喹啉-磺酰胺類化合物作為Th17細胞分化抑制劑的應用
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明設及化合物的新應用，特別設及哇嘟-橫酷胺類化合物作為化17細胞分化 抑制劑的應用。
【背景技術】
[0002] 自免疫疾病大約影響了 5%的人口，包括牛皮癖，多發(fā)性硬發(fā)癥，風濕性關節(jié)炎，哮 喘和炎癥性腸道病在內(nèi)的大約70多種人類疾病都和自免疫失調(diào)有關（Gocxlnowetal.， 2005)。目前自免疫疾病的治療主要依賴于一些非選擇性的免疫抑制劑，其療效有限且副作 用大，因而在臨床中還沒有非常特效的治療自免疫疾病的藥物。因此開發(fā)新型的高療效低 副作用的自免疫藥物成為一種急切的臨床需要。最新研究表明一種新的T細胞亞群化17細 胞和人類自免疫疾病和相關動物模型的發(fā)生相關化inden2006;KAlyetal.，2006)。 在風濕性關節(jié)炎、牛皮癖、哮喘、炎癥性腸炎等自免疫疾病中，化17細胞的特征細胞因子 IL17表達上調(diào)，而抑制IL17表達和化17細胞形成可W減輕自免疫疾病的發(fā)生或臨床嚴重 程度度owmanetal.，2006;iaklyetal.，2006)?，F(xiàn)有研究表明化17細胞的分化形成受 到轉(zhuǎn)錄因子R0R丫t的控制，而R0R丫t基因敲除的小鼠中化17細胞的分化能力下降，數(shù)量 減少，同時誘導發(fā)生的小鼠EAE自免疫疾病概率和臨床打分指標均有顯著的降低（Ivanov etal.，2006)。運意味著R0R丫t的功能抑制劑可W做為開發(fā)化17介導的自免疫疾病治 療藥物的定向祀標。
[000引 R0R丫t是類固醇類核受體家族成員，蛋白分子中包括一個保守的DNA結合域和有 12個螺旋構成的配體結合域，而配體結合域是結合配體、核定位和二聚體形成的重要區(qū)域。 類固醇類受體共激活分子SRCs能夠通過結合配體結構域的AF2區(qū)域來解聚轉(zhuǎn)錄抑制復合 物，招募轉(zhuǎn)錄激活分子，啟動相關基因轉(zhuǎn)錄（GlassandRosenfeld, 2000)。目前R0R丫t 的天然配體還沒有找到，但最近兩個研究找到了人工合成分子地高辛及其衍生物化uhet al.，20011;Rijita-Satoetal.，2011)和SRlOOUSoltetal.，2011)能夠特異性 的結合到ROR丫t的配體結構域，抑制ROR丫t的功能并降低化17細胞的分化能力，減弱小 鼠自免疫疾病EAE的臨床癥狀。然而地高辛及其衍生物具有很強的毒性（Paulaetal.， 2005)，而SRIOOI分子盡管在體外能夠有效抑制化17細胞分化，但在體內(nèi)實驗中即使在高 濃度給藥下（40mg/kg)，也只能略微減輕EAE的臨床癥狀。此外，SR1001能夠同其他的RORs 作用，選擇性較差（Soltetal.，2011)。運些研究一方面表明抑制R0R丫t的功能來治療 自免疫疾病是一個可行的方案，但目前還沒有找到一個理想的祀標藥物。因此尋找高效低 毒且有較強特異性的R0R丫t功能抑制劑將是開發(fā)化17介導的自免疫疾病藥物的一個重要 方向。
[0004] 參考文獻： BowmanEP,Chacker i anAA,Cua DJ. Rationale and safety of anti-interleukin-23 and anti-interleukin-17Atherapy. Curr Opin Infect Dis 2006; 19: 245-52. Fujita-Sato S, Ito S, Isobe T, Ohyama T, Wakabayashi K, Morishita K, Ando 0，Isono F. Structural basis of digoxin that antagonizes民0民yt receptor activity and suppresses Thl7 cell differentiation and interleukin (IL)-17 production. J Biol Chem 2011; 286: 31409-17. Glass, C. K.，and民osenfeld, M. G. (2000). The coregulator exchange in transcriptional functions of nuclear receptors. Genes Dev 14，121-141 Goodnow CC, Sprent J, Fazekas de St Groth B, Vinuesa CG. Cellular and genetic mechanisms of self tolerance and autoimmunity. Nature 2005; 435: 590-7. Huh JR, Leung MWL, Huang PX, Ryan DA, Krout MR, Malapaka RRV, Qiow J, Manel N, Ciofani M, Kim SV, Cuesta A, Santori F民，Lafaille JJ, Xu HE, Gin DY,民astinejad F, Littman DR. Digoxin and its derivatives suppress TH17 cell differentiation by antagonizing民0民yt activity. Nature 2011; 472: 486-90. Ivanov II，McKenzie BS, Zhou L, Tadokoro CE, Lepelley A, Lafaille JJ, Cua DJ, Littman DR. The orphan nuclear receptor民0民gammat directs the differentiation program of proinflammatory IL-17+T helper cells. Cell 2006; 126: 1121-33. Kidly K, Liu L, Na S, Sedgwick JD. The IL-23/Th(17) axis: therapeutic targets for autoimmune inf lamination. Cur r Op in Immunol 2006; 18: 670-5.. Paula S, Tabet MR, Ball WJJ. Interactions between cardiac glycosides and sodium/potassium-ATPase: three-dimentional structure-activity relationship models for ligand binding to the E2-Pi form of the enzyme versus activity inhibition. Biochemistry 2005; 44: 498-510. Solt LA, Kumar N, Nuhant P, Wang YJ, Lauer JL, Liu J, Istrate MA, Kamenecka M, Roush WR, Vidovi R, Sch rer SC, Xu J"H, Wagoner G, Drew PD, Griffin PR, Burris TP. Suppression of Thl7 different!過tion過nd過utoimmunity by過synthetic RO民ligand. Na化re 2011; 472: 491-4。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供哇嘟-橫酷胺類化合物作為化17細胞分化抑制劑的應用。
[0006] 發(fā)明人通過基于轉(zhuǎn)錄因子活性的巧光素酶活性篩選系統(tǒng)，發(fā)現(xiàn)哇嘟-橫酷胺類化 合物具有抑制化17細胞分化的關鍵轉(zhuǎn)錄因子R0R丫t的能力，抑制能力EC50為0. 391yM， 在利用體外化17細胞分化實驗驗證運些化合物具有抑制化17分化的的功能，包括能夠顯 著降低R0R丫t的轉(zhuǎn)錄表達，能夠抑制化17的效應分子IL17A的轉(zhuǎn)錄表達，IL17A細胞因子 在培養(yǎng)物中的分泌水平也得到明顯抑制，哇嘟-橫酷胺類化合物及其鹽酸鹽衍生物有望開 發(fā)成為治療自免疫疾病，特別是牛皮癖，多發(fā)性硬發(fā)癥，系統(tǒng)性紅斑狼瘡，風濕性關節(jié)炎，哮 喘或炎癥性腸道病的藥物。
[0007] 上述哇嘟-橫酷胺類化合物的結構式為
，其中X為面族元素。
【附圖說明】
[0008] 圖1是不同濃度的哇嘟-橫酷胺類化合物與相對巧光強度之間的關系圖； 圖2是哇嘟-橫酷胺類化合物對轉(zhuǎn)錄因子R0R丫tmRNA表達量的影響結果； 圖3是哇嘟-橫酷胺類化合物對IL17A細胞因子分泌量的影響圖。

【具體實施方式】
[0009] 在W下實驗中，所述哇嘟-橫酷胺類化合物的結構式為 (式I)，當C1元素換成其他面族元素氣（F)、漠（Br)或艦（I)時，也具有與C1相似的效果， 在此不依依給出實驗結果。
[0010] 基于轉(zhuǎn)錄因子活性的巧光素酶活性篩選系統(tǒng)可W按現(xiàn)有方法構建?；虬聪率龅姆?法構建得到： 材料： 細胞系化rkat和293T為本實驗室保存；D冊a細菌菌株由北京中科院遺傳所馬潤林 教授饋贈；限制性內(nèi)切酶購自美國fermentas公司；DNA連接酶購自美國的肥B