一種南瓜雌花乙醇提取物在治療糖尿病方面的新用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明具體涉及一種南瓜雌花乙醇提取物在治療糖尿病方面的新用途，屬于生物
技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 南瓜 Cucurbita moschata (Duch. ex Lam. ) Duch. ex Poiret 為萌蘆科南瓜屬草本 植物，世界各地普遍栽培。南瓜是我國夏秋季的主要蔬菜之一，隨著人民生活水平的提高以 及對(duì)營養(yǎng)和健康食品的日益關(guān)注，發(fā)現(xiàn)南瓜不僅營養(yǎng)豐富，長(zhǎng)期食用還具有食療保健和藥 用功能。資料顯示，南瓜產(chǎn)品的綜合開發(fā)與利用已日益受到國內(nèi)外學(xué)者的重視，被認(rèn)為是特 效保健食品。
[0003] 現(xiàn)代藥理學(xué)研宄證實(shí)，南瓜具有降血糖、調(diào)血脂、降血壓等功效，已公開的專利 CN201210466672. 2、CN201210180114. X、CN201110423905. 6 均指出南瓜作為其中主要原料 之一的組合物對(duì)糖尿病具有預(yù)防、治療作用；截止目前，對(duì)南瓜中的化學(xué)活性物質(zhì)基礎(chǔ)研宄 相對(duì)較少，其中的南瓜多糖被認(rèn)為是預(yù)防糖尿病的活性成分之一，它直接參與了降血糖、調(diào) 血脂等有關(guān)活動(dòng)，對(duì)大鼠、家兔、人等有非常顯著的降血糖作用（彭紅，歐陽友生，黃小茉， 等.南瓜多糖的生物活性及其開發(fā)前景，中草藥，2002 :33(7):附5-7)
[0004] 南瓜花是南瓜的花，一般為杏黃色，雌雄同株，單生。南瓜雄花花冠裂片大，先 端長(zhǎng)而尖；雌花花萼裂片葉狀。于6-7月南瓜開花時(shí)采收，新鮮或曬干可作藥用，具有清 濕熱，消腫毒之功效；南瓜花化學(xué)成分及其應(yīng)用于糖尿病治療的報(bào)道極少，已公開的專利 CN200910221844. 8提出了一種能防治糖尿病的養(yǎng)生茶，其制備方法包含有南瓜花等五種植 物組合而成的組合物。單用南瓜雌花用于糖尿病的治療，目前未見研宄報(bào)道。
[0005] 糖尿?。―iabetes mellituS，DM)是一種多病因的代謝性疾病，其特點(diǎn)是慢性高血 糖，伴隨因胰島素（Insulin)分泌及/或作用缺陷所引起的糖、脂肪和蛋白質(zhì)代謝紊亂。糖 尿病主要分為1型、2型及妊娠期糖尿病，其中2型糖尿病占患者群體的90%以上。目前， 糖尿病已經(jīng)成為嚴(yán)重威脅人類健康與生命的主要疾病，世界衛(wèi)生組織報(bào)告2014年全球糖 尿病患者人數(shù)已達(dá)3. 87億，而到2035年將增至5. 92億，增幅將達(dá)53%。此外，中國成為全 球糖尿病患者最多的國家，目前病人數(shù)已超過9600萬，2014年80周歲以下死亡的中國人數(shù) 中，源于糖尿病相關(guān)的疾病約占44%。
[0006] PTP-IB屬于蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶家族，與蛋白酪氨酸激酶（Protein Tyrosine Kinases)共同維持著酪氨酸蛋白磷酸化的平衡，研宄認(rèn)為，PTP-IB與胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)有 關(guān)，PTP-IB抑制劑可通過削弱PTP-IB對(duì)胰島素受體的去磷酸化作用，提高胰島素受體及其 底物-1的磷酸化水平，起到類胰島素和胰島素增敏的作用。近年來，PTP-IB成為抗2型糖 尿病和肥胖癥的新靶點(diǎn)。藥物學(xué)家一直致力于尋找該類酶的抑制劑，以開發(fā)更多的治療糖 尿病藥物。
[0007] 本發(fā)明研宄南瓜雌花的PTP-IB抑制活性，所得提取物可作為輔助治療糖尿病的 藥物或保健品進(jìn)一步研宄開發(fā)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的缺陷，提供一種具有顯著抑制PTP-IB 活性的南瓜雌花提取物及其制備方法，為南瓜雌花在藥物制備或保健品方面的研宄開發(fā)提 供新的用途。
[0009] 為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供了一種南瓜雌花乙醇提取物，以萌蘆科南瓜的干 燥雌花為原料，通過熱回流提取方法制備得到。
[0010] 所述熱回流提取方法為采用乙醇溶液作為溶劑進(jìn)行提取，乙醇溶液的質(zhì)量百分比 濃度為60-100 %，用量為6-10倍藥材質(zhì)量體積，提取次數(shù)為1-3次，提取溫度為60-80°C， 提取時(shí)間為1-3小時(shí)；提取液過濾，經(jīng)減壓濃縮、干燥，得到該乙醇提取物。
[0011] 本發(fā)明還提供了該南瓜雌花乙醇提取物在制備PTP-IB抑制劑類的抗糖尿病藥物 或保健品上的新用途。
[0012] 本發(fā)明南瓜雌花提取物具有PTP-IB抑制活性，可作為輔助治療糖尿病的藥物或 保健品而進(jìn)一步研宄開發(fā)。
【具體實(shí)施方式】
[0013] 下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本發(fā)明的實(shí)施方式不限于此。
[0014] 實(shí)施例1 :南瓜雌花純乙醇提取物的制備
[0015] 南瓜雌花干燥樣品100g，置于三角玻璃瓶中，加入10倍質(zhì)量體積純乙醇，水浴 80°C回流提取2次，每次2小時(shí)；提取液合并過濾，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮、回收溶劑，再經(jīng) 真空干燥，得到南瓜雌花純乙醇提取物粉末。
[0016] 實(shí)施例2 :南瓜雌花80%乙醇提取物的制備
[0017] 南瓜雌花干燥樣品l〇〇g，置于三角玻璃瓶中，加入8倍質(zhì)量體積80%乙醇，水浴 70°C回流提取2次，每次2小時(shí)；提取液合并過濾，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮、回收溶劑，再經(jīng) 真空干燥，得到南瓜雌花80%乙醇提取物粉末。
[0018] 實(shí)施例3 :南瓜雌花60%乙醇提取物的制備
[0019] 南瓜雌花干燥樣品l〇〇g，置于三角玻璃瓶中，加入6倍質(zhì)量體積60%乙醇，水浴 60°C回流提取1次，提取1小時(shí)；提取液過濾，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮、回收溶劑，再經(jīng)真空 干燥，得到南瓜雌花60%乙醇提取物粉末。
[0020] 實(shí)施例4 :南瓜雌花各乙醇提取物對(duì)PTP-IB的抑制實(shí)驗(yàn)
[0021] Biomol Red? PTP IB Tyrosine Phosphatase Drug Discovery Kit(BML-AK822-0001)購于Enzo公司，按試劑盒說明書操作。陽性藥： suramin (BML-KI285)，IOmg粉末溶解于0. 7mL緩沖液，配制濃度為IOmM的儲(chǔ)備液。受試樣 品：根據(jù)樣品溶解性以DMSO/純水配制成20mg/mL母液，依次稀釋為10、4、2mg/mL待用。采 用384孔板篩選體系，反應(yīng)體系（65 μ L) : 15 μ L緩沖液中加入0. 5ng/ μ L PTPlB酶10 μ L， 加入一定濃度的樣品溶液2yL，37°C恒溫下溫育30min后加入底物150μΜ IR5 25 yL， 37°C恒溫反應(yīng)30min后加入顯色劑13 μ L，于620nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度值（A值）。同時(shí)設(shè) 定空白對(duì)照（只加緩沖液）、陰性對(duì)照（只加緩沖液和酶液）和陽性對(duì)照（suramin)。以上 所有樣品及空白反應(yīng)均重復(fù)3次，取平均值為實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
[0022] 抑制率（％ ) = [ (A酶-A酶空）_ (A樣-A樣空）]/ (A酶-A酶空）*100 %
[0023] 取實(shí)施例1~3中制備得到的南瓜雌花各乙醇提取物，對(duì)PTP-IB的抑制活性試驗(yàn) 結(jié)果見下表1。
[0024] 表1樣品對(duì)PTP-IB的抑制活性
[0025]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種南瓜雌花乙醇提取物，以藥食兩用植物南瓜的干燥雌花為原料，通過乙醇熱回 流提取方法制備得到。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的南瓜雌花乙醇提取物，其特征在于：所述乙醇熱回流提取 方法為采用乙醇溶液作為溶劑進(jìn)行提取，乙醇溶液的質(zhì)量百分比濃度為60-100%，用量為 6-10倍藥材質(zhì)量體積，提取次數(shù)為1-3次，提取溫度為60-80°C，提取時(shí)間為1-3小時(shí)；提取 液過濾，經(jīng)減壓濃縮、干燥，得到該乙醇提取物。
3. 權(quán)利要求1所述的南瓜雌花乙醇提取物在治療糖尿病方面的新用途在于：該提取物 在一定濃度下具有顯著抑制蛋白酪氨酸磷酸酶IB(PTP-IB)的作用，可以應(yīng)用于制備抗糖 尿病藥物或保健品。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種南瓜雌花乙醇提取物在治療糖尿病方面的新用途。該南瓜雌花乙醇提取物以藥食兩用植物南瓜的干燥雌花為原料，通過乙醇熱回流提取方法制備得到。本發(fā)明制備的南瓜雌花乙醇提取物對(duì)蛋白酪氨酸磷酸酶1B具有顯著的抑制作用，可作為輔助治療糖尿病的藥物或保健品進(jìn)一步研究開發(fā)。
【IPC分類】A23L1-29, A61P3-10, A61K133-00, A61K36-42
【公開號(hào)】CN104840506
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510245613
【發(fā)明人】趙建斌, 周如初, 李仁明, 趙燕梅, 趙正竹, 王年鶴, 張寒, 陳劍
【申請(qǐng)人】蘇州神良生物科技有限公司
【公開日】2015年8月19日
【申請(qǐng)日】2015年5月13日