單一核甘酸突變型的引物組與檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種引物組與檢測方法，特別是涉及一種單一核甘酸突變型的引物 組與檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 目前針對(duì)全球及華人發(fā)生率與死亡率高的癌癥為主要研宄標(biāo)的，例如：開發(fā)以非 侵入式診斷策略進(jìn)行結(jié)直腸癌早期腫瘤基因診斷標(biāo)記的研發(fā)；針對(duì)肺癌的標(biāo)靶與化療用藥 后復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移與抗藥性，開發(fā)循環(huán)腫瘤細(xì)胞捕獲技術(shù)、驗(yàn)證預(yù)后突變基因群檢測，監(jiān)控腫瘤 化療與靶向用藥的療效等。都需要高階基因組技術(shù)平臺(tái)、轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研宄與驗(yàn)證為解決方案， 滿足這些醫(yī)療上還未被解決的急迫需求。
[0003] 傳統(tǒng)疾病診斷都通過臨床經(jīng)驗(yàn)、病理檢測、與細(xì)胞檢測作為依據(jù)，有靈敏度的限 制，也無法做到早期發(fā)現(xiàn)早期治療，或提早預(yù)測提早預(yù)防。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種單一核甘酸突變型的引物組與檢測方法， 其對(duì)疾病做到預(yù)測、預(yù)防等積極主動(dòng)管理，做到早期發(fā)現(xiàn)早期治療，或提早預(yù)測提早預(yù)防。
[0005] 本發(fā)明是通過下述技術(shù)方案來解決上述技術(shù)問題的：本發(fā)明提供一種單一核甘酸 突變型的引物組，其特征在于，其包括五十二組擴(kuò)增引物對(duì)，其分別對(duì)應(yīng)下表組號(hào)的擴(kuò)增引 物對(duì)：
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種單一核甘酸突變型的引物組，其特征在于，其包括五十二組擴(kuò)增引物對(duì)，其分別 對(duì)應(yīng)下表組號(hào)的擴(kuò)增引物對(duì)：
O
2. -種單一核甘酸突變型的檢測方法，其特征在于，其包括以下步驟： 步驟一，采集待檢全血樣本，提取循環(huán)腫瘤DNA ; 步驟二，將獲取的DNA產(chǎn)物加入擴(kuò)增引物對(duì)進(jìn)行油包水?dāng)U增反應(yīng)； 步驟三，使用去穩(wěn)定劑以及磁珠純化擴(kuò)增產(chǎn)物，去除產(chǎn)物中的油以及殘留在反應(yīng)體系 中的寡核苷酸； 步驟四，將經(jīng)過純化處理后的擴(kuò)增產(chǎn)物加入測序轉(zhuǎn)接頭以及條形碼序列，進(jìn)行延伸反 應(yīng)； 步驟五，使用磁珠純化延伸產(chǎn)物； 步驟六，將純化好的延伸產(chǎn)物進(jìn)行DNA質(zhì)量評(píng)估； 步驟七，評(píng)估通過的延伸產(chǎn)物直接進(jìn)行第二代測序儀上機(jī)檢測； 步驟八，讀取并分析檢測數(shù)據(jù)，確認(rèn)樣本的腫瘤基因的單一核甘酸突變型。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種單一核甘酸突變型的引物組與檢測方法，該方法包括以下步驟：步驟一，采集待檢全血樣本，提取循環(huán)腫瘤DNA；步驟二，將獲取的DNA產(chǎn)物加入擴(kuò)增引物對(duì)進(jìn)行油包水?dāng)U增反應(yīng)；步驟三，去除產(chǎn)物中的油以及殘留在反應(yīng)體系中的寡核苷酸；步驟四，將經(jīng)過純化處理后的擴(kuò)增產(chǎn)物加入測序轉(zhuǎn)接頭以及條形碼序列，進(jìn)行延伸反應(yīng)；步驟五，使用磁珠純化延伸產(chǎn)物；步驟六，將純化好的延伸產(chǎn)物進(jìn)行DNA質(zhì)量評(píng)估；步驟七，評(píng)估通過的延伸產(chǎn)物直接進(jìn)行第二代測序儀上機(jī)檢測；步驟八，讀取并分析檢測數(shù)據(jù)。本發(fā)明對(duì)疾病做到預(yù)測、預(yù)防等積極主動(dòng)管理，做到早期發(fā)現(xiàn)早期治療，或提早預(yù)測提早預(yù)防。
【IPC分類】C12N15-11, C12Q1-68
【公開號(hào)】CN104830856
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510270886
【發(fā)明人】楊鑫, 陳根德, 童凱澤, 張?zhí)鞎d, 陳昱廷, 張漢銘
【申請(qǐng)人】上?；埳锟萍加邢薰?br>【公開日】2015年8月12日
【申請(qǐng)日】2015年5月26日