專利名稱：提取物及其醫(yī)藥用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及由旋復花、代赫石、竹葉和淡豆豉得到的提取物，其含有50-90重量％總黃酮，及其在抗抑郁方面的用途。
背景技術：
本發(fā)明的提取物由旋覆花，代赭石，竹葉和淡豆豉得到，其中所含的組分旋覆花，代赭石，竹葉和淡豆豉是藥典收藏的無毒中藥材。到目前未見上述四種組分且含50-90重量％總黃酮的提取物在抗抑郁方面的報告。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明人現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)由旋覆花、代赭石、竹葉和淡豆豉組成且含50-90重量％總黃酮的提取物具有出人意料的抗抑郁作用，本發(fā)明基于上述發(fā)現(xiàn)現(xiàn)已完成。
因此，本發(fā)明涉及一種提取物，其是旋覆花，代赭石，竹葉和淡豆豉的提取物并且含50-90重量％的總黃酮。
本發(fā)明進一步涉及用于抗抑郁的產(chǎn)品或藥物組合物，其含旋覆花，代赭石，竹葉和淡豆豉的提取物及藥物載體，其中所述提取物含50-90重量％總黃酮。
本發(fā)明還涉及由旋覆花，代赭石，竹葉和淡豆豉組成且含50-90重量％總黃酮的提取物在制備用于抗抑郁的產(chǎn)品或藥物中用途。
根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明提取物是通過用水，C1-4烷基醇或它們的混合物提取旋覆花，代赭石，竹葉和淡豆豉的混合物得到的。
根據(jù)本發(fā)明，術語C1-4烷基醇舉例講可是甲醇，乙醇，丙醇，異丙醇，丁醇，異丁醇或叔丁醇。
根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明藥物組合物中載體為制藥領域常用的藥用賦形劑或藥用輔料，如藥用添加劑，稀釋劑或崩解劑等。
根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明中所述產(chǎn)品是指不作為藥物的產(chǎn)品，如功能性食品或保健產(chǎn)品。
根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明提取物中總黃酮可通過下面方法定性并定量測定定性采用鹽酸-鎂粉還原反應取少量樣品溶于熱甲醇中，加入少許鎂粉振搖滴加濃鹽酸后，升起的泡末呈紅色。顯示樣品中含有黃酮、黃酮醇或雙氫黃酮醇。
含量測定以蘆丁為標準品，具體方法如下1.蘆丁標準液的配置準確稱取干燥恒重的蘆丁標準品0.0752g，用30％乙醇溶解并定容至250ml，搖勻得濃度為0.3008g/L的標準液。
2.工作曲線的測定分別取上述蘆丁標準溶液0.4、0.8、1.6、2.4、3.2ml于5只10ml容量瓶中，用30％乙醇補充至5ml，加入0.28ml 5％亞硝酸鈉，搖勻，放置5min后，加入0.28ml 10％硝酸鋁，6min后加入2ml 1mol/L NaOH，混勻，用30％乙醇稀釋至刻度，10min后于510nm處比色測定，試劑為空白參比。
3.黃酮含量測定稱取含總黃酮的提取物0.1000g，用30％乙醇溶液溶解并定容至100ml，搖勻得濃度為1.000g/L的溶液，移取1ml溶液于10ml容量瓶中，按上面2方法操作，測定吸光度，以工作曲線所得標準方程計算黃酮含量。
根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明的藥物組合物或提取物可通過口服或非腸道途徑給藥。適于口服給藥的劑型舉例講有片劑，膠囊，溶液，懸浮液，顆粒劑或丸劑等。適于非腸道途徑如靜脈，皮下或肌內(nèi)給藥的劑型舉例講有注射液。
下面的實施例用來進一步說明本發(fā)明，但其不意味著對本發(fā)明的任何限制。
實施例1
旋復花，代赭石，竹葉和淡豆豉混合物的總黃酮提取物制備制備方法旋復花2000g、代赭石2000g、竹葉1000g、淡豆豉1000g，加入70％乙醇回流提取3遍(V/W＝6∶1)，過濾、減壓濃縮，冷凍干燥得到提取物784g。用水分散成懸浮狀溶液(提取物與水的重量比為1∶1.5)，石油醚萃取4遍(石油醚與懸浮溶液的體積比為1∶1)，棄去石油醚層，水層用水進一步分散(藥材∶水(1∶1))，離心，棄去沉淀；水層采用AB-8大孔樹脂(每4L樹脂的上樣量相當于3kg藥材)水洗兩個柱體積，棄去水洗脫液，70％乙醇洗脫至洗脫液呈淡黃色，70％乙醇洗脫液減壓濃縮烘干(50℃)，得到含總黃酮的提取物133g，產(chǎn)率為2.22％。用上面所述總黃酮測定方法和/或比色法測得實施例1所制備提取物中總黃酮含量為76.03重量％。
實施例2實施例1提取物的抗抑郁作用評價實驗材料實驗動物雄性昆明系小鼠，體重18-22g，購自本院實驗動物中心；雄性SPF級CD-1小鼠，購自北京維通利華實驗動物技術有限公司。雄性SPF級Wistar大鼠，體重160-180g，購自北京維通利華實驗動物技術有限公司。均飼養(yǎng)于本院實驗動物中心。
受試樣品實施例1提取物、去甲丙米嗪(DIM，SIGMA公司)、丙咪嗪(IMI，SIGMA公司)。
實驗儀器玻璃量筒，自制小鼠懸尾實驗觀察箱，秒表等。
實驗方法及結(jié)果小鼠給藥方法將小鼠50只隨機分為五組，分別為空白對照組、DIM組、實施例1提取物大、中、小劑量組，每組10只(或12只)。一次急性給藥后測試，其中DIM組或IMI組動物腹腔注射0.5小時后測試，其他四組均灌胃給藥1小時后測試(空白對照組給服蒸餾水)。
大鼠給藥方法將大鼠40只隨機分為五組，分別為空白對照組、DIM組、實施例1提取物大、中、小劑量組，每組8只。一次急性給藥后測試，其中DIM組動物腹腔注射0.5小時后測試，其他四組均灌胃給藥1小時后測試(空白對照組給服蒸餾水)。
小鼠強迫游泳試驗根據(jù)Porsolt建立的方法，將動物放入高20cm，直徑12cm，水深10cm的量筒，觀察6分鐘，記錄后4分鐘的不動時間。結(jié)果見表1。
小鼠懸尾試驗根據(jù)Lucien Steru等建立的方法本室改進，用夾子將小鼠尾端20mm處固定，使其呈倒懸狀態(tài)，觀察6分鐘，記錄后4分鐘的不動時間。結(jié)果見表2。
大鼠強迫游泳試驗根據(jù)Porsolt建立的方法。將大鼠置于盛有的自來水的玻璃缸(直徑18cm，高40cm)中，水深23cm，水溫28℃，游泳15分鐘后取出置于紅外線電暖爐前，用干布將動物身體上的水分擦拭后烤干。給藥后1小時，再次將大鼠放入上述同等條件的水缸中，累計觀察大鼠在5分鐘內(nèi)的不動時間。陽性對照藥丙米嗪在實驗前30分鐘腹腔注射。結(jié)果見表3。
小鼠5-HTP甩頭試驗給藥后1小時(其中陽性對照藥IMI30分鐘)后，腹腔注射5-HTP120mg/kg，即刻開始記錄20min內(nèi)小鼠甩頭次數(shù)。結(jié)果見表4。
數(shù)據(jù)處理所有數(shù)據(jù)以X±SD表示，組間差異用t檢驗。
表1 實施例1提取物對小鼠強迫游泳實驗不動時間的影響

注與空白組比較，*P＜0.05 **P＜0.01表2 實施例1提取物對小鼠懸尾實驗不動時間的影響

注與空白組比較，*P＜0.05 **P＜0.01表3 實施例1提取物對大鼠強迫游泳試驗不動時間的影響

注與空白組比較，*P＜0.05
表4 實施例1提取物對小鼠5-HTP甩頭試驗的影響

注與空白組比較，*P＜0.05 **P＜0.01結(jié)論研究表明，實施例1的總黃酮提取物可以顯著縮短小鼠強迫游泳試驗、小鼠懸尾試驗、大鼠強迫游泳試驗的不動時間，顯著增加小鼠5-HTP試驗的甩頭次數(shù)。顯示其具有抗抑郁作用。
權(quán)利要求
1.旋覆花，代赭石，竹葉和淡豆豉的提取物，其含有50-90重量％總黃酮。
2.一種產(chǎn)品或藥物組合物，其包括由旋覆花，代赭石，竹葉和淡豆豉得到的提取物及藥用載體，其中所述提取物含50-90重量％的總黃酮。
3.由旋覆花，代赭石，竹葉和淡豆豉得到的提取物在制備用于提取物的產(chǎn)品或藥物中用途，其中所述提取物含50-90重量％總黃酮。
4.權(quán)利要求1的提取物，其含有76.03重量％總黃酮。
5.權(quán)利要求2的產(chǎn)品或藥物組合物，其中所述提取物含有76.03重量％總黃酮。
6.權(quán)利要求3的產(chǎn)品或藥物組合物，其中所述提取物含有76.03重量％總黃酮。
全文摘要
本發(fā)明涉及由旋復花、代赫石、竹葉和淡豆豉得到的提取物，其含有50－90重量％總黃酮，及其在抗抑郁方面的用途。
文檔編號A61P25/24GK1660154SQ200410006049
公開日2005年8月31日 申請日期2004年2月27日 優(yōu)先權(quán)日2004年2月27日
發(fā)明者李云峰, 張有志, 于能江, 袁莉, 趙毅民, 肖文彬, 羅質(zhì)璞 申請人:中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院毒物藥物研究所