專利名稱：N－(3－苯并呋喃基)脲衍生物的制作方法
本申請為1996年3月6日提交的發(fā)明名稱為“N-(3-苯并呋喃基)脲衍生物”、申請?zhí)枮?6103073.9的分案申請。
本發(fā)明涉及N-(3-苯并呋喃基)脲衍生物，其制備方法和其醫(yī)藥用途。
已知吞噬細(xì)胞的NADPH氧化酶是過氧化物游離基明離子和由其衍生的活性氧類的生理來源，而這兩者對于抵御病原體是重要的。而且，致炎性(如TNFα、IL-1或IL-6)和抗炎性的細(xì)胞因子(如IL-10)在宿主發(fā)揮防御機(jī)制過程中起了關(guān)鍵的作用。不能控制發(fā)炎性調(diào)節(jié)因子的產(chǎn)生可以引起急性和慢性炎癥、自身免疫性疾病、組織損害、多器官病變以致于死亡。我們還知道吞噬細(xì)胞中環(huán)狀A(yù)MP的增加可抑制氧游離基的產(chǎn)生，并且這種細(xì)胞功能比其它功能如聚集反應(yīng)和酶釋放更敏感。
具有脂肪氧合酶抑制作用的苯并呋喃-和苯并噻吩衍生物在EP146243中公開。
本發(fā)明涉及通式(Ⅰ)的N-(3-苯并呋喃基)脲衍生物及其鹽 其中A和D相同或不同，表示氫、各具有至多6個碳原子的直鏈或支鏈?；蛲檠豸驶虮硎揪哂兄炼?個碳原子的直鏈或支鏈烷基，它可被羧基或具有至多6個碳原子的烷氧羰基、苯氧基或苯甲?；我馊〈?，或表示鹵素、羧基、氰基、硝基、三氟甲基、三氟甲氧基、或式-OR5、-S(O)aR6、-(O-CH2-CO)b-NR7R8、-CO-NR9R10、-SO2-NR11R12或-NH-SO2R13基團(tuán)，其中R5、R6、R8、R9、R10、R11和R12相同或不同，表示氫、具有3-6個碳原子的環(huán)烷基、芐基或含有至多三個選自N、S和O雜原子的5-7元飽和或不飽和的雜環(huán)、所述的雜環(huán)可與苯環(huán)稠合并且可被選自下述的相同或不同的取代基任意地取代鹵素、氰基、硝基或具有至多6個碳原子的直鏈或支鏈烷基或表示各具有至多8個碳原子的直鏈或支鏈烷基、鏈烯基或?；虮硎颈贿x自下述基團(tuán)的相同或不同的取代基任意單取代或雙取代的苯基硝基、鹵素、羧基或具有至多6個碳原子的直鏈或支鏈烷氧羰基，或R5表示羥基保護(hù)基或具有至多6個碳原子的直鏈或支鏈烷氧羰基，或表示具有至多8個碳原子的直鏈或支鏈烷基，該烷基可被羧基、羥基、各具有至多6個碳原子的直鏈或支鏈的酰基或烷氧羰基、苯氧基、苯甲?；〈?，或被含有至多三個選自N、S和/或O的雜原子的5-7元不飽和雜環(huán)取代，所述的雜環(huán)可被鹵素、氰基、硝基或具有至多6個碳原子的直鏈或支鏈烷基任意取代，或R5表示式SO2R14基團(tuán)，其中R14表示苯基、三氟甲基或具有至多4個碳原子的直鏈或支鏈烷基，a表示0、1或2，b表示0或1，R7表示氫或具有至多4個碳原子的直鏈或支鏈烷基，R13表示具有6-10個碳原子芳基、三氟甲基或具有至多6個碳原子的直鏈或支鏈烷基，R1表示氫、具有至多6個碳原子的直鏈或支鏈烷基、氨基保護(hù)基或基團(tuán)-CO-R15，其中R15表示羥基、具有至多6個碳原子的直鏈或支鏈烷氧羰基、具有3-6個碳原子的環(huán)烷基、吡啶基、吡咯烷基、或具有至多8個碳原子的直鏈或支鏈烷基，它可被鹵素、羧基或具有至多6個碳原子的直鏈或支鏈烷氧羰基任意取代；或表示苯基，它可被羥基、羧基或各具有至多6個碳原子的直鏈或支鏈烷氧基或烷氧羰基任意取代，L表示氧原子或硫原子，R2和R3相同或不同，表示氫、具有至多6個碳原子的環(huán)烷基、各具有至多8個碳原子的直鏈或支鏈烷基、烷氧羰基或鏈烯基，或表示苯甲?；?、具有6-10個碳原子的芳基，它們可被選自下述基團(tuán)的相同或不同的取代基任意單取代至三取代鹵素、氰基、硝基、羧基或各具有至多6個碳原子的直鏈或支鏈烷基、烷氧基、烷氧羰基或?；?，或R2和R3與氮原子一起形成任選含有氧原子的5-至7-元飽和雜環(huán)，和R4表示被選自下述基團(tuán)的相同或不同的取代基任意單取代至三取代的苯基羥基、苯硫基、具有3-6個碳原子的環(huán)烷基、鹵素、硝基、四唑基、噻唑基、呋喃基、吡啶基、三氟甲基、二氟甲基、氰基、羧基或各具有至多8個碳原子的直鏈或支鏈烷基、烷氧基、烷氧羰基或酰基，或表示可被苯基任意取代苯基，前者又可被鹵素任意單取代或雙取代，或者被基團(tuán)-NR16R17,-SR18,-SO2R19或-O-SO2-R20任意取代，其中R16和R17的定義如上述R7和R8的定義，并且與后者相同或不同，或R16表示氫，和R17表示具有至多6個碳原子的直鏈或支鏈酰基，R18表示氫或具有至多6個碳原子的直鏈或支鏈烷基，R19和R20相同或不同，并且表示具有至多6個碳原子的直鏈或支鏈烷基，芐基或苯基。
本發(fā)明的N-(3-苯并呋喃基)脲衍生物也可以其鹽的形式存在。一般來說，這里是指與有機(jī)或無機(jī)堿或酸形成的鹽。
本發(fā)明中生理上可接受的鹽是優(yōu)選的。N-(3-苯并呋喃基)脲衍生物的生理上可接受的鹽為含有游離羧基的本發(fā)明物質(zhì)的金屬鹽和銨鹽。特別優(yōu)選的鹽是，例如鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽或鈣鹽，以及由氨衍生的，或由有機(jī)堿如乙胺、二或三乙胺、二或三乙醇胺、二環(huán)己基胺、二甲基氨基乙醇、天冬氨酸、亮氨酸或乙二胺衍生的銨鹽。
本發(fā)明化合物的生理上可接受的鹽也指與無機(jī)酸或有機(jī)酸生成的鹽。這里優(yōu)選的鹽是指與無機(jī)酸形成的鹽，無機(jī)酸如鹽酸、氫溴酸、磷酸或硫酸，或與有機(jī)羧酸或磺酸形成的鹽，有機(jī)羧酸和磺酸如乙酸、馬來酸、富馬酸、蘋果酸、檸檬酸、酒石酸、乙磺酸、苯磺酸、甲基苯磺酸或萘二磺酸。
本發(fā)明化合物以立體異構(gòu)體的形式存在，它們以象或鏡象(對映異構(gòu)體)或不以象或鏡象(非對映異構(gòu)體)的形式存在。本發(fā)明涉及對映體和外消旋物形式，也涉及非對映異構(gòu)體混合物。類似于非對映異構(gòu)體，采用已知的方法可將外消旋物拆分為單一組分的立體異構(gòu)體。
一般來說，雜環(huán)表示含有至多3個選自氧、硫和/或氮的雜原子的5-至7-元飽和或不飽和的，優(yōu)選5-至6-元飽和或不飽和的雜環(huán)，所述的雜環(huán)可與芳環(huán)進(jìn)一步稠合。
下述雜環(huán)基是優(yōu)選的噻吩基、呋喃基、吡咯基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、噠嗪基、喹啉基、異喹啉基、喹唑啉基、喹噁唑基、cinnolyl、噻唑基、二氫噻唑基、苯并噻唑基、異噻唑基、苯并異噻唑基、噁唑基、苯并噁唑基、異噁唑、咪唑基、吲哚基、嗎啉基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、噁唑基、噁唑啉基或三唑基。
一般來說，上述定義中提及的氨基保護(hù)基包括下述一系列保護(hù)基芐氧基羰基、3,4-二甲氧基芐氧羰基、3,5-二甲氧基芐氧羰基、2,4-二甲氧基芐氧羰基、4-甲氧基芐氧羰基、4-硝基芐氧羰基、2-硝基芐氧羰基、2-硝基-4,5-二甲氧基芐氧羰基、甲氧基羰基、乙氧基羰基、丙氧基羰基、異丙氧基羰基、丁氧基羰基、異丁氧基羰基、叔丁氧基羰基、烯丙氧基羰基、乙烯氧基羰基、2-硝基芐氧羰基、3,4,5-三甲氧基芐氧羰基、環(huán)己氧基羰基、1,1-二甲基乙氧基羰基、金剛烷基羰基、鄰苯二甲?；?、2,2,2-三氯代乙氧基羰基、2,2,2-三氯代-叔丁氧基羰基、氧基羰基、苯氧基羰基、4-硝基苯氧基羰基、芴-9-基甲氧基羰基、甲酰基、乙酰基、丙?；?、新戊?；?、2-氯乙?；?、2-溴乙?；?,2,2-三氟乙?；?、2,2,2-三氯乙?；?、苯甲?；?-氯苯甲?；?、4-溴苯甲?；?、4-硝基苯甲?；⑧彵蕉柞喕?、異戊?；蚱S氧基亞甲基、4-硝基芐基、2,4-二硝基芐基或4-硝基苯基。
優(yōu)選的通式(Ⅰ)化合物及其鹽是下述化合物其中A和D相同或不同，并且表示氫、各具有至多5個碳原子的直鏈或支鏈?；蛲檠豸驶?，或表示具有至多4個碳原子的直鏈或支鏈烷基，它們可被羧基、羥基、具有至多5個碳原子的烷氧羰基、苯氧基或芐氧基任意取代，或表示氟，氯，溴，硝基，三氟甲基或下式基團(tuán)-OR5、-S(O)a-R6、-(O-CH2-CO)b-NR7R8、-CO-NR9R10、-SO-NR11R12或-NH-SO2-R13，其中R5、R6、R8、R9、R10、R11和R12相同或不同，表示氫，環(huán)丙基，環(huán)戊基，環(huán)己基，醌醇基(chinolyl)，吡啶基，咪唑基，1,3-噻唑基或噻吩基，它們由相同或不同選自下述的取代基選擇取代的氟、氯、溴、碘、氰基、硝基或最多有5個碳原子的直鏈或支鏈烷基，表示各自最多有6個碳原子的直鏈或支鏈的烷基、鏈烯基或酰基，或表示被相同或不同的選自下列基團(tuán)的取代基單取代或二取代的苯基硝基、氟、氯、溴、碘、羧基或最多有5個碳原子的直鏈支鏈的烷氧羰基，或者R5表示芐基，乙?；蛩难踹拎蜃疃嘤?個碳原子的直鏈或支鏈烷氧羰基，表示最多具有6個碳原子的直鏈或支鏈烷基，該烷基被羧基、羥基、最多有4個碳原子的直鏈或支鏈?；蛲檠豸驶⒈窖趸?、苯甲酰基取代，或被由氟、氯、溴、氰基、硝基或最多有4個碳原子的直鏈或支鏈烷基選擇取代的吡啶基，咪唑基，噻吩基或呋喃基所取代，或者R5表示式-SO2-R14基團(tuán)，其中R14表示苯基、三氟甲基或最多有3個碳原子的直鏈或支鏈烷基，a表示數(shù)0、1或2,b表示數(shù)0或1,R7表示氫或最多有3個碳原子的直鏈或支鏈烷基，R13表示苯基、三氟甲基或最多有3個碳原子的直鏈或支鏈烷基，R1表示氫、最多有4個碳原子的直鏈或支鏈烷基，叔丁氧羰基或式-COR15基團(tuán)，其中
R15表示羥基，最多有4個碳原子的直鏈或支鏈烷氧羰基，環(huán)戊基，環(huán)己基，吡咯烷基或最多有5個碳原子、且被下述基團(tuán)選擇取代的直鏈或支鏈烷基氟、氯、溴、羧基或最多有4個碳原子的直鏈或支鏈烷氧羰基，或表示苯基，該苯基被羥基、羧基或各自最多有4個碳原子的烷氧基或烷氧羰基取代，L表示氧或硫原子，R2和R3相同或不同，表示氫，環(huán)丁基，環(huán)戊基，環(huán)己基或各自最多有6個碳原子的直鏈或支鏈烷基、烷氧羰基或鏈烯基，或表示被相同或不同的包括下面一系列取代基單取代至三取代的苯甲?；虮交?、氯、溴、碘、羧基、氰基、硝基、或最多各自有5個碳原子的支鏈或直鏈烷基、烷氧基或烷氧羰基，或者R2和R3與氮原子一起形成吡咯烷基、哌啶基或嗎啉基，以及R4表示由相同或不同的包括下面一系列取代基單取代至三取代的苯基羥基、硫代苯基、環(huán)戊基、環(huán)己基、氟、氯、溴、碘、硝基、四唑基、噻唑基、呋喃基、吡啶基、三氟甲基、二氟甲基、氰基、羧基，最多各自有6個碳原子的直鏈或支鏈烷基、烷氧基、烷氧羰基或?；?，或由苯基選擇取代的苯基，前者被氟、氯或溴選擇的單取代或二取代。
最優(yōu)選的通式(Ⅰ)化合物和其鹽是下述化合物其中A和D相同或不同，表示氫、最多各自有4個碳原子的直鏈或支鏈?；蛲檠豸驶?、或最多有3個碳原子的直鏈或支鏈烷基，該基團(tuán)被最多有4個碳原子的羧基或烷氧羰基選擇取代；苯氧基、苯甲酰基，或表示氟，氯，溴，硝基，氰基，三氟甲基，三氟甲氧基，或下式基團(tuán)-OR5,-S(O)aR6,-(O-CH2-CO)b-NR7R8,-CONR9R10,-SO2NR11R12或-NH-SO2R13，其中R5、R6、R8、R9、R10、R11和R12相同，表示氫，環(huán)丙基，環(huán)戊基，環(huán)己基，醌醇基，吡啶基，咪唑基，1,3-噻唑基或噻吩基，這些基團(tuán)被相同或不同的下述一系列取代基所取代氟、氯、溴、碘、氰基、硝基或最多有3個碳原子的直鏈或支鏈烷基，表示各自最多有3個碳原子的直鏈或支鏈烷基、鏈烯基或?；虮硎颈交?，該苯基被相同或不同的下述一系列取代基選擇的單取代或二取代氟、氯、溴、碘、羧基或最多有3個碳原子的直鏈或支鏈烷氧羰基，或者R5表示芐基，乙?；蛩难踹拎蜃疃嘤?個碳原子的直鏈或支鏈烷氧羰基，表示最多有4個碳原子的直鏈或支鏈烷基，該烷基被羧基、羥基、各自最多有3個碳原子的?；蛲檠豸驶?、苯氧基、苯甲?；虮贿拎せ溥蚧蜞绶曰〈?，或者R5表示式-SO2R14基團(tuán)，
其中R14表示苯基、三氟甲基或甲基，a表示數(shù)0、1或2,b表示數(shù)0或1,R7表示氫，甲基或乙基，R13表示苯基，三氟甲基或甲基，R1表示氫或最多有3個碳原子的烷基，或式-COR15基團(tuán)，其中R15表示羥基、最多有3個碳原子的直鏈或支鏈烷氧羰基，環(huán)戊基，環(huán)己基，吡啶基，吡咯烷基，或最多有4個碳原子的直鏈或支鏈烷基，該烷基由氟、氯、溴、羧基或最多有3個碳原子的直鏈或支鏈烷氧羰基選擇取代，或表示苯基，該苯基被羥基、羧基或各自最多有3個碳原子的直鏈或支鏈烷氧基或烷氧羰基選擇取代，L表示氧或硫原子，R2和R3相同或不同，表示氫，環(huán)丁基，環(huán)戊基，環(huán)己基或各自最多有5個碳原子的直鏈或支鏈烷基、烷氧羰基或鏈烯基，或表示苯甲?；虮交鼈兪潜幌嗤虿煌南率鲆幌盗腥〈x擇的單取代至三取代氟、氯、溴、碘、羧基、氰基、硝基或各自最多有3個碳原子烷基、烷氧基或烷氧羰基，或者R2和R3與氮原子一起形成吡咯烷基環(huán)，以及R4表示苯基，該苯基被相同或不同的下述一系列取代基選擇的一取代至三取代羥基、硫代苯基、環(huán)戊基、環(huán)己基、氟、氯、溴、
硝基、四唑基、噻唑基、呋喃基、吡啶基、三氟甲基、二氟甲基、氰基、羧基或最多各自有5個碳原子的直鏈或支鏈的烷基、烷氧基、烷氧羰基或?；?，或苯基，該苯基可被任選由氯一取代或二取代的苯基任意取代。
另外本發(fā)明還發(fā)現(xiàn)了制備通式(Ⅰ)化合物的方法，其特征在于將其中A、D、R1和R4具有上文定義的通式(Ⅱ)化合物 和其中L和R2具有上文定義的通式Ⅲ化合物R2-N=C=L(Ⅲ)在惰性溶劑中進(jìn)行反應(yīng)，必要時在有堿和/或有輔助劑存在下進(jìn)行；在R2/R3=H和L=O的情況下，使通式(Ⅱ)化合物和通式(Ⅲa)化合物反應(yīng)E-SO2-N-C-O (Ⅲa)其中E表示鹵素，優(yōu)選氯；在R2/R3=H和L=S的情況下，使通式(Ⅱ)化合物和NH4SCN反應(yīng)；以及在R1、R2和/或R3≠H情況下，可選擇性地用常規(guī)方法衍生得到氨基基團(tuán)。
本發(fā)明的方法可用例如下述方程式的方法說明 適當(dāng)?shù)娜軇┦浅Ｓ玫脑诜磻?yīng)條件下不發(fā)生變化的有機(jī)溶劑。包括醚如乙醚、二噁烷或四氫呋喃，丙酮，二甲亞砜，二甲基甲酰胺或醇類，如甲醇、乙醇、丙醇或鹵代烴，如二氯甲烷、三氯甲烷或四氯甲烷，優(yōu)選二氯甲烷。
適當(dāng)?shù)膲A通常是有機(jī)或無機(jī)堿。優(yōu)選包括堿金屬氫氧化物如氫氧化鈉、碳酸氫鈉或氫氧化鉀，堿土金屬氫氧化物如氫氧化鋇，堿金屬碳酸鹽如碳酸鈉或碳酸鉀，堿土金屬碳酸鹽如碳酸鈣，或堿金屬，或有機(jī)胺(三烷基(C1-C6)胺)如三乙胺，或雜環(huán)化合物如1,4-二氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛烷(DABCO)、1,8-二氮雜雙環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU)，或氨化物(amide)如氨化鈉、丁基氨化鋰或丁基鋰、吡啶或甲基哌啶。也可使用堿金屬，如鈉或它的氫化物如氫化鈉作為堿使用。優(yōu)選碳酸鉀、三乙胺、碳酸氫鈉和氫氧化鈉。
該方法通常在-30℃至+100℃溫度范圍內(nèi)，優(yōu)選在-10℃至+50℃范圍內(nèi)進(jìn)行。
該方法通常在常壓下進(jìn)行，但是也可以在提高的壓力下或在減壓條件下(如在0.5至5.0巴范圍內(nèi))進(jìn)行。
相對于1摩爾通式(Ⅲ)或(Ⅲa)化合物堿的用量為1至10摩爾，優(yōu)選1.0至4摩爾。
作為原料使用的通式(Ⅱ)化合物是新的，可用下述方法制備首先使其中A和D如上文定義的通式(Ⅳ)化合物 與通式(Ⅴ)化合物反應(yīng)R4-CO-CH2-T (Ⅴ)其中R4如上文定義，和T表示典型的離去基團(tuán)，例如氯、溴、碘、甲苯磷酸基或甲磺酸基，優(yōu)選溴，可以制備通式(Ⅵ)化合物 其中A、D和R4如上文定義，反應(yīng)在一種上述溶劑或堿中，優(yōu)選在三乙胺和二甲基甲酰胺中進(jìn)行；
接著在最后步驟中與NaOC2H5/C2H5OH進(jìn)行反應(yīng)。
該方法通常在+10℃至+150℃溫度范圍內(nèi)，優(yōu)選在+30℃至+80℃范圍內(nèi)進(jìn)行。
該方法通常在常壓下進(jìn)行，但是也可以在升高的壓力或減壓下(例如在0.5至5巴范圍內(nèi))進(jìn)行。
通式(Ⅲ)、(Ⅲa)、(Ⅳ)、(Ⅴ)和(Ⅵ)化合物是已知的，在某些情況下是新化合物，并可用常規(guī)方法制備。
出人意料的是，通式(Ⅰ)化合物抑制氧游離基的形成和TNFα(腫瘤壞死因子)的生成，但趨向于釋放IL-10。這些化合物能通過抑制吞噬細(xì)胞磷酸二酯酶活性而增加細(xì)胞環(huán)腺苷酸(環(huán)AMP)。
特別是本發(fā)明化合物能通過多形核細(xì)胞(PMN)抑制過氧化物的生成。還有，在多種刺激，包括細(xì)菌脂多糖(LPS)、全調(diào)理酵母聚糖(ZymC3b)和IL-1β的刺激的響應(yīng)中，這些化合物抑制人體單核細(xì)胞中TNFα的釋放和增強(qiáng)IL-10的產(chǎn)生。
可能是由于Ⅳ型磷酸二酯酶對其的降解而使其得到抑制從而由細(xì)胞cAMP提高導(dǎo)致了上述作用。
所以本發(fā)明化合物可用作治療急性和慢性感染病變的藥物。
本發(fā)明化合物優(yōu)選適于治療和預(yù)防急慢性感染和自身免疫疾病，例如氣腫、牙槽炎、休克肺、各種哮喘、COPD、ARDS、支氣管炎、動脈硬化、關(guān)節(jié)病、胃腸道感染、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、心肌炎、膿毒癥和膿毒病休克、關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕脊椎炎和骨關(guān)節(jié)炎、革蘭氏陰性敗毒癥、再灌注損傷、移植的宿主反應(yīng)、同種移植排異、瘧疾、肌痛、HIV、AIDS、惡病質(zhì)、Cronh病、潰瘍性結(jié)腸炎、Pyresis、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、多發(fā)性硬化、Ⅰ型糖尿病、牛皮癬、Bechet病、變態(tài)反應(yīng)性紫癜、腎炎、慢性腎小球腎炎、腸感染疾病和白血病。另外本發(fā)明化合物適合于減輕再氧化后壞死組織的損壞，在此情況下同時給藥到嘌呤醇以抑制黃嘌呤氧化酶更好，也用于和過氧化物歧化酶結(jié)合治療。試驗(yàn)說明1．制備人PMN用靜脈穿刺方法從健康受試者身上取血，甩葡聚糖沉淀和在緩沖介質(zhì)中再懸浮的方法純化中性細(xì)胞。
2．FMLP刺激后過氧化物基陰離子生成的抑制作用在微滴板的孔中使中性細(xì)胞(2.5×105ml-1)與細(xì)胞素C(1.2mg/ml)混合。把本發(fā)明化合物加入二甲亞砜(DMSO)，在所有的孔中化合物濃度范圍為2.5nM至10μM,DMSO濃度為0.1％v/v。加入細(xì)胞松弛素B(5μg×ml-1)后把板在37℃孵育5分鐘。然后加入4×10-8M的FMLP刺激中性細(xì)胞，并通過在Thermomax微滴板分光光度計(jì)上監(jiān)測OD550測量作為過氧化物歧化酶的過氧化物的生成，該歧化酶能抑制細(xì)胞素C的還原。起始速率用Softmax動力學(xué)計(jì)算程序計(jì)算。各空白孔含有200單位的過氧化歧化酶。
過氧化物生成的抑制作用由下式計(jì)算[1-((Rx-Rb))]((Ro-Rb))·100]]>Rx=含本發(fā)明化合物的孔中的速率Ro=對照孔的速率Rb=含過氧化物歧化酶的空白孔的速率本發(fā)明化合物的IC50值范圍為0.07μM-10μM。
3．PMN環(huán)AMP濃度的測定將本發(fā)明化合物和3.7×106PMN一起在37℃孵育5分鐘，然后加入4×10-8M的FMLP,6分鐘后加入于96％v/v乙醇中的1％v/v的濃鹽酸，其中含有0.1mM EDTA，使蛋白質(zhì)沉淀，離心后使乙醇萃取物在氮?dú)庵姓舭l(fā)至干，再懸浮于含4mM EDTA的50mM Tris/HCl(pH 7.4)之中，用Amersham International plc.提供的環(huán)ANP結(jié)合蛋白質(zhì)試樣測定萃取物中環(huán)AMP濃度，用含對照孵育載體中的百分?jǐn)?shù)表示環(huán)AMP濃度。
在1μM化合物時化合物使cAMP水平的提高為對照值的0-400％。
4．PMN磷酸二酯酶試驗(yàn)按Souness和Scott(Biochem.J.,291,389-395,1993)所述由人體PMN基本如組織勻漿進(jìn)行。按作者所述把組織勻漿用釩酸鈉/谷胱甘肽處理，以表示出在磷酸二酯酶上的descrete立體定向位置。本發(fā)明化合物的IC50值范圍為0.001μM至10μM。
5．人體血小板磷酸二酯酶試驗(yàn)除了勻漿是如上文所述用釩酸鹽谷胱甘肽處理以外，基本上按Schmidt等人(Biochem.Pharmacol.,42,153-162,1991)所述的方法進(jìn)行。本發(fā)明化合物的IC50值大于100μM。
6．對大鼠腦膜的rolipram結(jié)合位置的結(jié)合試驗(yàn)本試驗(yàn)基本按Schneider等人(Eur.J.Pharmacol.,127,105-115,1986)所述的方法進(jìn)行。本發(fā)明化合物的IC50值范圍0.01-10μM。
7．人體單核細(xì)胞的制備由正常供體身上取血，用密度離心從外周血液中分離出單核細(xì)胞，接著離心沖洗。
8．內(nèi)毒素誘導(dǎo)的TNF釋放用LPS(2μgml-1)刺激單核細(xì)胞(1×106mL-1)，和不同濃度(10-4至10μgml-1)的化合物一起孵育，把化合物溶于DMSO/介質(zhì)(2％v/v)。細(xì)胞在RPMI-1640培養(yǎng)基谷氨酰胺/FCS補(bǔ)給培養(yǎng)基中于37℃下，在含5％CO2的加濕空氣中孵育，18-24小時后用人體TNF特異ELISA(medgenix)測定上清液中的TNF。對照組是沒有刺激的和不含化合物的LPS刺激的單核細(xì)胞。實(shí)施例2、13和16化合物誘導(dǎo)了人體單核細(xì)胞中LPS產(chǎn)生的TNF活性。
9．內(nèi)毒素誘導(dǎo)的小鼠體克致死率使B6D2F 1小鼠(n=10)用半乳糖胺(600mg/kg)致敏，用LPS(0.01μg/每只小鼠)觸發(fā)小鼠體克和死亡。在施用LPS 1小時以前靜脈給藥本發(fā)明化合物，對照組是用LPS作用于小鼠而不用化合物，在用LPS 8至24小時后小鼠死亡，實(shí)施例2、13和16化合物在劑量為3-30mg/kg時內(nèi)毒素引起的死亡減少大約70％至100％。
半乳糖胺/LPS引起的死亡減少。
10．人體單核細(xì)胞的刺激作用和細(xì)胞因子水平的測定在試驗(yàn)化合物存在下用100ng/ml LPS、0.8mg/ml ZymC3b或10ng/ml IL-1β刺激人體單核細(xì)胞，最終DMSO濃度保持在0.1％v/v。37℃下，于含5％CO2的加濕空氣中將細(xì)胞孵育過夜，取上清液貯于-70℃。用A6抗-TNF單克隆抗體作為初級抗體由ELISA測定TNFα濃度，二級抗體是多克隆抗-TNFα抗體IP300(Genzyme)，以及測定抗體是多克隆抗-rabbit IgG堿性磷酸酶結(jié)合體(Sigma)。IL-10由ELISA(Biosource)測定。實(shí)施例2化合物能抑制LPS和IL-1β誘導(dǎo)的TNFα生成，IC50值為1-2μM，而在化合物濃度10μM時，ZymC3b誘導(dǎo)的TNFα生成能抑制大約50％。實(shí)施例2還能引起IL-10的釋放，本身不刺激IL-10的生成，在10μM IL-10的生成大約增加3-4倍。
新的活性化合物可按常規(guī)方法制成常用劑型，例如片劑、包復(fù)片劑、丸劑、粒劑、氣霧劑、糖漿、乳劑、懸浮劑和溶液，制備中可使用惰性、無毒、藥學(xué)上可接受的賦形劑或溶劑。與此有關(guān)的是，在各種情況下，治療活性化合物的濃度大約是混合物總重量的0.5至90％，即其含量為要足以達(dá)到預(yù)定的劑量范圍。
制劑可以，例如把活性化合物和溶劑和/或賦形劑摻合，適當(dāng)?shù)乜墒褂萌榛瘎┖?或分散劑，而當(dāng)用水作稀釋劑的情況下，如需要可以使用例如有機(jī)溶劑作輔助劑。
可用常規(guī)方式給藥，優(yōu)選口服或腸道外給藥，特別是經(jīng)舌或靜脈內(nèi)用藥。
在腸道外給藥的情況下，活性化合物溶液可使用適當(dāng)?shù)囊后w載體。
通常要達(dá)到有效的治療效果在靜脈用藥時給藥量最好是大約0.001至10mg/kg，優(yōu)選約0.01至5mg/kg體重，口服用藥時劑量是大約為0.01至25mg/kg，優(yōu)選0.1至10mg/kg體重。
盡管如此，也有必要主要依據(jù)下述因素改變上述劑量體重或施甩方法，施藥者的個體狀態(tài)、藥劑的形式和給藥的時間或間隔，因此在某些情況下可能用比上述最小劑量更少的量就足夠了，而在某些情況下必須要超過所述上限的量。在用藥量相對較大的情況下，最好在每日用藥期內(nèi)把它們分成數(shù)個單個劑量。溶劑Ⅰ石油醚∶乙酸乙酯1∶1Ⅱ石油醚∶乙酸乙酯5∶1Ⅲ石油醚∶乙酸乙酯5∶2
Ⅳ乙酸乙酯Ⅴ二氯甲烷∶甲醇5∶1Ⅵ二氯甲烷Ⅶ環(huán)己烷∶乙酸乙酯3∶1Ⅷ二氯甲烷∶甲醇50∶1起始化合物實(shí)施例Ⅰ2-羥基-4-甲氧基苯 腈 把2-羥基-4-甲氧基苯甲醛(55g,0.36mol)、鹽酸羥胺(30g,0.43mol)和甲酸鈉(34g,0.5mol)在甲酸(200ml,0.43mol)中回流1.25小時，然后，在攪拌下30分鐘內(nèi)在冰浴上使得到的溶液快速冷卻，得到的沉淀經(jīng)過濾分離和用水充分洗滌，在真空干燥器中干燥后得到標(biāo)題化合物(45g,0.3mol，產(chǎn)率84％)，為紅磚色固體，mp 169-171℃,Rf(EtOAc)0.43。實(shí)施例Ⅱ(3-氨基-6-甲氧基苯并呋喃-2-基)-(3-硝基苯基)甲酮
把等當(dāng)量的2-羥基-4-甲氧基苯腈(5g,33.5mmol)和ω-溴代-3-硝基乙酰苯(8.2g,33.5mmol)溶于30ml DMF并加入4.6ml三乙胺，混合物于75℃加熱90分鐘。用水使其驟冷，用二氯甲烷萃取三次，真空蒸發(fā)溶劑，殘余物干燥過夜。粗產(chǎn)品在150mg鈉于50ml乙醇的混合物中加熱回流90分鐘，冷卻至室溫后，蒸出溶劑，把殘余物溶于水并用乙酸乙酯萃取三次，用Na2SO4干燥有機(jī)層，真空濃縮，殘余物用色譜法(硅膠60)進(jìn)一步純化。產(chǎn)率9.6g(92％)Rf 0.18(Ⅲ)mp 214℃按類似于實(shí)施例Ⅰ的方法制備表Ⅰ-Ⅴ中的化合物。
表Ⅰ
表Ⅰ(續(xù))
表Ⅰ(續(xù))
表Ⅰ(續(xù))
表Ⅰ(續(xù))
表Ⅰ(續(xù))
表Ⅱ
表Ⅱ(續(xù))
表Ⅲ
表Ⅲ(續(xù))
表Ⅲ(續(xù))
表Ⅳ
表Ⅳ(續(xù))
表Ⅳ(續(xù))
表Ⅴ
表Ⅴ(續(xù))
表Ⅴ(續(xù)) 制備實(shí)施例實(shí)施例1N-(3-(6-甲氧基-2-(4′-甲基苯甲酰基)苯并呋喃基)脲 把1g(3.55mmol)實(shí)施例Ⅱ化合物溶于二氯甲烷(20ml)，冷卻至0℃，在30分鐘內(nèi)向其中滴加氯代磺酰基異氰酸酯(0.55g,3.99mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液，之后使反應(yīng)物回至室溫并再攪拌4小時。加水(20ml)，反應(yīng)物攪拌過夜。真空去除二氯甲烷，把殘余物溶于乙酸乙酯，甩鹽水洗滌，分離，用MgSO4干燥。將蒸發(fā)后得到的固體用戊烷研制得到標(biāo)題化合物(1g,3.1mmol，產(chǎn)率87％)，為黃色固體，mp 258-260℃,Rf(CH3OH∶CH2Cl2,1∶1)0.82。
用類似于實(shí)施例1的方法制備表1所列化合物。
表1
表1(續(xù))
表1(續(xù)) 實(shí)施例21N-苯甲?；?N′-(3-(2-(2′,4′-二氯苯甲?；?-6-甲氧基苯并呋喃基)硫脲 將1.35g(4mmol)實(shí)施例Ⅳ化合物和苯甲?；惲蚯杷狨?720mg,4.4mmol)于丙酮(20ml)中回流24小時，在此之后使反應(yīng)冷卻并在攪拌下傾入冰水中。沉淀物經(jīng)過濾分離和用水洗滌，在干燥器中真空干燥后分離出標(biāo)題化合物(1.6g,3.3mmol，產(chǎn)率84％)，為黃色固體，mp 100-102℃,Rf 0.67(Ⅳ)。
按類似于實(shí)施例1的方法制備表2-6所列化合物。
表2
表3
表3(續(xù))
表3(續(xù))
表4
表4(續(xù))
表4(續(xù))
表5
表6
表6(續(xù))
表6(續(xù))
表6(續(xù))
權(quán)利要求
1．含有至少一種通式(Ⅰ)的N-(3-苯并呋喃基)脲衍生物以及可藥用的稀釋劑的組合物的制備方法，其特征在于將N-(3-苯并呋喃基)脲衍生物與常規(guī)輔劑一起配成合適的施用劑型， 其中A和D相同或不同，表示氫、各具有至多6個碳原子的直鏈或支鏈?；蛲檠豸驶?，或表示具有至多6個碳原子的直鏈或支鏈烷基，任選被羧基或具有至多6個碳原子的烷氧羰基、苯氧基或苯甲?；〈?，或表示鹵素、羧基、氰基、硝基、三氟甲基、三氟甲氧基、或式-OR5、-S(O)aR6、-(O-CH2-CO)b-NR7R8、-CO-NR9R10、-SO2-NR11R12或-NH-SO2R13，其中R5、R5、R8、R9、R10、R11和R12相同或不同，表示氫、具有3-6個碳原子的環(huán)烷基、芐基或含有至多三個選自N、S和O雜原子的5-7元飽和或不飽和的雜環(huán)、所述的基團(tuán)可與苯基稠合并且任選被選自下述的相同或不同的取代基基所取代鹵素、氰基、硝基或具有至多6個碳原子的直鏈或支鏈烷基或表示各具有至多8個碳原子的直鏈或支鏈烷基、鏈烯基或?；?，或表示任選被選自下述基團(tuán)的相同或不同的取代基所單取代或雙取代的苯基硝基、鹵素、羧基或具有至多6個碳原子的直鏈或支鏈烷氧羰基，或R5表示羥基保護(hù)基或具有至多6個碳原子的直鏈或支鏈烷氧羰基，或表示具有至多8個碳原子的直鏈或支鏈烷基，它可被羧基或羥基、具有至多6個碳原子的直鏈或支鏈酰基或烷氧羰基、苯氧基、苯甲?；〈虮缓兄炼嗳齻€選自N、S和/或O的雜原子的5-7元不飽和的雜環(huán)取代，所述的雜環(huán)可任選被鹵素、氰基、硝基或具有至多6個碳原子的直鏈或支鏈烷基所取代，或R5表示式SO2R14基團(tuán)，其中R14表示苯基、三氟甲基或具有至多4個碳原子的直鏈或支鏈烷基，a表示0、1或2，b表示0或1，R7表示氫或具有至多4個碳原子的直鏈或支鏈烷基，R13表示具有6-10個碳原子芳基、三氟甲基或具有至多6個碳原子的直鏈或支鏈烷基，R1表示氫、具有至多6個碳原子的直鏈或支鏈烷基、氨基保護(hù)基或基團(tuán)-CO-R15，其中R15表示羥基、具有至多6個碳原子的直鏈或支鏈烷氧羰基、具有3-6個碳原子的環(huán)烷基、吡啶基、吡咯烷基、或具有至多8個碳原子的直鏈或支鏈烷基，任選被鹵素、羧基或具有至多6個碳原子的直鏈或支鏈烷氧羰基所取代，或表示苯基，任選被羥基、羧基或各具有至多6個碳原子的直鏈或支鏈烷氧基或烷氧羰基所取代，L表示氧原子或硫原子，R2和R3相同或不同，表示氫、具有至多6個碳原子的環(huán)烷基、各具有至多8個碳原子的直鏈或支鏈烷基、烷氧羰基或鏈烯基，或表示苯甲?；?、具有6-10個碳原子的芳基，它任選被選自下述基團(tuán)的相同或不同的取代基所單取代至三取代；鹵素、氰基、硝基、羧基或各具有至多6個碳原子的直鏈或支鏈烷基、烷氧基、烷氧羰基或?；?，或R2和R3與氮原子一起形成任選含有氧原子的5-至7-元飽和雜環(huán)，和R4表示任選被選自下述基團(tuán)的相同或不同的取代基所單取代至三取代的苯基羥基、苯硫基、具有3-6個碳原子的環(huán)烷基、鹵素、硝基、四唑基、噻唑基、呋喃基、吡啶基、三氟甲基、二氟甲基、氰基、羧基或各具有至多8個碳原子的直鏈或支鏈烷基、烷氧基、烷氧羰基或?；虮硎救芜x被苯基所取代的苯基，前者又可被鹵素所單取代或雙取代，或者任選被基團(tuán)-NR16R17,-SR18,-SO2R19或-O-SO2-R20所取代，其中R16和R17的定義如上述R7和R8的定義，并且與后者相同或不同，或R18表示氫，和R17表示具有至多6個碳原子的直鏈或支鏈酰基，R18表示氫或具有至多6個碳原子的直鏈或支鏈烷基，R19和R20相同或不同，表示具有至多6個碳原子的直鏈或支鏈烷基，芐基或苯基。
全文摘要
公開含有通式(Ⅰ)的N－(3－苯并呋喃基)脲衍生物以及可藥用的稀釋劑的組合物的制備方法,其特征在于將N－(3－苯并呋喃基)脲衍生物與常規(guī)輔劑一起配成合適的施用劑型,式(Ⅰ)為:其中A、D、R
文檔編號C07D307/82GK1313284SQ0110339
公開日2001年9月19日 申請日期1996年3月6日 優(yōu)先權(quán)日1995年3月6日
發(fā)明者G·布勞力希, R·費(fèi)希爾, M·艾薩耶德, R·亨寧, M·施佩策爾, K·-H·施列馬, U·尼施, S·圖霍普, G·施特頓, T·S·阿伯拉姆, M·F·費(fèi)茲杰拉德 申請人:拜爾公司