本發(fā)明涉及中藥領(lǐng)域，具體而言，本發(fā)明涉及中草藥葫蘆巴的提取物及其制備方法以及這種提取物作為藥物的用途。
背景技術(shù)：
胡蘆巴，英文名：commonfenugreekseed，拉丁名：trigonellafoenum-graecuml.。為豆科植物胡蘆巴的干燥成熟種子。一年生草本，高30-80厘米。主根深達(dá)土中80厘米，根系發(fā)達(dá)。莖直立，圓柱形，多分枝，微被柔毛。羽狀三出復(fù)葉；托葉全緣，膜質(zhì)，基部與葉柄相連，先端漸尖，被毛；葉柄平展，長6-12毫米；小葉長倒卵形、卵形至長圓狀披針形，近等大，長15-40毫米，寬4-15毫米，先端鈍，基部楔形，邊緣上半部具三角形尖齒，上面無毛，下面疏被柔毛，或禿凈，側(cè)脈5-6對，不明顯；頂生小葉具較長的小葉柄?；o梗，1-2朵著生葉腋，長13-18毫米；萼筒狀，長7-8毫米，被長柔毛，萼齒披針形，錐尖，與萼等長；花冠黃白色或淡黃色，基部稍呈堇青色，旗瓣長倒卵形，先端深凹，明顯地比冀瓣和龍骨瓣長；子房線形，微被柔毛，花柱短，柱頭頭狀，胚珠多數(shù)。莢果圓筒狀，長7-12厘米，徑4-5毫米，直或稍彎曲，無毛或微被柔毛，先端具細(xì)長喙，喙長約2厘米(包括子房上部不育部分)，背縫增厚，表面有明顯的縱長網(wǎng)紋，有種子10-20粒。種子長圓狀卵形，長3-5毫米，寬2-3毫米，棕褐色，表面凹凸不平?；ㄆ?-7月，果期7-9月。
我國中醫(yī)古籍也多有記載，如《綱目》：胡蘆巴，右腎命門藥也，元陽不足，冷氣潛伏，不能歸元者宜之。張子和《儒門事親》云，有人
病目不睹，思食苦豆，即胡蘆巴，頻頻不缺，不周歲而目中微痛，如蟲行入眥，漸明而愈。按此亦因其益命門之功，所謂益火之原，以消陰翳是也?！侗静萸笳妗罚汉J巴，苦溫純陽，亦能入腎補命門，......。功與仙茅、附子、硫黃恍惚相似，然其力則終遜于附子、硫黃，故補火仍須兼以附、硫、茴香、吳茱萸等藥同投，方能有效?！侗静菡x》：胡蘆巴，乃溫養(yǎng)下焦，疏泄寒氣之藥，后人以治疝瘕、腳氣等證，必系真陽式微，水寒氣滯者為宜，茍挾溫邪，即為大忌。
糖尿病是一種因體內(nèi)胰島素絕對或者相對不足所導(dǎo)致的一系列臨床綜合癥，與遺傳基因有著非常密切的關(guān)聯(lián)。糖尿病的主要臨床表現(xiàn)為“三多一少”，即多飲、多尿、多食和體重下降，以及血糖高、尿液中含有葡萄糖等。
糖尿病分為1型糖尿病、2型糖尿病、續(xù)發(fā)糖尿病和妊娠期糖尿病，雖然每種類型的糖尿病的癥狀都是相似甚至相同的，但是發(fā)病的原因卻各自不同。不同類型的糖尿病都會導(dǎo)致胰腺中的β細(xì)胞不能產(chǎn)生足量的胰島素以降低血糖的濃度，導(dǎo)致高血糖癥的發(fā)生，1型糖尿病一般是由于遺傳因素致使自體破壞產(chǎn)生胰島素的β細(xì)胞導(dǎo)致的；2型糖尿病是由于組織細(xì)胞的胰島素抵抗，細(xì)胞不再同胰島素結(jié)合，使得進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部參與生成熱量的葡萄糖減少，留在血液中的葡萄糖增多，β細(xì)胞功能衰退或其他多種原因引起的；續(xù)發(fā)型糖尿病是由于其他疾病或原因造成的糖尿病，例如胰臟疾病或是避孕藥物引起的糖尿病；妊娠期糖尿病則與2型糖尿病相似，也是源于細(xì)胞的胰島素抵抗，不過其胰島素抵抗是由于妊娠期婦女分泌的激素所導(dǎo)致的。
世界衛(wèi)生組織2011年的的報告指出全世界有3.5億人患有糖尿病，超過80％的糖尿病死亡發(fā)塵在低收入和中等收入國家。目前1、2型糖尿病尚不能完全治愈，糖尿病可以引起多種并發(fā)癥。如果糖尿病沒有得到足夠的控制，可以引起一些急性并發(fā)癥，如低血糖癥、酮癥酸中毒、非酮高滲性昏迷。嚴(yán)重的長期并發(fā)癥包括：心血管疾病、慢性腎衰竭等疾病。對于目前使用的治療手段主要是胰島素，但是胰島素隨進(jìn)食給藥，給藥量受限，有依賴性等特點，迫使人們繼續(xù)探索新的治療藥物。
本發(fā)明人意外地發(fā)現(xiàn)從葫蘆巴中提取的一種化合物在制備治療糖尿病的藥物上有意想不到的效果，目前對于這一類化合物治療糖尿病尚無報道。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供了一種葫蘆巴鮮品或干品的提取物；
本發(fā)明的另一發(fā)明目的是提供了一種制備胡蘆巴提取物的方法；
本發(fā)明的另一發(fā)明目的是提供了胡蘆巴提取物用于制備糖尿病藥物的用途；
本發(fā)明的另一發(fā)明目的是提供了含有本發(fā)明式i化合物的藥物組合物。
本發(fā)明的目的是通過下述方法實現(xiàn)的。
本發(fā)明人分別對胡蘆巴的不同藥用部位進(jìn)行了研究，對胡蘆巴全草、胡蘆巴地上部分、葉、種子、莖和根部分別進(jìn)行了提取和活性研究，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，胡蘆巴的葉、種子、莖和根部分的藥學(xué)活性是有差別的，活性以葉提取物為最佳；活性的強弱順序是種子＞葉＞莖＞根。本發(fā)明人從這一發(fā)現(xiàn)中得到啟示，用胡蘆巴的地上部分代替?zhèn)鹘y(tǒng)使用的胡蘆巴全草進(jìn)行提取，這樣既保持和提高了提取浸膏的藥學(xué)活性，又避免使用胡蘆巴的根部。由于胡蘆巴是本草植物，不使用其根部，可以避免在采集胡蘆巴時將其根部拔起，這樣，胡蘆巴可以再生，既保護(hù)了植物資源，有保護(hù)了土地植被，這對保護(hù)資源和環(huán)境都有重要意義。
本發(fā)明提供了一種從葫蘆巴提取的治療糖尿病的化合物：
式i化合物以下述提取方法得到：
(1)將葫蘆巴全草的鮮品或干品，與水按重量比為1∶5～1∶15混合，調(diào)節(jié)ph至9～11，分2次煎煮，回流提取2次，每次1～2h，合并兩次提取液，離心過濾，調(diào)節(jié)濾液的ph為3～5，靜置5～6h，收集上清液；
(2)將步驟(1)中的上清液使用孔徑為0.1～0.5μm的微濾膜進(jìn)行過濾，透過液再經(jīng)2000～10000dalton超濾膜處理后，超濾膜透過液待用；
(3)將步驟(2)的透過液減壓濃縮，得到淡黃色濃縮物，將所述濃縮物用硅膠柱層析，以體積比7∶2∶1～6.5∶3.5∶1的氯仿+甲醇+水混合溶劑洗脫，tlc檢測，收集含式i化合物流份，減壓濃縮得到濃縮物；
(4)將步驟(3)得到的濃縮物用v乙醇∶v水＝9∶1反復(fù)重結(jié)晶，得到淡黃色的針狀晶體，即為式i化合物，經(jīng)hplc檢測純度為96.8％。
本發(fā)明還提供了式i化合物的制備方法，包括下述步驟：
(1)將葫蘆巴全草的鮮品或干品，與水按重量比為1∶5～1∶15混合，調(diào)節(jié)ph至9～11，分2次煎煮，回流提取2次，每次1～2h，合并兩次提取液，離心過濾，調(diào)節(jié)濾液的ph為3～5，靜置5～6h，收集上清液；
(2)將步驟(1)中的上清液使用孔徑為0.1～0.5μm的微濾膜進(jìn)行過濾，透過液再經(jīng)2000～10000dalton超濾膜處理后，超濾膜透過液待用；
(3)將步驟(2)的透過液減壓濃縮，得到淡黃色濃縮物，將所述濃縮物用硅膠柱層析，以體積比7∶2∶1～6.5∶3.5∶1的氯仿+甲醇+水混合溶劑洗脫，tlc檢測，收集含式i化合物流份，減壓濃縮得到濃縮物；
(4)將步驟(3)得到的濃縮物用v乙醇∶v水＝9∶1反復(fù)重結(jié)晶，得到淡黃色的針狀晶體，即為式i化合物，經(jīng)hplc檢測純度為96.8％。
優(yōu)選地，選用葫蘆巴的地上部分提??；更有選的，地上部分是葉、花、種子或莖；最優(yōu)選，種子。
本發(fā)明還提供了一種藥物組合物，其含有式i化合物以及藥學(xué)上可用的助劑。
所述藥物組合物，其劑型選自素片、薄膜包衣片、糖衣片、腸衣片、分散片、膠囊、顆粒劑、湯劑、合劑、糖漿劑、酒劑、酊劑、注射液、口服溶液或口服混懸液。
所述式i化合物可用于制備治療糖尿病藥物。
實施例
下面通過實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。應(yīng)該理解的是，本發(fā)明實施例所述方法僅僅是用于說明本發(fā)明，而不是對本發(fā)明的限制，在本發(fā)明的構(gòu)思前提下對本發(fā)明制備方法的簡單改進(jìn)都屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。實施例中用到的所有原料和溶劑均為普通商購分析純產(chǎn)品。
實施例：式i化合物的提取
(1)取胡蘆巴地上部分200克，與水按重量比為1∶10混合，調(diào)節(jié)ph至10，分2次煎煮，回流提取2次，每次2h，合并兩次提取液，離心過濾，調(diào)節(jié)濾液的ph為5，靜置6h，收集上清液；
(2)將步驟(1)中的上清液使用孔徑為0.1μm的微濾膜進(jìn)行過濾，透過液再經(jīng)5000dalton超濾膜處理后，超濾膜透過液待用；
(3)將步驟(2)的透過液減壓濃縮，得到淡黃色濃縮物，將所述濃縮物用硅膠柱層析，以體積比7∶2∶1的氯仿+甲醇+水混合溶劑洗脫，tlc檢測，收集含式i化合物流份，減壓濃縮得到濃縮物；
(4)將步驟(3)得到的濃縮物用v乙醇∶v水＝9∶1反復(fù)重結(jié)晶，得到淡黃色的針狀晶體，即為式i化合物，經(jīng)hplc檢測純度為96.8％，收率15％。
1hnmr(300mhz，dmso)，δ：16.77(s，1h，oh)；12.04(s，1h，oh)；11.66(s，1h，nh)；9.48(s，1h，oh)；8.37(s，1h，ch)；8.12(d，1h，ch)；7.39(m，1h，ch)；7.35(m，1h，ch)；7.32(m，1h，ch)；7.29(m，1h，ch)；6.62(s，1h，ch)；6.56(d，1h，h)；5.87(t，1h，h)；4.9(d，1h，ch)；4.47(s，1h，oh)；4.2(d，1h，h)；4.00(t，1h，ch)；2.82(s，4h，2ch2)；2.35～2.6(d，2h，ch2)；1.46(s，6h，2ch3)；1.14(s，6h，2ch3).
式i化合物的毒性實驗：
選用健康昆明種小鼠，由江蘇大學(xué)實驗動物中心提供。雌雄各半，體重為18-22g，每組10只，分5組。小鼠飼養(yǎng)于無毒塑料盒內(nèi)，每盒5只，雌、雄分籠，每天換1次墊料，自由攝食和飲水，室溫保持18-20℃，自然光照。藥物以0.9％氯化鈉水溶液溶解，受試物劑量以mg/kg表示。按以下劑量腹腔注射給藥，給藥容積為0.1ml/10g，采用多劑量一次給藥。式i化合物：96、137、196、280、400mg/kg。給藥后每天觀察記錄動物的外觀、精神、飲食、睡眠、活動情況以及逐日死亡分布，連續(xù)觀察10天，按bliss法計算ld50。高濃度組給藥后，小鼠精神萎靡，死前糞便不成形，消瘦，豎毛，抱團(tuán)萎縮不動。
式i化合物式i化合物對實驗性2型糖尿病小鼠的影響
(1)實驗方法：
動物分組：取健康雄性小鼠40只(由上海斯萊克實驗動物有限公司提供)，隨機分為正常對照組、高脂對照組、模型對照組和式i化合物組，每組10只小鼠，其中，模型對照組和式i化合物劑量組的小鼠事先用stz誘導(dǎo)糖尿病，構(gòu)建實驗性2型糖尿病小鼠模型。各組的飼料均為高脂飼料(由上海斯萊克實驗動物有限公司提供)。
實驗性2型糖尿病小鼠模型的構(gòu)建方法為：用高脂飼料連續(xù)飼養(yǎng)5周后，動物禁食不禁水12h，按40mg/kg體重的劑量腹腔注射stz(鏈脲佐菌素，streptozocin)溶液(臨用前配制)，連續(xù)注射三天，每天一次，共注射三次；高脂對照組注射0.1mol/lph為7.0的檸檬酸緩沖液，注射體積為100μl，注射次數(shù)為每天一次，連續(xù)注射三天，共注射三次。。
處理方法：造模后第四天開始連續(xù)給藥處理50天。
正常對照組：給與普通飼料，同時灌胃花生油；劑量為100μl，每天一次；
高脂對照組：給與高脂飼料，灌胃花生油，劑量為100μl，每天1次；
模型對照組：給與高脂飼料，灌胃花生油，劑量為100μl，每天1次；
式化合物組：給與高脂飼料，按照10mg/kg的劑量灌胃，每天一次，式i化合物可先用100μl花生油溶解。
每日測定各組小鼠的日攝食量和日飲水量，每隔一周禁食12h，尾部取血，測定各組小鼠的血糖變化值。末次給藥后，小鼠禁食不禁水12h，取血檢測血清中血糖、甘油三酯、膽固醇、肌酐、ast、alt等指標(biāo)，并取心、肝、胰、脾、腎、脂肪等組織稱重。
(2)實驗結(jié)果
表1式i化合物對實驗性2型糖尿病小鼠血清指標(biāo)的影響
注：＊p＜0.05vs模型對照組，＊＊p＜0.01vs模型對照組，#p＜0.05vs高脂對照組，##p＜0.01vs高脂對照組，n＝10。
與模型對照組相比，在造模后第11、18、25、32、38和53天，式i化合物組的空腹血糖值均顯著性降低，血糖降低率可達(dá)59.28％。如表2所示，與模型對照組相比，末次給藥后，式i化合物組血清中的血糖值顯著性降低。
在給藥處理的一到七周，式i化合物組比模型對照組的攝食量和飲水量均顯著的降低，說明通過式i化合物的給藥處理，能明顯減輕了實驗性2型糖尿病小鼠臨床表現(xiàn)中多飲多食的癥狀。
以上結(jié)果表明，式i化合物能夠降低實驗性2型糖尿病小鼠的血糖，并顯著減輕了2型糖尿病小鼠臨床表現(xiàn)中多飲多食的癥狀，改善因糖尿病導(dǎo)致的消瘦。