一種水產(chǎn)用氨基酸活性肽的生產(chǎn)方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及微生物發(fā)酵技術(shù)和特種水產(chǎn)飼料的生產(chǎn)技術(shù)，具體的說(shuō)是一種用微生物發(fā)酵方法生產(chǎn)氨基酸活性肽。以魚(yú)精膏、豆粕、花生粕、玉米漿干粉為發(fā)酵原料，以枯草芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌、釀酒酵母菌、海洋紅酵母和嗜酸乳桿菌為微生物發(fā)酵菌群，五種微生物液體種子分別采用搖瓶種子培養(yǎng)和發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)。固體與液體按比例均勻混合后，放置到發(fā)酵床上，經(jīng)通入無(wú)菌空氣進(jìn)行有氧固體發(fā)酵，再經(jīng)烘干、粉碎、過(guò)篩得到水產(chǎn)用氨基酸活性肽。本發(fā)明具有原料來(lái)源廣泛、發(fā)酵工藝成熟，產(chǎn)品蛋白含量高、氨基酸組份合理、肽轉(zhuǎn)化率高、酶系產(chǎn)物多、誘食效果好等特點(diǎn)，在海淡水魚(yú)、蝦、蟹和觀(guān)賞魚(yú)畜等水產(chǎn)動(dòng)物中應(yīng)用，可以防病治病，提高成活率和免疫力，提高生長(zhǎng)速度和提高品質(zhì)，還可以改善養(yǎng)殖環(huán)境,凈化水質(zhì)，水產(chǎn)用氨基酸活性肽是一種綠色的功能性的飼料添加劑。
【專(zhuān)利說(shuō)明】
-種水產(chǎn)用氨基酸活性化的生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明設(shè)及微生物發(fā)酵技術(shù)和特種水產(chǎn)飼料的生產(chǎn)技術(shù)，具體的說(shuō)是一種用微生 物發(fā)酵方法生產(chǎn)水產(chǎn)用氨基酸活性膚。
【背景技術(shù)】
[0002] 我國(guó)是全球最大的水產(chǎn)養(yǎng)殖國(guó)，水產(chǎn)養(yǎng)殖產(chǎn)量約占全球的70% W上。2015年我國(guó) 水產(chǎn)品總產(chǎn)量達(dá)6600萬(wàn)噸，其中養(yǎng)殖產(chǎn)量5600萬(wàn)噸，淡水魚(yú)類(lèi)產(chǎn)量3000萬(wàn)噸，海水魚(yú)類(lèi)產(chǎn)量 2600萬(wàn)噸。隨著人們膳食結(jié)構(gòu)的改變，對(duì)水產(chǎn)品的消費(fèi)量快速增加，水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)在全球消費(fèi) 中的地位越來(lái)越重要。目前，我國(guó)水產(chǎn)飼料產(chǎn)業(yè)已進(jìn)入快速、穩(wěn)步發(fā)展時(shí)期。我國(guó)養(yǎng)殖魚(yú)郵 的總產(chǎn)量約2600萬(wàn)噸，飼料系數(shù)Wl. 5計(jì)，理論上需要3900萬(wàn)噸飼料，但2015年我國(guó)的水產(chǎn) 配合飼料產(chǎn)量?jī)H2000萬(wàn)噸，水產(chǎn)飼料具有巨大發(fā)展空間。近年來(lái)，我國(guó)飼料工業(yè)發(fā)展很快， 取得了巨大成就，同時(shí)，應(yīng)更加注重新飼料資源的開(kāi)發(fā)利用，飼料安全和食品安全。促進(jìn)我 國(guó)飼料工業(yè)的可持續(xù)健康發(fā)展。
[0003] 目前，在我國(guó)的水產(chǎn)養(yǎng)殖和飼料行業(yè)面臨的問(wèn)題是:缺地、缺水、缺蛋白、缺品牌。 缺地、缺水控制不住，缺蛋白、缺品牌是我們?yōu)橹Φ姆较颉?br>[0004] 近年來(lái)，在研究和生產(chǎn)實(shí)踐中，人們采用豆巧、教皮、米慷為發(fā)酵原料，用微生物發(fā) 酵法和酶解法生產(chǎn)氨基酸和小膚。眾所周知，動(dòng)物消化道吸收順序是：小膚、氨基酸、蛋白 質(zhì)。蛋白質(zhì)在消化道中最終產(chǎn)物大部分是小膚，少部分是氨基酸，在后期的發(fā)酵中，也會(huì)降 解成膚類(lèi)物質(zhì)。小膚能夠穿過(guò)動(dòng)物的腸壁被吸收入循環(huán)系統(tǒng)，小膚比氨基酸更利于促進(jìn)動(dòng) 物的消化吸收、生長(zhǎng)發(fā)育和增強(qiáng)抗病抗力。目前，國(guó)內(nèi)外特種水產(chǎn)飼料發(fā)展很不均衡，國(guó)外 快，精養(yǎng)郵和海水魚(yú)80%使用特種飼料，國(guó)內(nèi)慢，精養(yǎng)郵和海水魚(yú)只有30 %左右使用特種飼 料，其它大部分還是飼喂鮮魚(yú)郵等鮮活巧料，鮮活巧料極易破壞了水質(zhì)，使郵魚(yú)的發(fā)病率大 幅度提高，所W特種水產(chǎn)飼料在水產(chǎn)養(yǎng)殖中有非常大的上升空間，目前，國(guó)內(nèi)每年能有1000 萬(wàn)噸的需求量，產(chǎn)值可達(dá)千億元W上，市場(chǎng)潛力巨大，市場(chǎng)前景非常廣闊。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明要解決的上述技術(shù)問(wèn)題，提供一種水產(chǎn)用氨基酸活性膚的生產(chǎn)方法，W魚(yú) 精膏、豆巧、花生巧、玉米漿干粉為發(fā)酵原料，W枯草芽抱桿菌、納豆芽抱桿菌、釀酒酵母菌、 海洋紅酵母和嗜酸乳桿菌為微生物發(fā)酵菌群，各種原料的重量比為;魚(yú)精膏20~30份、豆巧 60~70份、花生巧10~15、玉米漿干粉10~15份;各種菌液的重量比為:枯草芽抱桿菌5~10 份、納豆芽抱桿菌5~10份、釀酒酵母菌5~10份、海洋紅酵母5~10份、嗜酸乳桿菌5~10份； 發(fā)酵原料與液體種子重量比為：100~120:20~40;均勻混合后，放置到發(fā)酵床上，經(jīng)通入無(wú) 菌空氣進(jìn)行有氧固體發(fā)酵，發(fā)酵起始溫度為20°C~30°C，控制溫度為50°C~60°C，發(fā)酵時(shí)間 為100小時(shí)~120小時(shí);發(fā)酵料開(kāi)始降溫，溫度降低到20°C~30°C，發(fā)酵達(dá)到終點(diǎn)；經(jīng)流化床 進(jìn)風(fēng)溫度80°C~60°C，出風(fēng)溫度40°C~30°C，流化時(shí)間8分鐘~12分鐘，烘干到含水量10% ~12%，粉碎60目~100目過(guò)篩，得到水產(chǎn)用氨基酸活性膚；
[0006] 上述發(fā)酵原料中：魚(yú)精膏含水量為30%~40%、豆巧含水量為10%~13%、花生巧 含水量為10 %~13 %、玉米漿干粉含水量為10 %~13 %。其中所述發(fā)酵原料的總質(zhì)量含水 量為 13.60%~19.58%。
[0007] 上述發(fā)酵所得產(chǎn)品中，粗蛋白50 %~60 %，其中含短鏈膚20 %~30 % W上(短鏈膚 分子量為2000個(gè)道爾頓W下）、賴(lài)氨酸3.0 %~4.0 %、蛋氨酸1.0 %~2.0 %、蘇氨酸1.0 %~ 2.0%、色氨酸0.5%~0.9% ;
[000引上述發(fā)酵結(jié)束所得產(chǎn)品的抑值為4.0~5.0，總酸為200~300° T，發(fā)酵料中有酵母 酒香味和乳酸味。
[0009]所述的發(fā)酵結(jié)束所得產(chǎn)品的pH值為5.0，總酸為200° T，發(fā)酵料中有酵母酒香味和 乳酸味；
[0010]所述發(fā)酵原料中：魚(yú)精膏含水量為40 %、豆巧含水量為10 %、花生巧含水量為 10%、玉米漿干粉含水量為10%、所述發(fā)酵原料含水量為16.0%;
[0011] 上述發(fā)酵所得產(chǎn)品中，粗蛋白50%，其中含短鏈膚20% W上(短鏈膚分子量為2000 個(gè)道爾頓W下）、賴(lài)氨酸3.0%、蛋氨酸1.0%、蘇氨酸1.0%、色氨酸0.5%。
[0012] 所述的液體種子是分別經(jīng)過(guò)搖瓶種子培養(yǎng)，再經(jīng)過(guò)發(fā)酵罐培養(yǎng)得到的液體種子。
[0013] 所述發(fā)酵原料中各種原料的重量比為;魚(yú)精膏20份、豆巧60份、花生巧10份、玉米 漿干粉10份;液體種子中各種菌液的重量比為:枯草芽抱桿菌7份、納豆芽抱桿菌7份、釀酒 酵母菌7份、海洋紅酵母7份、嗜酸乳桿菌7份。
[0014] 所述發(fā)酵原料與液體種子重量比為：100:35;即發(fā)酵原料100份，枯草芽抱桿菌7 份、納豆芽抱桿菌7份、釀酒酵母菌7份、海洋紅酵母7份、嗜酸乳桿菌7份。
[0015] 所述枯草芽抱菌種子液、納豆芽抱桿菌液體種子中每毫升含活菌數(shù)為^ 100個(gè)億； 釀酒酵母菌液體種子和海洋紅酵母液體種子中每毫升含活菌數(shù)為^ 30個(gè)億，嗜酸乳桿菌液 體種子中每毫升含活菌數(shù)為含50個(gè)億。
[0016] 發(fā)酵原料放置到發(fā)酵床上，經(jīng)通入無(wú)菌空氣進(jìn)行有氧固體發(fā)酵，發(fā)酵起始溫度為 20°C，控制溫度為50°C，發(fā)酵時(shí)間為100小時(shí);發(fā)酵結(jié)束后，溫度降低到30°C，抑值為5.0,總 酸200°T發(fā)酵料中有酵母酒香味和乳酸味產(chǎn)生，發(fā)酵達(dá)到終點(diǎn)；再經(jīng)流化床進(jìn)風(fēng)溫度80°C， 出風(fēng)溫度30°C，流化時(shí)間10分鐘，烘干、粉碎到含水量10%，100目過(guò)篩，得到水產(chǎn)用氨基酸 活性膚。
[0017] 所述枯草芽抱菌種子罐和納豆芽抱桿菌種子罐的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件為:枯草芽抱 菌種子罐和納豆芽抱桿菌種子罐培養(yǎng)基W重量百分比計(jì)為:葡萄糖0.5~1.5 %、玉米漿干 粉2.0~4.0 %、硫酸錠0~0.2 %、憐酸氨二鐘0~0.2 %，余量為水;種子罐滅菌條件:滅菌 0.08~0.101?曰、115~1211：、18~20111111;培養(yǎng)條件:接種量10~20%;罐壓0.01~0.101口曰、 風(fēng)量100:80~100:120則111、轉(zhuǎn)速100~200巧111、溫度28°(：~32°(：;時(shí)間48~6地；
[0018] 所述釀酒酵母菌種子罐和海洋紅酵母種子罐的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件為:釀酒酵母菌 和海洋紅酵母種子罐的培養(yǎng)基W重量百分比計(jì)為：葡萄糖2.0~4.0%、玉米漿干粉2.0~ 4.0 %、硫酸錠0~0.2 %、憐酸氨二鐘0~0.2 %，余量為水；種子罐滅菌條件：滅菌0.08~ 0.101化、115~121°(：、18~20111111;培養(yǎng)條件:接種量10~20%;罐壓0.01~0.101?日、風(fēng)量 100:100~100:150則111、轉(zhuǎn)速180~220巧111、溫度28°(：~36°(：;時(shí)間48~6地；
[0019] 所述嗜酸乳桿菌種子罐的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件為:嗜酸乳桿菌的種子罐培養(yǎng)基W重 量百分比計(jì)為:葡萄糖1.0 ~2.0%、玉米漿干粉2.0~4.0 %、硫酸錠O~0.2%、憐酸氨二鐘O ~0.2%，余量為水;種子罐滅菌條件:滅菌0.08~O. lOMPa、115~121°C、18~20min;培養(yǎng)條 件：接種量10~20%;罐壓0.01~O.lOMPa、風(fēng)量100:0~100:100則111、轉(zhuǎn)速0~100巧111、溫度 28°C~36°C;時(shí)間48~72M乳酸菌24小時(shí)后為靜置培養(yǎng)，其它時(shí)間為通氣培養(yǎng)）。
[0020] 所述枯草芽抱菌種子罐和納豆芽抱桿菌種子罐的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件為:枯草芽抱 菌種子罐和納豆芽抱桿菌種子罐培養(yǎng)基W重量百分比計(jì)為：葡萄糖1.0%、玉米漿干粉 3.0%、硫酸錠0.1 %、憐酸氨二鐘0.1 %、余量為水;種子罐滅菌條件:滅菌0. lOMPa、121°C、 20min;培養(yǎng)條件:接種量20%;罐壓0.051口日、風(fēng)量100:100則111、轉(zhuǎn)速150巧111、溫度30°(：、時(shí)間 4化；
[0021] 所述釀酒酵母菌種子罐和海洋紅酵母種子罐的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件為:釀酒酵母菌 和海洋紅酵母種子罐的培養(yǎng)基W重量百分比計(jì)為:葡萄糖3.0%、玉米漿干粉3.0%、硫酸錠 0.1 %、憐酸氨二鐘0.1 %，余量為水;種子罐滅菌條件:滅菌0.0 SMPa、115°C、ISmin;培養(yǎng)條 件:接種量20 % ;罐壓0.05Mpa、風(fēng)量100:150vvm、轉(zhuǎn)速200巧m、溫度28 °C、時(shí)間4她；
[0022] 所述嗜酸乳桿菌種子罐的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件為:嗜酸乳桿菌種子罐培養(yǎng)基W重量 百分比計(jì)為:葡萄糖1.5%，玉米漿干粉3.0%、硫酸錠0.1%、憐酸氨二鐘0.1%，余量為水； 種子罐滅菌條件:滅菌0.081?3、115°(：、18111111;培養(yǎng)條件:接種量20%;罐壓0.05193、風(fēng)量 100:50vvm、轉(zhuǎn)速50巧m、溫度36°C、時(shí)間為6地(乳酸菌24小時(shí)后為靜置培養(yǎng)）。
[0023] 枯草芽抱桿菌和納豆芽抱桿菌是能夠產(chǎn)生芽抱的好氧微生物。在分類(lèi)學(xué)上屬原核 生物、真細(xì)菌，單個(gè)細(xì)胞(0.7~0.8X2~3WI1)，革蘭氏陽(yáng)性，無(wú)芙膜，周生鞭毛，能運(yùn)動(dòng)。芽抱 大(0.6~0.9X 1.0~1.5WI1)，楠圓到柱狀，位于菌體中央或稍偏。芽抱形成后菌體不膨大， 菌落表面粗糖，污白色或微黃色，在液體培養(yǎng)時(shí)，常形成皺釀。主要分布在海洋、江河、湖泊、 活性污泥和±壤中?？莶菅勘U菌繁殖速度快、容易培養(yǎng)，能分泌蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、 多種氨基酸、多種維生素、抗菌膚和生物促長(zhǎng)因子，具有生物好氧、調(diào)整菌群、抑制病菌、生 物括抗等功能，所W在提高動(dòng)物機(jī)體免疫力、增強(qiáng)消化系統(tǒng)酶活性、防病治病和促進(jìn)生長(zhǎng)中 起著重要作用。其芽抱抗逆性強(qiáng)、耐高溫、耐酸堿、耐擠壓，產(chǎn)品適用范圍廣泛，并且它能作 為模式菌株在生物忍片上進(jìn)行有效的DNA擴(kuò)增和蛋白質(zhì)、氨基酸分離。國(guó)內(nèi)外許多學(xué)者研究 表明，枯草芽抱桿菌在醫(yī)藥保健、水產(chǎn)養(yǎng)殖、禽畜養(yǎng)殖和生態(tài)環(huán)保等方面有較高的研究?jī)r(jià)值 和應(yīng)用價(jià)值。納豆芽抱桿菌主要是分解蛋白能力強(qiáng)。
[0024] 釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae)，也是面包酵母或叫出芽酵母，是與人類(lèi) 關(guān)系最廣泛的一種酵母。傳統(tǒng)上用于制作面包及釀酒，現(xiàn)代分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)中用 作真核生物的模式生物菌。釀酒酵母的細(xì)胞形態(tài)為球形或者卵球形，直徑5-10皿。細(xì)胞大小 為2.5~10WHX4.5~21WI1。繁殖的方式為出芽生殖，其碳源氮源利用廣泛，能利用葡萄糖、 麥芽糖、薦糖、半乳糖、阿拉伯糖、甘露醇、班巧酸、巧樣酸、木糖、山梨醇、果糖、乙醇和甘油； 釀酒酵母可W大量的合成酵母蛋白，可W代謝出各種酶系，降解纖維素和蛋白質(zhì)。有腸道益 生作用。海洋紅酵母主要能產(chǎn)生郵青素和多種維生素。
[00巧]嗜酸乳桿菌化actobacillus acidoP化Ius)屬于乳桿菌屬，革蘭氏陽(yáng)性桿菌，桿的 末端呈圓形，主要存在小腸中。具有酸甜芳香味，能分泌乳酸、乙酸可W使PH值下降，調(diào)整腸 道菌群平衡，產(chǎn)生膚類(lèi)抗菌素，抑制腸道不良微生物的增殖，對(duì)致病微生物有括抗作用。還 可W改善適口性，促進(jìn)生長(zhǎng)，提高飼料轉(zhuǎn)化率，降低抗生素和酸化劑的使用量，降低成本。特 別是對(duì)胃腸功能失調(diào)和服用抗菌素而引起胃腸功能失調(diào)等癥狀有特效，可W迅速使腸道內(nèi) 的菌群恢復(fù)正常平衡，抑制腐敗菌的增殖，具有很好的營(yíng)養(yǎng)保健作用。近年來(lái)，嗜酸乳桿菌 的應(yīng)用很廣泛。
[0026] 采用的魚(yú)精膏和玉米漿干粉為發(fā)酵原料，其主要思考是:魚(yú)精膏和有豐富的氨基 酸和小膚，并且有誘食性;玉米漿干粉有豐富氮源、有機(jī)憐魚(yú)精和微量元素，有助于微生物 的繁殖和生長(zhǎng)。
[0027] 魚(yú)精膏是魚(yú)粉家族中的重要成員，同魚(yú)粉一樣，含有動(dòng)物性蛋白質(zhì)50% W上，2000 道爾頓短膚鏈達(dá)到50 % W上，脫氨酸鹽酸鹽1.0~3.0 %，甘氨酸0.5~1.0 %，丙氨酸0.5~ 1.0%。含有多種動(dòng)物必須氨基酸、不飽和脂肪酸、多種維生素及微量有機(jī)礦物質(zhì)和未知的 生物素及促生長(zhǎng)因子;含有極易吸收的生物活性巧、牛橫酸、魚(yú)膠等;并且具有極好的水溶 性、小分子多膚容易被消化道吸收或吸附。具有增強(qiáng)免疫力、抗病力的保健功效，是各種微 生物生長(zhǎng)最好的培養(yǎng)基，特別是水溶性維生素 B復(fù)合物和各種氨基酸，能被微生物充分吸收 和利用。近年來(lái)人們對(duì)魚(yú)精膏的研究日臻完善，其氨基酸和膚類(lèi)物質(zhì)及次生長(zhǎng)因子很多，具 有維持生命體的生長(zhǎng)發(fā)育、新陳代謝等生命活動(dòng)的正常運(yùn)轉(zhuǎn)功能，促進(jìn)和維持正常生長(zhǎng)發(fā) 育，提高和調(diào)節(jié)免疫等功能。在飼料中添加，可W增強(qiáng)免役力營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑和誘食劑。
[00%]玉米漿干粉W鮮玉米漿為原料經(jīng)低溫瞬間加熱噴霧干燥而成，其水溶性蛋白質(zhì)保 存完好，保持了玉米漿液的所有特性，加熱方式為蒸汽加熱，產(chǎn)品無(wú)雜質(zhì)。玉米漿干粉用途 廣泛用于抗生素工業(yè)，維生素，氨基酸等發(fā)酵工業(yè)，在生物發(fā)酵過(guò)程中作水溶性植物蛋白及 水溶性維生素等營(yíng)養(yǎng)元素補(bǔ)充劑。
[0029] 該方法W魚(yú)精膏、豆巧、花生巧、玉米漿干粉為發(fā)酵原料，W枯草芽抱桿菌、納豆芽 抱桿菌、釀酒酵母菌、海洋紅酵母和嗜酸乳桿菌為微生物發(fā)酵菌群，五種微生物液體種子分 別采用搖瓶種子培養(yǎng)和發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)。固體與液體按比例均勻混合后，放置到發(fā)酵床上， 經(jīng)通入無(wú)菌空氣進(jìn)行有氧固體發(fā)酵，控制溫度為50°C~60°C，若是超過(guò)50°C，則進(jìn)行翻倒降 溫。再經(jīng)烘干、粉碎、過(guò)篩得到水產(chǎn)用氨基酸活性膚。
[0030] 本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)是:在種子液體培養(yǎng)中，發(fā)酵罐可為1噸罐或2噸罐，為=條(芽抱菌、酵 母菌、乳酸菌)深層發(fā)酵生產(chǎn)線(xiàn);在固體發(fā)酵中，可采用車(chē)陣式、履帶式、槽式、塔式等發(fā)酵方 式，烘干可采用負(fù)壓流化床、震動(dòng)流化床；固液混合、鋪料、發(fā)酵、傳送、烘干、粉碎、計(jì)量、包 裝等生產(chǎn)環(huán)節(jié)，采用自動(dòng)化、程序化控制，屬于規(guī)?；a(chǎn)。
[0031] 本發(fā)明特點(diǎn)是：1)五種微生物互補(bǔ)性好，生長(zhǎng)繁殖速度快、容易培養(yǎng)、菌體及代謝 產(chǎn)物營(yíng)養(yǎng)豐富等。2)魚(yú)精膏含有豐富的蛋白質(zhì)、18種氨基酸和小膚等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。3)玉米漿干 粉含有非蛋白氮和有機(jī)憐，發(fā)酵過(guò)程中可W充分利用并將其降解，代謝為動(dòng)物性蛋白。4)發(fā) 酵得到的產(chǎn)品營(yíng)養(yǎng)豐富，含有蛋白質(zhì)、氨基酸、有機(jī)酸、維生素、不飽和脂肪酸、微量元素和 膚類(lèi)抗生素等生物活性物質(zhì)。5)在水產(chǎn)養(yǎng)殖中應(yīng)用，誘食性、適口性、消化吸收率、免疫力、 抗病力好，可W明顯提高養(yǎng)殖動(dòng)物的繁殖和存活能力，增強(qiáng)皮膚肌肉色澤，可W促進(jìn)生長(zhǎng)和 品質(zhì)改善。還可W分解有機(jī)物、硫化氨、氨化物等污染物，改善養(yǎng)殖環(huán)境，凈化水質(zhì)，水產(chǎn)用 氨基酸活性膚是一種綠色的功能性的飼料添加劑，具有廣闊的市場(chǎng)前景。 具體實(shí)施例方式
[0032] 本發(fā)明采用的納豆芽抱桿菌、海洋紅酵母和嗜酸乳桿菌菌種由中國(guó)科學(xué)院微生物 所提供，魚(yú)精膏由山東漁工生物科技有限公司提供、玉米漿干粉由山東鶴伴山生物科技有 限公司提供。
[0033] 本發(fā)明各實(shí)施例采用的酵母菌為：中國(guó)工業(yè)微生物菌種保藏管理中屯、保藏的釀酒 酵母(Saccharomyces cereviSiae) ,CICC編號(hào)為1355;枯草芽抱桿菌為中國(guó)工業(yè)微生物菌 種保藏管理中屯、保藏的枯草芽抱桿菌枯草亞種(Bacillus subtilis subsp.subtilis)， CICC 編號(hào)為 20822。
[0034] 原料制備步驟如下：
[0035] (1)魚(yú)精膏的制備：
[0036] 將購(gòu)置的鮮魚(yú)進(jìn)行清洗去除雜質(zhì)，倒入魚(yú)漿粉碎機(jī)中，將其粉碎打磨成漿糊狀，將 糊狀魚(yú)漿注入到密閉的容器中，通入蒸汽，進(jìn)行熟化和滅菌處理，熟化過(guò)程技術(shù)參數(shù)為:熟 化壓力為:0.5-0.8MPa，熟化時(shí)間為：15-18分鐘，泄壓后，魚(yú)油和魚(yú)漿分離，分離后將魚(yú)漿在 離屯、機(jī)中在線(xiàn)離屯、，離屯、轉(zhuǎn)數(shù)為：1000-1200轉(zhuǎn)/分鐘，底部大顆粒為魚(yú)粉，上部為魚(yú)精膏。魚(yú) 精膏含水量為:30%~40 %;
[0037] (2)發(fā)酵原料制備:按所需比例將發(fā)酵原料中的魚(yú)精膏、豆巧、花生巧、玉米漿干粉 充分混合:發(fā)酵原料中各種原料的重量比為:魚(yú)精膏20~30份、豆巧60~70份、花生巧10~ 15、玉米漿干粉10~15份；
[0038] 發(fā)酵原料中的各物質(zhì)的質(zhì)量含水量為魚(yú)精膏30%~40%、豆巧10%~13%、花生 巧10 %~13 %、玉米漿干粉10 %~13 %，所述發(fā)酵原料的總質(zhì)量含水量為13.60 %~ 19.58%。
[0039] (3)液體種子制備:分別經(jīng)過(guò)搖瓶種子培養(yǎng)，再經(jīng)過(guò)發(fā)酵罐培養(yǎng)得到的液體種子， 具體制備步驟見(jiàn)(6)(7)(8)(9)(10)。按所需比例將液體種子中的枯草芽抱桿菌、納豆芽抱 桿菌、釀酒酵母菌、海洋紅酵母、嗜酸乳桿菌充分混合;液體種子中各種菌液的重量比為:枯 草芽抱桿菌5~10份、納豆芽抱桿菌5~10份、釀酒酵母菌5~10份、海洋紅酵母5~10份、嗜 酸乳桿菌5~10份。
[0040] 枯草芽抱桿菌種子液和納豆芽抱桿菌種子液活菌數(shù)為100個(gè)億/ml、釀酒酵母菌種 子液和海洋紅酵母種子液活菌數(shù)為30個(gè)億/ml、嗜酸乳桿菌種子液活菌數(shù)為50個(gè)億/ml;
[0041] (4)固體發(fā)酵階段：
[0042] 發(fā)酵原料與液體種子按100~120與20~40比例均勻混合，放置到發(fā)酵床上，經(jīng)通 入無(wú)菌空氣進(jìn)行有氧固體發(fā)酵。
[0043] 發(fā)酵起始溫度為20°C~30°C，控制溫度為50°C~60°C，發(fā)酵時(shí)間為100小時(shí)~120 小時(shí);發(fā)酵結(jié)束后，溫度降低到20°C~30°C，PH值為4.0~5.0，酸度值200°C~300°C，發(fā)酵料 中有酵母酒香味和乳酸味產(chǎn)生，發(fā)酵達(dá)到終點(diǎn)。
[0044] (5)烘干粉碎階段：
[0045] 再經(jīng)流化床進(jìn)風(fēng)溫度60°C~80°C，出風(fēng)溫度40°C~30°C，流化時(shí)間8分鐘~12分 鐘，烘干、粉碎到含水量10%~12%，60目~100目過(guò)篩，得到水產(chǎn)用氨基酸活性膚。
[0046] (6)枯草芽抱桿菌種子液的制備：
[0047] 1)單菌落分離:將經(jīng)活化的枯草芽抱桿菌斜面菌種在盛有新配制的葡萄糖牛肉膏 蛋白腺培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿上涂布，在恒溫培養(yǎng)箱中30°C、24小時(shí)培養(yǎng)，得到枯草芽抱桿菌單菌 落種子；
[0048] 2)搖瓶種子培養(yǎng):枯草芽抱桿菌單菌落種子在盛有葡萄糖牛肉膏蛋白腺培養(yǎng)基的 1000 ml搖瓶中接種，在恒溫?fù)u床中30°C、24小時(shí)震蕩培養(yǎng)，得到枯草芽抱桿菌搖瓶種子；
[0049] 3)液體種子培養(yǎng):將枯草芽抱桿菌搖瓶種子按質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%~20%的接種量接 種到種子罐培養(yǎng)基中，經(jīng)培養(yǎng)，得到枯草芽抱桿菌種子液;所述種子罐培養(yǎng)基W重量百分比 計(jì)為:葡萄糖0.5~1.5%、玉米漿干粉2.0~4.0 %、硫酸錠0~0.2%、憐酸氨二鐘0~0.2 %， 余量為水;種子罐滅菌條件，0.08~0.1 OMPa、115~121°C、18~20min;液體種子培養(yǎng)條件， 罐壓 0.01 ~O.lOMPa、風(fēng)量 100:100~100:150則111、轉(zhuǎn)速100~200巧111、溫度28°(：~32°(：、時(shí)間 24~36h;枯草芽抱桿菌種子液中含枯草芽抱桿菌活菌數(shù)含100億/ml;
[0050] (7)納豆芽抱桿菌種子液的制備：
[0051] 同（6)枯草芽抱桿菌種子液的制備方法一致，所不同的是菌種不一樣。
[0052] (8)釀酒酵母菌種子液的制備：
[0053] 1)單菌落分離:將經(jīng)活化的釀酒酵母菌斜面菌種在盛有新配制的葡萄糖蛋白腺酵 母膏培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿上涂布，在恒溫培養(yǎng)箱中3(TC、48小時(shí)培養(yǎng)，得到釀酒酵母單菌落種 子；
[0054] 2)搖瓶種子培養(yǎng)：釀酒酵母單菌落種子在盛有葡萄糖蛋白腺酵母膏培養(yǎng)基的 1000 ml搖瓶中接種，在恒溫?fù)u床中30°C、48小時(shí)培養(yǎng)，得到酵母菌搖瓶種子；
[0055] 3)液體種子培養(yǎng):將釀酒酵母搖瓶種子按質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%~20%的接種量接種到 種子罐培養(yǎng)基中，經(jīng)培養(yǎng)，得到酵母菌種子液;所述種子罐培養(yǎng)基W重量百分比計(jì)為:葡萄 糖2.0~4.0 %、玉米漿干粉2.0~4.0%、硫酸錠0~0.2 %、憐酸氨二鐘0~0.2 %，余量為水； 種子罐滅菌條件:罐壓0.08~O.lOMPa、溫度115~12TC、時(shí)間18~20min;液體種子培養(yǎng)條 件：罐壓 0.01 ~O.lOMPa、風(fēng)量 100:100~100:150^111、轉(zhuǎn)速180~220巧111、溫度28°(：~36°(：、 時(shí)間48~64h;釀酒酵母菌種子液中含釀酒酵母活菌數(shù)含30億/ml。
[0056] (9)海洋紅酵母菌種子液的制備：
[0057] 同（8)釀酒酵母菌種子液的制備方法一致，所不同的是菌種不一樣。
[0058] (10)嗜酸乳桿菌種子液的制備：
[0059] 1)單菌落分離:將經(jīng)活化的嗜酸乳桿菌斜面菌種在盛有新配制的葡萄糖蛋白腺牛 肉膏酵母膏培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿上涂布，在恒溫培養(yǎng)箱中3(TC、48小時(shí)培養(yǎng)，得到嗜酸乳桿菌單 菌落種子；
[0060] 2)搖瓶種子培養(yǎng):嗜酸乳桿菌單菌落種子在盛有葡萄糖蛋白腺牛肉膏酵母膏培養(yǎng) 基的1000 ml搖瓶瓶中接種，在恒溫培養(yǎng)箱中30°C、48小時(shí)培養(yǎng)，得到嗜酸乳桿菌搖瓶種子；
[0061] 3)液體種子培養(yǎng):將嗜酸乳桿菌搖瓶種子按質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%~20%的接種量接種 到種子罐培養(yǎng)基中，經(jīng)培養(yǎng)，得到嗜酸乳桿菌種子液;所述種子罐培養(yǎng)基W重量百分比計(jì) 為:葡萄糖2.0~4.0 %、玉米漿干粉2.0~4.0%、硫酸錠0~0.2 %、憐酸氨二鐘0~0.2 %，余 量為水;二級(jí)種子罐滅菌條件:罐壓0.08~O.lOMPa、溫度115~12rC、時(shí)間18~20min;二級(jí) 液體種子培養(yǎng)條件:罐壓0.0 l~0.1 OMPa、風(fēng)量100:50~100: IOOvvm、轉(zhuǎn)速100~ISOrpm、溫 度28°C~36°C (優(yōu)選32°C)、時(shí)間48~64h;嗜酸乳桿菌種子液中含嗜酸乳桿菌活菌數(shù)>50 億/ml。
[0062] (11)優(yōu)選的步驟(1)中，魚(yú)精膏的制備：
[0063] 將購(gòu)置的鮮魚(yú)進(jìn)行清洗去除雜質(zhì)，倒入魚(yú)漿粉碎機(jī)中，將其粉碎打磨成漿糊狀，將 糊狀魚(yú)漿注入到密閉的容器中，通入蒸汽，進(jìn)行熟化和滅菌處理，熟化過(guò)程技術(shù)參數(shù)為:熟 化壓力為:0.5-0.8MPa，熟化時(shí)間為：15-18分鐘，泄壓后，魚(yú)油和魚(yú)漿分離，分離后將魚(yú)漿在 離屯、機(jī)中在線(xiàn)離屯、，離屯、轉(zhuǎn)數(shù)為：1000-1200轉(zhuǎn)/分鐘，底部大顆粒為魚(yú)粉，上部為魚(yú)精膏。魚(yú) 精膏含水量為:30%~50%;優(yōu)選的步驟(2)中，按所需比例將發(fā)酵原料中的魚(yú)精膏、豆巧、 花生巧、玉米漿干粉充分混合:發(fā)酵原料中各種原料的重量比為:魚(yú)精膏20份、豆巧60份、花 生巧10份、玉米漿干粉10份；
[0064] 發(fā)酵原料中的各物質(zhì)的質(zhì)量含水量為魚(yú)精膏40%、豆巧10%、花生巧10%、玉米漿 干粉10%，所述發(fā)酵原料含水量為16.0%。
[0065] 優(yōu)選的步驟(3)中，按所需比例將液體種子中的枯草芽抱桿菌、納豆芽抱桿菌、釀 酒酵母菌、海洋紅酵母、嗜酸乳桿菌充分混合;液體種子中各種菌液的重量比為:枯草芽抱 桿菌7份、納豆芽抱桿菌7份、釀酒酵母菌7份、海洋紅酵母7份、嗜酸乳桿菌7份。
[0066] 枯草芽抱桿菌種子液和納豆芽抱桿菌種子液活菌數(shù)為100個(gè)億/ml、釀酒酵母菌種 子液和海洋紅酵母種子液活菌數(shù)為30個(gè)億/ml、嗜酸乳桿菌種子液活菌數(shù)為50個(gè)億/ml;
[0067] 優(yōu)選的步驟(4)中，發(fā)酵原料與液體種子按100與35比例均勻混合，放置到發(fā)酵床 上，經(jīng)通入無(wú)菌空氣進(jìn)行有氧固體發(fā)酵。
[006引發(fā)酵起始溫度為20°C，控制溫度為50°C，發(fā)酵時(shí)間為100小時(shí);發(fā)酵結(jié)束后，溫度降 低到30°C，PH值為5.0，酸度值200trC，發(fā)酵料中有酵母酒香味和乳酸味產(chǎn)生，發(fā)酵達(dá)到終 點(diǎn)。
[0069] 優(yōu)選的步驟（5)中，經(jīng)流化床進(jìn)風(fēng)溫度60°C，出風(fēng)溫度30°C，流化時(shí)間10分鐘，烘 干、粉碎到含水量10%，1〇〇目過(guò)篩，得到水產(chǎn)用氨基酸活性膚。
[0070] 優(yōu)選的步驟(6)中，枯草芽抱桿菌種子液的制備：
[0071] 1)單菌落分離:將經(jīng)活化的枯草芽抱桿菌斜面菌種在盛有新配制的葡萄糖牛肉膏 蛋白腺培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿上涂布，在恒溫培養(yǎng)箱中30°C、24小時(shí)培養(yǎng)，得到枯草芽抱桿菌單菌 落種子；
[0072] 2)搖瓶種子培養(yǎng):枯草芽抱桿菌單菌落種子在盛有葡萄糖牛肉膏蛋白腺培養(yǎng)基的 1000 ml搖瓶中接種，在恒溫?fù)u床中30°C、24小時(shí)培養(yǎng)，得到枯草芽抱桿菌搖瓶種子；
[0073] 3)液體種子培養(yǎng):將枯草芽抱桿菌搖瓶種子按質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%~20%的接種量接 種到種子罐培養(yǎng)基中，經(jīng)培養(yǎng)，得到枯草芽抱桿菌種子液;所述種子罐培養(yǎng)基W重量百分比 計(jì)為：
[0074] 葡萄糖1.0 %、玉米漿干粉3.0 %、硫酸錠0.1 %、憐酸氨二鐘0.1 %、余量為水;種子 罐滅菌條件:滅菌0. lOMPa、12TC、20min;培養(yǎng)條件:接種量20% ;罐壓0.05Mpa、風(fēng)量100: lOOvvm、轉(zhuǎn)速15化pm、溫度30°C、時(shí)間4她。枯草芽抱桿菌種子液中含枯草芽抱桿菌活菌數(shù)> 100億/ml;
[0075] 優(yōu)選的步驟(7)中，納豆芽抱桿菌種子液的制備：
[0076] 同（6)枯草芽抱桿菌種子液的制備方法一致，所不同的是菌種不一樣。
[0077] 優(yōu)選的步驟(8)中，釀酒酵母菌種子液的制備：
[0078] 1)單菌落分離:將經(jīng)活化的釀酒酵母菌斜面菌種在盛有新配制的葡萄糖蛋白腺酵 母膏培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿上涂布，在恒溫培養(yǎng)箱中3(TC、48小時(shí)培養(yǎng)，得到釀酒酵母單菌落種 子；
[0079] 2)搖瓶種子培養(yǎng)：釀酒酵母單菌落種子在盛有葡萄糖蛋白腺酵母膏培養(yǎng)基的 1000 ml搖瓶中接種，在恒溫培養(yǎng)箱中30°C、48小時(shí)培養(yǎng)，得到酵母菌搖瓶種子；
[0080] 3)液體種子培養(yǎng):將釀酒酵母搖瓶種子按質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%~20%的接種量接種到 種子罐培養(yǎng)基中，經(jīng)培養(yǎng)，得到酵母菌種子液;所述種子罐培養(yǎng)基W重量百分比計(jì)為:葡萄 糖3.0 %、玉米漿干粉3.0 %、硫酸錠0.1 %、憐酸氨二鐘0.1 %，余量為水;種子罐滅菌條件： 滅菌0.081?3、115°(：、18111111;培養(yǎng)條件:接種量20%;罐壓0.05193、風(fēng)量100:150則111、轉(zhuǎn)速 20化pm、溫度28°C、時(shí)間4她。釀酒酵母菌種子液中含釀酒酵母活菌數(shù)含30億/ml。
[0081 ]優(yōu)選的步驟(9)中，海洋紅酵母菌種子液的制備：
[0082] 同（8)釀酒酵母菌種子液的制備方法一致，所不同的是菌種不一樣。
[0083] 優(yōu)選的步驟(10)中，嗜酸乳桿菌種子液的制備：
[0084] 1)單菌落分離:將經(jīng)活化的嗜酸乳桿菌斜面菌種在盛有新配制的葡萄糖蛋白腺牛 肉膏酵母膏培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿上涂布，在恒溫培養(yǎng)箱中3(TC、48小時(shí)培養(yǎng)，得到嗜酸乳桿菌單 菌落種子；
[0085] 2)搖瓶種子培養(yǎng):嗜酸乳桿菌單菌落種子在盛有葡萄糖蛋白腺牛肉膏酵母膏培養(yǎng) 基的1000 ml搖瓶中接種，在恒溫?fù)u床中30°C、48小時(shí)培養(yǎng)，得到嗜酸乳桿菌搖瓶種子；
[0086] 3)液體種子培養(yǎng):將嗜酸乳桿菌固體種子按質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%~20%的接種量接種 到種子罐培養(yǎng)基中，經(jīng)培養(yǎng)，得到嗜酸乳桿菌種子液;所述種子罐培養(yǎng)基W重量百分比計(jì) 為：
[0087] 葡萄糖1.5 %，玉米漿干粉3.0 %、硫酸錠0.1 %、憐酸氨二鐘0.1 %，余量為水;種子 罐滅菌條件:滅菌0. 〇8MPa、115°C、ISmin;培養(yǎng)條件:接種量20 % ;罐壓0.05Mpa、風(fēng)量100: 50vvm、轉(zhuǎn)速50rpm、溫度36°C、時(shí)間為64K乳酸菌24小時(shí)后為靜置培養(yǎng)）；嗜酸乳桿菌種子液 中含嗜酸乳桿菌活菌數(shù)含50億/ml。
[0088] 實(shí)施例1
[0089] (1)魚(yú)精膏的制備:魚(yú)精膏的制備：
[0090] 將購(gòu)置的鮮魚(yú)進(jìn)行清洗去除雜質(zhì)，倒入魚(yú)漿粉碎機(jī)中，將其粉碎打磨成漿糊狀，將 糊狀魚(yú)漿注入到密閉的容器中，通入蒸汽，進(jìn)行熟化和滅菌處理，熟化過(guò)程技術(shù)參數(shù)為:熟 化壓力為:0.5-0.8MPa，熟化時(shí)間為：15-18分鐘，泄壓后，魚(yú)油和魚(yú)漿分離，分離后將魚(yú)漿在 離屯、機(jī)中在線(xiàn)離屯、，離屯、轉(zhuǎn)數(shù)為：1000-1200轉(zhuǎn)/分鐘，底部大顆粒為魚(yú)粉，上部為魚(yú)精膏。魚(yú) 精膏含水量為30%~40%; (2)枯草芽抱桿菌種子液的制備：
[0091] 1)單菌落分離:將經(jīng)活化的枯草芽抱桿菌斜面菌種在盛有新配制的葡萄糖牛肉膏 蛋白腺培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿上涂布，在恒溫培養(yǎng)箱中30°C、24小時(shí)培養(yǎng)，得到枯草芽抱桿菌單菌 落種子；
[0092] 2)搖瓶種子培養(yǎng):枯草芽抱桿菌單菌落種子在盛有葡萄糖牛肉膏蛋白腺培養(yǎng)基的 1000 ml搖瓶中接種，在恒溫?fù)u床中30°C、24小時(shí)培養(yǎng)，得到枯草芽抱桿菌搖瓶種子；
[0093] 3)液體種子培養(yǎng):將枯草芽抱桿菌搖瓶種子按質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%~20%的接種量接 種到種子罐培養(yǎng)基中，經(jīng)培養(yǎng)，得到枯草芽抱桿菌種子液;所述種子罐培養(yǎng)基W重量百分比 計(jì)為：
[0094] 葡萄糖1.0 %、玉米漿干粉3.0 %、硫酸錠0.1 %、憐酸氨二鐘0.1 %、余量為水;種子 罐滅菌條件:滅菌0. lOMPa、12TC、20min;培養(yǎng)條件:接種量20% ;罐壓0.05Mpa、風(fēng)量100: lOOvvm、轉(zhuǎn)速15化pm、溫度30°C、時(shí)間36h?？莶菅勘U菌種子液中含枯草芽抱桿菌活菌數(shù)> 100億/ml;
[0095] 4)菌數(shù)的檢測(cè)及其發(fā)酵結(jié)束的評(píng)價(jià):采用平板計(jì)數(shù)法測(cè)定枯草芽抱桿菌種子液中 含枯草芽抱桿菌活菌數(shù)^ 100億/ml。顯微鏡下檢查枯草芽抱桿菌種子液，菌體運(yùn)動(dòng)活潑，健 壯，整齊，無(wú)雜菌，無(wú)異味，無(wú)污染等異常現(xiàn)象，發(fā)酵結(jié)束，可與其他種子液按照比例混合使 用。
[0096] (3)納豆芽抱桿菌種子液的制備：
[0097] 同（2)枯草芽抱桿菌種子液的制備方法一致，所不同的是菌種不一樣。
[0098] (4)釀酒酵母菌種子液的制備：
[0099] 1)單菌落分離:將經(jīng)活化的釀酒酵母菌斜面菌種在盛有新配制的葡萄糖蛋白腺酵 母膏培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿上涂布，在恒溫培養(yǎng)箱中3(TC、48小時(shí)培養(yǎng)，得到釀酒酵母單菌落種 子；
[0100] 2)搖瓶種子培養(yǎng)：釀酒酵母單菌落種子在盛有葡萄糖蛋白腺酵母膏培養(yǎng)基的 1000 ml搖瓶中接種，在恒溫?fù)u床中30°C、48小時(shí)培養(yǎng)，得到酵母菌搖瓶種子；
[0101] 3)液體種子培養(yǎng):將釀酒酵母搖瓶種子按質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%~20%的接種量接種到 種子罐培養(yǎng)基中，經(jīng)培養(yǎng)，得到酵母菌種子液;所述種子罐培養(yǎng)基W重量百分比計(jì)為:葡萄 糖3.0 %、玉米漿干粉3.0 %、硫酸錠0.1 %、憐酸氨二鐘0.1 %，余量為水;種子罐滅菌條件： 滅菌0.081?3、115°(：、18111111;培養(yǎng)條件:接種量20%;罐壓0.05193、風(fēng)量100:150則111、轉(zhuǎn)速 20化pm、溫度28°C、時(shí)間4她。釀酒酵母菌種子液中含釀酒酵母活菌數(shù)含30億/ml。
[0102] 4)菌數(shù)的檢測(cè)及其發(fā)酵結(jié)束的評(píng)價(jià):酵母菌細(xì)胞形態(tài)大小約為2-5X5-30皿，酵母 菌多數(shù)為單細(xì)胞微生物，常呈卵圓形或者圓柱形。釀酒酵母培養(yǎng)皿檢查:平板培養(yǎng)基上的酵 母菌落呈白色粒狀凸起，培養(yǎng)成熟時(shí)，有酒香味。
[0103] 采用平板計(jì)數(shù)法測(cè)定釀酒酵母菌種子液中含釀酒酵母活菌數(shù)^ 100億/ml。菌體運(yùn) 動(dòng)活潑，健壯，整齊，無(wú)雜菌，無(wú)異味，無(wú)污染等異常現(xiàn)象，發(fā)酵結(jié)束，可與其他種子液按照比 例混合使用。
[0104] (5)海洋紅酵母菌種子液的制備：
[0105] 同（4)釀酒酵母菌種子液的制備方法一致，所不同的是菌種不一樣。
[0106] (6)嗜酸乳桿菌種子液的制備：
[0107] 1)單菌落分離:將經(jīng)活化的嗜酸乳桿菌斜面菌種在盛有新配制的葡萄糖蛋白腺牛 肉膏酵母膏培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿上涂布，在恒溫培養(yǎng)箱中3(TC、48小時(shí)培養(yǎng)，得到嗜酸乳桿菌單 菌落種子；
[0108] 2)搖瓶種子培養(yǎng):嗜酸乳桿菌單菌落種子在盛有葡萄糖蛋白腺牛肉膏酵母膏培養(yǎng) 基的1000 ml搖瓶中接種，在恒溫?fù)u床中30°C、48小時(shí)培養(yǎng)，得到嗜酸乳桿菌搖瓶種子；
[0109] 3)液體種子培養(yǎng):將嗜酸乳桿菌搖瓶種子按質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%~20%的接種量接種 到種子罐培養(yǎng)基中，經(jīng)培養(yǎng)，得到嗜酸乳桿菌種子液;所述種子罐培養(yǎng)基W重量百分比計(jì) 為:葡萄糖1.5 %，玉米漿干粉3.0 %、硫酸錠0.1 %、憐酸氨二鐘0.1 %，余量為水;種子罐滅 菌條件:滅菌0.〇8MPa、115°C、ISmin;培養(yǎng)條件:接種量20% ;罐壓0.05Mpa、風(fēng)量100:50vvm、 轉(zhuǎn)速50rpm、溫度36°C、時(shí)間為64h(乳酸菌24小時(shí)后為靜置培養(yǎng)）；嗜酸乳桿菌種子液中含嗜 酸乳桿菌活菌數(shù)^ 50億/ml。
[0110] 4)菌數(shù)的檢測(cè)及其發(fā)酵結(jié)束的評(píng)價(jià):細(xì)胞形態(tài)為在PH值5.OW下條件下，菌體呈現(xiàn) 短桿狀，菌體粗壯、兩端純圓，在PH值6.2條件下，菌體變細(xì)，桿狀較長(zhǎng)。培養(yǎng)皿檢查:平板培 養(yǎng)基上的嗜酸乳桿菌菌落呈無(wú)色透明，采用平板計(jì)數(shù)法測(cè)定嗜酸乳桿菌種子液中含嗜酸乳 桿菌活菌數(shù)^ 50億/ml。培養(yǎng)成熟時(shí)，PH=5W下，具有酸甜芳香味，菌體運(yùn)動(dòng)活潑，健壯，整 齊，無(wú)雜菌，無(wú)異味，無(wú)污染等異常現(xiàn)象，發(fā)酵結(jié)束，可與其他種子液按照比例混合使用。
[0111] (7)固體與液體混合階段:將發(fā)酵原料與液體種子按比例均勻混合，其重量比為： 魚(yú)精膏20份、豆巧60份、花生巧10份、玉米漿干粉10份、枯草芽抱桿菌7份、納豆芽抱桿菌7 份、釀酒酵母菌7份、海洋紅酵母7份、嗜酸乳桿菌7份;發(fā)酵原料總質(zhì)量含水量為:16.0%。
[0112] (8)固體發(fā)酵料培養(yǎng):將枯草芽抱桿菌、納豆芽抱桿菌、釀酒酵母菌、海洋紅酵母和 嗜酸乳桿菌分別經(jīng)過(guò)搖瓶種子培養(yǎng)，再經(jīng)過(guò)發(fā)酵罐培養(yǎng)得到的液體種子。
[0113] 按照枯草芽抱桿菌7份、納豆芽抱桿菌7份、釀酒酵母菌7份、海洋紅酵母7份、嗜酸 乳桿菌7份比例混合;發(fā)酵原料按照魚(yú)精膏20份、豆巧60份、花生巧10份、玉米漿干粉10份比 例混合;發(fā)酵原料與液體種子重量比為：100:35 ;，經(jīng)過(guò)通風(fēng)發(fā)酵培養(yǎng)，得到水產(chǎn)用氨基酸活 性膚。
[0114] (9)不同發(fā)酵原料配比對(duì)發(fā)酵溫度的影響：
[0115] 不同發(fā)酵原料配比試驗(yàn)設(shè)計(jì)和試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1、表2:
[0116] 親1.不同發(fā)醇原料配比試輪巧計(jì)
[0117]
[0118] 表2.不同發(fā)酵原料對(duì)發(fā)酵溫度的影響rc) LOI20 J 起始溫度 2〇"c±rc
[0121] 通過(guò)表2可W看出，試驗(yàn)組1、試驗(yàn)組2發(fā)酵溫度最好，溫度上升快，持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，50 °C W上持續(xù)24小時(shí)。試驗(yàn)組3發(fā)酵不理想，可能魚(yú)精膏太多的原因。對(duì)照組發(fā)酵也是起溫快， 持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)。
[0122] (10)不同發(fā)酵原料對(duì)發(fā)酵產(chǎn)品指標(biāo)的影響：
[0123] 不同發(fā)酵原料對(duì)發(fā)酵產(chǎn)品指標(biāo)的測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3:
[0124] 表3.不同發(fā)酵原料對(duì)發(fā)酵產(chǎn)品指標(biāo)的影響：
[01 巧 1
[0126] 通過(guò)表3可W看出，試驗(yàn)組I、試驗(yàn)組2測(cè)定指標(biāo)好于試驗(yàn)組3和試驗(yàn)組4的測(cè)定指 標(biāo)，試驗(yàn)組2測(cè)定指標(biāo)為：蛋白質(zhì)53.0 %、小膚26.0 %、賴(lài)氨酸3.6 %。蛋氨酸1.2 %、蘇氨酸 1.5%、色氨酸0.6%。
[0127] 在上述試驗(yàn)組2固體發(fā)酵料配方的情況下，試驗(yàn)結(jié)果表明：固體發(fā)酵在發(fā)酵床上進(jìn) 行通風(fēng)有氧培養(yǎng)，起始溫度為20°C~30°C，發(fā)酵過(guò)程控制溫度為50°C~60°C，發(fā)酵時(shí)間應(yīng)控 制在100~120小時(shí)；且使發(fā)酵溫度于40°C持續(xù)48小時(shí)W上后，通過(guò)翻倒、通風(fēng)加氧，可使發(fā) 酵料溫度下降至30°C W下，物理反應(yīng)和生化反應(yīng)結(jié)束，發(fā)酵料有酒香和乳酸味產(chǎn)生，PH值為 4.0~5.0,發(fā)酵達(dá)到終點(diǎn)；
[01%]對(duì)發(fā)酵床上發(fā)酵料進(jìn)行通風(fēng)，降低質(zhì)量含水量到20~25%，然后傳輸?shù)搅骰采希?在°C~60°C條件下烘干，烘干到質(zhì)量含水量^ 10%，粉碎、過(guò)篩。
[0129] 粉碎處理?xiàng)l件:在無(wú)菌潔凈條件下進(jìn)行，粉碎后粒度100目、含水量10%，為合格產(chǎn) 品。
[0130] (11)固體發(fā)酵階段：
[0131] 將按比例均勻混合后發(fā)酵料放置到發(fā)酵床上，經(jīng)通入無(wú)菌空氣進(jìn)行有氧固體發(fā) 酵。
[0132] 發(fā)酵起始溫度為20°C，控制溫度為50°C，發(fā)酵時(shí)間為100小時(shí);發(fā)酵結(jié)束后，溫度降 低到30°C，PH值為5.0，酸度值20°C，發(fā)酵料中有酵母酒香味和乳酸味產(chǎn)生，發(fā)酵達(dá)到終點(diǎn)。
[0133] (12)烘干粉碎階段：
[0134] 再經(jīng)流化床進(jìn)風(fēng)溫度60°C，出風(fēng)溫度30°C，流化時(shí)間10分鐘，烘干、粉碎到含水量 10%，100目過(guò)篩，得到水產(chǎn)用氨基酸活性膚。
[0135] 實(shí)施例2
[0136] 將實(shí)施例1獲得的水產(chǎn)用氨基酸活性膚(試驗(yàn)組2)和氨基酸活性膚(對(duì)照組)在特 種水產(chǎn)飼料中半量替代魚(yú)粉和豆巧在石斑魚(yú)中應(yīng)用，并觀(guān)察測(cè)定試驗(yàn)對(duì)飼料報(bào)酬率(FCR)、 成活率和增重率效果的影響，試驗(yàn)設(shè)計(jì)和試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4和表5:
[0137] 表4.水產(chǎn)用氨基酸活性膚半量替代魚(yú)粉和豆巧在石斑魚(yú)應(yīng)用的試驗(yàn)設(shè)計(jì)
[013 引
[0139 ] *基本原料量:原料中不包括蛋白量。基礎(chǔ)蛋白量:包括魚(yú)粉和豆巧；
[0140]表5.水產(chǎn)用氨基酸活性膚半量替代魚(yú)粉和豆巧對(duì)石斑魚(yú)增重量和成活率的影響 (30 天） 「01411
[0143] 通過(guò)表4和表5可W看出，在正常的條件和同等的管理水平下，經(jīng)過(guò)30天的喂養(yǎng)，試 驗(yàn)組飼料報(bào)酬率(FCR)0.798，對(duì)照組飼料報(bào)酬率(FCR) 1.062，試驗(yàn)組較對(duì)照組飼料報(bào)酬率 (FCR)降低0.264;試驗(yàn)組成活率96.0%，對(duì)照組成活率93.0%，試驗(yàn)組較對(duì)照組成活率提高 1.03 % ;試驗(yàn)組總增重2175.4g/30日，對(duì)照組總增重2168.3g/30日，試驗(yàn)組較對(duì)照組增重率 提高109.28%。試驗(yàn)結(jié)果表明：水產(chǎn)用氨基酸活性膚特種水產(chǎn)飼料(發(fā)酵原料中含魚(yú)精膏） 與氨基酸活性膚(發(fā)酵原料中不含魚(yú)精膏））膚特種水產(chǎn)飼料在石斑魚(yú)中進(jìn)行比較性應(yīng)用試 驗(yàn)，飼料報(bào)酬率(FCR)和提高增重率效果明顯。
[0144] 實(shí)施例3
[0145] 將實(shí)施例1獲得的水產(chǎn)用氨基酸活性膚在特種水產(chǎn)飼料中半量替代魚(yú)粉和豆巧， 在南美白對(duì)郵中進(jìn)行應(yīng)用試驗(yàn)，并觀(guān)察測(cè)定試驗(yàn)對(duì)飼料報(bào)酬率(FCR)、成活率和增重率效果 的影響，試驗(yàn)設(shè)計(jì)和試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表6、表7和表8、表9、表10:
[0146] 表6.水產(chǎn)用氨基酸活性膚半量替代魚(yú)粉和豆巧對(duì)南美白對(duì)郵應(yīng)用試驗(yàn)設(shè)計(jì)
[0147]
12 *基本原料量:原料中不包括蛋白量?；A(chǔ)蛋白量:包括魚(yú)粉和豆巧； 2 表7.含氨基酸活性膚特種水產(chǎn)飼料對(duì)南美白對(duì)郵的成活率和增重量的影響（30 天） 「01 加 I
[0151] * 水溫 26°C;
[0152] *養(yǎng)殖池水體面積:長(zhǎng)X寬X高=5m X 4m X 1.5m = 30m3;池邊為圓角。
[0153] *養(yǎng)殖地點(diǎn)：山東省濰坊市寒亭區(qū)大家法孫劍雄
[0154] *試驗(yàn)時(shí)間：2015年8月19日到9月18日
[01W] 在水溫26 °C時(shí)，經(jīng)過(guò)30天的喂養(yǎng)，試驗(yàn)結(jié)果經(jīng)過(guò)方差和T檢驗(yàn)，其結(jié)果見(jiàn)表8、9、10:
[0156] 表8. t-檢驗(yàn):飼料報(bào)酬率(FCR)成對(duì)雙樣本均值分析
[0157]
[015引 *試驗(yàn)組與對(duì)照組t檢驗(yàn)P值小于0.01差異極顯著。
[0159] 通過(guò)表8可W看出，t-檢驗(yàn):飼料報(bào)酬率(FCR)成對(duì)雙樣本均值分析，試驗(yàn)組與對(duì)照 組t檢驗(yàn)P值小于0.0 l差異極顯著。
[0160] 表9. t-檢驗(yàn):成活率成對(duì)雙樣本均值分析
[0161]
[0162] *試驗(yàn)組與對(duì)照組t檢驗(yàn)P值大于0.05差異不顯著。
[0163] 通過(guò)表9可W看出.t-檢驗(yàn):成活率成對(duì)雙樣本均值分析，試驗(yàn)組與對(duì)照組t檢驗(yàn)P 值大于0.05差異不顯著。
[0164] 表10. t-檢驗(yàn)增重率成對(duì)雙樣本均值分析
[01 化]
[0166]
[0167] *試驗(yàn)組與對(duì)照組t檢驗(yàn)P值小于0.05差異顯著。
[0168] 通過(guò)表10可W看出，t-檢驗(yàn)增重率成對(duì)雙樣本均值分析，試驗(yàn)組與對(duì)照組t檢驗(yàn)P 值小于0.05差異顯著。
[0169] 通過(guò)表6、表7和表8、表9、表10可W看出，在正常的條件和同等的管理水平下，經(jīng)過(guò) 30天的喂養(yǎng)，試驗(yàn)組飼料報(bào)酬率(FCR)0.88，對(duì)照組飼料報(bào)酬率(FCR) 1.03，試驗(yàn)組較對(duì)照組 飼料報(bào)酬率(FCR)降低0.15;試驗(yàn)組成活率96.67 %，對(duì)照組成活率94.67 %，試驗(yàn)組較對(duì)照 組成活率提高1.02% ;試驗(yàn)組總增重115.15g/30日，對(duì)照組總增重104.89g/30日，試驗(yàn)組較 對(duì)照組增重率提高9.78%。試驗(yàn)結(jié)果表明：氨基酸活性膚特種水產(chǎn)飼料在南美白對(duì)郵中進(jìn) 行應(yīng)用，飼料報(bào)酬率(FCR)和提高增重率效果明顯。
[0170] 實(shí)施例4
[0171] 將實(shí)施例1獲得的水產(chǎn)用氨基酸活性膚在特種水產(chǎn)飼料中半量替代魚(yú)粉和豆巧在 甲魚(yú)中應(yīng)用，并觀(guān)察測(cè)定試驗(yàn)對(duì)飼料報(bào)酬率(FCR)、成活率和增重率效果的影響，試驗(yàn)設(shè)計(jì) 和試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表11、表12:
[0172] 表11.水產(chǎn)用氨基酸活性膚半量替代魚(yú)粉和豆巧對(duì)甲魚(yú)應(yīng)用試驗(yàn)設(shè)計(jì)
[0173]
[0174] *基本原料量:原料中不包括蛋白量?；A(chǔ)蛋白量:包括魚(yú)粉和豆巧
[0175] 表12.水產(chǎn)用氨基酸活性膚半量替代魚(yú)粉和豆巧對(duì)對(duì)甲魚(yú)增重量的影響(30天）
[0176]
[0177] 通過(guò)表12可W看出，在正常的條件和同等的管理水平下，經(jīng)過(guò)30天的喂養(yǎng)，試驗(yàn)組 飼料報(bào)酬率(FCR)O. 9707,對(duì)照組飼料報(bào)酬率(FCR)I. 2019,試驗(yàn)組較對(duì)照組飼料報(bào)酬率 (FCR)降低0.2312;試驗(yàn)組較對(duì)照組成活率提高1.02%;試驗(yàn)組總增重1217.2g/30日，對(duì)照 組總增重1134.9g/30日，試驗(yàn)組較對(duì)照組增重率提高107.25 %。試驗(yàn)結(jié)果表明：水產(chǎn)用氨基 酸活性膚特種水產(chǎn)飼料(發(fā)酵原料中含魚(yú)精膏)試驗(yàn)組與不含水產(chǎn)用氨基酸活性膚特種水 產(chǎn)飼料特種水產(chǎn)飼料對(duì)照組在甲魚(yú)中進(jìn)行比較性應(yīng)用試驗(yàn)，飼料報(bào)酬率(FCR)和提高增重 率效果明顯。
[0178] 本發(fā)明具有生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)單，易于操作、生產(chǎn)原料來(lái)源廣泛，成本低易于推廣、生產(chǎn) 周期短發(fā)酵產(chǎn)物多，產(chǎn)品質(zhì)量好，易于應(yīng)用等特點(diǎn)。在水產(chǎn)養(yǎng)殖中應(yīng)用，可W提高免疫力和 成活率，可W加快生長(zhǎng)發(fā)育和提高產(chǎn)量，可W凈化水質(zhì)和改善養(yǎng)殖環(huán)境，是一種綠色的功能 性的飼料添加劑。
[0179] 與實(shí)施例1-4不同之處在于，為提高產(chǎn)品質(zhì)量，縮短生產(chǎn)周期，分離、純化并鑒定 的高活性微生物菌株，其應(yīng)用效果更佳。
[0180] 目前，經(jīng)過(guò)我們生產(chǎn)應(yīng)用，其應(yīng)用效果非常好，已在山東的青島、煙臺(tái)、濰坊、荷澤， 河北的秦皇島、迂寧的葫蘆島等地區(qū)應(yīng)用，取得了很好的經(jīng)濟(jì)效益，我們已將產(chǎn)品實(shí)現(xiàn)了商 品化生產(chǎn)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種水產(chǎn)用氨基酸活性肽的生產(chǎn)方法，其特征在于：以魚(yú)精膏、豆柏、花生柏、玉米漿 干粉為發(fā)酵原料，以枯草芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌、釀酒酵母菌、海洋紅酵母和嗜酸乳桿菌 為微生物發(fā)酵菌群，各種原料的重量比為;魚(yú)精膏20~30份、豆柏60~70份、花生柏10~15、 玉米漿干粉10~15份;各種菌液的重量比為:枯草芽孢桿菌5~10份、納豆芽孢桿菌5~10 份、釀酒酵母菌5~10份、海洋紅酵母5~10份、嗜酸乳桿菌5~10份;發(fā)酵原料與液體種子重 量比為：100~120:20~40;均勻混合后，放置到發(fā)酵床上，經(jīng)通入無(wú)菌空氣進(jìn)行有氧固體發(fā) 酵，發(fā)酵起始溫度為20°C~30°C，控制溫度為50°C~60°C，發(fā)酵時(shí)間為100小時(shí)~120小時(shí)； 發(fā)酵料開(kāi)始降溫，溫度降低到20°C~30°C，發(fā)酵達(dá)到終點(diǎn)；經(jīng)流化床進(jìn)風(fēng)溫度80°C~60°C， 出風(fēng)溫度40 °C~30 °C，流化時(shí)間8分鐘~12分鐘，烘干到含水量10 %~12 %，粉碎60目~100 目過(guò)篩，得到水產(chǎn)用氨基酸活性肽； 上述發(fā)酵原料中：魚(yú)精膏含水量為30 %~40 %、豆柏含水量為10 %~13 %、花生柏含水 量為10%~13%、玉米漿干粉含水量為10%~13%。2. 按照權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)方法，其特征在于:上述發(fā)酵所得產(chǎn)品中，粗蛋白50%~ 60 %，其中含短鏈肽20 %~30 %以上(短鏈肽分子量為2000個(gè)道爾頓以下）、賴(lài)氨酸3.0 %~ 4.0%、蛋氨酸1.0%~2.0%、蘇氨酸1.0%~2.0%、色氨酸0.5%~0.9%; 上述發(fā)酵結(jié)束所得產(chǎn)品的pH值為4.0~5.0，總酸為200~300° T，發(fā)酵料中有酵母酒香 味和乳酸味。3. 按照權(quán)利要求1或2所述的生產(chǎn)方法，其特征在于:所述的發(fā)酵結(jié)束所得產(chǎn)品的pH值 為5.0，總酸為200° T，發(fā)酵料中有酵母酒香味和乳酸味； 所述發(fā)酵原料中：魚(yú)精膏含水量為40%、豆柏含水量為10%、花生柏含水量為10%、玉 米漿干粉含水量為10 %; 上述發(fā)酵所得產(chǎn)品中，粗蛋白50%，其中含短鏈肽20%以上(短鏈肽分子量為2000個(gè)道 爾頓以下）、賴(lài)氨酸3.0%、蛋氨酸1.0%、蘇氨酸1.0%、色氨酸0.5%。4. 按照權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)方法，其特征在于:所述的液體種子是分別經(jīng)過(guò)搖瓶種子 培養(yǎng)，再經(jīng)過(guò)發(fā)酵罐培養(yǎng)得到的液體種子。5. 按照權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)方法，其特征在于：所述發(fā)酵原料中各種原料的重量比 為；魚(yú)精膏20份、豆柏60份、花生柏10份、玉米漿干粉10份;液體種子中各種菌液的重量比 為:枯草芽孢桿菌7份、納豆芽孢桿菌7份、釀酒酵母菌7份、海洋紅酵母7份、嗜酸乳桿菌7份。6. 按照權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)方法，其特征在于:所述發(fā)酵原料與液體種子重量比為： 100:35;即發(fā)酵原料100份，枯草芽孢桿菌7份、納豆芽孢桿菌7份、釀酒酵母菌7份、海洋紅酵 母7份、嗜酸乳桿菌7份。7. 按照權(quán)利要求1、4、5或6所述的方法，其特征在于:所述枯草芽孢菌種子液、納豆芽孢 桿菌液體種子中每毫升含活菌數(shù)為2 100個(gè)億;釀酒酵母菌液體種子和海洋紅酵母液體種 子中每毫升含活菌數(shù)為2 30個(gè)億，嗜酸乳桿菌液體種子中每毫升含活菌數(shù)為2 50個(gè)億。8. 按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:發(fā)酵原料放置到發(fā)酵床上，經(jīng)通入無(wú)菌空 氣進(jìn)行有氧固體發(fā)酵，發(fā)酵起始溫度為20°C，控制溫度為50°C，發(fā)酵時(shí)間為100小時(shí);發(fā)酵結(jié) 束后，溫度降低到30°C，pH值為5.0，總酸200° T發(fā)酵料中有酵母酒香味和乳酸味產(chǎn)生，發(fā)酵 達(dá)到終點(diǎn)；再經(jīng)流化床進(jìn)風(fēng)溫度80°C，出風(fēng)溫度30°C，流化時(shí)間10分鐘，烘干、粉碎到含水量 10%，100目過(guò)篩，得到水產(chǎn)用氨基酸活性肽。9. 照權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:所述枯草芽孢菌種子罐和納豆芽孢桿菌種子 罐的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件為:枯草芽孢菌種子罐和納豆芽孢桿菌種子罐培養(yǎng)基以重量百分比 計(jì)為:葡萄糖〇. 5~1.5%、玉米漿干粉2.0~4.0 %、硫酸銨0~0.2%、磷酸氫二鉀0~0.2 %， 余量為水;種子罐滅菌條件:滅菌〇. 08~0. lOMPa、115~121°C、18~20min;培養(yǎng)條件:接種 量 10~20% ;罐壓0.01 ~O.lOMPa、風(fēng)量 100:80~100:120vvm、轉(zhuǎn)速 100~200rpm、溫度28°C ~32°C;時(shí)間48~64h; 所述釀酒酵母菌種子罐和海洋紅酵母種子罐的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件為:釀酒酵母菌和海 洋紅酵母種子罐的培養(yǎng)基以重量百分比計(jì)為:葡萄糖2.0~4.0%、玉米漿干粉2.0~4.0%、 硫酸銨0~0.2%、磷酸氫二鉀0~0.2%，余量為水;種子罐滅菌條件:滅菌0.08~0 . lOMPa、 115~121°(：、18~2〇111丨11;培養(yǎng)條件：接種量10~20% ;罐壓0.01~0.1010^、風(fēng)量100:100~ 100:150vvm、轉(zhuǎn)速 180 ~220rpm、溫度 28°C ~36°C;時(shí)間 48 ~64h; 所述嗜酸乳桿菌種子罐的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件為:嗜酸乳桿菌的種子罐培養(yǎng)基以重量百 分比計(jì)為：葡萄糖1.0~2.0 %、玉米漿干粉2.0~4.0%、硫酸銨0~0.2 %、磷酸氫二鉀0~ 0.2%，余量為水;種子罐滅菌條件:滅菌0.08~0.1010^、115~121°(：、18~2〇11^11 ;培養(yǎng)條 件：接種量10~20% ;罐壓0.01~O.lOMPa、風(fēng)量100:0~100:100vvm、轉(zhuǎn)速0~lOOrpm、溫度 28°C~36°C;時(shí)間48~72h(乳酸菌24小時(shí)后為靜置培養(yǎng)，其它時(shí)間為通氣培養(yǎng)）。10. 照權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于:所述枯草芽孢菌種子罐和納豆芽孢桿菌種 子罐的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件為:枯草芽孢菌種子罐和納豆芽孢桿菌種子罐培養(yǎng)基以重量百分 比計(jì)為:葡萄糖1.0%、玉米漿干粉3.0%、硫酸銨0.1 %、磷酸氫二鉀0.1 %、余量為水;種子 罐滅菌條件：滅菌0. l〇MPa、121°C、20min;培養(yǎng)條件：接種量20 % ;罐壓0.05Mpa、風(fēng)量100: lOOvvm、轉(zhuǎn)速 150rpm、溫度30°C、時(shí)間48h; 所述釀酒酵母菌種子罐和海洋紅酵母種子罐的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件為:釀酒酵母菌和海 洋紅酵母種子罐的培養(yǎng)基以重量百分比計(jì)為：葡萄糖3.0 %、玉米漿干粉3.0 %、硫酸銨 0.1 %、磷酸氫二鉀0.1 %，余量為水;種子罐滅菌條件:滅菌0.08MPa、115 °C、18min;培養(yǎng)條 件:接種量20 % ;罐壓0.05Mpa、風(fēng)量100:150vvm、轉(zhuǎn)速200rpm、溫度28 °C、時(shí)間48h; 所述嗜酸乳桿菌種子罐的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件為:嗜酸乳桿菌種子罐培養(yǎng)基以重量百分 比計(jì)為:葡萄糖1.5%，玉米漿干粉3.0%、硫酸銨0.1 %、磷酸氫二鉀0.1 %，余量為水;種子 罐滅菌條件：滅菌0. 〇8MPa、115 °C、18min;培養(yǎng)條件：接種量20 % ;罐壓0.05Mpa、風(fēng)量100: 50vvm、轉(zhuǎn)速50rpm、溫度36°C、時(shí)間為64h(乳酸菌24小時(shí)后為靜置培養(yǎng)）。
【文檔編號(hào)】C12P21/00GK105861615SQ201610259632
【公開(kāi)日】2016年8月17日
【申請(qǐng)日】2016年4月22日
【發(fā)明人】閆大鳳, 葛明巧
【申請(qǐng)人】閆大鳳