拉嗦腸溶片治療潰瘍性結(jié)腸炎的效果基本上相同，比參比實施例2 和參比實施例3中所述的美洲大賺提取物治療潰瘍性結(jié)腸炎的效果好。從上面的實驗結(jié)果 還可W看出使用實施例4的美洲大賺提取物治療UC的效果要弱與使用實施例1中所述的 美洲大賺提取物的效果，但比參比實施例中的美洲大賺的效果好。
[0067] 綜上所述，本發(fā)明沒有對美洲大賺進行粉碎處理，而是直接通過濃度為60%~79% 的乙醇進行回流提取，提取液經(jīng)過雙效濃縮器濃縮，脫脂后得到美洲大賺提取物，在運樣簡 單的制備工藝下得到的美洲大賺提取物具有活性成分含量高，治療UC的效果顯著，無腥臭 味，色澤淺的特點。運樣的效果是不可預(yù)料的。
[006引本發(fā)明中所用的美洲大賺為同一批次的有效成分質(zhì)量一致的干燥蟲體。
【主權(quán)項】
1. 一種美洲大蠊提取物的制備工藝，其特征在于包括以下步驟： A. 浸泡：向稱好的美洲大蠊蟲體中加入藥材干重的4~8倍量的體積分?jǐn)?shù)為60~79% 的乙醇冷浸，時間為6~9小時； B. 提取：將步驟A中得到的美洲大蠊與乙醇的混合料液在70~80°C溫度下回流2~ 4次，第一次回流時，回流時間為2~3小時；第二次以后每次回流，加藥材干重4~7倍量 的體積分?jǐn)?shù)為60~79%乙醇，回流時間為1~2小時；合并每次回流得到的提取液，50~ 200目篩網(wǎng)過濾得到乙醇提取液； C. 濃縮：將步驟B得到的乙醇提取液緩慢不起泡的加入到雙效濃縮器中進行 濃縮，濃縮時在一效真空度為-0.02~-0.04Mpa，溫度為65~70 °C ;二效真空度 為-0. 06~-0. 04Mpa，溫度為60~65°C的條件下，濃縮至相對密度為1. 05~1. 15的稠 膏； D. 脫脂：將步驟C所得的稠膏加入到已經(jīng)加熱至75~85°C的純化水，攪拌8~15分 鐘，煮沸保溫30~90分鐘，冷卻后，在KTC以下保存10~18小時，用濾紙過濾去除上層油 月旨，得美洲大蠊提取物。2. 根據(jù)權(quán)利要求1中所述的制備工藝，其特征在于，步驟A可以才用以下技術(shù)方案：向 稱好的美洲大蠊蟲體中加入藥材干重的8倍量的體積分?jǐn)?shù)為75%的乙醇冷浸，時間為8小 時。3. 根據(jù)權(quán)利要求1中所述的制備工藝，其特征在于，步驟B可以才用以下技術(shù)方案：將 步驟A中得到的美洲大蠊與乙醇的混合料液在70~80°C溫度下進行第一次回流，回流時間 為2. 5小時；藥渣中加入原藥材干重的6倍量的75%乙醇在70~80°C下進行第二次回流， 回流時間為2小時；藥渣中繼續(xù)加入原藥材干重的6倍量的75%乙醇在70~80°C下進行 第三次回流，回流時間為2小時；合并三次回流得到的提取液，100目篩網(wǎng)過濾得到乙醇提 取液。4. 根據(jù)權(quán)利要求1中所述的制備工藝，其特征在于，步驟D可以才用以下技術(shù)方案：將 步驟C所得的稠膏加入到已經(jīng)加熱至80°C的純化水中，攪拌10分鐘，煮沸保溫60分鐘，冷 卻后，在KTC以下保存12小時，用濾紙過濾去除上層油脂，得美洲大蠊提取物。5. 根據(jù)權(quán)利要求1中所述的制備工藝，其特征在于，步驟D中所述的純化水的加入量為 稠膏重量的8~12倍。6. 根據(jù)權(quán)利要求1或4或5中所述的制備工藝，其特征在于，步驟D中所述的純化水的 加入量為稠霄重量的10倍。7. 根據(jù)權(quán)利要求1~6中任意一項所述的美洲大蠊的制備工藝制備的美洲大蠊提取 物。
【文檔編號】A61P1/00GK105878292SQ201510614596
【公開日】2016年8月24日
【申請日】2015年9月24日
【發(fā)明人】陳光健
【申請人】陳光健