一類二肽硼酸化合物及制備方法和用圖
【專利摘要】本發(fā)明公開了二肽硼酸化合物及制備方法和用途，本發(fā)明目的在于提供一種結構新穎的且具有抑制蛋白酶體功能的新型硼酸類化合物。本發(fā)明為式Ⅰ所示的結構，式Ⅰ：所述R為本發(fā)明具有阻斷腫瘤細胞增殖、誘發(fā)腫瘤細胞調(diào)亡，從而可用于多種疾病如惡性腫瘤治療等效果。
【專利說明】
一類二肽硼酸化合物及制備方法和用途
技術領域
[0001] 本發(fā)明涉及含肽硼酸化合物，具體涉及二肽硼酸化合物，并涉及這些化合物的合 成方法。
【背景技術】
[0002] 惡性腫瘤仍然是威脅人們生命與健康的一種主要疾病。目前雖然在治療惡性腫瘤 方面人類已經(jīng)取得了可喜的進展，但離治愈癌癥還有很長的路要走。目前上市的抗癌藥物 大多有嚴重的毒副作用。如何從抑制相關腫瘤誘導酶來研究靶向性的新型抗癌藥物已成為 藥物科學家們的一個研究新藥的重要途徑。
[0003] 細胞內(nèi)蛋白質(zhì)的產(chǎn)生和降解必須保持著動態(tài)平衡，才能維持細胞的穩(wěn)態(tài)和正常功 能。泛素-蛋白酶體途徑(111^911；[1：；[1111'0丨63801116。31：1^350可高效并高選擇性地降解細胞 內(nèi)蛋白質(zhì)，尤其是一些短壽命的細胞周期調(diào)節(jié)蛋白、癌基因和抑癌基因產(chǎn)物以及變性變構 蛋白等。當泛素-蛋白酶體系統(tǒng)對靶蛋白的降解功能失常時，可以引起癌蛋白聚集、抑癌蛋 白異常降解、突變細胞凋亡受阻和增殖加速，從而導致腫瘤的發(fā)生。
[0004] UPP的異常改變不僅與惡性腫瘤的病因?qū)W有著直接關素，并且與惡性腫瘤的發(fā)展 和預后有著密切的關系，針對這個療效確證的靶點酶，如何開發(fā)出一種價廉、療效高的蛋白 酶體抑制劑藥物是目前我們所關注的問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明目的是提供一種結構新穎的且具有抑制蛋白酶體功能的新型硼酸類化合 物，提供一種阻斷腫瘤細胞增殖、誘發(fā)腫瘤細胞調(diào)亡，從而可用于多種疾病如惡性腫瘤治療 的二肽硼酸化合物。
[0006] 本發(fā)明通過下述技術方案實現(xiàn)：
[0007] 二肽硼酸化合物，為式I所示的結構，
[0008] 式：
通過該結構的設置，能有效達到阻斷腫瘤細胞增殖、 誘發(fā)腫瘤細胞調(diào)亡的效果。
[0009] 本發(fā)明中R的優(yōu)選結構有三種，分別為
或
[0010] 上述三種結構的可以歸納為兩種合成途徑。
[0011] 途徑一為：
[0012]
J
[0015] 其中，有機堿為TEA、DIPEA或吡啶等物質(zhì)。
[0016]
時，采用途徑一的合成路線，R為R
時，采用途徑二的合成路線。
[0017] 其中，R為
時，該化學結構合成采用的原料一，
原

料二》 原料三為構 ? ' ，
[0018] 原料二中的R5為C1~C5的烷基，或含有雜原子N、S或0的支鏈烷基，或R5為取代或 非取代的苯基、芐基、萘基、5~6元雜環(huán)基;該R5的取代基為C 1~4的烷基、C 1~4的烷氧 基、鹵素或C 1~4的鹵代烷基；
[0019] 原料一中的R6為取代或非取代的苯基、萘基、5~6元雜環(huán)基，該R6的取代基為C 1 ~4的烷基、C 1~4的烷氧基、鹵素或C 1~4的鹵代烷基。

[0020] R為 ；時，該化學結構合成采用的原料一） K原料二為 9 R1C1，原料三為均
[0021]原料一中的X為碳原子或氮原子，原料二中的R1為取代或非取代的C 1~10的烷酰 基、C 1~10的烷氧?；?、苯磺?；⒈锦；?、萘?；螂s環(huán)?；揜1的取代基為C 1~4的 烷基、C 1~4的烷氧基、鹵素或C 1~4的鹵代烷基。
[0022]
i時，該化學結構合成采用的原料一為
原料二為 R2C1，原料三為?
[0023]原料二中的R2為取代或非取代的C 1~10的烷?；?、C 1~10的烷氧?；?、苯?；?、 萘?；螂s環(huán)?；?該R2的取代基為C 1~4的烷基、C 1~4的烷氧基、鹵素或C 1~4的鹵代 烷基。
[0024]上述三種優(yōu)選結構的具體合成路徑如下：
[0025] 第一種優(yōu)選的結構，所述式I中R3即本發(fā)明化合物的結構式
? 為：
i .·
[0026] 上述第一種優(yōu)選結構的具體合成路線為：
[0027]
[0028]本優(yōu)選結構中，所述R5為C1~C5的烷基，或含有雜原子N、S或0的支鏈烷基，或R5為 取代或非取代的苯基、芐基、萘基、5~6元雜環(huán)基;該R5的取代基為C 1~4的烷基、C 1~4的 烷氧基、鹵素或C 1~4的鹵代烷基；
[0029] 所述R6為取代或非取代的苯基、萘基、5~6元雜環(huán)基，該R6的取代基為C 1~4的烷 基、C 1~4的烷氧基、鹵素或C 1~4的鹵代烷基。
[0030] 本發(fā)明中所述雜環(huán)酰基中的雜原子為N、S或0。所述5~6元雜環(huán)基中的雜原子為N、 S或0〇
[0031] 第二種優(yōu)選結構，所述式I中R為
即本發(fā)明化合物的結構式為：
[0032] 上述第二種優(yōu)選結構的具體合成路線為：
[0033]
[0034] 本優(yōu)選結構中，所述X為碳原子或氮原子；
[0035]所述R1為取代或非取代的C 1~10的烷?； 1~10的烷氧?；⒈交酋；?、苯酰 基、萘酰基或雜環(huán)?；揜1的取代基為C1~4的烷基、C 1~4的烷氧基、鹵素或C 1~4的鹵 代烷基。
[0036]第三種優(yōu)選的結構，所述式I中R，
]本發(fā)明化合物的結構式為：
[0037]上述第三種優(yōu)選結構的具體合成路線為：
[0038] i
? Ο
[0039] 本優(yōu)選結構中，所述R2為取代或非取代的C 1~10的烷?；?、C 1~10的烷氧?；?、 苯酰基、萘?；螂s環(huán)酰基;該R2的取代基為C 1~4的烷基、C 1~4的烷氧基、鹵素或C 1~ 4的鹵代烷基。
[0040] 利用上述二肽硼酸化合物作為蛋白酶體抑制劑在腫瘤中的運用。通過本發(fā)明的新 化合物能有效達到阻斷腫瘤細胞增殖、誘發(fā)腫瘤細胞調(diào)亡，從而可用于多種疾病如惡性腫 瘤的治療。
[0041 ]本發(fā)明中R1為取代或非取代的C 1~10的烷?；?、C 1~10的烷氧酰基、苯磺酰基、 苯酰基、萘?；螂s環(huán)?；?，該R1的取代基為C 1~4的烷基、C 1~4的烷氧基、鹵素或C 1~ 4的鹵代烷基。是指:該R1可以是C 1~10的烷酰基、C 1~10的烷氧?；?、苯磺?；?、苯?；?、 萘酰基以及雜環(huán)?；械娜我环N，也可以是C 1~10的烷?；?、C 1~10的烷氧酰基、苯磺酰 基、苯?；⑤刘；约半s環(huán)?；腥我环N經(jīng)過取代基取代后的結構，該取代基為C 1~4的 烷基、C 1~4的烷氧基、鹵素以及C 1~4的鹵代烷基中的任一種。
[0042] 其中，C1~4的烷基是指含有1~4個碳原子的飽和烴基。雜環(huán)烷基是指非芳族雜碳 環(huán)基，包括環(huán)化的烷基，其中一個或多個成環(huán)碳原子被雜原子例如〇，N或S原子取代。雜環(huán)烷 基優(yōu)選具有3，4，5，6或7個成環(huán)原子。
[0043] 本發(fā)明與現(xiàn)有技術相比，具有如下的優(yōu)點和有益效果：
[0044] 1、本發(fā)明提供了一種結構新穎的新型硼酸類化合物，該化合物均能有效作用在泛 素-蛋白酶體途徑中，其具有抑制蛋白酶體的功能，能有效阻斷腫瘤細胞增殖，誘發(fā)腫瘤細 胞調(diào)亡，因而可用于多種疾病如惡性腫瘤的治療；
[0045] 2、本發(fā)明的新型硼酸類化合物均對蛋白酶體有抑制作用，且通過試驗證明，當式I 中R為
時，本發(fā)明的化合物活性極高，效果極其顯著。
【具體實施方式】
[0046] 為使本發(fā)明的目的、技術方案和優(yōu)點更加清楚明白，下面結合實施例，對本發(fā)明作 進一步的詳細說明，本發(fā)明的示意性實施方式及其說明僅用于解釋本發(fā)明，并不作為對本 發(fā)明的限定。
[0047] 實施例1
[0048] 將3-氨基苯甲酸甲酯（1.35g，7.35mmol)、吡啶-3-甲酸（1. Og，7.35mmol)和TBTU (2.86g，22.35mmol)投入50mL圓底燒瓶中，加 DMF(18mL)溶清，冰水浴降溫至0°C，滴加 DIPEA (2.88g，8.94mL)，加畢，室溫攪拌過夜，用乙酸乙酯（20mL)稀釋，依次用lmol/L鹽酸（10mL)、 飽和碳酸氫鈉溶液(10mL)洗滌，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮，得褐色油狀物1.3g。
[0049] 將該褐色油狀物和氫氧化鈉 （lg，25mmol)投入50mL原底燒瓶中，加甲醇（25mL)溶 清，室溫攪拌過夜，旋干溶劑，殘余物用水(20mL)溶解澄清，用2mol/L鹽酸調(diào)至pH5,抽濾，得 白色中間固體1.1 8，收率91.2%。
[0050] 該白色中間固體的結構為
〇
[0051 ]將上述白色中間固體（0.351g，1.45mmol)、原料三（0.5g，1.32mmol)和TBTU (0.51 g，1.58mmo 1)投入50mL圓底燒瓶中，加 DMF (4mL)溶清，冰水浴降溫至0 °C，滴加 DI PEA (2.88g，8.94mL)，加畢，0°C攪拌5min，滴加入飽和碳酸氫鈉溶液(25mL)，抽濾，得黃色中間 固體0.39 8，收率65%。
[0052]該黃色中間固體的結構為 、' 9
[0053] 將上述黃色中間固體（0· 39g，0 · 79mmol)、甲醇（8mL)、正己燒（8mL)、2mol/L鹽酸 (41111)和異丁基硼酸(0.378,3.61]11]1〇1)投入5〇1111^圓底燒瓶中，室溫攪拌4811，棄去正己燒層， 旋干溶劑，殘余物用lmol/L氫氧化鈉溶解，用乙酸乙酯（10mLX2)萃取，水相用lmol/L鹽酸 調(diào)至pH 5~6，抽濾，得白色固體成品140mg，收率50 %。該白色固體成品即為成品1。
[0054] 成品1的結構為
>H該結構的圖譜檢測結果如下： ' 9
[0055] MS m/z 338(M-OH) JH-匪R(400MHz，DMS0)S(ppm): 10.63(s，lH)，9.31(s，lH)， 9.11~9.12(d，lH)，8.76~8.77(t，lH)，8.28~8.34(m，2H)，7.96(m，lH)，7.45~7.59(t， 2H)，2.86(d，lH)，1.76(m，lH)，1.42(m，2H)，0.87~0.91(t，6H)。
[0056] 實施例2
[0057] 本實施例與實施例1的區(qū)別在于，將實施例1中的將吡啶-3-甲酸替換成苯甲酸，制 得的褐色油狀物為1.5g，然后制得的白色中間固體為1. lg，收率91.2%。
[0058] 該白色中間固體的結構為：
[0059] 該黃色中間固體為〇 . 3 9 g，收率6 5 %。該黃色中間固體的結構為：
[0061] 成品2的結構為 < 該結構的圖譜檢測結果如下：
[0060] 白色固體成品為80mg，收率33 %。該白色固體成品即為成品2。
i
[0062] MS m/z 337(1-010^11-匪R(400MHz，DMS0)S(ppm) :10.47~10.51(d，lH)，7.96~ 8.06(m，2H)，7.70~7.78(m，lH)，7.78~7.61(m，3H)，1.76~1.79(t，lH)，1.40~1.45(m， 2H)，1.17~1.23(m，lH)，0.57~0.83(t，6H)。
[0063] 實施例3
[0064] 本實施例與實施例1的區(qū)別在于，將實施例1中的吡啶-3-甲酸（1.0g，7.35mmol^ 換成2-呋喃甲酸(0.98g，8.8mmol)，制得的褐色油狀物為1.5g，將該褐色油狀物和氫氧化鈉 (lg，25mmol)投入50mL原底燒瓶中，加甲醇(25mL)溶清，室溫攪拌過夜，旋干溶劑，殘余物用 水（20mL)溶解澄清，用2mol/L鹽酸調(diào)至pH5，抽濾，制得的白色中間固體為0.98g，收率 83.2%〇
[0065] 該白色中間固體的結構為

[0066] 將上述白色中間固體(0.348，1.45111111〇1)、原料三（0.58，1.32111111〇1)和了81'1](0.51 8， 1.58mmo 1)投入50mL圓底燒瓶中，加 DMF (4mL)溶清，冰水浴降溫至0 °C，滴加 DI PEA (2.88g， 8.94mL)，加畢，0 °C攪拌5min，滴加入飽和碳酸氫鈉溶液（25mL)，抽濾，得黃色中間固體 〇.5g，收率 75%。
[0067] 該黃色中間固體的結構為 ?G
[0068] 將上述黃色中間固體(0.5g，0.98mmo 1)按照實施例1中的方式制備獲得白色固體 成品200mg，收率58% 該白色固體成品即為成品3。
[0069] 成品3的結構為該結構的圖譜檢測結果如下：
S ，
[0070] MS m/z 327(M-OH) JH-匪R(400MHz，DMS0)S(ppm) :9.31 ~9.38(d，lH)，9.28(s， 1H) ,8.16~8.29(d，lH)，7.48~7.98(m，2H)，7.36~7.48(m，3H)，6.70~6.73(m，lH)，2.84 (d，lH)，1.73~1.77(m，lH)，1.37~1.43(m，2H)，0.86~0.90(t，6H)。
[0071] 實施例4
[0072] 將3-氨基苯甲酸甲酯（1.5g，8mmol)、對甲苯磺酰氯（1.67g，8.8mmol)和吡啶 (1.58g，20mmo 1)投入50mL圓底燒瓶中，加四氫呋喃（18mL)溶清，室溫攪拌過夜，用乙酸乙酯 (20mL)稀釋，依次用lmol/L鹽酸（10mL)、飽和碳酸氫鈉溶液（10mL)洗滌，經(jīng)無水硫酸鈉干 燥，過濾，濃縮，得褐色油狀物2.4g。
[0073] 將該褐色油狀物（2.4g，6.8mmol)和氫氧化鈉 （lg，25mmol)投入50mL原底燒瓶中， 加甲醇（25mL)溶清，室溫攪拌過夜，旋干溶劑，殘余物用水(20mL)溶解澄清，用2mo 1/L鹽酸 調(diào)至pH5,抽濾，得白色中間固體2. Og，收率93.2%。
[0074] 該白色中間固體的結構為：

[0075] 將上述白色中間固體（0.335g，1.45mmol)、原料三（0.5g，1.32mmol)和TBTU (0.51 g，1.58mmo 1)投入50mL圓底燒瓶中，加 DMF (4mL)溶清，冰水浴降溫至0 °C，滴加 DI PEA (2.88g，8.94mL)，加畢，0°C攪拌5min，滴加入飽和碳酸氫鈉溶液(25mL)，抽濾，得黃色中間 固體〇.5 8，收率75%。
[0076] 該黃色中間固體的結構為： 〇
[0077] 將上述黃色中間固體（0 · 5g，0 · 94mmol)、甲醇（8mL)、正己燒（8mL)、2mol/L鹽酸 (41111)和異丁基硼酸(0.378,3.61]11]1〇1)投入5〇1111^圓底燒瓶中，室溫攪拌4811，棄去正己燒層， 旋干溶劑，殘余物用lmol/L氫氧化鈉溶解，用乙酸乙酯（10mLX2)萃取，水相用lmol/L鹽酸 調(diào)至pH 5~6，抽濾，得白色固體成品170mg，收率45.8 %。該白色固體成品即為成品4。
[0078] 成品4的結構為：
κ該結構的圖譜檢測結果如下：
[0079] MS m/z 387(1-010^11-匪R(400MHz，DMS0)S(ppm) :7.234~7.626(m，8H)，2.8(s， lH)，2.246(m，3H)，1.682(t，lH)，1.341~1.374(t，2H)，0.813~0.845(t，6H)。
[0080] 實施例5
[0081 ] 將3_氛基苯甲酸甲酯（1.5g，8mmol)、對甲氧基苯甲酸（1.34g，8.8mmol)和TBTU (2.86g，22.35mmol)投入50mL圓底燒瓶中，加 DMF(18mL)溶清，冰水浴降溫至0°C，滴加 DIPEA (2.88g，8.94mL)，加畢，室溫攪拌過夜，用乙酸乙酯（20mL)稀釋，依次用lmol/L鹽酸（10mL)、 飽和碳酸氫鈉溶液(10mL)洗滌，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮，得褐色油狀物2.4g。
[0082] 將該褐色油狀物(2.4g，7.0 lmmo 1)和氫氧化鈉（1 g，25mmo 1)投入50mL原底燒瓶中， 加甲醇（25mL)溶清，室溫攪拌過夜，旋干溶劑，殘余物用水(20mL)溶解澄清，用2mo 1/L鹽酸 調(diào)至pH5，抽濾，得白色中間固體2. lg，收率91.2%。
[0083] 該白色中間固體的結構為
[0084] 將上述白色中間固體(0.398，1.45111111〇1)、原料三（0.58，1.32111111〇1)和了81'1](0.51 8， 1.58mmo 1)投入50mL圓底燒瓶中，加 DMF (4mL)溶清，冰水浴降溫至0 °C，滴加 DI PEA (2.88g， 8.94mL)，加畢，0 °C攪拌5min，滴加入飽和碳酸氫鈉溶液（25mL)，抽濾，得黃色中間固體 〇.4g，收率 73.8%。
[0085] 該黃色中間固體的結構為：
' .〇
[0086] 將上述黃色中間固體（0 · 4g，0 · 77mmol)、甲醇（8mL)、正己燒（8mL)、2mol/L鹽酸 (41111)和異丁基硼酸(0.378,3.61]11]1〇1)投入5〇1111^圓底燒瓶中，室溫攪拌4811，棄去正己燒層， 旋干溶劑，殘余物用lmol/L氫氧化鈉溶解，用乙酸乙酯（10mLX2)萃取，水相用lmol/L鹽酸 調(diào)至pH 5~6，抽濾，得白色固體成品40mg，收率18 %。該白色固體成品即為成品5。
[0087] 成品5的結構為：
該結構的圖譜檢測結果如下：
[0088] MS m/z 367(M-OH) JH-匪R(400MHz，DMS0)S(ppm): 10.288(s，lH)，9.27(s，lH)， 8.33(m，lH)，7.655~7.675(m，lH)，7.436~7.487(m，lH)，7.032~7.062(m，2H)，3.836(m， 3H)，2.846(s，lH)，1.755(t，lH)，1.413~1.437(t，2H)，0.866~0.882(t，6H)。
[0089] 實施例6
[0090] 將3-氨基苯甲酸甲酯（1.5g，8mmol)、乙酸（0.49g，8.8mmol)和TBTU(2.86g， 22 · 35mmol)投入50mL圓底燒瓶中，加 DMF( 18mL)溶清，冰水浴降溫至0°C，滴加 DIPEA(2 · 88g， 8.94mL)，加畢，室溫攪拌過夜，用乙酸乙酯（20mL)稀釋，依次用lmol/L鹽酸（10mL)、飽和碳 酸氫鈉溶液(1 OmL)洗滌，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮，得褐色油狀物1.4g。
[0091] 將該褐色油狀物和氫氧化鈉（1.4g，7.21mmol)和氫氧化鈉（lg，25mmol)投入50mL 原底燒瓶中，加甲醇(25mL)溶清，室溫攪拌過夜，旋干溶劑，殘余物用水(20mL)溶解澄清，用 2mol/L鹽酸調(diào)至pH5，抽濾，得白色中間固體0.79g，收率65.3 %。
[0092] 該白色中間固體的結構為

[0093] 將上述白色中間固體(0.268，1.45111111〇1)、原料三（0.58，1.32111111〇1)和了81'1](0.51 8， 1.58mmo 1)投入50mL圓底燒瓶中，加 DMF (4mL)溶清，冰水浴降溫至0 °C，滴加 DI PEA (2.88g， 8.94mL)，加畢，0 °C攪拌5min，滴加入飽和碳酸氫鈉溶液（25mL)，抽濾，得黃色中間固體 〇.57g，收率 92.8%。
[0094] 該黃色中間固體的結構?
[0095] 將上述黃色中間固體（0 · 4g，0 · 94mmol)、甲醇（8mL)、正己燒（8mL)、2mol/L鹽酸 (41111)和異丁基硼酸(0.378,3.61]11]1〇1)投入5〇1111^圓底燒瓶中，室溫攪拌4811，棄去正己燒層， 旋干溶劑，殘余物用lmol/L氫氧化鈉溶解，用乙酸乙酯（10mLX2)萃取，水相用lmol/L鹽酸 調(diào)至pH 5~6，抽濾，得白色固體成品60mg，收率22 %。該白色固體成品即為成品6。
[0096] 成品6的結構為
該結構的圖譜檢測結果如下：
[0097] MS m/z 275(M-OH) JH-匪R(400MHz，DMS0)S(ppm): 10.15(s，lH)，9.25(s，lH)， 8.11(s，lH) ,7.79~7.83(d，lH)，7·57~7.59(d，lH)，7.39~7.43(t，lH)，2.80~2.81(d， lH)，2.10(s，3H)，1.72~1.74(t，lH)，1.39~1.45(t，2H)，0.94~0.89(t，6H)。
[0098] 實施例7
[0099] 將3-氨基苯甲酸甲酯（1 · 5g，8mmo 1)、2，4，5-三氟苯乙酸（1 · 67g，8 · 8mmo 1)和TBTU (2.86g，22.35mmol)投入50mL圓底燒瓶中，加 DMF(18mL)溶清，冰水浴降溫至0°C，滴加 DIPEA (2.88g，8.94mL)，加畢，室溫攪拌過夜，用乙酸乙酯（20mL)稀釋，依次用lmol/L鹽酸（10mL)、 飽和碳酸氫鈉溶液(1 OmL)洗滌，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮，得第一白色中間固體2.6g。 [0100] 將該第一白色中間固體(2.6g，7.9mmol)和氫氧化鈉 （lg，25mmo 1)投入50mL原底燒 瓶中，加甲醇(25mL)溶清，室溫攪拌過夜，旋干溶劑，殘余物用水(20mL)溶解澄清，用2mol/L 鹽酸調(diào)至pH5，抽濾，得第二白色中間固體2.2g，收率91.6%。
[0101]該第二白色中間固體的結構為

[0102]將上述第二白色中間固體（0.458，1.45!11111〇1)、原料三（0.58，1.32111111〇1)和了81'1] (0.51 g，1.58mmo 1)投入50mL圓底燒瓶中，加 DMF (4mL)溶清，冰水浴降溫至0 °C，滴加 DI PEA (2.88g，8.94mL)，加畢，0°C攪拌5min，滴加入飽和碳酸氫鈉溶液(25mL)，抽濾，得黃色油狀 物 〇.5g，收率 64.1%。
[0103]該黃色油狀物的結構為：
[0104] 將上述黃色油狀物(0.5g，0.58mmol)、甲醇（8mL)、正己燒(8mL)、2mol/L鹽酸(4ml) 和異丁基硼酸(〇. 37g，3.6mmol)投入50mL圓底燒瓶中，室溫攪拌48h，棄去正己燒層，旋干溶 劑，殘余物用lmol/L氫氧化鈉溶解，用乙酸乙酯（10mL X 2)萃取，水相用lmol/L鹽酸調(diào)至pH 5~6，抽濾，得白色粉末160mg，收率43.2 %。該白色粉末即為成品7。
[0105] 成品7的結構為 該結構的圖譜檢測結果如下： j
[0106] MS m/z '(^(M-OiDjH-NMRHOOMHzJMSOMbpmhlOjSA~10.486(d，lH)，9.251 (s，lH)，8.121(s，lH)，7.774~7.795(m，lH)，7.373~7.621(m，4H)，3.747(d，2H)，2.8~2.9 (d，lH)，1.691~1.724(t，lH)，1.363~1.386(t，2H)，0.824~0.840(t，6H)。
[0107] 實施例8
[0108] 將 3-氨基苯甲酸甲酯（1.358,7.35111111〇1)、吡啶-3-甲酸（1.(^，7.35111111〇1)和了81'1] (2.86g，22.35mmol)投入50mL圓底燒瓶中，加 DMF(18mL)溶清，冰水浴降溫至0°C，滴加 DIPEA (2.88g，8.94mL)，加畢，室溫攪拌過夜，用乙酸乙酯（20mL)稀釋，依次用lmol/L鹽酸（10mL)、 飽和碳酸氫鈉溶液（lOmL)洗滌，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮，得褐色油狀物1.3g。將褐色 油狀物（1.3g，5mmo 1)和氫氧化鈉（1 g，25mmo 1)投入50mL原底燒瓶中，加甲醇(25mL)溶清，室 溫攪拌過夜，旋干溶劑，殘余物用水(20mL)溶清，用2mol/L鹽酸調(diào)至pH5,抽濾，得第一白色 中間固體1.1 8，收率91.2%。
[0109] 該第一白色中間固體的結構為：
、' 〇
[0110] 將上述第一白色中間固體（0.3518，1.45111111〇1)、原料三（0.58，1.32111111〇1)和了81'1] (0.51 g，1.58mmo 1)投入50mL圓底燒瓶中，加 DMF (4mL)溶清，冰水浴降溫至0 °C，滴加 DI PEA (2.88g，8.94mL)，加畢，0°C攪拌5min，滴加入飽和碳酸氫鈉溶液(25mL)，抽濾，得第二白色 中間固體0.39g，收率65 %。
[0111] 該第二白色中間固體的結構為：
、 P
[0112] 將上述第二白色中間固體(0.398,0.79臟〇1)、甲醇（81^)、正己烷(81^)、2111 〇1/1鹽 酸(41111)和異丁基硼酸（0.378,3.61]1111〇1)投入5〇1111^圓底燒瓶中，室溫攪拌4811，棄去正己燒 層，旋干溶劑，殘余物用lmol/L氫氧化鈉溶解，用乙酸乙酯（10mL X 2)萃取，水相用lmol/L鹽 酸調(diào)至pH 5~6，抽濾，得白色固體成品1 OOmg，收率34 %。該白色固體成品即為成品8。
[0113] 成品8的結構為
該結構的圖譜檢測結果如下：
[0114] MS m/z 338(M-OH);1H-NMR(400MHz，DMS0)S(ppm):10.81~10.88(d，lH)，9.27(s， lH)，8.65~8.72(m，lH)，8.50(m，lH)，8.03~8.09(m，3H)，7.36~7.69(m，3H)，2.86(d，lH)， 1.75~1.78(m，lH)，1.42(m，2H)，0.84~0.91(t，6H)。
[0115] 實施例9
[0116]將3_氛基苯甲酸甲酯（3 · Og，16mmol)、啦嘆甲酸（2 · 0g，16mmol)和TBTU(2 · 86g， 22.35mmol)投入50mL圓底燒瓶中，加 DMF(18mL)溶清，冰水浴降溫至0°C，滴加 DIPEA(6.19g， 19.14mL)，加畢，室溫攪拌過夜，用乙酸乙酯(30mL)稀釋，依次用lmo 1 /L鹽酸(20mL)、飽和碳 酸氫鈉溶液(20mL)洗滌，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮，得黃色固體1.6g，收率39.1 %。
[0117] 將該黃色固體（1.6g，6.22mmol)和氫氧化鈉 （lg，25mmol)投入50mL原底燒瓶中，加 甲醇（25mL)溶清，室溫攪拌過夜，旋干溶劑，殘余物用水(20mL)溶解澄清，用2mol/L鹽酸調(diào) 至口115，抽濾，得第一白色中間固體1.28，收率79.4%。
[0118] 該第一白色中間固體的結構為
?p
[0119] 將上述第一白色中間固體（0.358，1.45!11111〇1)、原料三（0.58，1.32111111〇1)和了81'1] (0.51 g，1.58mmo 1)投入50mL圓底燒瓶中，加 DMF (4mL)溶清，冰水浴降溫至0 °C，滴加 DI PEA (2.88g，8.94mL)，加畢，0°C攪拌5min，滴加入飽和碳酸氫鈉溶液(25mL)，抽濾，得第二白色 中間固體〇.5g，收率78.1%。
[0120] 該第二白色中間固體的結構為
[0121] 將上述第二白色中間固體(0.58，1.02111111〇1)、甲醇（81^)、正己烷（81^)、2111 〇1/1鹽 酸(41111)和異丁基硼酸（0.378,3.61]1111〇1)投入5〇1111^圓底燒瓶中，室溫攪拌4811，棄去正己燒 層，旋干溶劑，殘余物用lmol/L氫氧化鈉溶解，用乙酸乙酯（10mL X 2)萃取，水相用lmol/L鹽 酸調(diào)至pH 5~6，抽濾，得白色固體成品160mg，收率53.2 %。該白色固體成品即為成品9。
[0122] 成品9的結構為
S該結構的圖譜檢測結果如下：
[0123] MS m/z 339(M-OH) JH-匪R(400MHz，DMS0)S(ppm): 10.91 ~10.98(d，lH，Ar-H)， 9.26~9.31(m，lH)，8.91~8.95(m，lH)，8.77~8.80(m，lH)，8.48~8.54(m，lH)，8.05~ 8.07(m，lH)，7.71~8.05(m，lH)，7.48~7.56(m，lH，Ar-H)，2.86(d，lH)，1.76~1.78(t， lH)，1.40~1.46(t，2H)，0.88~0.90(t，6H)。
[0124] 實施例10
[0125] 在冰浴條件下，將吡啶-3-甲酸甲酯（2g，120mmol)置于含有50ml二氯甲烷的反應 瓶中，然后慢慢滴加苯甲酰氯（120mmol)，最后加入N-甲基嗎啉(360mmol)。常溫反應25h，經(jīng) TLC監(jiān)測原料反應完全后終止。減壓旋蒸，向旋蒸殘余物中加入碳酸氫鈉飽和水溶液，乙酸 乙酯萃取。2mo 1/L的鹽酸水溶液洗，乙酸乙酯萃取。收集乙酸乙酯相并用無水硫酸鈉干燥， 過濾，減壓旋蒸得到600mg淺黃色固體粉末。
[0126] 取淺黃色固體粉末(500mg，1.1 lmmol)置于含有茄形燒瓶中，然后加入（138.8mg， 3.47mmo 1)氫氧化鈉，常溫反應直至原料反應完后終止。減壓旋干，加水溶清后，用乙酸乙酯 萃取，并棄去乙酸乙酯相。1N的HC1水溶液調(diào)pH至2~4左右，有固體析出，過濾，將上清液減 壓旋蒸，得到400mg淺黃色片狀固體。
[0127] 向含有20ml二氯甲烷的茄形瓶中，加入原料三(690mg，1.82mmol)，然后冰浴下加 入DIPEA(576·5mg，4·46mm Ol)，然后依次加入上步反應得到的淺黃色片狀固體（400mg， 1 · 65mmol)，TBTU(796 · 3mg，2 · 48mmol)，冰浴下反應兩個小時后加 NaHC03飽和水溶液終止并 攪拌5分鐘。乙酸乙酯萃取后分液，用1N的鹽酸水溶液對乙酸乙酯相進行酸化，對分液得到 的乙酸乙酯相進行水洗，收集乙酸乙酯相并加入無水硫酸鈉進行干燥，過濾，45°C減壓旋 蒸，得到500mg淺黃色泡沫狀固體。
[0128]在含有黃色泡沫狀固體（500mg，1.05mmol)的前形燒瓶中，依次加入3mL正己燒， 3mL無水甲醇，3mL 1N的HC1水溶液，最后加入428mg異丁基硼酸，常溫反應68h后終止反應。 分液，棄去正己烷相，減壓旋蒸甲醇相，向旋蒸殘余物中加入二氯甲烷溶解，并使用1N的氫 氧化鈉水溶液對殘余物進行堿化，用乙酸乙酯萃取并棄去有機相，用1N的鹽酸對乙酸乙酯 相進行酸化，過濾，并用乙酸乙酯多次沖洗濾餅，45 °C烘干，得到70mg白色固體粉末，產(chǎn)率： 43%。該白色固體粉末即為成品10。
[0129] 成品10的結構為"該結構的圖譜檢測結果如下：
1 ?
[0130] LCMS M/Z 356(M+1)/338(M-OH)/H 匪R(400MHz，DMS0)Sl0.78~10.46(m，lH)， 9.21~8.95(m，lH)，8.93~8.60(m，lH)，8.11~7.85(m，2H)，7.75~7.31(m，4H)，3.34~ 3.22(m，lH)，3.12~2.60(m，lH)，2.12~1.93(m，lH)，1.84~1.49(m，2H)，1.49~1.31(m， lH)，1.31~1.10(m，lH)，0.96~0.77(m，6H)。
[0131] 實施例11
[0132] 將6.66g化合物3-哌啶甲酸溶于25ml無水乙醇中，冰浴下滴加二氯亞砜，滴加完后 回流反應，至反應液澄清后終止。減壓旋蒸去掉溶劑乙醇，甲基叔丁基醚打漿，過濾，50°C烘 箱烘干得到9.56g的第一白色固體，49.51mmol。
[0133] 取上述第一白色固體1.2g溶于盛有10ml二氯甲烷的燒瓶中，常溫下，將對甲苯磺 酰氯溶于l〇ml二氯甲烷并向燒瓶中慢慢滴加，常溫反應45分鐘后終止。室溫下減壓旋蒸，將 殘余物溶于水并依次經(jīng)過稀鹽酸水溶液洗、碳酸氫鈉水溶液洗，然后用乙酸乙酯萃取，無水 硫酸鈉干燥，過濾，減壓旋蒸后得到淡黃色油狀物。
[0134] 將淡黃色油狀物溶于10ml無水乙醇中，加入過量的NaOH，常溫反應一個小時后，向 反應體系中加水終止反應，2N的HC1水溶液調(diào)pH至2，乙酸乙酯萃取，無水硫酸鈉干燥，過濾， 減壓旋蒸得到白色固體，將其用少量乙酸乙酯溶解后用石油醚沉淀，過濾烘干后得到lg第 二白色固體。
[0135] 上述第二白色固體的結構為：
[0136] 稱取原料三(474mg，1.25mmol)加入含有6ml二氯甲烷的反應瓶中。冰浴下將二異 丙基乙胺(436mg，2.7mmo 1)溶于少量二氯甲烷中，慢慢滴加入反應瓶中，攪拌5分鐘，加入第 二白色固體(389mg，1 · 37mmol)，最后加入TBTU( 1 · 3mmol)，冰浴下反應2 · 5小時后終止反應。 減壓旋蒸，向旋蒸殘余物中加入乙酸乙酯和水溶清后分液，將乙酸乙酯相依次經(jīng)過1 %的磷 酸洗，2 %的碳酸鉀洗后水洗，收集分液得到的乙酸乙酯相并用無水硫酸鈉干燥，過濾，減壓 旋蒸后得到〇.7g白色泡沫狀固體。
[0137] 將白色泡沫狀固體溶于含有16.2ml正己烷和16.2ml無水甲醇的圓底燒瓶中，常溫 反應29小時后終止。分液，棄去正己烷相，并用正己烷對甲醇相多萃取幾遍后，減壓旋蒸甲 醇相。將旋蒸殘余物用二氯甲烷稀釋，依次用2N NaOH調(diào)成堿性，分液，棄去二氯甲烷相，然 后用IN HC1水溶液將水相調(diào)pH至6,二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉干燥，過濾，減壓旋蒸得到 177mg白色固體成品，產(chǎn)率為42 %。該白色固體成品即為成品11。
[0138] 該成品11的結構為
該結構的圖譜檢測結果如下：
[0139] LCMS m/z 379(1-010,? 匪R(400MHz，DMS0)S8.70(s，lH)，7.61(d，lH)，7.59(d， lH)，7.45(t，2H)，3.73~3.47(m，2H)，2.40(d，3H)，2.29~2.01(m，3H)，1.94~1.04(m，8H)， 0.94~0.59(m，7H)。
[0140] 實施例12
[0141] 在冰浴條件下，將化合物哌啶-3-甲酸乙酯（lg，5.2mmol)置于含有20ml DMF的反 應瓶中，然后依次將呋喃羧酸（583mg，5 · 2mmol)、匪M( 1 · 58g，15 · 6mmol)、TBTU( 2g， 6.24mmol)加入反應瓶中，常溫反應100分鐘后終止。向反應體系中加入飽和碳酸氫鈉水溶 液并攪拌5分鐘，用乙酸乙酯萃取后分液，然后用1N的鹽酸洗乙酸乙酯相后分液，最后用水 洗。將乙酸乙酯相收集并加入無水硫酸鈉干燥，過濾，減壓旋干得到白色油狀物1.4g。
[0142] 向該白色油狀物中加入20ml無水甲醇以及過量的NaOH，常溫下反應80分鐘后終 止，減壓旋干，向旋蒸殘余物中加水使其溶清，乙酸乙酯萃取，用1N的鹽酸對乙酸乙酯相近 行酸化后分液，收集乙酸乙酯相并加無水硫酸鈉干燥，過濾，減壓旋干后得到150mg白色固 體粉末。
[0143] 該白色固體粉末的結構為
[0144] 向含有5ml Ν，Ν-二甲基甲酰胺的茄形瓶中，加入原料三(255mg，0.672mmol)，然后 冰浴下加入DIPEA(234.46,1.814)，然后依次加入白色固體粉末（150mg，0.672mmol)，TBTU (323.7mg，1.008mmol)，冰浴下反應4個小時后加水終止，然后加乙酸乙酯萃取，對乙酸乙酯 相使用1 %的磷酸水溶液進行堿化并分液，然后使用2 %的碳酸鉀水溶液對乙酸乙酯相進行 酸化并分液，最后水洗后分液，收集乙酸乙酯相并加入無水硫酸鈉進行干燥，過濾，減壓旋 蒸，得到360mg白色泡沫狀固體。
[0145] 向白色泡沫狀固體(360mg，0.765mmol)中加入4ml正己燒、4ml無水甲醇以及2mllN 的鹽酸，最后稱取(312mg，3mmol)的異丁基硼酸。常溫反應48小時后分液，棄去正己烷相。減 壓旋蒸甲醇-水相。向旋蒸殘余物中，加入碳酸氫鈉飽和水溶液攪拌5分鐘，乙酸乙酯萃取， 收集乙酸乙酯相并加入無水硫酸鈉干燥，過濾，減壓旋蒸得到淺黃色泡沫狀固體粉末 150mg，純化后得到白色固體粉末成品11 Omg，產(chǎn)率:43 %。該白色固體粉末成品即為成品12。
[0146] 該成品12的結構為
該結構的圖譜檢測結果如下：
[0147] LCMS m/z 319(1-010,? 匪R(400MHz，DMS0)S8.73(s，lH)，7.82(s，lH)，6.97(t， 1H)，6.61(d，lH)，4.27(d，2H),3.19~2.79(m，2H)，2.53(d，lH)，1.92((1,1H),1.77~1.50 (m，3H)，1.48~1.33(m，lH)，1.32~1.10(m，3H)，0.89~0.72(m，6H)。
[0148] 實施例13
[0149] 冰浴條件下，將化合物哌啶-3-甲酸乙酯(0.58,2.59!11111〇1)置于含有10111101^的反 應瓶中，然后依次將2、4、5-三氟乙酸（0.5g，2.59mmol)、NMM(0.79g，7.77mmol)、TBTU(lg， 3. lmmol)加入反應瓶中，常溫反應4小時后終止。向反應體系中加入飽和碳酸氫鈉水溶液并 攪拌5分鐘，用乙酸乙酯萃取后分液，然后用1N的鹽酸洗乙酸乙酯相后分液，最后用水洗。將 乙酸乙酯相收集并加入無水硫酸鈉干燥，過濾，減壓旋干得到淺黃色油狀物。
[0150] 向該油狀物的燒瓶中加入10ml無水甲醇，60mg氫氧化鈉，常溫下反應18小時后終 止。減壓旋干，加水溶解并用乙酸乙酯萃取后棄掉乙酸乙酯相，然后用1N的鹽酸調(diào)至pH2~ 4,用乙酸乙酯萃取，無水硫酸鈉干燥，過濾，減壓旋蒸，得到約430mg中間成品。
[0151] 該中間成品的結構為：
[0152] 向含有10ml N，N-二甲盎甲既妝的加形瓶甲，那八原料三（435 · 4mg，1 · 15mmo 1)，然 后冰浴下加入DIPEA(408.3mg，3.16mmol)，然后依次加入中間成品（330mg，1.15mmol)，TBTU (554mg，1.73mmol)，冰浴下反應兩小時25分鐘后加水終止，然后加乙酸乙酯萃取，對乙酸乙 酯相使用1%的磷酸水溶液進行堿化并分液，然后使用2%的碳酸鉀水溶液對乙酸乙酯相進 行酸化并分液，最后水洗后分液，收集乙酸乙酯相并加入無水硫酸鈉進行干燥，過濾，減壓 旋蒸，得到560mg白色泡沫狀固體。
[0153] 然后向白色泡沫狀固體中依次加入4mL正己燒，4mL無水甲醇，3mL 1N的HC1水溶 液，最后加入746.2mg異丁基硼酸，常溫反應21h后終止反應。分液，棄去正己烷相，減壓旋蒸 甲醇相，用1N的氫氧化鈉水溶液對殘余物進行堿化，并用乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯相， 用無水硫酸鈉干燥，過濾，減壓旋蒸得到340mg淺黃色泡沫狀粉末，產(chǎn)率:45 %。該淺黃色泡 沫狀粉末即為成品13。
[0154] 該成品13的結構為
該結構的圖譜檢測結果如下：
[0155] LCMS m/z 397(1-010,? 匪R(400MHz，DMS0)S7.46(d，lH)，7.37(s，lH)，4.33(d， lH)，4.03(dd，lH)，3.96~3.62(m，3H)，3.02(s，lH)，2.82~2.60(m，lH)，2.20(d，lH)，1.94 ~1.49(m，4H)，1.19(dd，4H)，0.99~0.66(m，6H)。
[0156] 實施例14
[0157] 在冰浴條件下，將化合物3-哌啶甲酸（500mg，2.6mmol)置于含有10ml DMF的反應 瓶中，然后依次將苯甲酸（320mg，2.6mmol)、NMM(789mg，7.8mmol)、TBTU(l.lg，3.12mmol)W 入反應瓶中，常溫反應16小時后終止。向反應體系中加入飽和碳酸氫鈉水溶液并攪拌5分 鐘，用乙酸乙酯萃取后分液，然后用1N的鹽酸洗乙酸乙酯相后分液，最后用水洗。將乙酸乙 酯相收集并加入無水硫酸鈉干燥，過濾，減壓旋干得到白色油狀物600mg。向該白色油狀物 中加入10ml無水甲醇，（200mg，4.9mmo 1 )NaOH，常溫下反應直至原料反應完全后終止，減壓 旋蒸，向旋蒸殘余物中加水使其溶清，乙酸乙酯萃取并棄去該乙酸乙酯相，用1N的鹽酸對乙 酸乙酯相進行酸化后分液，收集乙酸乙酯相并加無水硫酸鈉干燥，過濾，減壓旋干后得到 400mg白色片狀固體。
[0158] 白色片狀固體結構為：
[0159] 在冰浴下，向含有10ml二氯甲烷的茄形瓶中，加入原料三(538.18mg，1.42mmol)， 然后冰浴下滴加 DIPEA(893.7mg，3.8mmol)，然后依次加入白色片狀固體（330mg， 1.42mmol)，TBTU(684mg，2.13mmol)，冰浴下反應4個小時后終止。減壓旋蒸，然后使用氯化 銨飽和水溶液對旋蒸殘余物進行酸洗，乙酸乙酯萃取，使用碳酸氫鈉飽和水溶液對乙酸乙 酯相進行堿化并分液，最后水洗后分液，收集乙酸乙酯相并加入無水硫酸鈉進行干燥，過 濾，減壓旋蒸，得到700mg白色泡沫狀固體。
[0160] 向含有白色泡沫狀固體(682mg，1.42mmol)的前形瓶中加入5ml正己燒、5ml無水甲 醇以及4ml 1N的鹽酸，最后稱取（579mg，5.68mmol)的異丁基硼酸，常溫反應4天后終止反 應。分液，棄去正己烷相。減壓旋蒸甲醇-水相。向旋蒸殘余物中，加入碳酸氫鈉飽和水溶液， 乙酸乙酯萃取，用1N的HC1水溶液對乙酸乙酯相進行酸化，水洗，收集乙酸乙酯相并加入無 水硫酸鈉干燥，過濾，減壓旋蒸得到190mg白色固體成品，產(chǎn)率:80 %。白色固體成品為成品 14〇
[0161] 成品14的結構為
該結構的圖譜檢測結果如下：
[0162] LCMS M/Z 329(1-010,? 匪R(400MHz，DMS0)S7.42(d，3H)，7.38(s，2H)，4.31(d， 2H)，3.02(s，2H)，2.05~1.69(m，4H)，1.62(s，2H)，1.48~1.06(m，4H)，0.80(s，6H)。
[0163] 實施例15
[0164] 在冰浴條件下，將化合物L-苯丙氨酸甲酯（5g，20mmo 1)，N-甲基嗎啉，加入含有 20mL的反應瓶中，降溫至5-10°C，然后慢慢滴加芐基異氰酸酯(4g，30mmol)，常溫反應過夜。 經(jīng)TLC檢測原料反應完全后終止。將反應液加入稀鹽酸調(diào)pH至5-6,分液后飽和碳酸氫鈉水 溶液洗兩次，無水硫酸鎂干燥，過濾，30°C減壓旋蒸，得到油狀物。將該油狀物(2g，6.4mmo 1) 加入10ml無水甲醇中溶清，然后加入氫氧化鈉(512mg，12.8mmo 1)，45 °C加熱5小時后終止反 應，45°C減壓濃縮后加入乙醇攪拌30min。過濾，烘干，然后加入5mL水，調(diào)pH至5-6,乙酸乙酯 萃取，無水硫酸鎂干燥，過濾，45 °C減壓旋蒸，得到1.2g泡沫狀固體。
[0165] 稱取硼酯三氟乙酸鹽六(67〇11^，1.68111111〇1)，加入含有51111二氯甲烷的反應瓶中。冰 浴下將二異丙基乙胺(500mg，3.88mmo 1)溶于少量二氯甲烷中，慢慢滴加入反應瓶中，攪拌5 分鐘，加入上述方法得到的泡沫狀固體(500mg，1 · 68mmol)，最后加入TBTU(650mg，2mmol)， 冰浴下反應1.5小時后終止反應。反應液濃縮后加水，調(diào)pH至3-4,乙酸乙酯萃取兩次，無水 硫酸鎂干燥，過濾，30°C減壓旋蒸得到泡沫狀固體。將該固體溶于4mL甲醇，3mL正己烷中并 攪拌，3ml 1N鹽酸，最后加入(400mg，4mmol)異丁基硼酸，35°C反應16h后終止反應。將反應 液濃縮后加入乙酸乙酯萃取3次，無水硫酸鎂干燥，過濾，減壓旋蒸得到120mg固體粉末，產(chǎn) 率:29%。該固體粉末即為成品15。
[0166] 成品15的結構）該結構的圖譜檢測結果如下：
.，
[0167] LCMS M/Z 394(1^-011),? NMR(400MHz，DMS0)S8.92~8.70(m，lH)，7.28~7.00(m， 10H)，6.70(d，lH)，6.45~6.20(m，lH)，4.52(dd，lH)，3.72~3.20(m，2H)，3.15~2.73(m, 2H)，2.70~2.51(m，lH)，1.68~1.43(m，lH)，1.37~1.05(m，2H)，0.90~0.68(m，6H)。
[0168] 實施例16
[0169] 將L-苯丙氨酸甲酯（5g，23mmol)、N-甲基嗎啉（5.4g，53mmol)、DCM 20mL加入反應 瓶中并迅速降溫至5-10°C，然后慢慢滴加3-甲基芐基異氰酸酯(3.7g，28mmol)，常溫反應4h 后終止。向反應液中加入水并調(diào)pH至3-4，二氯甲烷萃取兩次，分液后，將有機相用飽和碳酸 氫鈉水溶液清洗兩次，收集有機相并用無水硫酸鎂干燥，過濾，減壓旋蒸得到油狀物，最后 使用石油醚：乙酸乙酯以5比1的比例，將其分散成固體，抽濾，并用石油醚洗滌濾餅多次，得 到白色固體粉末。將以上所得固體加入25mL無水甲醇中，加熱至50°C，溶清后再加入氫氧化 鋰（1.1 g，46mmo 1)，50°C下，反應0.5小時后終止，過濾，乙酸乙酯反復清洗濾餅。向該濾餅中 加入水溶清后，調(diào)pH至3-4，固體析出。過濾，烘干后得到4.3g白色固體。
[0170] 取白色固體（500mg，1 · 8mmo 1)、硼酯三氟乙酸鹽A(690mg，1 · 8mmo 1)、TBTU(700mg， 2mmol)、DCM 5mL加入反應瓶中并迅速降溫至_5°C，將二異丙基乙胺（520mg，4mmol)溶于少 量二氯甲燒中，慢慢滴加入反應液中。常溫反應5小時后終止反應。向反應液中加水并調(diào)pH 至3-4，分液后將有機相用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌兩次。收集有機相，無水硫酸鎂干燥，過 濾，30°C減壓旋蒸至泡沫狀。取該泡沫狀固體粉末500mg置于反應瓶中，然后依次加入4mL無 水甲醇、1.3mL 2.5N HCl，3mL正己烷，常溫反應過夜。經(jīng)TLC監(jiān)測，原料反應完全后終止反 應。向反應液中加入5mL水，乙酸乙酯萃取3次，收集乙酸乙酯相并用無水硫酸鎂干燥，過濾， 45 °C減壓旋蒸，得到泡沫狀固體粉末90mg，產(chǎn)率:12 %。該泡沫狀固體粉末即為成品16。
[0171] 成品16的結構為：
；結構的圖譜檢測結果如下：
[0172] LCMS M/Z 394(1-010,? NMR(400MHz，DMS0)S8.92~8.70(m，lH)，7.32~7.00(m， 9H)，6.70(d，lH),6.55~6.25(m，lH)，4.58(dd，lH),3.72~3.25(m，2H),3.10~2.73(m， 2H),2.73~2.56(m，lH),2.32~2.07(m，3H),1.68~1.43(m，lH),1.40~1.09(m，2H),0.93 ~0.70(m，6H)〇
[0173] 蛋白酶體活性檢測：
[0174] 蛋白酶體可催化底物多肽Suc-Leu-Val-Tyr-AMC (簡寫Suc-LLVY-AMC，Sue表示琥 珀?；?，AMC表示7-酰胺-4-甲基香豆素）水解，釋放具有熒光的自由AMC(Ex:348nm，Em: 440nm)。因而，通過測定加入不同濃度化合物后蛋白酶體催化底物得到成品的熒光值，計算 化合物抑制蛋白酶體活性的IC50值。
[0175] 本檢測中所用兔20S蛋白酶體購自Calbiochem公司，蛋白酶體活性檢測試劑盒(包 括熒光底物和緩沖液)購自Chemicon公司。實驗反應體系為100yL，蛋白酶體lng/yL，底物 (Suc-LLVY-AMC) 30μΜ，化合物(抑制劑）lyL。
[0176] 根據(jù)蛋白酶體活性檢測試劑盒的說明，利用全波長酶標儀（Thermo varioskan flash)檢測348nm/440nm熒光值，根據(jù)熒光值計算出化合物抑制蛋白酶體活性的IC50(yM) 值。由于檢測方法和計算方法均為現(xiàn)有技術，因此不再贅述。并采用上述相同的檢測方法檢 測出現(xiàn)有化合物乳胞素(Lactacystin)的活性，檢測結果如表1所示。
[0177] 表1
[0178]
'[0179]~通過上述試驗結果可知：對本發(fā)明的新型硼酸類化合物均對蛋白酶體有抑制作, 用。且本發(fā)明中不同位置的取代基團對活性的影響差異非常顯著，即采用不同的基團進行 取代以及在不同位點上取代時，化合物對蛋白酶體有抑制的活性差異較大。通過上述試驗 證明，當式I中R為
時，本發(fā)明的化合物活性極高。
[0180]以上所述的【具體實施方式】，對本發(fā)明的目的、技術方案和有益效果進行了進一步 詳細說明，所應理解的是，以上所述僅為本發(fā)明的【具體實施方式】而已，并不用于限定本發(fā)明 的保護范圍，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所做的任何修改、等同替換、改進等，均應包含 在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
【主權項】
1. 二肽硼酸化合物，其特征在于，為式I所示的結構，2. 根據(jù)權利要求1所述的二肽硼酸化合物，其特征在于，所述式I中R為所述R5為Cl~C5的烷基，或含有雜原子N、S或O的支鏈烷基，或R5為取代或非取代的苯 基、芐基、萘基、5~6元雜環(huán)基;該R5的取代基為C 1~4的烷基、C 1~4的烷氧基、鹵素或C 1 ~4的鹵代烷基； 所述R6為取代或非取代的苯基、萘基、5~6元雜環(huán)基，該R6的取代基為C 1~4的烷基、C 1~4的烷氧基、鹵素或C 1~4的鹵代烷基。3. 根據(jù)權利要求2所述的二肽硼酸化合物，其特征在于，所述5~6元雜環(huán)基中的雜原子 為N、S或0。4. 根據(jù)權利要求1所述的二肽硼酸化合物，其特征在于，所述式I中RSk 時； 所述X為碳原子或氮原子； 所述Rl為取代或非取代的C 1~10的烷?；?、C 1~10的烷氧?；⒈交酋；?、苯酰基、 萘?；螂s環(huán)?；?，該Rl的取代基為C 1~4的烷基、C 1~4的烷氧基、鹵素或C 1~4的鹵代烷基。5. 根據(jù)權利要求1所述的二肽硼酸化合物，其特征在于，所述式I中Ri 所述R2為取代或非取代的C 1~10的烷?；?、C 1~10的烷氧酰基、苯酰基、萘酰基或雜 環(huán)?；?該R2的取代基為C 1~4的烷基、C 1~4的烷氧基、鹵素或C 1~4的鹵代烷基。6. 根據(jù)權利要求4或5所述的二肽硼酸化合物，其特征在于，所述雜環(huán)?；械碾s原子 為N、S或0。7. 根據(jù)權利要求5所述的二肽硼酸化合物，其特征在于，所述式I的結構為：8. 二肽硼酸化合物的制備方法，其特征在于，所述化合物的合成路線為： 原料.'υ有機堿 丄卜,η 1.)硼酸化合犢、有機堿、原料三上 片；， Z.......'二......令中本-" Mni 原料二為氫氧化鈉 2) 鹽酸 f所述R5為Cl~C5的烷基，或含有雜原子N、S或O的支鏈烷基，或R5為取代或非取代的苯 基、芐基、萘基、5~6元雜環(huán)基;該R5的取代基為C 1~4的烷基、C 1~4的烷氧基、鹵素或C 1 ~4的鹵代烷基； 所述R6為取代或非取代的苯基、萘基、5~6元雜環(huán)基，該R6的取代基為C 1~4的烷基、C 1~4的烷氧基、鹵素或C 1~4的鹵代烷基。9. 二肽硼酸化合物的制備方法，其特征在于，所述化合物的合成路線為： 原料·一 〇顆酸化合物、有機堿，I)·酸化合物、有機堿、原料Ξ: p ^ + Z...................................................-中 _體一 ----=.........................................，成品 原料二4輟氧化鈉 鹽酸 5'所述X為 碳原子或氮原子，Rl為取代或非取代的C 1~10的烷?；?、C 1~10的烷氧?；?、苯磺酰基、 苯?；⑤刘；螂s環(huán)?；?，該Rl的取代基為C 1~4的烷基、C 1~4的烷氧基、鹵素或C 1~ 4的鹵代烷基；或者，原料- 所述R2 5 為取代或非取代的C 1~10的烷?； 1~10的烷氧?；?、苯酰基、萘?；螂s環(huán)?；?該 R2的取代基為C 1~4的烷基、C 1~4的烷氧基、鹵素或C 1~4的鹵代烷基。
【文檔編號】A61P35/00GK106008572SQ201610345911
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年5月23日
【發(fā)明人】陳少武, 唐克慧, 曹勝華, 邱東輝, 潘美英, 林世博, 覃傳軍
【申請人】成都千禧萊醫(yī)藥科技有限公司