示的化合物以離去基團(tuán)取代得到通式化合物（IV )，其與化合物V在 堿的存在下反應(yīng)制備得到通式化合物(I)。
[0060]
[0061]其中:W為離去基團(tuán);Ri~R3的定義如通式(I)中所述。
[0062] W表示離去基團(tuán)，可以提及例如(：1』^1、任選鹵代的(：1-(：6烷基磺?；趸?例如， 甲磺?；趸?、乙磺?；趸?、三氯甲磺?；?、任選具有取代基的的C6-C1()芳基磺?；趸?(例如，苯基磺?；趸?、對(duì)甲苯磺?；趸?，間-硝基苯磺?；趸?等。
[0063]作為所述的堿包括無(wú)機(jī)堿和有機(jī)堿，所述的無(wú)機(jī)堿可以提及例如，堿金屬碳酸鹽 類例如碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸銫等;堿金屬碳酸氫鹽類如碳酸氫鉀等;堿金屬氫氧化物例如 氫氧化鋰、氫氧化鈉、氫氧化鉀等;所述的有機(jī)堿可以提及例如三乙胺、吡啶、二甲基吡啶、 正丁基鋰、叔丁醇鉀等。
[0064]本發(fā)明中化合物的GPR40激動(dòng)活性及體內(nèi)降糖活性可以通過(guò)使用如下所述的測(cè)定 系統(tǒng)測(cè)定。
[0065] 以下生物學(xué)測(cè)試實(shí)施例描述解釋本發(fā)明。
[0066] 本發(fā)明測(cè)試?yán)芯唧w條件的實(shí)驗(yàn)方法通常按常規(guī)條件或按照商品制造廠商所建 議的條件。未注明具體來(lái)源的試劑，為市場(chǎng)購(gòu)買的常用試劑。
[0067]測(cè)試?yán)?本發(fā)明化合物對(duì)hGPR40_CH0穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞的激動(dòng)活性 [0068]本發(fā)明使用以下方法測(cè)定本發(fā)明化合物的GPR40激動(dòng)活性：
[0069] hGPR40-CH0穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞以3X104/孔的密度接種至96孔板，置于37°C、5%C02的細(xì)胞 培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)；棄去培養(yǎng)基，每孔加入lOOulHBSS清洗后，加入100ul含Probenecid的 Fluo-4染料溶液37 °C孵育90min;孵育結(jié)束后，吸出Fluo-4染料溶液，加 lOOylHBSS緩沖液， 洗去染料;每孔加入1〇〇μ1含Probenecid的HBSS，37°C孵育10min;96孔板中每孔加入不同濃 度的藥物，按照參數(shù)設(shè)置表用FLIPR(M 〇leCular Devices)讀數(shù)。分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。激動(dòng)活性= (化合物孔熒光值-空白對(duì)照孔熒光值)/(亞油酸孔熒光值-空白對(duì)照孔熒光值）X 100%，結(jié) 果見(jiàn)表1。
[0070] 表l:hGPR40受體激動(dòng)活性
[0071]
[0072] 結(jié)論:本發(fā)明所有化合物對(duì)GPR40具有明顯的激動(dòng)活性，其中I -2、I -5、1-6、1-7、I -8和1-9具有較強(qiáng)的GPR40激動(dòng)活性。
[0073] 測(cè)試?yán)?本發(fā)明中化合物的體內(nèi)降糖活性可以通過(guò)使用如下所述的測(cè)定系統(tǒng)測(cè) 定：
[0074] 正常小鼠口服糖耐量試驗(yàn)(OGTT): 10周齡昆明種清潔級(jí)小鼠，體重18~22g，雄性， 隨機(jī)分為8組，空白對(duì)照組(空白溶媒:0.5%的羧甲基纖維素鈉溶液），陽(yáng)性藥對(duì)照組(TAK-875:20mg/kg)，受試化合物組(20mg/kg)，每組8只，實(shí)驗(yàn)前小鼠禁食不禁水12小時(shí)，各組均 口服灌胃給藥，斷尾取血，測(cè)定血糖值(記為_(kāi)30min)。然后分別灌胃給予空白溶媒、TAK-875 和受試化合物，30min后測(cè)定血糖值記為Omin，之后立即按10ml/kg灌胃給予濃度為2g/10ml 的葡萄糖溶液，并于15，30，60，120min測(cè)定血糖值。結(jié)果見(jiàn)表2。
[0075] 表2:優(yōu)選化合物對(duì)正常小鼠口服糖耐量的影響j±SD，n=8)
[0076]
[0078] 注0.05為相對(duì)于空白對(duì)照組的Student's t檢驗(yàn)結(jié)果。
[0079] 正常小鼠口服糖耐量試驗(yàn)表明：1-6、1-7、1-8和1-9在體內(nèi)能夠明顯改善正常小鼠 的口服糖耐量，表現(xiàn)出較好的降血糖作用。
【具體實(shí)施方式】
[0080] 下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。需要說(shuō)明的是，下述實(shí)施例僅用于說(shuō)明， 而并非用于限制本發(fā)明。本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明的教導(dǎo)所做出的各種變化均應(yīng)在本申 請(qǐng)權(quán)利要求所要求的保護(hù)范圍之內(nèi)。
[0081 ] 實(shí)施例1
[0082] 怒其-1 並咕mS-q-其）7,西參田西S
[0083]
[0084] 4_鼠乙酰乙酸乙酯（4.25 1111，31.43臟〇1)浴亍01：的2〇1111濃硫酸中，形成的淡黃 色粘稠溶液置于冰浴冷卻至_5°C左右，分批加入間苯二酚(3.15 g，28.57 mmol)，控制內(nèi)溫 低于0°C，加畢，室溫?cái)嚢? h，反應(yīng)液倒入50ml冰水中，有白色固體析出，抽濾，水洗(5 ml X 2)濾餅，干燥得米白色固體5.6 g，粗品收率82 %。
[0085] 取上述粗品（2 g，9.50 mmol)于200 ml單頸瓶中，加入IN NaOH溶液（100 ml)，溶 液立即變成濃黃色，上述溶液置于油浴中加熱回流2 h，反應(yīng)完，冷卻至室溫，以濃硫酸調(diào)節(jié) PH至2-3,所得溶液以乙酸乙酯（30 ml X4)萃取，合并有機(jī)相，以飽和食鹽水(20 ml X2)洗 滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濾液減壓蒸除溶劑得灰褐色柱狀結(jié)晶1.3 g，粗品收率71.2 %。 取上述粗品（1 g，5.20 mmol)混懸于10 ml甲醇中，滴加0.5 ml濃硫酸，滴畢，升溫回流反應(yīng) 約4 h，反應(yīng)完，減壓蒸除甲醇，殘余液體傾入30 ml水中，以乙酸乙酯(20 mlX3)萃取，合并 有機(jī)相，分別以飽和碳酸氫鈉溶液(15 ml X 2)洗滌，飽和食鹽水（15 ml X 2)洗滌，無(wú)水硫酸 鈉干燥，過(guò)濾，濾液減壓蒸除溶劑得黃褐色油狀物，柱層析(石油醚/乙酸乙酯，80:20，v/v) 純化得淡黃色固體0.75 g，產(chǎn)率70%。
[0086] 1H NMR(300 MHz，DMS0-d6)S:9.54(s，lH，Ar0H)，7.69(s，lH，ArH)，7.33(d，J= 8.41 Hz，lH，ArH)，6.87(d，J=1.89 Hz，lH，ArH)，6.75,6.72(dd，J = 2.01，8.40 Ηζ，1Η， ArH)，3·71(s，2H，ArCH2C0)，3·63(s，3H，-〇CH3) ·
[0087] 實(shí)施例2
[0088] (6-羥基-2，3-二氫-丨-苯并呋喃-3-基）乙酸甲酯(v)
[0089]
[0090] 原料甲酯（2g，9.7 lmmo 1)溶于甲醇中，加入催化量鈀碳0.2g，以氫氣置換三次，通 入氫氣于室溫下攪拌24h，反應(yīng)完，以硅藻土做鋪墊過(guò)濾，洗滌濾餅，濾液減壓蒸除溶劑得灰 白色粉末狀固體 1.93g，產(chǎn)率95%</H NMR(300MHz，CDCl3)S:6.97(d，J = 8.71Hz，lH，ArH)， 6.31-6.34(m，2H，ArH)，4.82(brs，lH，Ar0H)，4.75(t，J = 9.10Hz，lH，-0CH2)，4·26,4·24 (dd，J=5.72,9.10Hz，lH，-0CH2)，3.74-3.84(m，lH，ArCH)，3.72(s，3H，-0CH 3)，2.74,2.69 (dd，J = 5.72,16.41Hz，1H，-C0CH2)，2.55,2.50(dd，J = 9.11，16.41Hz，1H，-C0CH2)·
[0091] 實(shí)施例3
[0092] 2-(6-(3-(哌啶-1-基)芐氧基)-2,3_二氫-1-苯并呋喃-3-基）乙酸（1-1)
[0093]
[0094] 第一步：3_鵬苯甲酸甲酯（lg，3 · 82mmol)，哌啶（0 · 76ml，7 · 63mmol)，碳酸鐘 (2 · 1 lg，15 · 26mmol)，鵬化亞銅（0 · 15g，0 · 76mmol)，L-腫氨酸（0 · 18g，1 · 53mmol)混溶于 20mlDMS0中，氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱60°C反應(yīng)8h，加水200ml稀釋，以乙酸乙酯（30ml X 3)萃取，合 并有機(jī)相，以飽和食鹽水（15ml X 2)洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濾液減壓蒸除溶劑得黃褐 色油狀物，經(jīng)柱層析（石油醚/乙酸乙酯，95:5，v/v)純化得無(wú)色油狀物VI-1 0.61g，產(chǎn)率 84% 〇
[0095] 4 MMR(300MHz，DMS〇-d6)δ: 7 · 43(s，1H，ArH)，7·33-7·29(m，2H，ArH)，7·24-7·18 (m，lH，ArH)，3.82(s，3H，-0Me)，3.22-3.10(m，4H，2XNCH2)，1.71-1.44(m，6H，-CH2CH2CH2).
[0096] 第二步:取上述無(wú)色油狀產(chǎn)物VI-1 (0.6g，2.73mmol)溶于25ml四氫呋喃中，加入硼 氫化鈉(0.3lg，8.19mmol)，所得混合物加熱回流，于回流狀態(tài)下緩慢滴加甲醇lml，滴畢繼 續(xù)回流反應(yīng)2h，冷至室溫，加水20ml攪拌30min，以乙酸乙酯（15ml X 3)萃取，合并有機(jī)相，以 飽和食鹽水(l〇ml X2)洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，抽濾，濾液減壓蒸除溶劑得無(wú)色油狀物III-1 0.56g，ESI-MS m/z:192.1[M+H]+。
[0097] 第三步:取上述無(wú)色油狀產(chǎn)物III-l 0.56g溶于20ml二氯甲烷中，于冰浴下滴加氯 化亞砜lml，加一滴DMF催化，攪拌均勻后加熱至40°C反應(yīng)3h，反應(yīng)液減壓蒸除多余的氯化亞 砜，所得褐色油狀物IV-l〇.62g，直接用于下步反應(yīng)。
[0098] 4 NMR(300MHz，DMS0-d6)S:7.28-7.23(m，lH)，7.09-7.03(m，lH)，6.92(d，J= 5.02Hz，lH)，6.7h7.66(m，lH)，5.12(s，2H)，3.22-3.10(m，4H)，1.71-1.44(m，6H).
[0099] 第四步：上述褐色油狀物IV-l(0.6g，2.86mmol)溶于20ml乙腈中，依次加入V (0.6g，2.90mmol)，碳酸鉀（1. lg，4.5mmol)，所得混合物加熱65°C反應(yīng)10h，抽濾，濾液減壓 蒸除溶劑得褐色油狀物，經(jīng)柱層析(石油醚/乙酸乙酯，85:15^八)純化得白色固體0.86 8， 所得固體溶于4mL四氫呋喃，6mL甲醇和2mL水中，加入Li0H(0.2g，8mmo 1)，室溫反應(yīng)4h，減壓 蒸除四氫呋喃和甲醇，冰水浴下滴加 IN稀鹽酸調(diào)節(jié)PH4-5,析出白色絮狀物，加水10ml稀釋， 以乙酸乙酯（15ml X 3)萃取，合并有機(jī)相，以飽和食鹽水（10ml X 2)洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥， 抽濾，濾液減壓蒸除溶劑，所得殘余物經(jīng)柱層析(石油醚/乙酸乙酯，60:40，v/v)純化得白色 固體 0.68g，熔點(diǎn) 110-112°C，產(chǎn)率 68%。
[0100] ΧΗ NMR(300MHz,DMS0-d6)5：12.23(brsaH),7.19-7.15(maH),7.09(dJ = 7.8Hz, lH)，6.96(s，lH)，6.85(d，J = 8.1Hz，lH)，6.78(d，J = 7.5Hz，lH)，6.48-6.42(m，2H)，4.95 (s，2H)，4·67(t，J=9.0Hz，lH)，4.27-4.09(m，lH)，3.74-3.62(m，lH)，3.17-3.06(m，4H)， 2.69,2.64(dd，J = 16.5,5.1Hz，lH)，2.45(d，J = 9.0Hz，lH)，1.68-1.50(m，6H).
[0101] 13CNMR(75MHz,DMSO-de)δ：173.57,161.10,159.70,152.13,138.20,129.39, 125.00,122.26,118.07,115.54,115.38,107.29,97.19,77.56,70.28,49.93,40.49， 37·57，25·66，24·35·ESI-MS m/z:366·1[M-H] - ·Anal·calcd·For C22H25NO4:C，71·91;H， 6.86;N，3.81;Found:C，71.94;H，6.85 ;N，3.82.
[0102] 實(shí)施例4
[0103] 2-(6-(3-(嗎啉-1-基)芐氧基)-2,3-二氫-1-苯并呋喃-3-基）乙酸（1-2)
[0104]
、COOH
[0105] 合成方法同1-1，得白色固