專(zhuān)利名稱(chēng)：環(huán)戊烯酮衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是關(guān)于可以在醫(yī)藥領(lǐng)域中使用的、具有抗癌作用等生理活性的環(huán)戊烯酮衍生物以及該化合物的制造方法。
以往，臨床治療方法中使用的藥物涉及烷基化劑、代謝抑制劑、植物生物堿等抗癌藥、抗生素、免疫促進(jìn)劑和免疫調(diào)節(jié)劑等多種藥劑，但這些藥物療法還不能說(shuō)已經(jīng)十分完善。
研究報(bào)告指出，在這些藥物中，由天然物質(zhì)得來(lái)的前列腺素中在5員環(huán)上具有α，β-不飽和羰基的前列腺素A和J類(lèi)能抑制DNA合成，可以作為安全性高的抗癌藥，目前已經(jīng)合成了它們的各種衍生物(參見(jiàn)特開(kāi)昭62-96438)。
本發(fā)明的目的是，研制具有抗癌作用、細(xì)胞凋亡誘發(fā)作用、抗菌作用等生理作用的環(huán)戊烯酮衍生物，提供該化合物的制造方法以及含有該化合物的藥物。
為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明人進(jìn)行了深入的研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，使由[III]式表示的4，5-二羥基-2-環(huán)戊烯-1-酮(以下簡(jiǎn)稱(chēng)環(huán)戊烯酮)與羧酸和/或其反應(yīng)性衍生物反應(yīng)，可以生成由[II]式表示的環(huán)戊烯酮衍生物，該環(huán)戊烯酮衍生物具有很強(qiáng)的癌細(xì)胞增殖抑制活性等生理活性。
本發(fā)明可以概括如下本發(fā)明的第1發(fā)明是關(guān)于由下列通式[I]表示的環(huán)戊烯酮衍生物或其旋光物或者它們的鹽。
式中，R1和R2是相同或不同的直鏈或支鏈烷基、直鏈或支鏈鏈烯基、芳基或芳脂族基，但不包括R1＝R2＝-CH3的情況。
本發(fā)明的第2發(fā)明是關(guān)于由通式[II]表示的環(huán)戊烯酮衍生物的制造方法，其特征是，使由下列[III]式表示的4，5-二羥基-2-環(huán)戊烯-1-酮和/或其旋光物與相當(dāng)于由下列通式[II]表示的環(huán)戊烯酮衍生物的R3、R4的羧酸和/或其反應(yīng)性衍生物同時(shí)或順次反應(yīng)。
式中，R3和R4是相同或不同的直鏈或支鏈烷基、直鏈或支鏈鏈烯基、芳基或芳脂族基。
本發(fā)明的第3發(fā)明是關(guān)于一種藥物，其特征是，該藥物含有選自本發(fā)明的第1發(fā)明的環(huán)戊烯酮衍生物或其旋光物或者它們的鹽中的化合物作為有效成分。
本發(fā)明的第4發(fā)明是關(guān)于一種藥物，其特征是，該藥物含有選自用本發(fā)明的第2發(fā)明的方法得到的環(huán)戊烯酮衍生物或其旋光物或者它們的鹽的化合物作為有效成分。
在本發(fā)明的第3和第4發(fā)明中，優(yōu)選的方案是，上述藥物為抗癌藥、細(xì)胞凋亡誘發(fā)劑、抗菌劑。
附圖的簡(jiǎn)要說(shuō)明

圖1是表示二乙?；h(huán)戊烯酮的質(zhì)譜分析的圖。
圖2是表示二乙?；h(huán)戊烯酮的1H-NMR譜的圖。
圖3是表示二苯甲酰基環(huán)戊烯酮的質(zhì)譜分析的圖。
圖4是表示二苯甲?；h(huán)戊烯酮的1H-NMR譜的圖。
圖5是表示二己?；h(huán)戊烯酮的1H-NMR譜的圖。
圖6是表示二肉豆蔻?；h(huán)戊烯酮的1H-NMR譜的圖。
圖7是表示二辛?；h(huán)戊烯酮的1H-NMR譜的圖。
圖8是表示二-3-辛烯酰基環(huán)戊烯酮的1H-NMR譜的圖。
圖9是表示二丁?；h(huán)戊烯酮的1H-NMR譜的圖。
圖10是表示二癸?；h(huán)戊烯酮的1H-NMR譜的圖。
圖11是表示二戊酰基環(huán)戊烯酮的1H-NMR譜的圖。
圖12是表示二丙?；h(huán)戊烯酮的1H-NMR譜的圖。
圖13是表示二-2-己烯?；h(huán)戊烯酮的1H-NMR譜的圖。
圖14是表示(-)-環(huán)戊烯酮的對(duì)二甲氨基苯甲?；苌锏腃D和(-)-環(huán)戊烯酮的立體結(jié)構(gòu)的圖。
圖15是表示(+)-環(huán)戊烯酮的對(duì)二甲氨基苯甲?；苌锏腃D和(+)-環(huán)戊烯酮的立體結(jié)構(gòu)的圖。
發(fā)明的實(shí)施方式下面具體地說(shuō)明本發(fā)明。
本發(fā)明中使用的由[III]式表示的環(huán)戊烯酮，其4位和5位的羥基的立體構(gòu)型包括順式異構(gòu)體和反式異構(gòu)體兩種情況。在本發(fā)明中，可以使用順式環(huán)戊烯酮，反式環(huán)戊烯酮，或者順式環(huán)戊烯酮與反式環(huán)戊烯酮的混合物。另外，也可以使用它們的旋光物。
順式環(huán)戊烯酮可以用化學(xué)合成法制備[參見(jiàn)(HelveticaChimica Acta)、第55卷、第2838-2844頁(yè)(1972)]。反式環(huán)戊烯酮也可以用化學(xué)合成法制備[參見(jiàn)(Carbohybrate Res.)、第247卷、第217-222頁(yè)(1993)]，另外，還可以通過(guò)對(duì)糖醛酸(例如葡糖醛酸)、糖醛酸衍生物(例如葡糖醛酸內(nèi)酯)等進(jìn)行加熱處理而制備(參見(jiàn)PCT/JP97/03052說(shuō)明書(shū))。在本發(fā)明中，也可以使用含有環(huán)戊烯酮的上述加熱處理物、其部分精制物以及精制物。
例如，糖醛酸使用D-葡糖醛酸，將其1％溶液在121℃下加熱處理4小時(shí)，使加熱處理物中生成環(huán)戊烯酮。用溶劑萃取該加熱處理物中的環(huán)戊烯酮，濃縮萃取物。然后用硅膠柱色譜分離該濃縮物，濃縮溶出的環(huán)戊烯酮級(jí)分，用氯仿從濃縮物中提取環(huán)戊烯酮，對(duì)提取的濃縮物進(jìn)行正相柱色譜分離，離析加熱處理物中的環(huán)戊烯酮。
環(huán)戊烯酮的物性列出如下。環(huán)戊烯酮的質(zhì)譜分析是采用DX302質(zhì)譜儀(日本電子社制造)進(jìn)行的。另外，使用重氯仿溶劑的NMR譜的測(cè)定是采用JNM-A500(日本電子社制造)。旋光率、UV吸收譜和紅外吸收光譜(IR)分別是使用DIP-370型旋光計(jì)(日本分光社制造)、UV-2500分光光度計(jì)(島津制作所制造)和FTIR-8000紅外分光光度計(jì)(島津制作所制造)。MSm/z 115〔M+H〕+1H-NMR(CDCl3)δ4.20(1H，d，J＝2.4Hz，5-H)、4.83(1H，m，4-H)、6.30(1H，dd，J＝1.2，6.1Hz，2-H)、7.48(1H，dd，J＝2.1，6.1Hz，3-H)其中，1H-NMR的化學(xué)位移值是以CHCl3的化學(xué)位移值為7.26ppm表示的。
旋光度[α]D200°(c1.3、水)UVλmax 215nm(水)IR(KBr法)在3400、1715、1630、1115、1060、1025cm-1有吸收。
對(duì)離析的環(huán)戊烯酮進(jìn)行光學(xué)離析，可以得到(-)-4，5-二羥基-2-環(huán)戊烯-1-酮和(+)-4，5-二羥基-2-環(huán)戊烯-1-酮。當(dāng)然，用合成方法得到的環(huán)戊烯酮也可以光學(xué)離析。
例如，將環(huán)戊烯酮溶解在乙醇中，向該乙醇溶液中添加己烷/乙醇(94/6)，制備環(huán)戊烯酮溶液。例如使用Chiral Pack As(ダイセル化學(xué)工業(yè))柱，在柱溫40℃、流動(dòng)相己烷/乙醇(94/6)條件下對(duì)該試樣溶液進(jìn)行HPLC，可以將環(huán)戊烯酮光學(xué)離析。
離析的(-)-反式-4，5-二羥基-2-環(huán)戊烯-1-酮[以下簡(jiǎn)稱(chēng)(-)-環(huán)戊烯酮]的旋光度是[α]D20-105°(c0.30、乙醇)，(+)-反式-4，5-二羥基-2-環(huán)戊烯-1-酮[以下簡(jiǎn)稱(chēng)(+)-環(huán)戊烯酮]的旋光度是[α]D20-104°(c0.53、乙醇)。另外，旋光度是用上述DIP-370型旋光計(jì)(日本分光社制造)測(cè)定的。
隨后，按上面所述的方法，采用質(zhì)譜分析、核磁共振(NMR)對(duì)(-)-環(huán)戊烯酮和(+)-環(huán)戊烯酮分別進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析，測(cè)定UV吸收光譜和紅外吸收光譜。結(jié)果，這兩種旋光物顯示出與光學(xué)離析前的環(huán)戊烯酮相同的結(jié)果。
設(shè)經(jīng)過(guò)光學(xué)離析的(-)-環(huán)戊烯酮和(+)-環(huán)戊烯酮分別為對(duì)二甲氨基苯甲酰基衍生物，使用J-720型圓二色性分散計(jì)(日本分光社制造)，測(cè)定圓二色性光譜(CD)，將所得結(jié)果用于二苯甲酸酯手性規(guī)則[參見(jiàn)J.Am.Chem.Soc.、第91卷、第3989-3991頁(yè)(1969)]，確定其立體構(gòu)型。
圖14中示出(-)-環(huán)戊烯酮的對(duì)二甲氨基苯甲?；苌锏腃D和(-)-環(huán)戊烯酮的立體結(jié)構(gòu)。圖中，縱軸表示摩爾圓二色性，橫軸表示波長(zhǎng)(nm)。另外，上述立體結(jié)構(gòu)用[IV]式表示如下
圖15中示出(+)-環(huán)戊烯酮的對(duì)二甲氨基苯甲酰基衍生物的CD和(+)-環(huán)戊烯酮的立體結(jié)構(gòu)。圖中，縱軸表示摩爾圓二色性，橫軸表示波長(zhǎng)(nm)。另外，上述立體結(jié)構(gòu)用[V]式表示如下
如同圖14、15和[IV]式、[V]式所示，(-)-環(huán)戊烯酮是(-)-(4R，5S)-反式-4，5-二羥基-2-環(huán)戊烯-1-酮，(+)-環(huán)戊烯酮是(+)-(4S，5R)-反式-4，5-二羥基-2-環(huán)戊烯-1-酮。
以上使用的環(huán)戊烯酮或其旋光物可以用任一方法制造，可以用說(shuō)明書(shū)中所述的方法制造，也可以用化學(xué)合成方法合成，在本發(fā)明中也可以使用環(huán)戊烯酮的反式體、順式體、它們的混合物以及它們的旋光物。
將環(huán)戊烯酮和/或其旋光物與具有直鏈或支鏈烷基、直鏈或支鏈鏈烯基、芳基或芳酯族基的羧酸和/或其反應(yīng)性衍生物同時(shí)或順次反應(yīng)，在反應(yīng)液中生成本發(fā)明的由通式[II]表示的環(huán)戊烯酮衍生物或其旋光物。
具有烷基的羧酸可以使用具有直鏈或支鏈的烷基的羧酸，烷基鏈的鏈長(zhǎng)可以根據(jù)環(huán)戊烯酮衍生物的生物活性、溶解性等適當(dāng)選擇。
具有直鏈烷基的羧酸例如可以使用乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、己酸、庚酸、正辛酸、壬酸、正癸酸、十一烷酸、十二烷酸、十三烷酸、十四烷酸、十五烷酸、十六烷酸、十七烷酸、十八烷酸、十九烷酸、二十烷酸、二十二烷酸、二十四烷酸、二十六烷酸、三十烷酸等。
具有支鏈烷基的羧酸例如可以使用異丁酸、異戊酸、2-甲基丁酸、三甲基乙酸、4-甲基戊酸、1，2-二甲基戊酸等。
具有鏈烯基的羧酸可以使用具有直鏈或支鏈的鏈烯基的羧酸，鏈烯基的鏈長(zhǎng)、不飽和度以及不飽和鍵的位置可以根據(jù)環(huán)戊烯酮衍生物的生物活性、溶解性等適當(dāng)選擇。
具有直鏈鏈烯基的羧酸例如可以使用丙烯酸、乙烯基乙酸、丁烯酸、異丁烯酸、烯丙基乙酸、2-己烯酸、3-己烯酸、3-辛烯酸、4-癸烯酸、10-十一碳烯酸、9-十六碳烯酸、6-十八碳烯酸、反式9-十八碳烯酸、油酸、亞油酸、α-亞麻酸、γ-亞麻酸、桐酸、二十碳三烯酸、花生油烯酸、二十碳五烯酸、巴西烯酸、芥酸、二十二碳六烯酸、西門(mén)木烯酸、21-三十烯酸等。
具有支鏈鏈烯基的羧酸例如可以使用甲基丙烯酸、惕各酸、當(dāng)歸酸、α-乙基丁烯酸等。
具有芳基的羧酸例如可以使用苯甲酸、甲苯酸、氯苯甲酸、溴苯甲酸、硝基苯甲酸、苯二甲酸、間苯二甲酸、對(duì)苯二甲酸、水楊酸、乙酰水楊酸、乙酰水楊基水楊酸、氨基水楊酸、對(duì)羥基苯甲酸、氨基苯甲酸、甲氧基苯甲酸、乙酰胺基苯甲酸、香草酸、苔色酸、萘甲酸、吡啶二羧酸、黃尿烯酸、奎尼酸、犬尿烯酸等，可以根據(jù)生成的環(huán)戊烯酮衍生物的生物活性、溶解性等選擇所使用的具有芳基的羧酸。
具有芳脂族基的羧酸例如可以使用苯基乙酸、苯基丙酸、苯基乳酸、苯丙酮酸、肉桂酸、阿托酸、萘乙酸等，可以根據(jù)生成的環(huán)戊烯酮衍生物的生物活性、溶解性等選擇所使用的具有芳烷基的羧酸。
本發(fā)明中使用的羧酸的反應(yīng)性衍生物例如可以舉出?；u、酸酐、酸性酯、鹽等，可以根據(jù)要達(dá)到的目的制備所使用的羧酸的反應(yīng)性衍生物。
羧酸或其反應(yīng)性衍生物與環(huán)戊烯酮的反應(yīng)，可以按照環(huán)戊烯酮衍生物中的R3和R4相同的方式進(jìn)行，也可以按照R3與R4不同的方式進(jìn)行。即，可以使R3與R4不同的羧酸同時(shí)與環(huán)戊烯酮反應(yīng)，也可以使R3與R4不同的羧酸順次與環(huán)戊烯酮進(jìn)行反應(yīng)。此時(shí)，通過(guò)保護(hù)環(huán)戊烯酮中的一個(gè)羥基，可以高效率地制備R3與R4不同的環(huán)戊烯酮衍生物。
環(huán)戊烯酮或其旋光物與羧酸反應(yīng)生成的環(huán)戊烯酮衍生物或其旋光物具有很強(qiáng)的癌細(xì)胞增殖抑制活性，可以以該活性作為指標(biāo)從反應(yīng)液中提純、分離環(huán)戊烯酮或其旋光物。提純、分離的方法可以采用化學(xué)方法或物理方法等公知的純化方法，可以將凝膠過(guò)濾法、利用分子量分級(jí)薄膜的分級(jí)法、溶劑萃取法、分餾法、使用離子交換樹(shù)脂的各種色譜法等以往公知的純化方法組合使用，提純和離析反應(yīng)生成物中的環(huán)戊烯酮衍生物或其旋光物。
例如，將環(huán)戊烯酮或其旋光物、4-二甲氨基吡啶和羧酸溶解在二氯甲烷中，在冰冷卻下添加N，N-二環(huán)己基碳化二亞胺使之反應(yīng)，生成本發(fā)明的環(huán)戊烯酮衍生物。用硅膠柱色譜提純生成物，可以離析出目的物環(huán)戊烯酮衍生物。
另外，也可以使環(huán)戊烯酮或其旋光物與醋酸酐在無(wú)水吡啶中反應(yīng)，從反應(yīng)物中提純、分離出二乙酰環(huán)戊烯酮。
由本發(fā)明得到的環(huán)戊烯酮衍生物的旋光物，可以通過(guò)消旋混合物的機(jī)械分離進(jìn)行離析，優(yōu)先選用結(jié)晶法離析，作為非對(duì)映立體異構(gòu)物鹽或包合物結(jié)晶而離析，采用酶·微生物的動(dòng)力學(xué)離析，以及采用色譜進(jìn)行離析。
采用色譜進(jìn)行離析，可以使用氣相色譜、液相色譜或薄層色譜等，可以使用與它們相適應(yīng)的手性固定相。
采用液相色譜進(jìn)行光學(xué)離析，可以采用使用手性固定相的方法、使用手性洗提液的方法以及作為非對(duì)映立體異構(gòu)物的分離等方法。
手性固定相可以使用酰胺系固定相、尿素系固定相、配位基交換型固定相、多糖·多糖衍生物固定相、蛋白質(zhì)固定相、聚甲基丙烯酸酯固定相、聚甲基丙烯酰胺固定相等。
洗提液可以使用己烷系、醇系、水(緩沖液)系等，與上述固定相組合適當(dāng)使用。
本發(fā)明所得到的環(huán)戊烯酮衍生物或其旋光物的鹽，有些是可以用作藥物的鹽，可以采用公知的方法轉(zhuǎn)換。
本發(fā)明所得到的環(huán)戊烯酮衍生物或其旋光物或者它們的鹽，對(duì)于下列癌細(xì)胞具有細(xì)胞增殖抑制作用人前骨髓性白血病細(xì)胞HL-60、人的急性淋巴芽球性白血病細(xì)胞MOLT-3、肺癌細(xì)胞A-549、SV40形質(zhì)轉(zhuǎn)換肺細(xì)胞WI-38VA13、肝癌細(xì)胞Hep G2、結(jié)腸癌細(xì)胞HCT 116、人的結(jié)腸癌細(xì)胞SW480、人的結(jié)腸癌細(xì)胞WiDr、胃癌細(xì)胞AGS、骨髓瘤細(xì)胞等癌細(xì)胞，含有選自本發(fā)明的環(huán)戊烯酮衍生物或其旋光物或者它們的鹽的化合物作為有效成分的藥品，例如可以以選自本發(fā)明的環(huán)戊烯酮衍生物或其旋光物或者它們的鹽的化合物作為有效成分，將其與公知的藥用載體組合形成制劑，制成抗癌藥。本發(fā)明所得到的環(huán)戊烯酮衍生物或其旋光物或者它們的鹽的癌細(xì)胞增殖抑制作用對(duì)本發(fā)明沒(méi)有任何限制作用，例如，本發(fā)明還包含對(duì)于癌細(xì)胞的細(xì)胞凋亡誘發(fā)作用。
抗癌藥一般可以按下述方法制造，即，將選自環(huán)戊烯酮衍生物或其旋光物或者它們的鹽的化合物與藥學(xué)上允許的液體或固體的載體配合，必要時(shí)添加溶劑、分散劑、乳化劑、緩沖劑、穩(wěn)定劑、賦形劑、粘結(jié)劑、崩解劑、潤(rùn)滑劑等，制成片劑、顆粒劑、散劑、粉末劑、膠囊劑等固形制劑或通常液劑、懸浮劑、乳劑等溶液劑。另外，還可以制成干燥制品，在使用之前添加適當(dāng)?shù)妮d體，形成液狀。
藥用載體可以根據(jù)上述給藥方式和劑型加以選擇，對(duì)于經(jīng)口給藥的制劑來(lái)說(shuō)，例如可以使用淀粉、乳糖、白糖、甘露醇、羧甲基纖維素、玉米淀粉、無(wú)機(jī)鹽等。另外，在制備經(jīng)口給藥的制劑時(shí)，還可以配入粘結(jié)劑、崩解劑、表面活性劑、潤(rùn)滑劑、流動(dòng)性促進(jìn)劑、矯味劑、著色劑、香料等。
另一方面，對(duì)于非經(jīng)口給藥的制劑來(lái)說(shuō)，將本發(fā)明的有效成分即選自環(huán)戊烯酮衍生物或其旋光物或者它們的鹽的化合物溶解或懸浮于作為稀釋劑的注射用蒸餾水、生理食鹽水、葡萄糖水溶液、注射用植物油、芝麻油、花生油、大豆油、玉米油、丙二醇、聚乙二醇等中，必要時(shí)添加殺菌劑、穩(wěn)定劑、等張化劑、鎮(zhèn)痛劑等，制成制劑。
本發(fā)明的抗癌藥可以采用與制劑形態(tài)相應(yīng)的適當(dāng)給藥途徑給藥。給藥方法沒(méi)有特別的限制，可以?xún)?nèi)用、外用或注射。注射劑例如可以通過(guò)靜脈注射、肌肉注射、皮下注射、皮內(nèi)注射給藥，外用劑也包括栓劑等。
抗癌藥的給藥量可以根據(jù)制劑形式、給藥方法、使用目的以及患者的年齡、體重、癥狀等適當(dāng)設(shè)定，不是一成不變的，一般地說(shuō)，制劑中所含的、選自環(huán)戊烯酮衍生物或其旋光物或者它們的鹽的化合物的量為成人每日0.2μg～200mg/kg。當(dāng)然，給藥量根據(jù)各種條件而有所變化，有的時(shí)候比上述給藥量少，也有的時(shí)候比上述給藥量多。本發(fā)明的藥劑除了直接經(jīng)口給藥外，還可以添加到日常的任何食品飲料中攝入。
本發(fā)明所得到的環(huán)戊烯酮衍生物或其旋光物或者它們的鹽具有細(xì)胞凋亡誘發(fā)活性，可以從這些化合物中選擇至少一種化合物作為有效成分，制成細(xì)胞凋亡誘發(fā)劑。細(xì)胞凋亡誘發(fā)劑可以按照上述抗癌藥中所述的方法制成制劑，并按抗癌藥中所述的方法給藥。
細(xì)胞凋亡誘發(fā)劑的給藥量可以根據(jù)制劑形式、給藥方法、使用目的以及患者的年齡、體重、癥狀等適當(dāng)設(shè)定，不是一成不變的，一般地說(shuō)，制劑中所含的、選自環(huán)戊烯酮衍生物和/或其旋光物的量為成人每日0.1μg～100mg/kg。當(dāng)然，給藥量根據(jù)各種條件而有所變化，有的時(shí)候比上述給藥量少，也有的時(shí)候超過(guò)上述給藥量范圍。本發(fā)明的藥劑除了直接經(jīng)口給藥外，還可以添加到日常的任何食品飲料中攝入。
一般認(rèn)為，細(xì)胞凋亡作用與病理學(xué)上所說(shuō)的細(xì)胞死亡即壞死不同，是從一開(kāi)始就編入細(xì)胞本身的基因中的死亡。即，任何外部或內(nèi)部的因素都可能誘發(fā)編程細(xì)胞凋亡作用的基因活化，基于該基因而生物合成編程性細(xì)胞死亡基因蛋白質(zhì)，由于生成的編程性細(xì)胞死亡蛋白質(zhì)的作用使細(xì)胞本身分解，導(dǎo)致死亡。
本發(fā)明的細(xì)胞凋亡誘發(fā)劑可以在所希望的組織和細(xì)胞中誘發(fā)這種細(xì)胞凋亡作用，以自然的形式從生物體中排除不需要的細(xì)胞或病源細(xì)胞，因而是極其有用的。
本發(fā)明的細(xì)胞凋亡誘發(fā)劑可以在細(xì)胞凋亡作用誘發(fā)方法中使用。即，使用環(huán)戊烯酮衍生物或其旋光物或者它們的鹽作為有效成分，可以誘發(fā)細(xì)胞凋亡作用，該方法對(duì)于弄清細(xì)胞凋亡誘發(fā)基理以及篩選細(xì)胞凋亡誘發(fā)劑和細(xì)胞凋亡誘發(fā)抑制劑等十分有用。
本發(fā)明得到的環(huán)戊烯酮衍生物或其旋光物或者它們的鹽具有抗菌活性，可以從這些化合物中選擇至少一種化合物作為有效成分制成抗菌劑。抗菌劑可以按上述抗癌藥的方法制成制劑，采用與制劑形式相應(yīng)的適當(dāng)給藥途徑給藥。給藥方法沒(méi)有特別的限制，可以?xún)?nèi)用、外用或注射。注射劑例如可以通過(guò)靜脈注射、肌肉注射、皮下注射或皮內(nèi)注射等給藥，外用劑也包括栓劑等。
抗菌劑的給藥量可以根據(jù)制劑形式、給藥方法、使用目的以及患者的年齡、體重、癥狀等適當(dāng)設(shè)定，不是一成不變的，一般地說(shuō)，制劑中所含的、選自環(huán)戊烯酮衍生物或其旋光物或者它們的鹽的量為成人每日10μg～20mg/kg。當(dāng)然，給藥量根據(jù)各種條件而有所變化，有的時(shí)候比上述給藥量少，也有的時(shí)候超過(guò)上述給藥量范圍。本發(fā)明的藥劑除了直接經(jīng)口給藥外，還可以添加到日常的任何食品飲料中攝入。
本發(fā)明的抗菌劑也可以作為防腐劑，用來(lái)提高食品或飲料的保存性。另外，還可以用于將環(huán)戊烯酮衍生物或其旋光物或者它們的鹽添加到食品或飲料中，防止食品或飲料腐敗的方法中。
本發(fā)明的抗菌劑對(duì)于革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌和革蘭氏陰性細(xì)菌都有效。另外，本發(fā)明的抗菌劑對(duì)于齲齒病菌和牙周病菌也具有抗菌活性，可以制成含有本發(fā)明的抗菌劑的口腔內(nèi)用藥?？谇粌?nèi)用藥的形態(tài)可以是液體狀或膏狀等公知的形態(tài)?？谇粌?nèi)用藥的例子可以舉出牙膏。使用本發(fā)明的抗菌劑，還可以提供抗菌性化妝品。另外，使用本發(fā)明的抗菌劑還可以提供浴用劑。
本發(fā)明得到的環(huán)戊烯酮衍生物或其旋光物或者它們的鹽，可以由環(huán)戊烯酮和任意的羧酸或其反應(yīng)性衍生物高效率地制備。
含有本發(fā)明得到的環(huán)戊烯酮衍生物或其旋光物或者它們的鹽作為有效成分的食品或飲料的制造方法沒(méi)有特別的限制，可以采用烹飪、加工以及常用的食品或飲料的制造方法制造，只要制得的食品或飲料中含有有效量的選自具有生理作用的環(huán)戊烯酮衍生物或其旋光物或者它們的鹽的化合物即可。
本發(fā)明得到的環(huán)戊烯酮衍生物或其旋光物或者它們的鹽，將其以生理活性的有效量給藥時(shí)沒(méi)有發(fā)現(xiàn)毒性。例如，在經(jīng)口給藥的場(chǎng)合，以300mg/kg的劑量將二丙酰基環(huán)戊烯酮、二己酰基環(huán)戊烯酮、二-2-己烯?；h(huán)戊烯酮或其旋光物或者它們的鹽中的任一種給小鼠一次性經(jīng)口給藥時(shí)，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)死亡例。
本發(fā)明所得到的環(huán)戊烯酮衍生物或其旋光物或者它們的鹽可以簡(jiǎn)便地制造，由于具有各種生理作用，在醫(yī)藥、食品等領(lǐng)域中具有廣泛的應(yīng)用前景。
實(shí)施例下面通過(guò)實(shí)施例更具體地說(shuō)明本發(fā)明，但本發(fā)明不受這些實(shí)施例的限制。另外，實(shí)施例中的％表示重量％。
實(shí)施例1(1)將10g D-葡糖醛酸(シグマ公司制造G5269)溶解在1升的水中，在121℃下加熱4小時(shí)，然后減壓濃縮至10ml左右。向其中添加醋酸丁酯∶醋酸∶水＝3∶2∶2混合液的上層40ml，混合后離心分離，在減壓下將所得上清液濃縮至約10ml。
將上述提取液加到柱色譜用硅膠BW-300SP(2×28cm，富士シリシア化學(xué)社制造)上，以醋酸丁酯∶醋酸∶水＝3∶2∶2的上層作為洗提液，用空氣壓縮機(jī)加壓至0.2kg/cm2，以每分鐘5ml的流速進(jìn)行分離。按照每1級(jí)分10ml進(jìn)行分級(jí)分離，每1級(jí)分取一部分，用薄層色譜分析，從第61至80級(jí)分中含有高純度的環(huán)戊烯酮。將這些級(jí)分匯集到一起，減壓下濃縮，然后用40ml的氯仿萃取，在減壓下濃縮萃取液，得到100mg的環(huán)戊烯酮。
采用使用Palpack型S柱的正相HPLC分離該級(jí)分，用215nm的紫外線吸收進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果純度為98％。
將113.9mg上述環(huán)戊烯酮溶解在2.85ml乙醇中，再向該乙醇溶液中添加己烷/乙醇(94/6)3.85ml，制成17mg/ml的環(huán)戊烯酮溶液。用0.5μm的過(guò)濾器過(guò)濾該溶液，將其作為光學(xué)離析HPLC試樣溶液。
按以下條件對(duì)該試樣溶液進(jìn)行光學(xué)離析HPLC，分別收集前峰的(-)-環(huán)戊烯酮和后峰的(+)-環(huán)戊烯酮的級(jí)分，減壓干固，分別得到(-)-環(huán)戊烯酮43.2 mg和(+)-環(huán)戊烯酮43.0mg。
光學(xué)離析HPLC條件柱Chiral Pack AS(ダイセル化學(xué)工業(yè))2.0cm×25.0cm柱溫度40℃移動(dòng)相己烷/乙醇(94/6)流速14.0ml/分檢測(cè)UV210nm試樣注入量150μl(2.55mg)按上述條件再次進(jìn)行光學(xué)離析，以使所得到的(-)-環(huán)戊烯酮和(+)-環(huán)戊烯酮兩者總共含有約1％的對(duì)映體。結(jié)果，從前峰的(-)-環(huán)戊烯酮30.0mg中得到19.7mg不含對(duì)映體的(-)-環(huán)戊烯酮，從后峰的(+)-環(huán)戊烯酮37.4mg中得到27.7mg的不含對(duì)映體的(+)-環(huán)戊烯酮。另外，(-)-環(huán)戊烯酮和(+)-環(huán)戊烯酮的光學(xué)離析HPLC的溶出時(shí)間分別為33分鐘和40分鐘。
(2)在按實(shí)施例1-(1)所述方法得到的29.6mg環(huán)戊烯酮中添加1ml無(wú)水吡啶(295-26，ナカライテスク公司制造)和0.1ml醋酸酐(002-26，ナカライテスク公司制造)，在室溫下攪拌3小時(shí)。用氯仿萃取反應(yīng)液，得到36mg二乙?；h(huán)戊烯酮。
使用DX302質(zhì)譜分析儀(日本電子公司制造)對(duì)所得到的二乙?；h(huán)戊烯酮進(jìn)行質(zhì)譜分析。另外，將其溶解在CDCl3中，用NMR分析其結(jié)構(gòu)。核磁共振裝置使用JNM-A500(日本電子公司制造)。測(cè)定結(jié)果列在下面，其中，1H-NMR的化學(xué)位移值是以氯仿的化學(xué)位移值為7.24ppm表示。MSm/z 199(M+H)+1H-NMRδ2.12(3H，S，-OCOCH3)，2.16(3H，S，-OCOCH3)，5.16(1H，d，J＝3.0Hz，H-5)，5.89(1H，m，H-4)，6.40(1H，d-d，J＝1.5，6.5Hz，H-2)，7.43(1H，d-d，J＝2.5，6.5Hz，H-3)圖1中示出二乙?；h(huán)戊烯酮的質(zhì)譜，圖2中示出其1H-NMR譜。圖1中，橫軸表示m/z值，縱軸表示相對(duì)強(qiáng)度(％)。另外，在圖2中，橫軸表示化學(xué)位移值(ppm)，縱軸表示信號(hào)的強(qiáng)度。
(3)使用按實(shí)施例1-(1)中所述的方法得到15.9mg(-)-環(huán)戊烯酮，進(jìn)行與實(shí)施例1-(2)同樣的反應(yīng)，得到15.1mg二乙酰基(-)-環(huán)戊烯酮。與上述實(shí)施例1-(2)同樣利用質(zhì)譜分析和核磁共振進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析，得到與上述實(shí)施例1-(2)同樣的結(jié)果。
(4)使用按實(shí)施例1-(1)中所述的方法得到16.7mg(+)-環(huán)戊烯酮，進(jìn)行與實(shí)施例1-(2)同樣的反應(yīng)，得到18.8mg二乙?；?+)-環(huán)戊烯酮。與上述實(shí)施例1-(2)同樣利用質(zhì)譜分析和核磁共振進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析，得到與上述實(shí)施例1-(2)同樣的結(jié)果。
(5)13.8mg環(huán)戊烯酮中添加44.3mg苯甲酸(041-20，ナカラィテスク公司制造)7.5mg二甲氨基吡啶(DMAP東京化成工業(yè)公司制造D1450)和51.0mgN，N’-二環(huán)己基碳二亞胺(DCCペフチド研究所制造1001)，添加5ml氯仿，在冰冷卻下攪拌4小時(shí)。過(guò)濾反應(yīng)液，將所得濾液加到硅膠柱(75ml)上，用氯仿溶出，得到含有二苯甲酰基環(huán)戊烯酮的級(jí)分。減壓除去該級(jí)分中的溶劑，將殘?jiān)芙庠谝掖贾?，然后采用以氯?甲醇＝99∶1的混合液作為展開(kāi)溶劑的硅膠薄層色譜進(jìn)行分離。從薄層中除去Rf＝0.45-0.55部分的硅膠，用氯仿萃取，得到二苯甲?；h(huán)戊烯酮3.2mg。
與上述實(shí)施例1-(2)同樣，采用質(zhì)譜分析和核磁共振對(duì)所得到的二苯甲酰基環(huán)戊烯酮進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析，結(jié)果給出如下。
MS m/z 323(M+H)+1H-NMRδ5.56(1H，d，J＝3.0Hz，H-5)，6.30(1H，m，H-4)，6.54(1H，d-d，J＝T.5，6.5Hz，H-2)，7.44(4H，m，芳香環(huán)的H)，7.58(2H，m，芳香環(huán)的H)，7.64(1H，d-d，J＝2.0，6.5Hz，H-3)，8.06(4H，m，芳香環(huán)的圖3中示出二苯甲?；h(huán)戊烯酮的質(zhì)譜，圖4中示出其1H-NMR譜。圖3中，橫軸表示m/z值，縱軸表示相對(duì)強(qiáng)度(％)。另外，在圖4中，橫軸表示化學(xué)位移值(ppm)，縱軸表示信號(hào)的強(qiáng)度。
(6)使用22.1mg(-)-環(huán)戊烯酮、71.9mg苯甲酸、12.1mg DMAP和80.3mg DCC，進(jìn)行與上述實(shí)施例1-(5)同樣的反應(yīng)，得到19.2mg二苯甲?；?-)-環(huán)戊烯酮。與上述實(shí)施例1-(5)同樣采用質(zhì)譜分析和核磁共振進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析，得到與上述實(shí)施例1-(5)同樣的結(jié)果。
(7)使用20.4mg(+)-環(huán)戊烯酮、65.6mg苯甲酸、11.0mg DMAP和74.3mg DCC，進(jìn)行與上述實(shí)施例1-(5)同樣的反應(yīng)，得到21.4mg二苯甲?；?+)-環(huán)戊烯酮。與上述實(shí)施例1-(5)同樣采用質(zhì)譜分析和核磁共振進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析，得到與上述實(shí)施例1-(5)同樣的結(jié)果。
(8)將30mg環(huán)戊烯酮、10mg DMAP和153mg己酸(ナカライテスク公司制造070-26)溶解在5.9ml的二氯甲烷中，在冰冷卻下添加108mg DCC。反應(yīng)1小時(shí)后，用以氯仿作為展開(kāi)溶劑的硅膠薄層色譜分離、提純反應(yīng)液。從薄層中除去Rf＝0.3-0.4部分的硅膠，用氯仿萃取，得到二己?；h(huán)戊烯酮11mg。
將所得到的二己?；h(huán)戊烯酮溶解在CDCl3，用核磁共振法(NMR)確認(rèn)。核磁共振裝置使用JNM-EX270 FT NMR系統(tǒng)(日本電子公司制造)。另外，1H-NMR的化學(xué)位移值是以四甲基硅烷的化學(xué)位移值為0ppm表示的。
結(jié)果給出如下。1H-NMRδ7.44(1H，dd，J2-3＝6.27Hz，J3-4＝1.98Hz，H-3)，6.42(1H，dd，J2-3＝6.27Hz，J3-4＝1.32Hz，H-2)，5.91(1H，m，H-4)，5.16(1H，d，J4-5＝2.97Hz，H-5)，2.42(2H，t，J＝7.26Hz)，2.38(2H，t，J＝7.76Hz)，1.65(4H，m)，1.26(8H，m)，0.88(6H，t)圖5中示出二己?；h(huán)戊烯酮的1H-NMR譜。在圖5中，橫軸表示化學(xué)位移值(ppm)，縱橫表示信號(hào)的強(qiáng)度。
(9)將30mg環(huán)戊烯酮、10mg DMAP和301mg肉豆蔻酸(東京化學(xué)工業(yè)公司制造M0476)溶解在5.9ml的二氯甲烷中，在冰冷卻下添加108mg DCC。反應(yīng)1小時(shí)后，用以氯仿作為展開(kāi)溶劑的硅膠薄層色譜分離反應(yīng)液。從薄層中除去Rf＝0.45-0.55部分的硅膠，用氯仿萃取，得到二肉豆蔻?；h(huán)戊烯酮53mg。
與實(shí)施例1-(8)同樣，利用核磁共振對(duì)秘得到的二肉豆蔻基環(huán)戊烯酮進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析，結(jié)果給出如下。1H-NMRδ7.45(1H，dd，J2-3＝5.94Hz，J3-4＝2.31Hz，H-3)，6.42(1H，dd，J2-3＝5.31Hz，J3-4＝1.32Hz，H-2)，5.92(1H，m，H-4)，5.16(1H，d，J4-5＝2.64Hz，H-5)，2.42(2H，t，J＝7.26Hz)，2.38(2H，t，J＝7.91Hz)，1.63(4H，m)，1.26(32H，m)，0.88(6H，t)
圖6中示出二肉豆蔻?；h(huán)戊烯酮的1H-NMR譜。在圖6中，橫軸表示化學(xué)位移值(ppm)，縱橫表示信號(hào)的強(qiáng)度。
(10)將30mg環(huán)戊烯酮、10mgDMAP和190mg辛酸(ナカライテスク公司制造071-11)溶解在5.9ml的二氯甲烷中，在冰冷卻下添加108mg DCC。反應(yīng)1小時(shí)后，用以氯仿作為展開(kāi)溶劑的硅膠薄層色譜分離反應(yīng)液。從薄層中除去Rf＝0.25-0.35部分的硅膠，用氯仿萃取，得到二辛?；h(huán)戊烯酮27mg。
與實(shí)施例1-(8)同樣，利用核磁共振對(duì)所得到的二辛酰基環(huán)戊烯酮進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析，結(jié)果給出如下。1H-NMRδ7.44(1H，dd，J2-3＝6.1Hz，J3-4＝2.16Hz，H-3)，6.41(1H，dd，J2-3＝6.1Hz，J3-4＝1.48Hz，H-2)，5.92(1H，m，H-4)，5.16(1H-，d，J4-5＝2.97Hz，H-5)，2.42(2H，t，J＝7.59Hz)，2.38(2H，t，J＝7.91Hz)，1.65(4H，m)，1.29(16H，m)，0.88(6H，t)圖7中示出二辛?；h(huán)戊烯酮的1H-NMR譜。在圖7中，橫軸表示化學(xué)位移值(ppm)，縱橫表示信號(hào)的強(qiáng)度。
(11)將30mg環(huán)戊烯酮、10mg DMAP和190mg辛烯酸(東京化成工業(yè)公司制造00070)溶解在5.9ml的二氯甲烷中，在冰冷卻下添加108mgDCC。反應(yīng)1小時(shí)后，用以氯仿作為展開(kāi)溶劑的硅膠薄層色譜分離反應(yīng)液。從薄層中除去Rf＝0.25-0.35部分的硅膠，用氯仿萃取，得到二-3-辛酰基環(huán)戊烯酮25mg。
與實(shí)施例1-(8)同樣，利用核磁共振對(duì)所得到的二-3-辛烯?；h(huán)戊烯酮進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析，結(jié)果給出如下。1H-NMRδ7.44(1H，dd，J2-3＝6.27Hz，J3-4＝2.32Hz，H-3)，6.42(1H，dd，J2-3＝6.27Hz，J3-4＝1.49Hz.H-2)，5.91(1H，m，H-4)，5.55(4H，m)，5.16(1H，d，J4-5＝2.97Hz，H-5)，3.12(4H，dd，J＝12.85Hz，J＝6.59Hz)，2.04(4H，m)，1.33(8H，m)，0.89(6H，t)圖8中示出二-3-辛烯?；h(huán)戊烯酮的1H-NMR譜。在圖8中，橫軸表示化學(xué)位移值(ppm)，縱橫表示信號(hào)的強(qiáng)度。
(12)將30mg環(huán)戊烯酮、10mgDMAP和115mg正丁酸酸(東京化成工業(yè)公司制造B0754)溶解在5.9ml的二氯甲烷中，在冰冷卻下添加108mg DCC。反應(yīng)1小時(shí)后，用以氯仿作為展開(kāi)溶劑的硅膠薄層色譜分離反應(yīng)液。從薄層中除去Rf＝0.20-0.30部分的硅膠，用氯仿萃取，得到二丁?；h(huán)戊烯酮16mg。
與實(shí)施例1-(8)同樣，利用核磁共振對(duì)所得到的二丁烯酰基環(huán)戊烯酮進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析，結(jié)果給出如下。1H-NMRδ7.45(1H，dd，J2-3＝6.27Hz，J3-4＝2.13Hz，H-3)，6.42(1H，dd，J2-3＝6.27Hz，J3-4＝1.65Hz，H-2)，5.91(1H，m，H-4)，5.16(1H，d，J4-5＝2.64Hz，H-5)圖9中示出二丁烯?；h(huán)戊烯酮的1H-NMR譜。在圖9中，橫軸表示化學(xué)位移值(ppm)，縱橫表示信號(hào)的強(qiáng)度。
(13)將30mg環(huán)戊烯酮、10mgDMAP和226mg正癸酸酸(東京化成工業(yè)公司制造D0017)溶解在5.9ml的二氯甲烷中，在冰冷卻下添加108mg DCC。反應(yīng)1小時(shí)后，用以氯仿作為展開(kāi)溶劑的硅膠薄層色譜分離反應(yīng)液。從薄層中除去Rf＝0.35-0.45部分的硅膠，用氯仿萃取，得到二癸?；h(huán)戊烯酮35mg。
與實(shí)施例1-(8)同樣，利用核磁共振對(duì)所得到的二癸酰基環(huán)戊烯酮進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析，結(jié)果給出如下。1H-NMRδ7.44(1H，dd，J2-3＝6.27Hz，J3-4＝1.97Hz，H-3)，6.42(1H，dd，J2-3＝6.27Hz，J3-4＝1.3Hz，H-2)，5.91(1H，m，H-4)，5.15(1H，d，J4-5＝2.97Hz，H-5)，2.42(2H，t，J＝7.24Hz)，2.38(2H，t，J＝7.91Hz)，1.65(4H，m)，1.26(24H，m)，0.88(6H，t)圖10中示出二癸酰基環(huán)戊烯酮的1H-NMR譜。在圖10中，橫軸表示化學(xué)位移值(ppm)，縱橫表示信號(hào)的強(qiáng)度。
(14)將30mg環(huán)戊烯酮、16mgDMAP、66mg三乙胺(東京化成工業(yè)公司制造T0424)和122mg正戊酸酐(東京化成工業(yè)公司制造V0006)溶解在5.9ml的二氯甲烷中，在冰冷卻下反應(yīng)1小時(shí)后，使用以氯仿∶甲醇＝200∶1作為展開(kāi)溶劑的硅膠薄層色譜展開(kāi)該反應(yīng)液，從薄層中除去Rf＝0.7-0.8部分的硅膠，用氯仿萃取，得到二戊?；h(huán)戊烯酮39mg。
與實(shí)施例1-(8)同樣，利用核磁共振對(duì)所得到的二戊酰基環(huán)戊烯酮進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析，結(jié)果給出如下。1H-NMRδ7.45(1H，dd，J2-3＝6.11Hz，J3-4＝1.66Hz，H-3)、6.42(1H，dd，J2-3＝6.11Hz，J3-4＝1.66Hz，H-2)、5.91(1H，m，H-4)、5.16(1H，d，J4-5＝2.97Hz，H-5)、2.43(2H，dd，J＝7.59，7.59Hz)、2.39(2H，dd，J＝7.59，7.59Hz)、1.65(4H，m)、1.38(4H，m)、0.93(6H，dd，J＝7.26，7.26Hz)圖11中示出二戊?；h(huán)戊烯酮的1H-NMR譜。在圖11中，橫軸表示化學(xué)位移值(ppm)，縱橫表示信號(hào)的強(qiáng)度。
(15)將30mg環(huán)戊烯酮、16m DMAP、66mg三乙胺和86mg丙酸酐(東京化成工業(yè)公司制造P0513)溶解在5.9ml的二氯甲烷中，在冰冷卻下反應(yīng)1小時(shí)，使用以氯仿∶甲醇＝200∶1作為展開(kāi)溶劑的硅膠薄層色譜展開(kāi)該反應(yīng)液，從薄層中除去Rf＝0.5-0.6部分的硅膠，用氯仿萃取，得到二丙酰基環(huán)戊烯酮31mg。
與實(shí)施例1-(8)同樣，利用核磁共振對(duì)所得到的二丙?；h(huán)戊烯酮進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析，結(jié)果給出如下。1H-NMRδ7.45(1H，dd，J2-3＝6.27Hz，J3-4＝2.15Hz，H-3)、6.42(1H，dd，J2-3＝6.27Hz，J3-4＝1.49Hz，H-2)、5.91(1H，m，H-4)、5.16(1H，d，J4-5＝2.97Hz，H-5)、2.46(2H，dd，J＝15.01，7.59Hz)、2.42(2H，dd，J＝15.01，7.59Hz)、1.18(6H-，dd，J＝7.59，7.59Hz)圖12中示出二丙?；h(huán)戊烯酮的1H-NMR譜。在圖12中，橫軸表示化學(xué)位移值(ppm)，縱橫表示信號(hào)的強(qiáng)度。
(16)將2g環(huán)戊烯酮、733mg DMAP、4.1ml反式-2-己烯酸(東京化成工業(yè)公司制造H0383)和5.57g DCC溶解在200ml的二氯甲烷中，室溫下反應(yīng)2小時(shí)。使用以己烷∶乙酸乙酯＝8∶1作為溶劑的硅膠柱色譜分離該反應(yīng)液，得到在硅膠薄色譜上顯示單一斑點(diǎn)的級(jí)分。減壓濃縮該級(jí)分，得到油狀的二-2-己烯?；h(huán)戊烯酮約900mg。
與實(shí)施例1-(8)同樣，利用核磁共振對(duì)所得到的二-2-己烯酰基環(huán)戊烯酮進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析，結(jié)果給出如下。1H-NMRδ0.92(6H，m，11-H+11’-H)、1.48(4H，m，10-H+10’-H)、2.18(4H，m，9-H，9’-H)、5.22(1H，d，J＝3.0Hz，5-H)、5.85(2H，m，7-H+7’-H)、5.98(1H，m，4-H)、6.41(1H，dd，J＝1.0，6.0Hz，2-H)、7.04(2H，m，8-H+8’-H)、7.47(1Hdd，J＝2.0，6.0Hz，3-H)另外，將在環(huán)戊烯酮的5位上鍵合的2-己烯酰基的碳原子規(guī)定為從羰基起順序?yàn)?位～11位，將在環(huán)戊烯酮的4位上鍵合的2-己烯酰基的碳原子規(guī)定為從羰基起順序?yàn)?’位～11’位。
圖13中示出二-2-己烯?；h(huán)戊烯酮的1H-NMR譜。在圖13中，橫軸表示化學(xué)位移值(ppm)，縱橫表示信號(hào)的強(qiáng)度。
實(shí)施例2將二乙酰基環(huán)戊烯酮、二乙?；?-)-環(huán)戊烯酮、二乙?；?+)-環(huán)戊烯酮、二苯甲?；h(huán)戊烯酮、二苯甲?；?-)-環(huán)戊烯酮、二苯甲酰基(+)-環(huán)戊烯酮、二己酰基環(huán)戊烯酮、二肉豆蔻?；h(huán)戊烯酮、二辛?；h(huán)戊烯酮、二-3-辛烯?；h(huán)戊烯酮、二辛?；h(huán)戊烯酮、辛烯酰基環(huán)戊烯酮、二丁?；h(huán)戊烯酮、二癸?；h(huán)戊烯酮、二戊?；h(huán)戊烯酮、二丙酰基環(huán)戊烯酮和二-2-己烯?；h(huán)戊烯酮各自和1mM乙醇溶液用70％乙醇水溶液稀釋。
將各稀釋液5μl裝入96孔微量滴定板的加樣孔中，風(fēng)干后，在各加樣孔中添加含有5000各HL-60細(xì)胞(ATCC CCL-240)的含10％胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基100μl，在5％二氧化碳存在下37℃培養(yǎng)48小時(shí)。用光學(xué)顯微鏡觀察細(xì)胞的形態(tài)，添加5mg/ml的3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四唑鎓溴化物(MTT)磷酸緩沖食鹽水溶液10μl，繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)，然后用顯微鏡觀察細(xì)胞的發(fā)育狀況。另外，添加含有0.04N HCl的2-丙醇100μl，充分?jǐn)嚢?，測(cè)定590nm的吸光度，用以作為細(xì)胞增殖度。以觀察不到活細(xì)胞的、加樣孔的培養(yǎng)基中所含有的最小的環(huán)戊烯酮衍生物濃度作為細(xì)胞增殖抑制濃度。
結(jié)果示于表1中。
表1
在各細(xì)胞增殖抑制濃度下，細(xì)胞中形成細(xì)胞凋亡小體。另外，這些化合物的旋光物也顯示出同樣的癌細(xì)胞增殖抑制活性和細(xì)胞凋亡誘發(fā)作用。
實(shí)施例3將Staphylococcus aureus 3A(NCTC 8319、被檢驗(yàn)菌①)、Bacillus subtilis IFO3021(被檢驗(yàn)菌②)和Pseu DOMO NAS aeruginosa IFO3081(被檢驗(yàn)菌③)用敏感性肉湯培養(yǎng)基(ニッスイ公司制造)培養(yǎng)1夜(種培養(yǎng))。測(cè)定600nm的吸光度，根據(jù)預(yù)先對(duì)各菌株制成的、表示活菌數(shù)與600nm的吸光度關(guān)系的校正曲線計(jì)算出活菌數(shù)。用新鮮的敏感性肉湯培養(yǎng)基將培養(yǎng)液稀釋成1×106個(gè)/ml，在96孔微量滴定板的各孔中分別注入180μl。在各孔中分別加入20μl實(shí)施例1-(8)得到的二己?；h(huán)戊烯酮的2000μg/ml、1000μg/ml、500μg/ml、250μg/ml、125μg/ml、62.5μg/ml水溶液或水，在37℃下靜置培養(yǎng)一夜(正式培養(yǎng))。另外，將種培養(yǎng)液的一部分用滅菌水稀釋?zhuān)坎荚诿舾行匀鉁傊桨迮囵B(yǎng)基上，在37℃下培養(yǎng)一夜后，計(jì)算菌落數(shù)，測(cè)定實(shí)際的活菌數(shù)。
將正式培養(yǎng)后各加樣孔中的培養(yǎng)液用滅菌水稀釋?zhuān)坎荚诿舾行詢(xún)?nèi)湯瓊脂平板培養(yǎng)基上，在37℃下培養(yǎng)一夜后，計(jì)算菌落數(shù)，測(cè)定實(shí)際的活菌數(shù)。
與添加水的加樣孔進(jìn)行比較，以活菌數(shù)達(dá)到最少的最小濃度作為增殖抑制濃度，以活菌數(shù)比正式培養(yǎng)開(kāi)始時(shí)減少的最小濃度作為殺菌濃度。結(jié)果示于表2中。
表2中的數(shù)值是二己?；h(huán)戊烯酮對(duì)于被檢驗(yàn)菌①-③顯示出增殖抑制作用和殺菌作用的培養(yǎng)液濃度，單位是μg/ml。
表2
由以上所述可以看出，二己?；h(huán)戊烯酮具有很強(qiáng)的抗菌活性，另外，實(shí)施例1中制備的其它化合物以及它們的旋光物也顯示出與二己酰基環(huán)戊烯酮同樣的抗菌活性。
實(shí)施例4注射劑
(1)在生理食鹽水(與上述相同)中添加1％濃度的二乙酰基環(huán)戊烯酮或二己?；h(huán)戊烯酮，制成注射劑。
(2)在生理食鹽水(與上述相同)中分別以0.5％和0.1％的濃度添加二苯甲酰基環(huán)戊烯酮或者二丁酰基環(huán)戊烯酮和甘草酸，制成注射劑。
實(shí)施例5片劑(1)制備含有100mg二苯甲?；h(huán)戊烯酮和適量微結(jié)晶性纖維素的片劑，包上糖衣，制成片劑。
(2)制備含有0.1mg二乙酰基(-)-環(huán)戊烯酮、10mg甘草酸二鉀和適量微結(jié)晶性纖維素的片劑，包上糖衣，制成片劑。
發(fā)明的效果本發(fā)明提供了具有抗癌作用、癌細(xì)胞增殖抑制活性、細(xì)胞凋亡誘發(fā)作用和抗菌作用等生理活性的環(huán)戊烯酮衍生物或其旋光物或者它們的鹽以及它們的制造方法。使用本發(fā)明得到的化合物作為有效成分的藥物可以維持生物體的正常狀態(tài)，是非常有用的藥品。
權(quán)利要求
1.由下列通式[I]表示的環(huán)戊烯酮衍生物或其旋光物或者它們的鹽，
式中，R1和R2是相同或不同的直鏈或支鏈烷基、直鏈或支鏈鏈烯基、芳基或芳脂族基，但不包括R1＝R2＝-CH3的情況。
2.藥物，其特征是，含有選自權(quán)利要求1所述的環(huán)戊烯酮衍生物或其旋光物或者它們的鹽中的至少一種化合物作為有效成分。
3.權(quán)利要求2所述的藥物，其中，所述的藥物是抗癌藥。
4.權(quán)利要求2所述的藥物，其中，所述的藥物是細(xì)胞凋亡誘發(fā)劑。
5.權(quán)利要求2所述的藥物，其中，所述的藥物是抗菌劑。
6.由通式[II]表示的環(huán)戊烯酮衍生物的制造方法，其特征是，使由下列[III]式表示的4，5-二羥基-2-環(huán)戊烯-1-酮和/或其旋光物與相當(dāng)于由下列通式[II]表示的環(huán)戊烯酮衍生物的R3和R4的羧酸和/或其反應(yīng)性衍生物同時(shí)或順次反應(yīng)，
式中，R3和R4是相同或不同的直鏈或支鏈烷基、直鏈或支鏈鏈烯基、芳基或芳脂族基。
7.藥物，其特征是，含有選自用權(quán)利要求6所述方法得到的環(huán)戊烯酮衍生物或其旋光物或者它們的鹽中的至少一種化合物作為有效成分。
8.權(quán)利要求7所述的藥物，其中，所述的藥物是抗癌藥。
9.權(quán)利要求7所述的藥物，其中，所述的藥物是細(xì)胞凋亡誘發(fā)劑。
10.權(quán)利要求7所述的藥物，其中，所述的藥物是抗菌劑。
全文摘要
5－(R
文檔編號(hào)C07C69/013GK1247528SQ98802459
公開(kāi)日2000年3月15日 申請(qǐng)日期1998年2月26日 優(yōu)先權(quán)日1997年3月11日
發(fā)明者小山信人, 豬飼勝重, 小林英二, 加藤郁之進(jìn) 申請(qǐng)人:寶酒造株式會(huì)社