專利名稱：一種用于組織細(xì)胞基因組dna的核酸吸附快速分離方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域中組織細(xì)胞基因組DNA分離方法，具體涉及ー種用于組織細(xì)胞基因組DNA分離試劑及核酸吸附離心套管，采用該核酸吸附分離方法，能快速分離出組織細(xì)胞基因組DNA，分離出的DNA產(chǎn)量和純度高，無(wú)蛋白質(zhì)及RNA污染。
背景技術(shù)：
目前，國(guó)內(nèi)外提取組織細(xì)胞中基因組DNA，利用蛋白酶消化后采用有機(jī)溶劑抽提的
方法。該方法實(shí)驗(yàn)周期長(zhǎng)、操作繁瑣，提取的基因組DNA純度和產(chǎn)量不高，常含有蛋白質(zhì)和RNA的污染，直接影響下游實(shí)驗(yàn)工作。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)上實(shí)驗(yàn)方法存在的缺陷或不足，本發(fā)明的目的在于，提供ー種用于組織細(xì)胞基因組DNA的核酸快速分離方法，該方法能快速分離組織細(xì)胞中基因組DNA，其分離的DNA純度和產(chǎn)量高、無(wú)蛋白質(zhì)及RNA污染。為了實(shí)現(xiàn)上述任務(wù)，本發(fā)明采用如下的技術(shù)解決方案ー種用于組織細(xì)胞基因組DNA的核酸快速分離方法，其特征在于，該方法采用核酸吸附離心套管，用DNA提取試劑從勻漿后的組織或消化后的細(xì)胞中快速分離DNA，所述的DNA提取試劑由懸浮溶液、離解溶液、清除溶液、洗滌溶液、分離溶液組成，具體操作過(guò)程是收集經(jīng)勻漿后的組織或消化后的細(xì)胞，加懸浮溶液懸浮，然后用離解溶液將基因組DNA從組織或細(xì)胞中離解出來(lái)，通過(guò)核酸吸附管中吸附層的吸附，用清除溶液清除蛋白質(zhì)及其他雜質(zhì)，再用洗滌溶液清洗，最后用分離溶液使DNA與核酸吸附層脫離，從而獲得超純的DNA ；所述的DNA提取試劑各組分及物質(zhì)濃度(摩爾/升)組成按終濃度體積為懸浮溶液0.01-0. 2mol/L C4H11NO3, 0. 001-0. 5mol/L EDTA，0. 0001-0. 9mol/LC15H28NaNO3,余量為去離子水；離解溶液0. 5-1OmoI/L胍鹽，余量為去離子水；清除溶液0. l-10mol/L胍鹽，0. 01_4mol/L C4H11NO3,余量為こ醇和去離子水的混合溶液(2:1，v/v)；洗滌溶液0. 01-8mol/L NaCl, 0. 001-3mol/L C4H11NO3，余量為こ醇和去離子水的混合溶液(2:1，v/v);分離溶液0.01-10mol/L EDTA,0. 001-0. 6mol/L C4H11NO3,余量為去離子水。所述核酸吸附離心套管包括內(nèi)層吸附管和外層收集管，其中，內(nèi)層吸附管中含吸附介質(zhì)層，外層套管為液體收集管，使用時(shí)將內(nèi)層吸附管插入到外層收集管中。本發(fā)明的用于組織細(xì)胞基因組DNA的核酸快速分離方法，操作簡(jiǎn)便，耗時(shí)短，提取的基因組DNA純度高，無(wú)蛋白質(zhì)及RNA污染。顯示其較傳統(tǒng)提取血液DNA方法的優(yōu)勢(shì)，更體現(xiàn)出具有普及臨床對(duì)疾病診斷和研究的應(yīng)用價(jià)值。


圖I是實(shí)驗(yàn)流程圖下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)發(fā)明進(jìn)ー步詳細(xì)說(shuō)明。
具體實(shí)施例方式按照本發(fā)明的技術(shù)方案，本發(fā)明的用于組織細(xì)胞基因組DNA的核酸快速分離方法，采用核酸提取試劑和核酸吸附離心套管。其中，核酸提取試劑包含懸浮溶液，離解溶液，清除溶液，洗滌溶液和分離溶液。所述的核酸提取試劑中，離解溶液的作用是使基因組DNA從組織或細(xì)胞中離解出來(lái)，通過(guò)核酸吸附管中吸附層的吸附，用清除溶液清除蛋白質(zhì)及其他雜質(zhì)，再用洗滌溶液清洗，最后用分離溶液使DNA與核酸吸附層脫離,從而獲得超純的DNA。DNA提取試劑各組分及物質(zhì)濃度(摩爾/升)組成按終濃度體積為懸浮溶液0.01-0. 2mol/L C4H11NO3, 0. 001-0. 5mol/L EDTA，0. 0001-0. 9mol/LC15H28NaNO3,余量為去離子水；離解溶液0. 5-1OmoI/L胍鹽，余量為去離子水；清除溶液0. l-10mol/L胍鹽，0. 01_4mol/L C4H11NO3,余量為こ醇和去離子水的混合溶液(こ醇去離子水=2:1，v/v)；洗滌溶液0. 01_8mol/L NaCl, 0. 001-3mol/L C4H11NO3,余量為こ醇和去離子水的混合溶液(こ醇去離子水=2:1，v/v)；分離溶液0.01-10mol/L EDTA，0. 001-0. 6mol/L C4H11NO3,余量為去離子水。核酸吸附材料為圓形紙片，核酸吸附離心套管包含內(nèi)層吸附管和外層收集管，當(dāng)每加一次試劑時(shí)需將內(nèi)層吸附管插入到外層收集管中，經(jīng)離心后棄去收集管中廢液，再將吸附管插回收集管中，當(dāng)最后加分離液時(shí)需將吸附管插入到ー干凈(新的)的收集管中，再經(jīng)過(guò)離心獲得純化的DNA。以下是發(fā)明人給出的具體實(shí)施例，操作流程參見(jiàn)圖I所示I、收集經(jīng)勻漿后的組織或消化后的細(xì)胞，加懸浮溶液懸浮，室溫放置5min。2、加離解溶液混勻，室溫放置5min。3、將液體吸入吸附管中，室溫放置2min，12000r離心30s，棄去收集管中的廢液，
將吸附管插回收集管中。4、加清除溶液，12000r離心30s，棄去收集管中的廢液，將吸附管插回收集管中。5、加洗滌溶液，12000r,離心30s，棄去收集管中的廢液。6、將吸附管插入ー干凈的收集管中，加分離溶液室溫放置2min后，12000r離心Imin，獲得超純的DNA。
權(quán)利要求
1.ー種用于組織細(xì)胞基因組DNA的核酸快速分離方法，其特征在于，該方法采用核酸吸附離心套管，用DNA提取試劑從勻漿后的組織或消化后的細(xì)胞中快速分離DNA，所述的DNA提取試劑由懸浮溶液、離解溶液、清除溶液、洗滌溶液、分離溶液組成，具體操作過(guò)程是 收集經(jīng)勻漿后的組織或消化后的細(xì)胞，加懸浮溶液懸浮，然后用離解溶液將基因組DNA從組織或細(xì)胞中離解出來(lái)，通過(guò)核酸吸附管中吸附層的吸附，用清除溶液清除蛋白質(zhì)及其他雜質(zhì)，再用洗滌溶液清洗，最后用分離溶液使DNA與核酸吸附層脫離，從而獲得超純的DNA ； 所述的DNA提取試劑各組分及物質(zhì)濃度(摩爾/升)組成按終濃度體積為懸浮溶液0. 01-0. 2mol/L C4H11NO3, 0. 001-0. 5mol/L EDTA，0. 0001-0. 9mol/LC15H28NaNO3,余量為去離子水； 離解溶液0. 5-lOmol/L胍鹽，余量為去離子水； 清除溶液0. 1-lOmol/L胍鹽，0.01-4mol/L C4H11NO3,余量為こ醇和去離子水的混合溶液； 洗滌溶液0.01-8mol/L NaCl,0. 001-3mol/L C4H11NO3，余量為こ醇和去離子水的混合溶液； 分離溶液0. 01-10mol/L EDTA，0. 001-0. 6mol/L C4H11NO3，余量為去離子水。
2.如權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述核酸吸附離心套管包括內(nèi)層吸附管和外層收集管，其中，內(nèi)層吸附管中含吸附介質(zhì)層，外層套管為液體收集管，使用時(shí)將內(nèi)層吸附管插入到外層收集管中。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種用于組織細(xì)胞基因組DNA的核酸快速分離方法，采用核酸吸附離心套管，用DNA提取試劑從勻漿后的組織或消化后的細(xì)胞中快速分離DNA，DNA提取試劑由懸浮溶液、離解溶液、清除溶液、洗滌溶液、分離溶液組成。本發(fā)明操作簡(jiǎn)便，耗時(shí)短，提取的基因組DNA純度高，無(wú)蛋白質(zhì)及RNA污染。顯示其較傳統(tǒng)提取基因組DNA方法的優(yōu)勢(shì)，更體現(xiàn)出具有普及臨床對(duì)疾病診斷和研究的應(yīng)用價(jià)值。
文檔編號(hào)C07H1/08GK102864139SQ20121033275
公開(kāi)日2013年1月9日 申請(qǐng)日期2012年9月11日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月11日
發(fā)明者饒國(guó)洲, 李昂, 茍建重, 石建峰, 魏紅 申請(qǐng)人:西安交通大學(xué)口腔醫(yī)院