諷值MS0)，完全溶解后使用酶標(biāo)儀于492皿測(cè)定其光密度OD 值。最后W空白組OD值為100%，計(jì)算各組細(xì)胞抑制率。
[0094]
陽(yáng)0巧]3. 3、HDAC祀點(diǎn)的確證
[0096] 1)基本原理
[0097] 藥物對(duì)HDAC活性的影響采用HDAC活性檢測(cè)試劑盒來(lái)考察。在樣品（細(xì)胞裂解 液）中加入含有乙酷化賴氨酸鏈的底物，樣品中的有活性的HDAC會(huì)將底物上的賴氨酸鏈去 乙酷化，從而使底物活化。再加入賴氨酸發(fā)光試劑，即產(chǎn)生巧光，用酶標(biāo)儀記錄信號(hào)用于表 示樣品中HDAC的活性。 陽(yáng)〇9引。測(cè)定方法
[0099] 1)將未加藥處理的A549細(xì)胞裂解液50yg溶解于85yL(終體積）的(1地2〇中。 對(duì)于陽(yáng)性空白組，先加2yL的化LA核提取物，再加入83yL(1地2〇。陰性空白組，加入2yL TrichostatinA和 83JiL(1地2〇。 陽(yáng)100]。每孔中加入10yL的10倍緩沖液。 陽(yáng)101] 3)每孔加入5yLHDAC的巧光底物，并且加入藥物，使終濃度達(dá)到所設(shè)定的濃度， 充分混合，37°C解育30min。
[0102] 4)加入10yL賴氨酸顯影液，充分混合，停止反應(yīng)。37°C下解育30min。 陽(yáng)103] 5)酶標(biāo)儀檢測(cè)巧光度值（條件為發(fā)射波長(zhǎng)/激發(fā)波長(zhǎng)為350-380/440-460nm)。 陽(yáng)104] 3. 4、統(tǒng)計(jì)方法
[01化]全部資料采用SPSS(16. 0)統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行檢驗(yàn)分析。各組數(shù)據(jù)用均值+標(biāo)準(zhǔn)誤 (Mean±S.E.)表示，采用One-WayANOVA評(píng)價(jià)整體性差異，并進(jìn)行Dunnett或Dunnett'S T3檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較。 陽(yáng)106] 4、實(shí)驗(yàn)結(jié)果 陽(yáng)107] 4.LMTT實(shí)驗(yàn)
[0108] (1)化合物對(duì)人白血病化60細(xì)胞增殖的影響 陽(yáng)109] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表1所示，藥物10^1作用4她，化合物8側(cè)護(hù)1、2、3、4、5、6、7、9、10、 11、12、13、15、16、17、19、對(duì)化60細(xì)胞增殖有顯著抑制作用，抑制率均大于50%。選擇10yM作用4化后抑制率大于50%的樣品進(jìn)行復(fù)篩，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表2所示。
[0110] 表I.化合物（10iiM)對(duì)HL60細(xì)胞株的存活抑制率（％ )(Mean+SE)
[0113] **沖 < 0.OOlVsControl;*沖 < 0.OlVsControl;沖 < 0. 05VsControl.
[0114] 表2.化合物對(duì)化60細(xì)胞株的存活抑制率（％ )(Mean+SE)
[0116] **沖 < 0.OOlVsControl;*沖 < 0.OlVsControl;沖 < 0. 05VsControl.
[0117] (2)化合物對(duì)人皮膚T細(xì)胞淋己瘤化tl02細(xì)胞增殖的影響
[0118] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表3所示，藥物10yM作用4她，化合物SNOH-1、3、4、5、7、9、11、13、15、 16、17、19對(duì)化tl02細(xì)胞增殖有顯著抑制作用，抑制率均大于50 %。選擇IOyM作用4她 后抑制率大于50%的樣品進(jìn)行復(fù)篩，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表3所示。
[0119] 表3.化合物對(duì)化tl02細(xì)胞株的存活抑制率（％ ) (Mean±SE) 陽(yáng) 120]
[0122] **沖 < 0.OOlVsControl;*沖 < 0.OlVsControl;沖 < 0. 05VsControl. 陽(yáng)12引 4. 2.HDAC祀點(diǎn)的確證實(shí)驗(yàn)
[0124] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表4所示，未加藥處理的細(xì)胞提取總蛋白后，藥物20iiM作用4她，化合 物5側(cè)護(hù)1、3、5、7、9、11、13、15、17、19對(duì)4549細(xì)胞的皿4(：有顯著抑制作用，抑制率均大于 50%。選擇IOyM作用4化后HDAC抑制率大于50%且Mm式驗(yàn)中IC50小于IOyM的10 個(gè)樣品進(jìn)行復(fù)篩，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表5所示。 陽(yáng)1巧]表4.化合物對(duì)A549細(xì)胞HDAC活性的影響（％ ) (Mean)
[0127]表5.化合物對(duì)A549細(xì)胞HDAC活性的影響（％ )(Mean±SE) 陽(yáng)12引
[0130]本本沖<0?OOlVsControl;本沖<0?OlVsControl;沖<0? 05VsControl.
[0131] 表6?化合物靴向HDAC篩藥結(jié)果匯總（％ )(Mean+沈）
陽(yáng)133] 對(duì)線蟲(chóng)壽命影響實(shí)驗(yàn)：
[0134] 實(shí)驗(yàn)方法：
[0135] 實(shí)驗(yàn)選取秀麗隱桿線蟲(chóng)（N2野生型），在NGM固體培養(yǎng)基（(w/v)0. 3%化C1、 0. 25%PeptoneU. 5%Agar'O. 00005%Qiolesterol'lmMCaClzUmMM拆〇4,25mMKH2PO4) 上進(jìn)行擴(kuò)增，WE.COli0P50為食物，培養(yǎng)溫度為20°C。線蟲(chóng)壽命實(shí)驗(yàn)使用同步化成蟲(chóng)，獲 得同步化成蟲(chóng)需將成蟲(chóng)親本挑入新的固體培養(yǎng)基中產(chǎn)卵，4-8小時(shí)后將成蟲(chóng)挑出。卵解化3 天后，線蟲(chóng)發(fā)育至L4后期，收集該線蟲(chóng)用于壽命實(shí)驗(yàn)。壽命觀察使用96孔板，線蟲(chóng)培養(yǎng)于 NGM液體培養(yǎng)基中（(w/v)0. 3% 化Cl、0. 25%P巧tone、0. 00005%CholesteroUlmMCaClz、 ImMM拆〇4,25mMKH2P〇4、30yM5-Fluor〇-2, -deo巧uridine,加入 1/24 體積的的 0D600 為 0. 5的0P50E.COli)。實(shí)驗(yàn)設(shè)置空白對(duì)照組（不加藥組）和藥物處理組，每組10-15個(gè)復(fù) 孔，每孔挑入10條同步化線蟲(chóng)，加入200y1培養(yǎng)基，置于20°C培養(yǎng)，每隔=天更換1/3培 液。將化合物溶于DMSO配置成儲(chǔ)存液，按照實(shí)驗(yàn)所需濃度稀釋于NGM液體培養(yǎng)基中，線蟲(chóng) 培養(yǎng)基中的DMSO終濃度低于1/10000。線蟲(chóng)壽命統(tǒng)計(jì)從藥物處理的第二天開(kāi)始，每組起始 為100-150只線蟲(chóng)，每天觀察線蟲(chóng)是否存活，W線蟲(chóng)不動(dòng)作為線蟲(chóng)死亡的標(biāo)志，當(dāng)線蟲(chóng)在某 天發(fā)生死亡事件，該只線蟲(chóng)死亡則計(jì)錄為1，直至全部死亡。數(shù)據(jù)用GraphpadPrismS的 Survival曲線作圖，計(jì)算PValue(X〇g-rank(Mantel-Cox)Test，VS空白對(duì)照組）。給藥劑 里：
[0136] CG-03-01(SN0H-3)和CG-03-02 (SNOH-Il)共用 了 7 個(gè)劑量組：0， 0. 1yM, 0. 3yM, 1yM, 3yM, 10yM，30yM，CG-03-03 (SN0H-14)、CG-30-04 (SN0H-15)和 CG-03-05(SN0H-16)共用了6個(gè)劑量組：0,0. 1yM，0. 3yM, 1yM, 3yM,IOyM,VPA(丙戊 酸）共用了 5 個(gè)劑量組：0, 0. 3mM,lmM, 3mM,6mM 陽(yáng)137] 線蟲(chóng)壽命曲線（圖I)顯示5個(gè)化合物均有延長(zhǎng)壽命的作用，VPA已報(bào)道可W延長(zhǎng) 線蟲(chóng)壽命，5個(gè)化合物的作用遠(yuǎn)遠(yuǎn)好于VPA。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 如通式（I)所述的異徑目虧酸類化合物：其中R為H，Cle的烷基；R1和R2為H、面素或面素取代的C1Ce烷基。2. 如權(quán)利要求1所述的異翔民酸類化合物，其中，R為H，C1C4烷基，優(yōu)選H，甲基，乙基。3. 如權(quán)利要求1或2所述的異徑目虧酸類化合物，其中，R1和R2為H、面素或面素取代的 。C4烷基，優(yōu)選為H、F、C1、化或CF3。4. 根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的異徑朽酸類化合物，選自：5. 藥物組合物，包含權(quán)利要求1-4任何一項(xiàng)所述的異徑目虧酸類化合物。6. 權(quán)利要求1-4任何一項(xiàng)所述的異徑目虧酸類化合物或權(quán)利要求5所述的藥物組合物在 制備治療細(xì)胞增殖疾病藥物或保健品中的應(yīng)用。7. 如權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的細(xì)胞增殖疾病為淋己瘤、白血病、非 小細(xì)胞肺癌或腎癌。8. 權(quán)利要求1-4任何一項(xiàng)所述的異徑目虧酸類化合物或權(quán)利要求5所述的藥物組合物在 制備延長(zhǎng)壽命藥物或保健品中的應(yīng)用。9. 一種如權(quán)利要求1所述的異徑目虧酸類化合物的制備方法，其特征在于： 起始原料為肉桂酸的甲醋、乙醋或丙醋，優(yōu)選甲醋、乙醋。10. 如權(quán)利要求9所述的制備方法，其特征在于，W肉桂酸甲醋為原料：制備如下：
【專利摘要】本發(fā)明屬醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，公開(kāi)了異羥肟酸類化合物及其制備方法和用途。化合物的結(jié)構(gòu)如下所示，其中R為H，C1-C6烷基；R1和R2為H、鹵素或鹵素取代的C1-C6烷基。其制備主要以肉桂酸酯為起始原料，經(jīng)氯磺化、與取代的苯胺成磺酰胺、與羥胺反應(yīng)得到目標(biāo)化合物，操作簡(jiǎn)單、后處理方便、收率較高。目標(biāo)化合物具有組蛋白去乙?；敢种苹钚?，對(duì)多種癌細(xì)胞具有良好的抑制作用和對(duì)線蟲(chóng)具有良好的延長(zhǎng)壽命作用，從而用于腫瘤的治療及延長(zhǎng)壽命等其他用途。
【IPC分類】A61P35/02, A61K31/18, C07C303/40, C07C311/21, A61P35/00, A23L33/10
【公開(kāi)號(hào)】CN105237444
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510622248
【發(fā)明人】陳國(guó)良, 吳春福, 王立輝, 楊靜玉, 趙嫚, 包雪飛, 裴剛, 張儒
【申請(qǐng)人】沈陽(yáng)藥科大學(xué)
【公開(kāi)日】2016年1月13日
【申請(qǐng)日】2015年9月24日