專利名稱：基因組被修飾的細胞的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種基因組被修飾的細胞，與其親代細胞相比，具有降低的或去除了和糖鏈修飾相關的酶的活性，所述糖鏈中巖藻糖的I-位與N-糖苷連接糖鏈復合體還原末端的N-乙酰氨基葡萄糖的6-位通過α -鍵結(jié)合，以及采用該細胞產(chǎn)生抗體分子的過程。
背景技術：
在IgG類抗體的Fe區(qū)，存在兩個N-糖苷連接糖鏈結(jié)合位點。在血清IgG中，通常在糖鏈結(jié)合位點上結(jié)合了一個具有多個分支的復合物型糖鏈，其中加入的唾液酸或等 分N-乙酰氨基葡萄糖很少。已知就半乳糖加入至復合物型糖鏈非還原末端上和巖藻糖 添加至還原末端的N-乙酰氨基葡萄糖上有一定的多樣性[Biochemistry (生物化學),36, 130(1997)]。這種糖鏈結(jié)構(gòu)已認為可通過糖鏈基因來確定，也就是合成糖鏈的糖基轉(zhuǎn)移酶的基因和水解糖鏈的糖酵解酶的基因。N-糖苷連接糖鏈的合成如下所述。糖蛋白在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(以后稱為“ER”)腔中用糖鏈進行修飾。在N-糖苷連接糖鏈的生物合成步驟中，相對大的糖鏈被轉(zhuǎn)移至在ER腔中延伸的多肽鏈上。在轉(zhuǎn)變過程中，糖鏈首先連續(xù)加入到由大約20個α-異戊二烯單位組成的長鏈脂質(zhì)載體的磷酸基團上，稱為磷酸多萜醇(此后有時稱為"P-Dol")。即，N-乙酰氨基葡萄糖被轉(zhuǎn)移至磷酸多萜醇形成GIcNAc-P-P-DoI，然后轉(zhuǎn)移又一個GlcNAc，從而形成 GlcNAc-GlcNAc-P-P-DoI。下一步，5 個甘露糖(此后有時甘露糖被稱為"Man")被轉(zhuǎn)移，因此形成(Man)5-(GlcNAc)2-P-P-Dol,然后四個Man和三個葡萄糖(此后葡萄糖有時被稱為"Glc")被轉(zhuǎn)移。因此，形成了糖鏈前體，(Glc)3-(Man)9-(GlcNAc)2-P-P-D0I,稱為形成了核心寡糖。含有14個糖的糖鏈前體被作為一個團體轉(zhuǎn)移至內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔中含有天冬酰胺-X-絲氨酸或天冬酰胺-X-蘇氨酸序列的多肽上。在反應中，結(jié)合至核心寡糖上的磷酸多萜醇(P-P-Dol)被釋放，但通過焦磷酸酶的水解作用再次成為磷酸多萜醇，并再進行循環(huán)。在糖鏈與多肽結(jié)合后立即開始糖鏈的加工。即，三個Glc和一個或兩個Man在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上被刪除，已知α -I, 2_葡萄糖苷酶I，α -1，3_葡萄糖苷酶II和α-1,2-甘露糖苷酶與刪除作用有關。在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上被加工的糖蛋白被轉(zhuǎn)移至聞爾基體上，被進行不同的修飾。在聞爾基體的池(cis)部分,存在有關添加甘露糖憐酸的N-乙酰氨基葡萄糖磷酸轉(zhuǎn)移酶，N-乙酰氨基葡萄糖I-磷酸二酯α -N-乙酰氨基葡萄糖苷酶和α -甘露糖苷酶I，并將Man殘基還原至5。在高爾基體的中間部分，存在涉及在復合物型N-糖苷連接糖鏈的外側(cè)第一個GIcNAc的添加的N-乙酰氨基葡萄糖轉(zhuǎn)移酶I (GnTI)，涉及刪除兩個Man的α -甘露糖苷酶II，涉及從外側(cè)添加第二個GIcNAc的N-乙酰氨基葡萄糖轉(zhuǎn)移酶II (GnTII)和涉及巖藻糖添加至還原末端的N-乙酰氨基葡萄糖上的α 1，6_巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶。在高爾基體的trans部分,存在與半乳糖的添加有關的半乳糖轉(zhuǎn)移酶和與唾液酸如N-乙酰神經(jīng)氨酸的添加有關的唾液酸轉(zhuǎn)移酶或類似物。已知N-糖苷連接糖鏈是通過這些不同酶的作用形成的。就抗體中的糖鏈而言，據(jù)報道巖藻糖向抗體N-糖苷連接糖鏈還原末端N-乙酰氨基葡萄糖的添加修飾極大地改變了抗體的抗體依賴的細胞介導細胞毒活性(此后稱為“ADCC活性”)(W000/61739)。這個報道表明糖鏈的結(jié)構(gòu)在人抗體IgGl亞型的效應器功能中發(fā)揮重要作用。通常，考慮用作藥物的大多數(shù)人源化抗體通過使用遺傳重組技術制備，使用動物細胞，如中國倉鼠卵巢組織來源的CHO細胞作為宿主細胞產(chǎn)生。但如上所述，由于糖鏈結(jié)構(gòu)在抗體的效應器功能中發(fā)揮非常重要的作用，并在宿主細胞表達的糖蛋白的糖鏈結(jié)構(gòu)中觀察到一些差異，需要開發(fā)用于產(chǎn)生具有更高效應器功能的抗體的宿主細胞。也已經(jīng)進行了修飾通過導入有關糖鏈修飾的酶基因產(chǎn)生的糖蛋白的糖鏈結(jié)構(gòu)的嘗試，作為其例子，已有報道I)可能產(chǎn)生一種蛋白，其中大量唾液酸通過將大鼠β-半乳·糖苷-α -2，6-唾液酸轉(zhuǎn)移酶導入CHO細胞中而被添加至糖鏈的非還原末端上[J. Biol.Chem.(生物化學雜志)，261. 13848 (1989) ]，2)通過將人β -半乳糖苷_2_ α -巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶轉(zhuǎn)移至小鼠L細胞中，可能表達一種H抗原，其中巖藻糖(此后稱為“Fuc”)被添加至糖鏈的非還原末端上(Fuc a l-2Gal β I-) [Science (科學)，252. 1668 (1991)]，和 3)通過使用一種導入了 β_1，4-Ν-乙酰氨基葡萄糖轉(zhuǎn)移酶III(GnTIII)的CHO細胞產(chǎn)生一種抗體，從而可能產(chǎn)生一種N-糖苷連接糖鏈的等分N-乙酰氨基葡萄糖添加比例很高的抗體[Glycobiology(糖生物學)，泛，813(1995) :W0 99/54342]。當通過使用導入了 GnTIII 的CHO細胞表達抗體時，所述抗體顯示較親代細胞中表達的抗體高16倍的ADCC活性。然而，由于已有報道GnTIII或β-1，4-Ν-乙酰氨基葡萄糖轉(zhuǎn)移酶V (GnTV)的過度表達顯示出對CHO細胞的毒性，因此其不適合產(chǎn)生抗體藥物。對糖蛋白的生產(chǎn)例子也已有報道，其中產(chǎn)生的糖鏈結(jié)構(gòu)可通過使用一種突變體作為宿主細胞而改變，該突變體中有關糖鏈修飾的酶基因的活性被改變，作為其例子，已有報道使用CHO細胞的一種突變體克隆產(chǎn)生了具有高甘露糖型(high mannose type)糖鏈結(jié)構(gòu)的抗體，該突變體克隆中4-N-乙酰氨基葡萄糖轉(zhuǎn)移酶I (GnTI)被刪除[J. Immunol.(免疫學雜志)，160，3393 (1998)]。另外，已經(jīng)報道了一種抗體表達,其具有一種糖鏈結(jié)構(gòu),其中唾液酸未被添加至糖鏈非的還原末端側(cè)，和通過使用CMP-唾液酸轉(zhuǎn)運子或UDP-半乳糖轉(zhuǎn)運子缺陷克隆產(chǎn)生的未添加半乳糖的抗體表達例子，但沒有發(fā)現(xiàn)具有增強的效應器功能，適合用作藥物的抗體[J. Immunol.(免疫學雜志),160，3393 (1998)]。由于已經(jīng)獲得的突變體克隆是通過誘變劑處理導入隨機突變得到的克隆，它們不適合作為用于產(chǎn)生藥學制劑的克隆。因此，為了修飾制備的糖蛋白的糖鏈結(jié)構(gòu)，已經(jīng)進行了許多在宿主細胞中控制有關糖鏈修飾的酶活性的嘗試。但實際上，由于糖鏈修飾機制是多樣化和復雜的，不能說糖鏈的生理作用已被完全闡明，因此目前的情況是要反復試驗和錯誤。特別的是已經(jīng)逐漸地闡明了抗體的效應器功能受糖鏈結(jié)構(gòu)的影響很大，但能夠產(chǎn)生具有最合適的糖鏈結(jié)構(gòu)修飾的抗體分子的宿主細胞目前還沒有獲得。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及下列的⑴至(43)。(I) 一種修飾基因組以使與糖鏈修飾相關的酶的活性比其親代細胞更低或消失的細胞，所述糖鏈中巖藻糖的I位與N-糖苷連接的糖鏈復合體中還原端的N-乙酰氨基葡萄糖的6位通過α -鍵連接。(2)根據(jù)(I)的細胞，其中編碼糖鏈修飾相關酶的基因組基因被敲除，所述糖鏈中巖藻糖的I位與N-糖苷連接的糖鏈復合體中還原端的N-乙酰氨基葡萄糖的6位通過α-鍵連接。(3)根據(jù)(I)或(2)的細胞，編碼糖鏈修飾相關酶的基因組上的所有等位基因被敲除，所述糖鏈修飾中巖藻糖的I位與N-糖苷連接的糖鏈復合體中還原端的N-乙酰氨基葡萄糖的6位通過α -鍵連接。
(4)根據(jù)(I)至(3)任一項中的細胞，與糖鏈修飾相關的酶是α 1，6_巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶，所述糖鏈中巖藻糖的I位與N-糖苷連接的糖鏈復合體中還原端的N-乙酰氨基葡萄糖的6位通過α -鍵連接。(5)根據(jù)(4)的細胞，α 1，6-巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶是選自以下(a)至⑷的DNA編碼的蛋白質(zhì)(a)含有SEQ ID NO: I所示的核苷酸序列的DNA;(b)含有SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列的DNA;(C)在嚴格條件下，與包含SEQ ID NO: I所示的核苷酸序列的DNA雜交，并具有α 1，6-巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶活性的DNA;(d)在嚴格條件下，與包含SEQ ID N0:2所示的核苷酸序列的DNA雜交，并具有α 1，6-巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶活性的DNA。(6)根據(jù)(4)的細胞，α 1，6-巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶是選自以下(a)、(b)、(c)、(d)、(e)和(f)的蛋白質(zhì)(a)含有SEQ ID N0:4所示氨基酸序列的蛋白質(zhì)；(b)含有SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的蛋白質(zhì)；(c)含有SEQ ID N0:4所示氨基酸序列中至少一個氨基酸被刪除、取代、插入、和/或添加的氨基酸序列，并具有α 1，6-巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶活性的蛋白質(zhì)；(d)含有SEQ ID NO: 5所示氨基酸序列中至少一個氨基酸被刪除、取代、插入、和/或添加的氨基酸序列，并具有α 1，6-巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶活性的蛋白質(zhì)；(e)含有與SEQ ID N0:4所示氨基酸序列具有80%或以上同源性的氨基酸序列，并具有α 1，6-巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶活性的蛋白質(zhì)；(f)含有與SEQ ID N0:5所示氨基酸序列具有80%或以上同源性的氨基酸序列，并具有α 1，6-巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶活性的蛋白質(zhì)。(7)根據(jù)(I)至(6)任一項中的細胞，此細胞對識別糖鏈的凝集素具有抗性，所述糖鏈中巖藻糖的I位與N-糖苷連接的糖鏈復合體中還原端的N-乙酰氨基葡萄糖的6位通過α-鍵連接。(8)根據(jù)(7)的細胞，此細胞對選自以下(a)至⑷的至少一個凝集素具有抗性(a)小扁豆凝集素；
(b)豌豆凝集素；(c)蠶豆凝集素；(d)陳皮木耳凝集素。(9)根據(jù)⑴至⑶任一項中的細胞，此細胞選自以下(a)至(j):(a)來源于中國倉鼠卵巢組織的CHO細胞；(b)大鼠骨髓瘤細胞系 YB2/3HL. P2. Gil. 16Ag. 20 細胞；(c)小鼠骨髓瘤細胞系NSO細胞；(d)小鼠骨髓瘤細胞系SP2/0_Agl4細胞；·(e)來源于敘利亞倉鼠腎組織的BHK細胞；(f)產(chǎn)生抗體的雜交瘤細胞；(g)人白血病細胞系Namalwa細胞；(h)胚胎干細胞；⑴受精卵細胞；(j)植物細胞。(10)根據(jù)⑴至(9)任一項中的細胞，此細胞含有編碼抗體分子的基因。(11)根據(jù)(10)的細胞，此的抗體分子選自以下的(a)至⑷:(a)人抗體；(b)人源化抗體；(c)含(a)或(b)Fc區(qū)的抗體片段；(d)含(a)或(b)Fc區(qū)的融合蛋白質(zhì)。(12)根據(jù)(10)或(11)的細胞，其中抗體分子屬于IgG型。(13)根據(jù)(I)至(12)任一項中的細胞，此細胞產(chǎn)生的抗體組合物比其親代細胞產(chǎn)生的抗體組合物具有更高的抗體依賴性細胞介導細胞毒活性。(14)根據(jù)(13)的細胞，其中具有更高抗體依賴性細胞介導細胞毒活性的抗體組合物比其親代細胞產(chǎn)生的抗體組合物具有更高的糖鏈比例，所述糖鏈中巖藻糖不與Fe區(qū)結(jié)合的N-糖苷連接的糖鏈總復合體中還原端的N-乙酰氨基葡萄糖連接。(15)根據(jù)(14)的細胞，其中不連接巖藻糖的糖鏈中，巖藻糖的I位不與N-糖苷連接的糖鏈復合體中還原端的N-乙酰氨基葡萄糖的6位通過α -鍵連接。(16)根據(jù)(13)至(15)任一項中的細胞，其中巖藻糖不與還原端的N-乙酰氨基葡萄糖通過α -鍵連接的糖鏈比例是抗體組合物中與Fe區(qū)結(jié)合的N-糖苷連接糖鏈總復合體的20%或以上。(17)根據(jù)(13)至(16)任一項中的細胞，其中具有更高抗體依賴性細胞介導細胞毒活性的抗體組合物沒有巖藻糖與糖鏈還原端的N-乙酰氨基葡萄糖結(jié)合的糖鏈。(18) 一種產(chǎn)生抗體組合物的方法，其中所述的方法包括使用根據(jù)求10至17任一項中所述的細胞。(19) 一種產(chǎn)生抗體組合物的方法，所述方法包括在培養(yǎng)基中培養(yǎng)根據(jù)(10)至
(18)任一項中所述的細胞，在培養(yǎng)基中形成和積累抗體組合物；并從培養(yǎng)基中回收抗體組合物。(20)根據(jù)(18)或(19)所述的方法，所述抗體組合物是比其親代細胞產(chǎn)生的抗體組合物具有更高抗體依賴性細胞介導細胞毒活性的抗體組合物。(21)根據(jù)(20)的步驟，所述的具有更高抗體依賴性細胞介導細胞毒活性的抗體組合物比其親代細胞產(chǎn)生的抗體組合物具有更高的糖鏈比例，所述糖鏈中巖藻糖不與Fe區(qū)結(jié)合的N-糖苷連接的糖鏈總復合體中還原端的N-乙酰氨基葡萄糖連接。糖不與N-乙酰氨基葡萄糖在還原端結(jié)合。(22)根據(jù)(21)的步驟，所述的不連接巖藻糖的糖鏈中，巖藻糖的I位不與N-糖苷連接的糖鏈 總復合體中還原端的N-乙酰氨基葡萄糖的6位通過α -鍵連接。(23)根據(jù)(20)至(22)任一項中的細胞，所述的具有更高抗體依賴性細胞介導細胞毒活性的抗體組合物是與抗體組合物Fe區(qū)結(jié)合的N-糖苷連接的糖鏈總復合體中，巖藻糖不與還原端的N-乙酰氨基葡萄糖通過α -鍵連接的糖鏈比例是抗體組合物中與Fe區(qū)結(jié)合的N-糖苷連接糖鏈總復合體的20%或以上。(24)根據(jù)(20)至(23)任一項中的細胞，所述的具有更高抗體依賴性細胞介導細胞毒活性的抗體組合物是沒有巖藻糖與糖鏈中還原端N-乙酰氨基葡萄糖連接的抗體組合物。(25)使用根據(jù)(I)至(9)任一項中細胞產(chǎn)生的轉(zhuǎn)基因非人動物或植物或其后代。(26)根據(jù)(24)的轉(zhuǎn)基因非人動物或植物或其后代，所述的轉(zhuǎn)基因非人動物選自牛、綿羊、山羊、豬、馬、小鼠、大鼠、家禽、猴和兔。(27)根據(jù)(25)或(26)所述的轉(zhuǎn)基因非人動物或植物或其后代，其被導入了編碼抗體分子的基因。(28)根據(jù)(27)的轉(zhuǎn)基因非人動物或植物或其后代，所述的抗體分子選自以下(a)至(d):(a)人抗體；(b)人源化抗體；(c)含(a)或(b)Fc區(qū)的抗體片段；(d)含(a)或(b)Fc區(qū)的融合蛋白質(zhì)。(29)根據(jù)(27)或(28)的轉(zhuǎn)基因非人動物或植物或其后代，所述的抗體分子屬于IgG 族。(30) 一種產(chǎn)生抗體組合物的步驟，其特征在于包括培養(yǎng)根據(jù)(27)至(29)任一項中的轉(zhuǎn)基因非人動物或植物；分離從培養(yǎng)的動物或植物中誘導的含有抗體分子的組織或體液；從分離的組織或體液中回收含所需抗體分子的抗體組合物。(31) 一種產(chǎn)生抗體組合物的步驟，其特征在于包括從根據(jù)(26)至(29)任一項中的轉(zhuǎn)基因非人動物或植物或其后代中分離產(chǎn)生抗體的細胞；在培養(yǎng)基中培養(yǎng)分離的產(chǎn)生抗體的細胞，在培養(yǎng)基中形成和積累抗體組合物；從培養(yǎng)基中回收抗體組合物。(32)根據(jù)(30)或(31)的步驟，所述的抗體組合物是比基因組未被修飾的轉(zhuǎn)基因非人動物或植物或其后代產(chǎn)生的抗體組合物具有更高抗體依賴性細胞介導細胞毒活性的抗體組合物。(33)根據(jù)(32)的步驟，所述的具有更高抗體依賴性細胞介導細胞毒活性的抗體組合物比基因組未被修飾的轉(zhuǎn)基因非人動物或植物或其后代產(chǎn)生的抗體組合物具有較高比例的糖鏈，所述糖鏈中巖藻糖不與和抗體組合物Fe區(qū)結(jié)合的N-糖苷連接的糖鏈總復合體的還原端的N-乙酰氨基葡萄糖連接。(34)根據(jù)(33)的步驟，糖鏈中巖藻糖的I位不與N-糖苷連接的糖鏈總復合體的還原端位置的N-乙酰氨基葡萄糖的6位通過α -鍵連接。(35)根據(jù)(32)至(34)任一項中的步驟，具有更高抗體依賴性細胞介導細胞毒活性的抗體組合物中巖藻糖不與還原端的N-乙酰氨基葡萄糖通過α -鍵連接的糖鏈比例是抗體組合物中與Fe區(qū)結(jié)合的N-糖苷連接糖鏈總復合體的20%或以上。(36)根據(jù)(32)至(35)任一項中的細胞，具有更高抗體依賴性細胞介導細胞毒活 性的抗體組合物是糖鏈中沒有巖藻糖與還原端的N-乙酰氨基葡萄糖連接的抗體組合物。(37) 一種含有Fe區(qū)具有N-糖苷連接糖鏈的抗體分子的抗體組合物，具有巖藻糖不與和抗體組合物Fe區(qū)結(jié)合的N-糖苷連接的糖鏈總復合體的還原端的N-乙酰氨基葡萄糖連接的糖鏈。(38)根據(jù)37所述的抗體組合物，不連接巖藻糖的糖鏈是巖藻糖的I位不與N-糖苷連接的糖鏈復合體的還原端的N-乙酰氨基葡萄糖的6位通過α -鍵連接的糖鏈。(39) 一種通過(18)至(24)任一項中的步驟產(chǎn)生的抗體組合物。(40) 一種通過(27)至(36)任一項中的步驟產(chǎn)生的抗體組合物。(41)含有根據(jù)(37)至(40)任一項中的抗體組合物作為活性成分的藥物。(42)根據(jù)(41)的藥物，其是以下疾病的診斷劑、預防劑或治療劑腫瘤相關疾病、變態(tài)反應相關疾病、炎癥相關疾病、自身免疫性疾病、心血管疾病、病毒感染相關疾病或細菌感染相關疾病。(43)在生產(chǎn)根據(jù)(41)或(42)的藥物中對根據(jù)(37)至(40)任一項的抗體組合物的應用。在修飾基因組以便較其親代細胞具有較低的或去除了有關糖鏈修飾酶的活性的細胞(此后稱為“本發(fā)明的細胞”)中修飾基因組的方法并不特別限制，只要細胞基因組的修飾是為了較其親代細胞具有較低的或去除了有關糖鏈修飾酶(此后稱為"al，6-巖藻糖修飾酶")的活性，其特征在于所述糖鏈中巖藻糖的I-位與N-糖苷連接糖鏈復合體還原末端的N-乙酰氨基葡萄糖的6-位通過α -鍵結(jié)合。親代細胞是降低或去除α I, 6-巖藻糖修飾酶活性的方法應用于基因組之前的細胞。親代細胞不特別限制，包括下列細胞。NSO親代細胞包括下列文獻中所描述的NSO細胞如BIO/TECHNOLOGY, 10, 169 (1992)和 Biotechnol. Bioeng. ,73, 261 (2001)，在 RIKEN 細胞銀行，物理化學研究協(xié)會中登記的NSO細胞系(RCB 0213)，通過將這些細胞系移植至它們可生長的培養(yǎng)基中獲得的亞細胞系，和類似細胞。SP2/0-Agl4親代細胞包括在下面文獻中所描述的SP2/0_Agl4細胞，如J. Immunol.(免疫學雜志),126, 317 (1981), Nature (自然),276. 269(1978)和 HumanAntibodies and Hybridomas, 3, 129(1992)，在 ATCC 中登記的 SP2/0_Agl4 細胞(ATCCCRL-1581)，通過將這些細胞系移植至它們生長的培養(yǎng)基中獲得的亞細胞系(ATCCCRL-1581. I)，和類似細胞。來自中國倉鼠卵巢組織的CHO親代細胞包括在下列文獻中所描述的 CHO 細胞，如 Journal of Experimental Medicine (實驗醫(yī)學雜志)(Jikken Igaku), 108.945(1958), Proc. Natl. Acad. Sci.(美國科學院學報)USA, 60, 1275(1968), Genetics (遺傳學)，迪，513(1968)，Chromosoma(染色#),41., 129 (1973), Methods in Cell Science (細胞學方法)，叢，115 (1996)，RadiationResearch (放射研究).148. 260(1997). Proc. Natl.Acad.Sci.(美國科學院學報)USA, II，4216 (1980) ,Proc. Natl. Acad. Sci.(美國科學院學報)USA, Μ, 1275(1968), Cell ( M ),6,121 (1975)和 Molecular Cell Genetics(遺傳學)，Appendix I，H (883-900 頁)，在 ATCC 登記的細胞系 CH0-K1 (ATCC CCL-61)、細胞系 DUXBll (ATCC CRL-9096)和細胞系 Pro_5 (ATCC CRL-1781)，市售的細胞系 CH0-S (LifeTechnologies的Cat #11619)，通過將這些細胞系移植至它們生長的培養(yǎng)基中獲得的亞細胞系，和類似細胞。大鼠骨髓瘤細胞系YB2/3HL. P2. Gil. 16Ag. 20親代細胞包括從Y3/Agl. 2. 3細胞(ATCC CRL-1631)建立的細胞系，在下面文獻中描述的YB 2/3HL. P2. Gil. 16Ag. 20細胞如J. Cell. Biol.，93, 576 (1982)和 Methods EnzymoI.(酶學方法)，73B, I (1981)，在 ATCC 登記的YB2/3HL. P2. Gil. 16Ag. 20細胞(ATCC CRL-1662)，通過將這些細胞系移植至它們生長的培養(yǎng)基中獲得的亞細胞系，和類似細胞。巖藻糖的I位通過α -鍵和復合體N-糖苷連接糖鏈的還原末端N-乙酰氨基葡萄糖的6位結(jié)合的反應。涉及在復合體N-糖苷連接糖鏈的還原末端通過α -鍵巖藻糖的I位和N-乙酰氨基葡萄糖的6位結(jié)合的反應的酶包括對在復合體N-糖苷連接糖鏈的還原末端通過α -鍵巖藻糖的I位和N-乙酰氨基葡萄糖的6位結(jié)合的反應有影響的酶。I, 6-巖藻糖修飾酶包括α 1，6_巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶，a _L_巖藻糖苷酶和類似酶。對在復合體N-糖苷連接糖鏈的還原末端通過α -鍵巖藻糖的I位和N-乙酰氨基葡萄糖的6位結(jié)合的反應有影響的酶也包括對涉及在復合體N-糖苷連接糖鏈的還原末端通過α-鍵巖藻糖的I位和N-乙酰氨基葡萄糖的6位結(jié)合反應的酶活性有影響的酶，和對物質(zhì)的結(jié)構(gòu)如酶的底物一樣有影響的酶。在本發(fā)明中，α 1,6-巖藻糖修飾酶包括下列(a), (b)，(c)或(d)的DNA編碼的蛋白和下列(e), (f), (g), (h),⑴或(j)的蛋白質(zhì)(a)含有SEQ ID NO: I代表的核苷酸序列的DNA ；(b)含有SEQ ID NO:2代表的核苷酸序列的DNA ；(c)與含有SEQ ID NO: I代表的核苷酸序列的DNA在嚴格條件下雜交并編碼具有α 1,6-巖藻糖轉(zhuǎn)移酶活性的蛋白質(zhì)的DNA ；(d)與含有SEQ ID NO: 2代表的核苷酸序列的DNA在嚴格條件下雜交并編碼具有α 1,6-巖藻糖轉(zhuǎn)移酶活性的蛋白質(zhì)的DNA ；(e)含有SEQ ID NO:4代表的氨基酸序列的蛋白質(zhì)；(f)含有SEQ ID NO:5代表的氨基酸序列的蛋白質(zhì)；(g)含有下列的氨基酸序列的蛋白質(zhì)，其中在由SEQ ID N0:4所代表的氨基酸序列其中至少一個氨基酸被刪除、取代、插入和/或添加，并具有α I, 6-巖藻糖轉(zhuǎn)移酶活性；(h)含有下列的氨基酸序列的蛋白質(zhì)，其中在由SEQ ID N0:5所代表的氨基酸序列，其中至少一個氨基酸被刪除、取代、插入和/或添加，并具有α 1，6-巖藻糖轉(zhuǎn)移酶活性；
(i)含有與SEQ ID NO:4所代表的氨基酸序列具有80%或更多同源性的氨基酸序列，并具有α 1，6-巖藻糖轉(zhuǎn)移酶活性的蛋白質(zhì)；(j)含有與SEQ ID NO: 5所代表的氨基酸序列具有80%或更多同源性的氨基酸序列，并具有α 1，6-巖藻糖轉(zhuǎn)移酶活性的蛋白質(zhì)，和類似物。在本發(fā)明中，在嚴格條件下雜交的DNA是例如通過如克隆雜交(colonyhybridization),卩遼菌斑雜交或Southern印跡雜交的方法,使用如具有SEQ ID NO: I或2代表的核苷酸序列的DNA或其部分片段作為探針獲得的DNA，并特別包括可在O. 7至I. OM氯化鈉存在下，采用濾膜在65°C進行雜交所鑒定的DNA，其中群體或噬菌斑來源的DNA片段固定在濾膜上，然后在65°C使用O. I至2XSSC溶液(由150mM的氯化鈉和15mM的檸檬酸鈉組成的I X SSC溶液的組合物)沖洗濾膜?？梢愿鶕?jù)已描述的方法進行雜交，如在MolecularCloning, A Labooratory Manual (分子克隆，實驗手冊)，第二版，Cold Spring HarborLaboratory Press (冷泉港實驗室印刷)(1989)(此后稱為“分子克隆，第二版”)，現(xiàn)代分子生物學方法，John Wiley & Sons, 1987-1997 (此后稱為“現(xiàn)代分子生物學方法”)，DNA克隆核心技術，實踐方法，第二版，牛津大學(1995);和類似文章?？呻s交的DNA包括與SEQID·NO: I或2所示核苷酸序列具有至少60%或更多，優(yōu)選70%或更多，更優(yōu)選80%或更多，進一步優(yōu)選90%或更多，更為優(yōu)選的是95%或更多，最優(yōu)選98%或更多。在本發(fā)明中，含有SEQ ID N0:4或5所代表的氨基酸序列，其中至少一個氨基酸被刪除，取代，插入和/或添加，并具有α 1，6-巖藻糖轉(zhuǎn)移酶活性的蛋白質(zhì)，可通過例如將一個位點定向突變導入分別具有SEQ ID Ν0:4或5所示氨基酸序列的蛋白質(zhì)的編碼DNA中，使用如下所述的位點定向突變，如在分子克隆，第二版；現(xiàn)代分子生物學方法，NucleicAcids Research (核酸研究),10, 6487 (1982) ；Proc. Natl. Acad. Sci.(美國科學院學M ) USA, 79, 6409(1982) ; Gene(基因),Μ, 315(1985) ; Nucleic Acids Research (核酸研^), 13, 4431(1985) ; Proc. Natl. Acad. Sci.(美國科學院學報)USA,盤，488 (1985);和類似文章。被刪除，取代，插入和/或添加的氨基酸數(shù)量是一個或多個，這個數(shù)量不特別限制，但這個數(shù)量是可以通過一種已知的技術，如位點定向突變刪除，取代或添加，例如I至幾十，優(yōu)選I至20，更優(yōu)選I至10，最優(yōu)選I至5。在本發(fā)明中，含有與SEQ ID NO:4或5所示氨基酸序列具有80%或更多同源性的氨基酸序列，并具有α 1，6-巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶活性的蛋白質(zhì)，當采用分析軟件如BLAST [J. Mol.Biol. .215. 403 (1990) I. FAST A「酶學方法，183, 63 (1990) I 或類似方法計算時，與 SEQ IDΝ0:4或5所示氨基酸序列具有至少80%或更多，優(yōu)選85%或更多，更優(yōu)選90%或更多，仍更優(yōu)選95%或更多，更為優(yōu)選97%或更多，最優(yōu)選99%或更多的同源性。在本發(fā)明中，修飾基因組以便有關糖鏈修飾的酶活性的降低或消除超過其親代細胞，所述的糖鏈中巖藻糖的I位通過α -鍵和復合體N-糖苷連接糖鏈的還原末端N-乙酰氨基葡萄糖的6位連接，其含義是突變被導入酶的表達控制區(qū)，以便減少這種酶的表達，或突變被導入基因的氨基酸序列中以便降低這種酶的功能。導入突變的含義是在基因組的核苷酸序列中進行修飾，如刪除，取代，插入和/或添加?；蚪M基因被敲除的細胞的含義是在細胞中基因組基因的表達或功能完全被抑制?；蚪M基因被敲除的細胞包括從基因組中完全或部分刪除目的基因的細胞。作為獲得這種細胞的方法，可以使用任何技術，只要目的基因組能夠被修飾。但優(yōu)選遺傳工程技術。例子包括(a) 一種基因破壞技術，包括靶向編碼1，6-巖藻糖修飾酶的基因，(b)導入編碼1，6-巖藻糖修飾酶顯性負突變基因的技術，(C)將突變導入編碼1，6_巖藻糖修飾酶的基因中的技術，(d)抑制編碼α 1，6-巖藻糖修飾酶的基因轉(zhuǎn)錄和/或翻譯的技術。而且，本發(fā)明的細胞可通過使用以下的方法獲得，即通過使用選擇對植物凝集素有抗性的克隆，所述凝集素可識別其中巖藻糖的I位通過α -鍵和復合體N-糖苷連接糖鏈的還原末端N-乙酰氨基葡萄糖的6位連接的糖鏈。
植物凝集素抗性細胞的生長不受細胞培養(yǎng)過程中植物凝集素有效濃度的抑制。有效濃度是親代細胞不能正常生長的濃度，或高于該濃度親代細胞不能生長的濃度，該濃度優(yōu)選類似于親代細胞不能正常生長的濃度，更優(yōu)選是親代細胞不能正常生長的濃度2至5倍，仍更優(yōu)選至少是親代細胞不能正常生長的濃度10倍，最優(yōu)選高于親代細胞不能正常生長的濃度至少20倍。在本發(fā)明中，不能抑制生長的植物凝集素的有效濃度可根據(jù)細胞系來決定，通常為 10 μ g/ml 至 10. Omg/ml,優(yōu)選 O. 5 至 2. Omg/ml。作為凝集素，可以使用任何凝集素，只要它是可以識別巖藻糖的I位通過α鍵結(jié)合于N-糖苷鍵合的復合糖鏈還原性末端的N-乙酰葡糖胺6位的糖鏈的凝集素。例子包括小扁豆凝集素LCA (來源于Lens culinaris的扁豆凝集素),豌豆凝集素PSA (來源于Pisumsativum的豌豆凝集素),一種蠶豆凝集素VFA (來源于Vicia faba的凝集素)，陳皮木耳凝集素AAL (來源于Aleuria aurantia的凝集素)等等。本發(fā)明的細胞可以是任何細胞，只要其能夠表達一種抗體分子。例子包括酵母、動物細胞、昆蟲細胞、植物細胞和類似物，具體的例子包括在下面第3項中所描述的那些。動物細胞包括來自中國倉鼠卵巢組織的CHO細胞，大鼠骨髓瘤細胞系YB2/3HL. P2Gil. 16Ag. 20細胞，小鼠骨髓瘤細胞系NSO細胞，小鼠骨髓瘤SP2/0_Agl4細胞，來自敘利亞倉鼠腎組織的BHK細胞，產(chǎn)生抗體的雜交瘤細胞，人白血病細胞系Namalwa細胞，胚胎干細胞，受精卵細胞和類似細胞。優(yōu)選的例子包括用于產(chǎn)生抗體組合物的上述骨髓瘤細胞和雜交瘤細胞，產(chǎn)生人源化抗體和人抗體的宿主細胞，制備可產(chǎn)生人抗體的非人轉(zhuǎn)基因動物的胚胎干細胞和受精卵細胞，制備可產(chǎn)生人源化抗體和人抗體的轉(zhuǎn)基因植物的植物細胞，和類似細胞。本發(fā)明的細胞產(chǎn)生的抗體組合物較親代細胞所產(chǎn)生的抗體組合物的ADCC活性更聞。而且，本發(fā)明的細胞能夠產(chǎn)生一種抗體組合物，其中在與組合物中Fe區(qū)結(jié)合的N-糖苷連接糖鏈總復合體中，巖藻糖不與糖鏈還原末端中N-乙酰氨基葡萄糖結(jié)合的糖鏈比例較親代細胞產(chǎn)生抗體組合物高。本發(fā)明涉及一種產(chǎn)生抗體組合物的過程，其特征是使用本發(fā)明的細胞?？贵w組合物是一種含有Fe區(qū)具有N-糖苷連接糖鏈復合體的抗體分子的組合物?？贵w是一種四聚體，其中兩條多肽鏈，重鏈(此后稱為“H鏈”)和輕鏈(此后稱為“L鏈”)中的兩個分子分別是相連的。每個H鏈N-末端的大約四分之一和L鏈N-末端的大約四分之一(每個都超過100個氨基酸)稱為V區(qū)，該區(qū)富有多樣性，并直接與抗原的結(jié)合有關。V區(qū)以外部分的較大部分稱為C區(qū)。根據(jù)C區(qū)的同源性，抗體分子分為IgG，IgM, IgA, IgD和IgE幾型。同樣，根據(jù)C區(qū)的同源性IgG型也進一步分為IgGl至IgG4亞型。H鏈從其N-末端側(cè)分為四個免疫球蛋白區(qū)VH，CHl，CH2和CH3，和在CHl和CH2之間將CHl和CH2分開的高度可變的多肽區(qū)，稱為鉸鏈區(qū)。含有鉸鏈區(qū)后的CH2和CH3的結(jié)構(gòu)單位稱為Fe區(qū)，N-糖苷連接糖鏈結(jié)合在上面，該區(qū)也是Fe受體，補體和類似物結(jié)合的區(qū)域(免疫學圖冊，原版，Nankodo, 2000年2月10日發(fā)行,第五版；抗體技術手冊(Kotai KogakuNyumon) ,Chijin Shokan, 1994 年 I 月 25 日，第一版)。根據(jù)與蛋白質(zhì)部分的結(jié)合形式，糖蛋白，如抗體的糖鏈粗略地分為兩種類型，即與天冬酰胺(N-糖苷連接的糖鏈)結(jié)合的糖鏈和與其他氨基酸，如絲氨酸、蘇氨酸(O-糖苷連接糖鏈)結(jié)合的糖鏈。N-糖苷連接糖鏈有一個基本的共同核心結(jié)構(gòu)，由下面的結(jié)構(gòu)式(I)表示[生物化學實驗方法23-研究糖蛋白糖鏈的方法(Gakujutsu Shuppan中心)，Reiko Takahashi 主編(1989)]
權利要求
1.一種產(chǎn)生抗體組合物的方法，所述方法包括使用含有編碼抗體分子的基因的細胞，其中細胞的基因組被修飾以使與糖鏈修飾相關的酶的活性比其親代細胞更低或消失，所述糖鏈中巖藻糖的I位與N-糖苷連接的糖鏈復合體中還原端的N-乙酰氨基葡萄糖的6位通過α-鍵連接。
2.根據(jù)權利要求I所述的方法，其特征在于編碼糖鏈修飾相關酶的基因組基因被敲除，所述糖鏈中巖藻糖的I位與N-糖苷連接的糖鏈復合體中還原端的N-乙酰氨基葡萄糖的6位通過α-鍵連接。
3.根據(jù)權利要求I所述的方法，其特征在于編碼糖鏈修飾相關酶的基因組上的所有等位基因被敲除，所述糖鏈中巖藻糖的I位與N-糖苷連接的糖鏈復合體中還原端的N-乙酰氨基葡萄糖的6位通過α-鍵連接。
4.根據(jù)權利要求I所述的方法，其特征在于與糖鏈修飾相關的酶是α1，6-巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶，所述糖鏈中巖藻糖的I位與N-糖苷連接的糖鏈復合體中還原端的N-乙酰氨基葡萄糖的6位通過α -鍵連接。
5.根據(jù)權利要求4所述的方法，其特征在于所述的α ，6-巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶是選自以下(a)至(d)的DNA編碼的蛋白質(zhì) (a)含有SEQID NO: I所示的核苷酸序列的DNA; (b)含有SEQID NO:2所示的核苷酸序列的DNA; (c)在嚴格條件下，與包含SEQID NO: I所示的核苷酸序列的DNA雜交，并具有α 1，6-巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶活性的DNA; (d)在嚴格條件下，與包含SEQID N0:2所示的核苷酸序列的DNA雜交，并具有α 1，6-巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶活性的DNA。
6.根據(jù)權利要求4的方法，其特征在于所述的α ，6-巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶是選自以下(a)、(b)、(c)、(d)、(e)和⑴的蛋白質(zhì) (a)含有SEQID N0:4所示氨基酸序列的蛋白質(zhì)； (b)含有SEQID N0:5所示氨基酸序列的蛋白質(zhì)； (c)含有SEQID N0:4所示氨基酸序列中至少一個氨基酸被刪除、取代、插入、和/或添加的氨基酸序列，并具有α ，6-巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶活性的蛋白質(zhì)； (d)含有SEQID N0:5所示氨基酸序列中至少一個氨基酸被刪除、取代、插入、和/或添加的氨基酸序列，并具有α ，6-巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶活性的蛋白質(zhì)； (e)含有與SEQID N0:4所示氨基酸序列具有80%以上同源性的氨基酸序列，并具有α 1，6-巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶活性的蛋白質(zhì)； (f)含有與SEQID NO:5所示氨基酸序列具有80%以上同源性的氨基酸序列，并具有α 1，6-巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶活性的蛋白質(zhì)。
7.根據(jù)權利要求I所述的方法，其特征在于所述細胞對識別糖鏈的凝集素具有抗性，所述糖鏈中巖藻糖的I位與N-糖苷連接的糖鏈復合體中還原端的N-乙酰氨基葡萄糖的6位通過α-鍵連接。
8.根據(jù)權利要求7所述的方法，其特征在于所述細胞對選自以下(a)至(d)的至少一種凝集素具有抗性 (a)小扁豆凝集素；(b)豌豆凝集素； (c)蠶豆凝集素； (d)陳皮木耳凝集素。
9.根據(jù)權利要求I所述的方法，其特征在于所述細胞選自以下(a)至(j) (a)來源于中國倉鼠卵巢組織的CHO細胞； (b)大鼠骨髓瘤細胞系YB2/3HL.P2. Gil. 16Ag. 20細胞; (c)小鼠骨髓瘤細胞系NSO細胞； (d)小鼠骨髓瘤細胞系SP2/0-Agl4細胞； (e)來源于敘利亞倉鼠腎組織的BHK細胞； (f)產(chǎn)生抗體的雜交瘤細胞； (g)人白血病細胞系Namalwa細胞； (h)胚胎干細胞； (i)受精卵細胞； (j)植物細胞。
10.根據(jù)權利要求I所述的方法，其特征在于所述的抗體分子選自以下的(a)至(d): (a)人抗體; (b)人源化抗體； (C)含(a)或(b)Fc區(qū)的抗體片段； (d)含(a)或(b)Fc區(qū)的融合蛋白質(zhì)。
11.根據(jù)權利要求I所述的方法，其特征在于所述的抗體分子屬于IgG型。
12.根據(jù)權利要求I所述的方法，其特征在于所述方法包括在培養(yǎng)基中培養(yǎng)細胞，在培養(yǎng)物中形成和積累抗體組合物；并從培養(yǎng)物中回收抗體組合物。
13.根據(jù)權利要求I至12任一項所述的方法，其特征在于所述抗體組合物是比其親代細胞產(chǎn)生的抗體組合物具有更高抗體依賴性細胞介導細胞毒活性的抗體組合物。
14.根據(jù)權利要求13所述的方法，其特征在于所述的具有更高抗體依賴性細胞介導細胞毒活性的抗體組合物比其親代細胞產(chǎn)生的抗體組合物具有更高的糖鏈比例，所述糖鏈中巖藻糖不與Fe區(qū)結(jié)合的N-糖苷連接的糖鏈總復合體中糖鏈還原端的N-乙酰氨基葡萄糖連接。
15.根據(jù)權利要求14所述的方法，其特征在于所述的不與巖藻糖連接的糖鏈中，巖藻糖的I位不與N-糖苷連接的糖鏈復合體中還原端的N-乙酰氨基葡萄糖的6位通過α -鍵連接。
16.根據(jù)權利要求13所述的細胞，其特征在于所述的具有更高抗體依賴性細胞介導細胞毒活性的抗體組合物是與抗體組合物Fe區(qū)結(jié)合的N -糖苷連接的糖鏈總復合體中，巖藻糖不與還原端的N-乙酰氨基葡萄糖通過α -鍵連接的糖鏈比例是抗體組合物中與Fe區(qū)結(jié)合的N-糖苷連接糖鏈總復合體的20%以上。
17.根據(jù)權利要求13所述的細胞，其特征在于所述的具有更高抗體依賴性細胞介導細胞毒活性的抗體組合物是沒有巖藻糖與糖鏈中還原端N-乙酰氨基葡萄糖連接的抗體組合物。
18.—種產(chǎn)生抗體組合物的方法，其特征在于包括培養(yǎng)轉(zhuǎn)基因非人動物或植物；從培養(yǎng)的動物或植物中分離含有所導入的抗體分子的組織或體液；從分離的組織或體液中回收含所需抗體分子的抗體組合物，其中轉(zhuǎn)基因非人動物或植物使用細胞產(chǎn)生，其中細胞的基因組被修飾以使與糖鏈修飾相關的酶的活性比其親代細胞更低或消失，并且被導入編碼抗體分子的基因，所述糖鏈中巖藻糖的I位與N-糖苷連接的糖鏈復合體中還原端的N-乙酰氨基葡萄糖的6位通過α-鍵連接。
19.一種產(chǎn)生抗體組合物的方法，其特征在于包括從轉(zhuǎn)基因非人動物或植物或其后代中分離產(chǎn)生抗體的細胞；在培養(yǎng)基中培養(yǎng)分離的產(chǎn)生抗體的細胞，在培養(yǎng)物中形成和積累抗體組合物；以及從培養(yǎng)物中回收抗體組合物，其中轉(zhuǎn)基因非人動物或植物或其后代使用細胞產(chǎn)生，其中細胞的基因組被修飾以使與糖鏈修飾相關的酶的活性比其親代細胞更低或消失，并且被導入編碼抗體分子的基因，所述糖鏈中巖藻糖的I位與N-糖苷連接的糖鏈復合體中還原端的N-乙酰氨基葡萄糖的6位通過α -鍵連接。
20.根據(jù)權利要求18或19所述的方法，其特征在于所述的抗體組合物是比基因組未被修飾的轉(zhuǎn)基因非人動物或植物或其后代產(chǎn)生的抗體組合物具有更高抗體依賴性細胞介導細胞毒活性的抗體組合物。
21.根據(jù)權利要求20所述的方法，其特征在于所述的具有更高抗體依賴性細胞介導細胞毒活性的抗體組合物比基因組未被修飾的轉(zhuǎn)基因非人動物或植物或其后代產(chǎn)生的抗體組合物具有較高比例的糖鏈，所述糖鏈中巖藻糖不與和抗體組合物Fe區(qū)結(jié)合的N -糖苷連接的糖鏈總復合體的還原端的N-乙酰氨基葡萄糖連接。
22.根據(jù)權利要求21所述的方法，其特征在于所述的糖鏈中巖藻糖的I位不與N-糖苷連接的糖鏈還原端位置的N-乙酰氨基葡萄糖的6位通過α -鍵連接。
23.根據(jù)權利要求20所述的方法，其特征在于所述的具有更高抗體依賴性細胞介導細胞毒活性的抗體組合物中巖藻糖不與還原端的N-乙酰氨基葡萄糖連接的糖鏈比例是抗體組合物中與Fe區(qū)結(jié)合的N-糖苷連接糖鏈總復合體的20%以上。
24.根據(jù)權利要求20所述的細胞，其特征在于所述的具有更高抗體依賴性細胞介導細胞毒活性的抗體組合物是糖鏈中沒有巖藻糖與還原端的N-乙酰氨基葡萄糖連接的抗體組合物。
25.一種含有在Fe區(qū)具有N-糖苷連接糖鏈的抗體分子的抗體組合物，其特征在于具有巖藻糖不與和抗體組合物Fe區(qū)結(jié)合的N -糖苷連接的糖鏈總復合體的還原端的N-乙酰氨基葡萄糖連接的糖鏈。
26.根據(jù)權利要求25所述的抗體組合物，其特征在于所述的不連接巖藻糖的糖鏈是巖藻糖的I位不與N -糖苷連接的糖鏈復合體的還原端的N-乙酰氨基葡萄糖的6位通過α-鍵連接的糖鏈。
27.—種通過權利要求1，18和19任一項中所述的方法產(chǎn)生的抗體組合物。
28.含有根據(jù)權利要求25至27任一項中所述的抗體組合物作為活性成分的藥物。
29.根據(jù)權利要求28所述的藥物，其特征在于所述藥物是以下疾病的診斷劑、預防劑或治療劑腫瘤相關疾病、變態(tài)反應相關疾病、炎癥相關疾病、自身免疫性疾病、心血管疾病、病毒感染相關疾病或細菌感染相關疾病。
30.權利要求25至27任一項的抗體組合物在生產(chǎn)根據(jù)權利要求28或29所述的藥物中的應用。
全文摘要
本申請涉及基因組被修飾的細胞，所述的修飾使與糖鏈修飾相關的酶活性較其親代細胞更降低或消失，在所述修飾中，N-糖苷連接的糖鏈復合體中巖藻糖的1位與還原端的N-乙酰氨基葡萄糖的6位在通過α-鍵連接，以及用該細胞產(chǎn)生抗體組合物的方法。
文檔編號A61P37/00GK102911987SQ20121020159
公開日2013年2月6日 申請日期2003年4月9日 優(yōu)先權日2002年4月9日
發(fā)明者大貫尚子, 佐藤光男, 森勝弘, 山野和也 申請人:協(xié)和發(fā)酵麒麟株式會社