本發(fā)明涉及原料藥品制備領(lǐng)域，具體是一種莫諾苷的制備方法。

背景技術(shù)：

莫諾苷分子式：c17h26011。分子量：402.38。分子結(jié)構(gòu)：

成分分類：環(huán)烯醚萜苷類。物理性質(zhì)：可溶于乙醇、水等極性較大的溶劑，在一定條件下易水解。藥理作用：研究表明山茱萸中的環(huán)烯醚萜總苷能改善糖尿病血管并發(fā)癥，可用于治療糖尿病藥物的開發(fā)。莫諾苷具有保護細(xì)胞免于h202誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性和細(xì)胞凋亡的作用，因此可作為一種神經(jīng)保護類藥物。莫諾苷還具有苦補健胃的功效。山茱萸為山茱萸科植物山茱萸的干燥成熟果肉。其性微溫，味酸、澀，歸肝、腎經(jīng)，具有補益肝腎，收澀固脫的功效。用于眩暈耳鳴，腰膝酸痛，陽痿遺精，遺尿尿頻，崩漏帶下，大汗虛脫，內(nèi)熱消渴?，F(xiàn)代研究表明環(huán)烯醚萜為山茱萸的主要有效部位。特別是其中的莫諾苷具有改善糖尿病血管并發(fā)癥、抗氧化、抗凋亡、增加神經(jīng)營養(yǎng)、促進神經(jīng)生長等藥理作用，對對腦卒中、腦缺血，再灌注損傷、癡呆、帕金森病等腦重大疾病具有顯著的治療和預(yù)防作用。莫諾苷還具有預(yù)防及治療急慢性肝損傷和肝纖維化的作用。莫諾苷是一種小分子、大極性的環(huán)烯醚萜類化合物，化學(xué)性質(zhì)不太穩(wěn)定，提取分離難度大，目前提取分離莫諾苷都是在實驗室小規(guī)模制備，工藝復(fù)雜、成本高。因此，開發(fā)低成本的工業(yè)化大生產(chǎn)價值的莫諾苷提取分離工藝具有現(xiàn)實意義。

申請?zhí)枮?01510438773.2的中國專利公開一種制備莫諾苷的方法，該發(fā)明，包括如下步驟：將山茱萸進行滲漉提取，得到山茱萸提取液；將得到的山茱萸提取液濃縮，得到山茱萸浸膏；得到所述山茱萸浸膏，與硅膠混勻、干燥、研細(xì)后，裝填于色譜柱中；所述色譜柱中已裝有柱層析用空白硅膠；用洗脫液對所述色譜柱進行洗脫并收集流分，再除去所述收集到的流分中的洗脫液，用甲醇溶解殘留物，重結(jié)晶，得到所述莫諾苷。此種方法對山茱萸的提取效率比較低，得到莫諾苷含量偏低。

申請?zhí)枮?00510041480的中國專利公開一種山茱萸提取物及其制備工藝，該發(fā)明中山茱萸藥材用乙醇進行提取，提取液濃縮后低溫靜置，上層固體用酸堿處理后的提取物a，下層清液用大孔樹脂柱分離得到提取物b，將提取物a和b混合的山茱萸提取物，此種方法對山茱萸的提取效率同樣很低，所的產(chǎn)品含量也比較低。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種莫諾苷的制備方法，以解決上述背景技術(shù)中提出的問題。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

一種莫諾苷的制備方法，其特征在于包括以下幾個步驟：

(1)原材料加乙醇采用微波、超聲波協(xié)同提取法進行提取：將山茱萸原料粉碎加5-10倍量乙醇，通過微波、超聲波協(xié)助提取40-60分鐘，提取2-3次；

(2)采用大孔樹脂吸附提取液：回收提取液中的乙醇，過濾后加入大孔樹脂柱進行吸附，然后采用水-醇梯度洗脫，最后收集莫諾苷流分；

(3)莫諾苷流分通過過濾膜進行過濾操作：將莫諾苷流分加入超濾膜進行超濾，超濾完成后再加入納濾膜進行過濾，然后收集濃縮液；

(4)對收集到的濃縮液進行萃取操和結(jié)晶操作：將上述濃縮液加水飽和正丁醇萃取2-4次，然后將萃取液合并，再進行減壓濃縮，濃縮后可得到濃縮浸膏，將濃縮浸膏溶于乙酸乙酯來除去不溶物和水層，再加入無水硫酸鈉回收乙酸乙酯，溶液經(jīng)過過濾后加入二氯甲烷，隨后可看到有白色沉淀析出，最后放置結(jié)晶，重復(fù)結(jié)晶3-4次，采取減壓干燥后即可得到莫諾苷產(chǎn)品。

步驟①中乙醇濃度為20-60％。

步驟①中超聲頻率為20-80khz，功率為1000-3000w。

步驟①中微波頻率為2500khz，功率10kw。

步驟②中大孔樹脂可從hpd850、s-8、nak-ii、las-7、ads-17中選取。

步驟②中水-醇梯度洗脫為6-10bv水-4-6bv10-30％乙醇溶液-6-9bv50-80％乙醇溶液。

步驟③中過濾膜種類和過濾條件：超濾膜為截留分子量3000-7000的中空復(fù)合膜，納濾膜為截留分子量150的中空復(fù)合膜。過濾壓力0.2-0.7mpa。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明采用微波超聲超聲波協(xié)同提取法，微波是一種非電離的電磁輻射，被輻射物質(zhì)的極性分子在微波電磁場中快速轉(zhuǎn)向及定向排列，利用微波加熱的特性對物料中目標(biāo)成分進行選擇性提取的方法，通過調(diào)節(jié)微波的參數(shù)，可有效加熱目標(biāo)成分，以利于目標(biāo)成分的提取與分離，利用超聲波產(chǎn)生的強烈振動和空化效應(yīng)加速植物細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的釋放、擴散并溶解進入溶劑中，同時可以保持被提取物質(zhì)的結(jié)構(gòu)和生物活性不發(fā)生變化，提取速度快，雜質(zhì)溶出少，且能耗低，具有高效無工業(yè)污染等優(yōu)點。大孔樹脂和過濾膜結(jié)合使用，除雜效果好、能耗低，和單一使用過濾膜進行過濾分離相比，延長了過濾膜的使用壽命，簡化工藝流程，更便于于操作，所得產(chǎn)品含量高，該方法適合放大生產(chǎn)，成本低，能耗小。

具體實施方式

下面將結(jié)合具體實施方式進一步說明本發(fā)明，對發(fā)明實施例中的技術(shù)方案進行清楚、完整地描述，但本發(fā)明要求保護的范圍并不局限于下列實施方式，顯然，所描述的實施例僅僅是本發(fā)明一部分實施例，而不是全部的實施例?；诒景l(fā)明中的實施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發(fā)明保護的范圍。

一種莫諾苷的制備方法，其特征在于包括以下幾個步驟：

(1)原材料加乙醇采用微波、超聲波協(xié)同提取法進行提?。簩⑸杰镙窃戏鬯榧?-10倍量乙醇，通過微波、超聲波協(xié)助提取40-60分鐘，提取2-3次；

(2)采用大孔樹脂吸附提取液：回收提取液中的乙醇，過濾后加入大孔樹脂柱進行吸附，然后采用水-醇梯度洗脫，最后收集莫諾苷流分；

(3)莫諾苷流分通過過濾膜進行過濾操作：將莫諾苷流分加入超濾膜進行超濾，超濾完成后再加入納濾膜進行過濾，然后收集濃縮液；

(4)對收集到的濃縮液進行萃取操和結(jié)晶操作：將上述濃縮液加水飽和正丁醇萃取2-4次，然后將萃取液合并，再進行減壓濃縮，濃縮后可得到濃縮浸膏，將濃縮浸膏溶于乙酸乙酯來除去不溶物和水層，再加入無水硫酸鈉回收乙酸乙酯，溶液經(jīng)過過濾后加入二氯甲烷，隨后可看到有白色沉淀析出，最后放置結(jié)晶，重復(fù)結(jié)晶3-4次，采取減壓干燥后即可得到莫諾苷產(chǎn)品。

步驟①中乙醇濃度為20-60％。

步驟①中超聲頻率為20-80khz，功率為1000-3000w。

步驟①中微波頻率為2500khz，功率10kw。

步驟②中大孔樹脂可從hpd850、s-8、nak-ii、las-7、ads-17中選取。

步驟②中水-醇梯度洗脫為6-10bv水-4-6bv10-30％乙醇溶液-6-9bv50-80％乙醇溶液。

步驟③中過濾膜種類和過濾條件：超濾膜為截留分子量3000-7000的中空復(fù)合膜，納濾膜為截留分子量150的中空復(fù)合膜。過濾壓力0.2-0.7mpa。

實施例1：使用破碎設(shè)備將山茱萸原料粉碎，取5kg粉碎后的山茱萸投入到微波、超聲波協(xié)同提取罐內(nèi)，加入15l40％乙醇，將超聲波發(fā)射器的頻率調(diào)至80khz，功率調(diào)至10kw，微波發(fā)射器的頻率為2500khz，功率為10kw，然后進行微波、超聲波協(xié)同提取，每次提取30分鐘，提取2次，將所有提取液合并在一起，回收提取液中的乙醇，將提取液加入2lhpd850大孔樹脂柱進行吸附，流速控制在3l/h，吸附結(jié)束后依次用20l水-15l10％乙醇溶液-18l60％乙醇溶液進行洗脫，收集60％乙醇洗脫液，加入截留分子量3000-7000的過濾膜進行超濾，將進口壓力控制在0.2-0.7mpa，過濾液再加入截留分子量150的納濾膜進行濃縮，濃縮液轉(zhuǎn)入萃取罐，加入3bv的水飽和正丁醇萃取4次，將萃取液濃縮，然后回收正丁醇，即可得到濃縮浸膏。濃縮浸膏加入10bv的乙酸乙酯溶解，除去水層，過濾不溶物，濾液加入無水硫酸鈉回收乙酸乙酯，將濾液內(nèi)加入二氯甲烷，然后攪勻直至有沉淀析出，隨后放置結(jié)晶，結(jié)晶物再用乙酸乙酯溶解加入二氯甲烷重復(fù)結(jié)晶3次，過濾減壓干燥得莫諾苷產(chǎn)品75g，含量97％。

實施例2：使用破碎設(shè)備將山茱萸原料粉碎，取5kg粉碎后的山茱萸投入到微波、超聲波協(xié)同提取罐內(nèi)，加入15l40％乙醇，將超聲波發(fā)射器的頻率調(diào)至60khz，功率調(diào)至8kw，微波發(fā)射器的頻率為2500khz，功率為10kw，然后進行微波、超聲波協(xié)同提取，每次提取30分鐘，提取3次，將所有提取液合并在一起，回收提取液中的乙醇，將提取液加入2lhpd850大孔樹脂柱進行吸附，流速控制在3l/h，吸附結(jié)束后依次用20l水-15l10％乙醇溶液-18l60％乙醇溶液進行洗脫，收集60％乙醇洗脫液，加入截留分子量3000-7000的過濾膜進行超濾，將進口壓力控制在0.2-0.7mpa，過濾液再加入截留分子量150的納濾膜進行濃縮，濃縮液轉(zhuǎn)入萃取罐，加入3bv的水飽和正丁醇萃取4次，將萃取液濃縮，然后回收正丁醇，即可得到濃縮浸膏。濃縮浸膏加入10bv的乙酸乙酯溶解，除去水層，過濾不溶物，濾液加入無水硫酸鈉回收乙酸乙酯，將濾液內(nèi)加入二氯甲烷，然后攪勻直至有沉淀析出，隨后放置結(jié)晶，結(jié)晶物再用乙酸乙酯溶解加入二氯甲烷重復(fù)結(jié)晶3次，過濾減壓干燥得莫諾苷產(chǎn)品71g，含量96％。

實施例3：使用破碎設(shè)備將山茱萸原料粉碎，取5kg粉碎后的山茱萸投入到微波、超聲波協(xié)同提取罐內(nèi)，加入30l50％乙醇，將超聲波發(fā)射器的頻率調(diào)至20khz，功率調(diào)至1kw，微波發(fā)射器的頻率為2500khz，功率為10kw，然后進行微波、超聲波協(xié)同提取，每次提取60分鐘，提取2次，將所有提取液合并在一起，回收提取液中的乙醇，將提取液加入3ls-8大孔樹脂柱進行吸附，流速控制在2l/h，吸附結(jié)束后依次用22l水-9l15％乙醇溶液-12l65％乙醇溶液進行洗脫，收集65％乙醇洗脫液，加入截留分子量3000-7000的過濾膜進行超濾，將進口壓力控制在0.2-0.7mpa，過濾液再加入截留分子量150的納濾膜進行濃縮，濃縮液轉(zhuǎn)入萃取罐，加入5bv的水飽和正丁醇萃取3次，將萃取液濃縮，然后回收正丁醇，即可得到濃縮浸膏。濃縮浸膏加入17bv的乙酸乙酯溶解，除去水層，過濾不溶物，濾液加入無水硫酸鈉回收乙酸乙酯，將濾液內(nèi)加入二氯甲烷，然后攪勻直至有沉淀析出，隨后放置結(jié)晶，結(jié)晶物再用乙酸乙酯溶解加入二氯甲烷重復(fù)結(jié)晶3次，過濾減壓干燥得莫諾苷產(chǎn)品68g，含量96％

實施例4：使用破碎設(shè)備將山茱萸原料粉碎，取10kg粉碎后的山茱萸投入到微波、超聲波協(xié)同提取罐內(nèi)，加入65l60％乙醇，將超聲波發(fā)射器的頻率調(diào)至80khz，功率調(diào)至1kw，微波發(fā)射器的頻率為2500khz，功率為10kw，然后進行微波、超聲波協(xié)同提取，每次提取30分鐘，提取2次，將所有提取液合并在一起，回收提取液中的乙醇，將提取液加入2llnak-ii大孔樹脂柱進行吸附，流速控制在3l/h，吸附結(jié)束后依次用80l水-28l20％乙醇溶液-33l60％乙醇溶液進行洗脫，收集60％乙醇洗脫液，加入截留分子量3000-7000的過濾膜進行超濾，將進口壓力控制在0.2-0.7mpa，過濾液再加入截留分子量150的納濾膜進行濃縮，濃縮液轉(zhuǎn)入萃取罐，加入7bv的水飽和正丁醇萃取4次，將萃取液濃縮，然后回收正丁醇，即可得到濃縮浸膏。濃縮浸膏加入18bv的乙酸乙酯溶解，除去水層，過濾不溶物，濾液加入無水硫酸鈉回收乙酸乙酯，將濾液內(nèi)加入二氯甲烷，然后攪勻直至有沉淀析出，隨后放置結(jié)晶，結(jié)晶物再用乙酸乙酯溶解加入二氯甲烷重復(fù)結(jié)晶3次，過濾減壓干燥得莫諾苷產(chǎn)品142g，含量99％

實施例5：使用破碎設(shè)備將山茱萸原料粉碎，取15kg粉碎后的山茱萸投入到微波、超聲波協(xié)同提取罐內(nèi)，加入70l50％乙醇，將超聲波發(fā)射器的頻率調(diào)至70khz，功率調(diào)至2kw，微波發(fā)射器的頻率為2500khz，功率為10kw，然后進行微波、超聲波協(xié)同提取，每次提取40分鐘，提取3次，將所有提取液合并在一起，回收提取液中的乙醇，將提取液加入9llas-7大孔樹脂柱進行吸附，流速控制在9l/h，吸附結(jié)束后依次用95l水-39l10％乙醇溶液-55l70％乙醇溶液進行洗脫，收集70％乙醇洗脫液，加入截留分子量3000-7000的過濾膜進行超濾，將進口壓力控制在0.2-0.7mpa，過濾液再加入截留分子量150的納濾膜進行濃縮，濃縮液轉(zhuǎn)入萃取罐，加入5bv的水飽和正丁醇萃取3次，將萃取液濃縮，然后回收正丁醇，即可得到濃縮浸膏。濃縮浸膏加入8bv的乙酸乙酯溶解，除去水層，過濾不溶物，濾液加入無水硫酸鈉回收乙酸乙酯，將濾液內(nèi)加入二氯甲烷，然后攪勻直至有沉淀析出，隨后放置結(jié)晶，結(jié)晶物再用乙酸乙酯溶解加入二氯甲烷重復(fù)結(jié)晶3次，過濾減壓干燥得莫諾苷產(chǎn)品196g，含量98％

實施例6：使用破碎設(shè)備將山茱萸原料粉碎，取20kg粉碎后的山茱萸投入到微波、超聲波協(xié)同提取罐內(nèi)，加入82l50％乙醇，將超聲波發(fā)射器的頻率調(diào)至80khz，功率調(diào)至5kw，微波發(fā)射器的頻率為2500khz，功率為10kw，然后進行微波、超聲波協(xié)同提取，每次提取50分鐘，提取2次，將所有提取液合并在一起，回收提取液中的乙醇，將提取液加入12llads-17大孔樹脂柱進行吸附，流速控制在20l/h，吸附結(jié)束后依次用125l水-46l10％乙醇溶液-78l65％乙醇溶液進行洗脫，收集65％乙醇洗脫液，加入截留分子量3000-7000的過濾膜進行超濾，將進口壓力控制在0.2-0.7mpa，過濾液再加入截留分子量150的納濾膜進行濃縮，濃縮液轉(zhuǎn)入萃取罐，加入6bv的水飽和正丁醇萃取4次，將萃取液濃縮，然后回收正丁醇，即可得到濃縮浸膏。濃縮浸膏加入12bv的乙酸乙酯溶解，除去水層，過濾不溶物，濾液加入無水硫酸鈉回收乙酸乙酯，將濾液內(nèi)加入二氯甲烷，然后攪勻直至有沉淀析出，隨后放置結(jié)晶，結(jié)晶物再用乙酸乙酯溶解加入二氯甲烷重復(fù)結(jié)晶3次，過濾減壓干燥得莫諾苷產(chǎn)品273g，含量98％。

實施例7：使用破碎設(shè)備將山茱萸原料粉碎，取25kg粉碎后的山茱萸投入到微波、超聲波協(xié)同提取罐內(nèi)，加入95l40％乙醇，將超聲波發(fā)射器的頻率調(diào)至60khz，功率調(diào)至4kw，微波發(fā)射器的頻率為2500khz，功率為10kw，然后進行微波、超聲波協(xié)同提取，每次提取35分鐘，提取3次，將所有提取液合并在一起，回收提取液中的乙醇，將提取液加入15llnak-ii大孔樹脂柱進行吸附，流速控制在22l/h，吸附結(jié)束后依次用150l水-52l10％乙醇溶液-112l50％乙醇溶液進行洗脫，收集50％乙醇洗脫液，加入截留分子量3000-7000的過濾膜進行超濾，將進口壓力控制在0.2-0.7mpa，過濾液再加入截留分子量150的納濾膜進行濃縮，濃縮液轉(zhuǎn)入萃取罐，加入7bv的水飽和正丁醇萃取4次，將萃取液濃縮，然后回收正丁醇，即可得到濃縮浸膏。濃縮浸膏加入15bv的乙酸乙酯溶解，除去水層，過濾不溶物，濾液加入無水硫酸鈉回收乙酸乙酯，將濾液內(nèi)加入二氯甲烷，然后攪勻直至有沉淀析出，隨后放置結(jié)晶，結(jié)晶物再用乙酸乙酯溶解加入二氯甲烷重復(fù)結(jié)晶3次，過濾減壓干燥得莫諾苷產(chǎn)品351g，含量99％。

對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，顯然本發(fā)明不限于上述示范性實施例的細(xì)節(jié)，而且在不背離本發(fā)明的精神或基本特征的情況下，能夠以其他的具體形式實現(xiàn)本發(fā)明。因此，無論從哪一點來看，均應(yīng)將實施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本發(fā)明的范圍由所附權(quán)利要求而不是上述說明限定，因此旨在將落在權(quán)利要求的等同要件的含義和范圍內(nèi)的所有變化囊括在本發(fā)明內(nèi)。

此外，應(yīng)當(dāng)理解，雖然本說明書按照實施方式加以描述，但并非每個實施方式僅包含一個獨立的技術(shù)方案，說明書的這種敘述方式僅僅是為清楚起見，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)將說明書作為一個整體，各實施例中的技術(shù)方案也可以經(jīng)適當(dāng)組合，形成本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解的其他實施方式。