一種獨(dú)角蓮多糖提取物的制備方法
【專利摘要】一種獨(dú)角蓮多糖提取物的制備方法，涉及一種多糖提取物的制備方法，具體包括以下制備步驟：向干燥的獨(dú)角蓮根莖粉末中加入1-10%重量比的復(fù)合酶和3-15重量比的水超聲波條件下進(jìn)行酶解；超聲波條件下進(jìn)行提取\抽濾；再通過離心機(jī)濃縮,采用70-95％濃度的乙醇對(duì)上述濃縮液進(jìn)行攪拌混合，醇沉6-18小時(shí)，在3000轉(zhuǎn)/分轉(zhuǎn)速下離心5-20分鐘，收集離心杯底部多糖；干燥，得獨(dú)角蓮多糖提取物產(chǎn)品。本發(fā)明工藝操作簡單實(shí)用，應(yīng)用該工藝提取的獨(dú)角蓮多糖節(jié)省提取時(shí)間，提取率高，提取物具有顯著的抗酪氨酸激酶、抗氧化和抗腫瘤等生物活性。
【專利說明】一種獨(dú)角蓮多糖提取物的制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種多糖提取物的制備方法，特別是涉及一種獨(dú)角蓮多糖提取物的制備方法。

【背景技術(shù)】
[0002]獨(dú)角蓮(Typhoniumgiganteum Engl.)為天南星科(Araceae)犁頭尖屬(Typhonium Schott)植物，是中國特有的一種植物。獨(dú)角蓮主要產(chǎn)于河南、四川、陜西等地，現(xiàn)全國各地亦多栽培，東北地區(qū)產(chǎn)量極高，且價(jià)格較低廉?！睹耖g草藥》、《中藥大辭典》記載，獨(dú)角蓮球莖供藥用，逐寒濕、祛風(fēng)痰、鎮(zhèn)痙、治中風(fēng)痰壅，口眼歪斜、破傷風(fēng)、治跌打損傷、淋巴結(jié)核。迄今為止，對(duì)這種植物的研究仍較少，僅限于民間偏方使用，對(duì)其有效活性成分的研究及應(yīng)用也處于開發(fā)階段。
[0003]多糖是一種廣泛存在于動(dòng)物細(xì)胞膜和植物、微生物細(xì)胞壁中的天然大分子物質(zhì)，是一種重要的生物體能量資源和構(gòu)成材料，同時(shí)還參與細(xì)胞的多種活動(dòng)。研究表明，許多植物多糖具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、降血糖、抗輻射和延緩衰老等生物活性。
[0004]根據(jù)資料查詢和本專利 申請(qǐng)人:試驗(yàn)研究證明，從獨(dú)角蓮中提取的獨(dú)角蓮多糖具有顯著提高免疫力、抗腫瘤、抗氧化等功能。獨(dú)角蓮多糖是純天然物質(zhì)，可以通過食品添加劑、顆粒沖劑、口服液、膠囊、滴丸、軟膠囊等形式制備成保健品或藥品。本專利 申請(qǐng)人:發(fā)表的論文介紹了使用水提醇沉法提取獨(dú)角蓮多糖，Sevag法除蛋白的純化方法，但該提取方法存在提取時(shí)間長，耗能高、活性成分提取物收率低等問題。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供一種獨(dú)角蓮多糖提取物的制備方法，該方法包括材料預(yù)處理、超聲提取或微波提取、濃縮、醇沉、收集、干燥、包裝保存等，應(yīng)用該工藝提取的獨(dú)角蓮多糖節(jié)省提取時(shí)間，提取率高，提取物具有顯著的抗酪氨酸激酶、抗氧化和抗腫瘤等生物活性。
[0006]本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的:
一種獨(dú)角蓮多糖提取物的制備方法，所述方法利用復(fù)合酶在超聲條件下對(duì)藥材進(jìn)行酶解、再進(jìn)行超聲提取、濃縮、醇沉、收集、干燥制得，具體包括以下制備步驟:
O向干燥的獨(dú)角蓮根莖粉末中加入1-10%重量比的復(fù)合酶和3-15重量比的水，在30-90°C下，25ΚΗζ-100ΚΗζ的超聲波條件下進(jìn)行酶解0.5_5h，酶解結(jié)束后加熱滅活復(fù)合酶；
2)25KHz-100KHz的超聲波條件下進(jìn)行1_4次提取，每次l_5h，合并提取液進(jìn)行抽濾；再通過離心機(jī)在2000-4000轉(zhuǎn)/分的條件下離心5-20分鐘，將處理物進(jìn)行固液分離，棄固形物后對(duì)上清液進(jìn)行濃縮；
3)上清液進(jìn)行減壓濃縮，濃縮至原體積的1/4-1/5即可合并提取液；
4)采用70-95%濃度的乙醇對(duì)上述濃縮液進(jìn)行攪拌混合，醇沉6-18小時(shí)，在3000轉(zhuǎn)/分轉(zhuǎn)速下離心5-20分鐘，收集離心杯底部多糖；5)干燥，得獨(dú)角蓮多糖提取物產(chǎn)品。
[0007]所述的一種獨(dú)角蓮多糖提取物的制備方法，所述復(fù)合酶是木瓜蛋白酶、纖維素酶、果膠酶、酸性蛋白酶、角質(zhì)酶、多酞聚糖酶和淀粉酶的任意兩種或多種混合物。
[0008]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)與效果是:
本發(fā)明提供了一種安全、環(huán)保、高效的獨(dú)角蓮多糖提取方法，該方法提取率高、純度高，使用超聲波復(fù)合酶法提取獨(dú)角蓮多糖，包括材料預(yù)處理、超聲提取或微波提取、濃縮、醇沉、收集、干燥、包裝保存等工藝步驟，該工藝操作簡單實(shí)用，應(yīng)用該工藝提取的獨(dú)角蓮多糖節(jié)省提取時(shí)間，提取率高，提取物具有顯著的抗酪氨酸激酶、抗氧化和抗腫瘤等生物活性。

【具體實(shí)施方式】
[0009]下面結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳述。
[0010]下述實(shí)施例中所用試劑均為市售產(chǎn)品，下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。
[0011]實(shí)施例1:
將復(fù)合酶(0.5g木瓜蛋白酶、0.5g纖維素酶、和0.5g淀粉酶)加到50g干燥的獨(dú)角蓮根莖粉末中，加入水200ml，在25KHz的超聲波發(fā)生器中，30°C下，超聲酶解2h，酶解結(jié)束后，在100°C下滅酶lh。選用頻率為10KHz的超聲波條件，對(duì)上述經(jīng)預(yù)處理過的提取材料進(jìn)行提取2次，每次lh，合并提取液，通過離心機(jī)在3000轉(zhuǎn)/分的條件下離心10分鐘，將處理物進(jìn)行固液分離，棄固形物后對(duì)上清液進(jìn)行濃縮；在601:對(duì)收集上清液進(jìn)行減壓濃縮，濃縮至原體積的1/5即可；采用95%濃度的乙醇對(duì)上述濃縮液進(jìn)行攪拌混合，濃縮液醇沉12小時(shí)后，在3000轉(zhuǎn)/分轉(zhuǎn)速下離心10分鐘，收集離心杯底部多糖；將收集的多糖置真空干燥箱內(nèi)，在50°C真空干燥；收率3.1%，多糖含量38.9%。
[0012]實(shí)施例2:
將復(fù)合酶(1.0g纖維素酶、和0.5g果膠酶)加到50g干燥的獨(dú)角蓮根莖粉末中，加入水250ml，在25KHz的超聲波發(fā)生器中，30°C下，超聲酶解2h，酶解結(jié)束后，在100°C下滅酶lh。選用頻率為SOKHz的超聲波條件，對(duì)上述經(jīng)預(yù)處理過的提取材料進(jìn)行提取2次，每次lh，合并提取液，通過離心機(jī)在3000轉(zhuǎn)/分的條件下離心10分鐘，將處理物進(jìn)行固液分離，棄固形物后對(duì)上清液進(jìn)行濃縮；在601:對(duì)收集上清液進(jìn)行減壓濃縮，濃縮至原體積的1/4即可；采用80%濃度的乙醇對(duì)上述濃縮液進(jìn)行攪拌混合，濃縮液醇沉10小時(shí)后，在3000轉(zhuǎn)/分轉(zhuǎn)速下離心10分鐘，收集離心杯底部多糖；將收集的多糖置真空干燥箱內(nèi)，在50°C真空干燥；收率3.5%,多糖含量32.4%ο
[0013]實(shí)施例3:
將復(fù)合酶(1.0g纖維素酶、和0.5g淀粉酶)加到50g干燥的獨(dú)角蓮根莖粉末中，加入水500ml，在25KHz的超聲波發(fā)生器中，30°C下，超聲酶解4h，酶解結(jié)束后，在100°C下滅酶lh。選用頻率為10KHz的超聲波條件，對(duì)上述經(jīng)預(yù)處理過的提取材料進(jìn)行提取2次，每次lh，合并提取液，通過離心機(jī)在3000轉(zhuǎn)/分的條件下離心10分鐘，將處理物進(jìn)行固液分離，棄固形物后對(duì)上清液進(jìn)行濃縮；在601:對(duì)收集上清液進(jìn)行減壓濃縮，濃縮至原體積的1/4即可；采用90%濃度的乙醇對(duì)上述濃縮液進(jìn)行攪拌混合，濃縮液醇沉12小時(shí)后，在3000轉(zhuǎn)/分轉(zhuǎn)速下離心10分鐘，收集離心杯底部多糖；將收集的多糖置真空干燥箱內(nèi)，在50°C真空干燥；收率3.3%，多糖含量34.4%。
[0014]實(shí)施例4:
將復(fù)合酶(0.5g酸性蛋白酶和0.5g多酞聚糖酶)加到50g干燥的獨(dú)角蓮根莖粉末中，加入水300ml，在25KHz的超聲波發(fā)生器中，30°C下，超聲酶解lh_4h，酶解結(jié)束后，在100°C下滅酶0.5-lh。選用頻率為10KHz的超聲波條件，對(duì)上述經(jīng)預(yù)處理過的提取材料進(jìn)行提取2次，每次Ih，合并提取液，通過離心機(jī)在3000轉(zhuǎn)/分的條件下離心15分鐘，將處理物進(jìn)行固液分離，棄固形物后對(duì)上清液進(jìn)行濃縮；在601:對(duì)收集上清液進(jìn)行減壓濃縮，濃縮至原體積的1/4即可；采用，75%濃度的乙醇對(duì)上述濃縮液進(jìn)行攪拌混合，濃縮液醇沉12小時(shí)后，在3000轉(zhuǎn)/分轉(zhuǎn)速下離心10分鐘，收集離心杯底部多糖；將收集的多糖置真空干燥箱內(nèi)，在50°C真空干燥 ；收率3.1%，多糖含量33.8%。
【權(quán)利要求】
1.一種獨(dú)角蓮多糖提取物的制備方法，其特征在于，所述方法利用復(fù)合酶在超聲條件下對(duì)藥材進(jìn)行酶解、再進(jìn)行超聲提取、濃縮、醇沉、收集、干燥制得，具體包括以下制備步驟: 1)向干燥的獨(dú)角蓮根莖粉末中加入1-10%重量比的復(fù)合酶和3-15重量比的水，在30-90°C下，25ΚΗζ-100ΚΗζ的超聲波條件下進(jìn)行酶解0.5_5h，酶解結(jié)束后加熱滅活復(fù)合酶； 2)25KHz-100KHz的超聲波條件下進(jìn)行1_4次提取，每次l_5h，合并提取液進(jìn)行抽濾；再通過離心機(jī)在2000-4000轉(zhuǎn)/分的條件下離心5-20分鐘，將處理物進(jìn)行固液分離，棄固形物后對(duì)上清液進(jìn)行濃縮； 3)上清液進(jìn)行減壓濃縮，濃縮至原體積的1/4-1/5即可合并提取液； 4)采用70-95%濃度的乙醇對(duì)上述濃縮液進(jìn)行攪拌混合，醇沉6-18小時(shí)，在3000轉(zhuǎn)/分轉(zhuǎn)速下離心5-20分鐘，收集離心杯底部多糖； 5)干燥，得獨(dú)角蓮多糖提取物產(chǎn)品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種獨(dú)角蓮多糖提取物的制備方法，其特征在于，所述復(fù)合酶是木瓜蛋白酶、纖維素酶、果膠酶、酸性蛋白酶、角質(zhì)酶、多酞聚糖酶和淀粉酶的任意兩種或多種混合物。
【文檔編號(hào)】A61P39/06GK104072627SQ201410243448
【公開日】2014年10月1日 申請(qǐng)日期:2014年6月4日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月4日
【發(fā)明者】宋艷玲, 鮑微澤, 賈金龍, 孫歡, 劉曉娟 申請(qǐng)人:沈陽化工大學(xué)