一種水牛角提取液的制備方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明屬于中藥有效成分提取方法【技術(shù)領(lǐng)域】，即水牛角提取液的制備方法。是將水牛角表面刷洗干凈后拋片、冷凍粉碎，然后投入膠體磨進(jìn)行濕法粉碎，研磨液加入人工胃液提取和人工腸液提取，每步后均加熱進(jìn)行酶滅活，合并提取液，調(diào)PH值，微孔濾膜過(guò)濾、超濾除去加入蛋白酶及大分子雜質(zhì)的，收集后濃縮成水牛角提取液或噴霧干燥得水牛角提取物。比常規(guī)工藝大大提高了浸膏率，總氨基酸得率。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種水牛角提取液的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于中藥有效成分提取方法【技術(shù)領(lǐng)域】，即水牛角提取液的制備方法。具體設(shè)計(jì)一種先進(jìn)的動(dòng)物角類(lèi)藥物的提取方法，利用冷凍粉碎及膠體磨進(jìn)行超微粉碎，提高了提取面積，增加了提取收率，充分的利用藥材資源，同時(shí)模擬藥物進(jìn)入胃腸后的消化吸收環(huán)境而進(jìn)行的水解，并通過(guò)膜分離技術(shù)進(jìn)行純化的，進(jìn)行難以通過(guò)水煎方式進(jìn)行提取的角類(lèi)藥材新的提取方法。
【背景技術(shù)】
[0002]水牛角為牛科動(dòng)物水牛及/AaJw1S bubal is Linnaeus的角，收載于《中國(guó)藥典》2010版一部77頁(yè)，具有清熱涼血、解毒定驚的功效，主要用于溫病高熱，神昏譫語(yǔ)，發(fā)斑發(fā)疹，吐血、驚風(fēng)、癲狂等證。為中藥犀角的替代品，是常用中藥，鎊片或搓成粗粉15_30g，先煎3小時(shí)以上使用?，F(xiàn)代化學(xué)成分研究表明，水牛角含多種氨基酸、膚類(lèi)、蛋白質(zhì)、角纖維、當(dāng)醇類(lèi)、肌類(lèi)、強(qiáng)心苷類(lèi)等化學(xué)成分。藥理作用研究結(jié)果證明水牛角水煎液有抗感染、縮短凝血時(shí)間以及鎮(zhèn)靜等作用，但由于角類(lèi)藥材質(zhì)地堅(jiān)實(shí)，提取比較困難，所以傳統(tǒng)角類(lèi)藥物均挫末用藥汁兌服，但由于水牛角作為犀角的替代品用量很大，所以人們經(jīng)常采用水提、酸水解、堿水解、酸堿水解、酶解等方式進(jìn)行提取，由于水牛角質(zhì)地致密，提取率非常低，同時(shí)，由于不同的酶，酶切位點(diǎn)各異，酶的選擇影響了水解解物中肽段的分子量大小及氨基酸組成，從而導(dǎo)致的酶解產(chǎn)物生物活性的差異.總提取的成分與機(jī)體內(nèi)自然吸收的成分存在差異性，有的工藝還有鋇殘留。
[0003]冷凍粉碎技術(shù)利用了物料在低溫狀態(tài)下的“低溫脆性”，即物料隨著溫度的降低，其硬度和脆性增加， 而塑性及韌性降低，在一定溫度下，用一個(gè)很小的力就能將其粉碎。冷凍粉碎技術(shù)可獲得更細(xì)的粉末，使物料的流動(dòng)性得到較大改善，等條件時(shí)冷凍粉碎的處理能力顯著高于常溫粉碎并可以保持藥材的有效成分。
[0004]膠體磨勻漿技術(shù)，是一種比較新的濕法粉碎技術(shù)，通過(guò)膠體磨勻漿，可以把難粉碎的藥材進(jìn)行粉碎，提高了不易被溶劑穿透而進(jìn)行提取的藥材的提取面積。
[0005]膜分離技術(shù)因操作條件溫和，能耗又低，被認(rèn)為是分離小肽及氨基酸體系的理想方法。以往方法，提取效果差，收率低。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]為了改進(jìn)水牛角的提取方法，更好的提高水牛角藥材的利用率，更好的利用水牛角藥材，得到純度較高、更接近機(jī)體的吸收的提取液成分，提供了水牛角的提取方法。
[0007]采用冷凍粉碎和膠體磨濕法粉碎相結(jié)合，配合仿胃腸道環(huán)境的仿生態(tài)提取技術(shù)，結(jié)合先進(jìn)的膜分離技術(shù)，提取水牛角中的活性成分，是一個(gè)低風(fēng)險(xiǎn)、高產(chǎn)出的項(xiàng)目，具有很高經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益的方式。可以改善節(jié)約藥材資源，更好的提取和保證水牛角有效成分，增加含水牛角產(chǎn)品的價(jià)值和市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力，為中藥角類(lèi)藥物的新產(chǎn)品開(kāi)發(fā)開(kāi)辟了新的道路。[0008]本發(fā)明的目的是提供一種水牛角提取液的制備方法，其是將水牛角表面刷洗干凈后拋片、冷凍粉碎，然后投入膠體磨進(jìn)行濕法粉碎，研磨液加入人工胃液提取(酸及胃蛋白酶水解)和人工腸液提取(胰蛋白酶、糜蛋白酶水解)，每步后均加熱進(jìn)行酶滅活，合并提取液，調(diào)PH值，微孔濾膜過(guò)濾、超濾(切割相對(duì)分子量分子量20000)除去加入蛋白酶及大分子雜質(zhì)的，收集后濃縮成水牛角提取液或噴霧干燥得水牛角提取物。
[0009]一種水牛角提取液的制備方法，其特征在于步驟如下:
1.將水牛角刷凈表面，電刨薄片后放入液氮中冷凍后進(jìn)行粉碎。
[0010]2.將冷凍粉碎得水牛角粉，按料液比1:1-1:10投入膠體磨進(jìn)行濕法粉碎，得研磨液。
[0011]3.將上述研磨液，加熱至沸騰，沸騰后微沸狀態(tài)繼續(xù)提取2_6h。然后分離提取液，水牛角繼續(xù)加水(料液比1:1-1:10)重復(fù)上述步驟提取2-4次，過(guò)濾后合并提取液濃縮后備用；水牛角藥洛備用。
[0012]4.將步驟3水提后的水牛角藥渣，加入人工胃液進(jìn)行水解(料液比1:1-1:10)，溫度39°C，水解4-6小時(shí)，加熱至85°C滅活蛋白酶，過(guò)濾后上清液濃縮備用，水牛角藥渣備用；所述人工胃液按《中國(guó)藥典》附錄配制:稀鹽酸16.4ml，加水800ml與胃蛋白酶10g，搖勻后，加水衡釋至100ml，用量同比例放大；采用人工胃液進(jìn)行水解，與水牛角粉末服用后進(jìn)入機(jī)體在胃中的pH值、酶的種類(lèi)和濃度等消化條件一致，通過(guò)這種仿生方法，在體外得到與體內(nèi)一致的水解物，避免以往酸堿酶水解法導(dǎo)致的過(guò)度水解或水解不到位，避免由于不同的酶，酶切位點(diǎn)各異，酶的選擇影響了水解解物中肽段的分子量大小及氨基酸組成，從而導(dǎo)致的酶解產(chǎn)物生物活性的差異。 [0013]5.將步驟4水牛角藥渣，加入人工腸液進(jìn)行水解(料液比1:1-1:10)，溫度39°C，水解8小時(shí)，加熱至85°C滅活蛋白酶，過(guò)濾后上清液濃縮備用；所述人工腸液按中國(guó)藥典附錄配制:取磷酸二氫鉀6.8g,加水500ml使溶解,用0.lmol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至6.8,取胰酶10g，加水量使溶解，將兩液混合后，加水稀釋至1000ml，用量同比例放大；采用人工腸液水解，與水牛角粉末服用后進(jìn)入機(jī)體在腸道中的PH值、酶的種類(lèi)和濃度等消化條件一致,通過(guò)這種仿生方法,在體外得到與體內(nèi)一致的水解物,避免以往酸堿酶水解法導(dǎo)致的過(guò)度水解或水解不到位，同時(shí)避免由于不同的酶，酶切位點(diǎn)各異，酶的選擇影響了水解解物中肽段的分子量大小及氨基酸組成，從而導(dǎo)致的酶解產(chǎn)物生物活性的差異。
[0014]6.將步驟3、4、5所得的濃縮液合并后濃縮，進(jìn)行透析除鹽至透析液(蒸餾水)中電導(dǎo)率與配置人工胃液和腸液的蒸餾水相近，除鹽后的提取液過(guò)微孔濾膜后進(jìn)行超濾，切割相對(duì)分子量分子量15000 - 20000 (截留至此分子量的原因是水解得到氨基酸和小肽的分子量均低于此分子量，同時(shí)，由于加入的人工胃液和人工腸液中的消化酶的分子量均大于20000，未被水解的大分子雜質(zhì)分子量也大于20000)除去加入酶及大分子雜質(zhì)的，收集后濃縮成水牛角提取液；超濾操作條件溫和不破壞水解物的結(jié)構(gòu)，是分離小肽及氨基酸體系的理想方法。
[0015]7.濃縮液噴霧干燥，稱(chēng)量，計(jì)算總提取物收率。
優(yōu)選，水牛角提取液的制備方法，其步驟如下:
(1)將水牛角刷凈表面，電刨薄片后放入液氮中冷凍后進(jìn)行粉碎；
(2)將冷凍粉碎得水牛角粉，按料液比1:10投入膠體磨進(jìn)行濕法粉碎，得研磨液；(3)將上述研磨液，加熱至沸騰，沸騰后微沸狀態(tài)繼續(xù)提取4h。然后分離提取液，水牛角繼續(xù)加水重復(fù)上述步驟提取4次，過(guò)濾后合并提取液濃縮后備用；水牛角藥渣備用；
(4)將步驟3水提后的水牛角藥渣，加入人工胃液進(jìn)行水解，溫度39°C，水解4小時(shí)，加熱至85°C滅活蛋白酶，過(guò)濾后上清液濃縮備用，水牛角藥渣備用；所述人工胃液按《中國(guó)藥典》附錄配制:稀鹽酸16.4ml，加水800ml與胃蛋白酶10g，搖勻后，加水衡釋至100ml，用量同比例放大；
(5)將步驟4水牛角藥渣，加入人工腸液進(jìn)行水解，溫度39°C，水解8小時(shí)，加熱至85°C滅活蛋白酶，過(guò)濾后上清液濃縮備用；所述人工腸液按中國(guó)藥典附錄配制:取磷酸二氫鉀
6.8g，加水500ml使溶解，用0.lmol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至6.8，取胰酶10g，加水量使溶解，將兩液混合后，加水稀釋至1000ml，用量同比例放大； (6)將步驟3、4、5所得的濃縮液合并后濃縮，進(jìn)行透析除鹽，除鹽后的提取液過(guò)微孔濾膜后進(jìn)行超濾，截取相對(duì)分子量分子量20000，收集后濃縮成水牛角提取液；
(7)濃縮液噴霧干燥，稱(chēng)量，計(jì)算總提取物收率。
[0016]本發(fā)明提取水牛角的特點(diǎn)在于:
1、冷凍粉碎配合膠體磨濕法粉碎獲得粒徑更小的水牛角粉末，提高提取面積，更有利于下一步的提取，采用人工胃液提取和人工腸液提取，微孔濾膜過(guò)濾，水牛角提取液收率比較高，總含氮量為水煎的30倍，酸堿水解的21倍，酶水解的20倍。最終比常規(guī)工藝大大提高了浸膏率，總氨基酸得率。
[0017]2、本發(fā)明采取仿生態(tài)的提取方法、條件溫和，胃蛋白酶的含量和酸度、胰蛋白酶的含量和PH值以及提取的溫度，均與正常水牛角粉末進(jìn)入機(jī)體后的消化環(huán)境一致，避免了由于不同的酶，酶切位點(diǎn)不通對(duì)水解解物中肽段的分子量大小及氨基酸組成的影響，得到的提取液與機(jī)體內(nèi)自然吸收的成分相似，所得成分狀態(tài)好、藥理活性好。
[0018]3、避免了酸堿分離工藝鋇的殘留，避免了鋇離子對(duì)心臟的毒性。
[0019]4、采取了先進(jìn)的膜分離技術(shù)，得到了更純的具有解熱抗炎活性的活性部位群。
[0020]5、.所得的提取液和機(jī)體正常吸收的成分及比例相似，更易于吸收產(chǎn)生療效。
[0021]6、實(shí)驗(yàn)工藝簡(jiǎn)單易操作，實(shí)驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定，可以適用于工業(yè)大生產(chǎn)。
【具體實(shí)施方式】
[0022]實(shí)施例1
水牛角提取液的制備方法:
1.取水牛角100g，刷凈表面，電刨薄片后放入液氮中冷凍后進(jìn)行粉碎。
[0023]2.將冷凍粉碎得水牛角粉，按料液比1:10投入膠體磨進(jìn)行濕法粉碎。得研磨液。
[0024]3.將上述研磨液，加熱至沸騰，沸騰后微沸狀態(tài)繼續(xù)提取4h。然后分離提取液，水牛角繼續(xù)加水重復(fù)上述步驟提取2次，合并提取液濃縮后備用，水牛角粉末備用。
[0025]4.將步驟3水提后的水牛角末(藥渣)，加入人工胃液(《中國(guó)藥典》附錄:稀鹽酸16.4ml，加水約800ml與胃蛋白酶10g，搖勻后，加水衡釋至100mL)進(jìn)行水解，溫度39°C，水解4小時(shí)，加熱至85°C滅活蛋白酶，過(guò)濾后上清液濃縮備用。水牛角粉末備用。
[0026]5.將步驟4水牛角粉末，加入人工腸液(《中國(guó)藥典》附錄:取磷酸二氫鉀6.8g，加水500ml使溶解，用0.lmol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH值至6.8，取胰酶10g，加水量使溶解，將兩液混合后，加水稀釋至1000ml)進(jìn)行水解，溫度39°C,水解8小時(shí),加熱至85°C滅活蛋白酶，過(guò)濾后上清液濃縮備用。
[0027]6.將3、4、5步驟所得的濃縮液合并后濃縮，進(jìn)行透析除鹽，除鹽后的提取液過(guò)微孔濾膜后進(jìn)行超濾，截留相對(duì)分子量分子量20000以下除去加入蛋白酶及大分子雜質(zhì)的，收集后濃縮成水牛角提取液。
[0028]7.濃縮，噴霧干燥，稱(chēng)量，計(jì)算總提取物收率。[0029]8.氨基酸含量測(cè)定精密稱(chēng)取各提取物IOmg,用蒸餾水配成10 mL，精密吸取0.5 mL置5 mL試管中，加水至2 mL,加茚三酮試劑0.5 mL,搖勻，置沸水浴中15 min,取出以流水冷卻，加正丙醇-水(I: I)混合液至刻度，搖勻，置I mL比色池中，于570nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，以丙氨酸溶液為標(biāo)準(zhǔn)溶液繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，計(jì)算總氨基酸含量。
[0030]計(jì)算總氨基酸含量。測(cè)得總提取物收率為25.25%，總氨基酸得率為18.98%。
[0031]附1:水牛角不同提取方法的比較研究
水牛角刷凈表面，刨成薄片后打成細(xì)粉，分別用以下方法進(jìn)行提取并測(cè)定總提取物重量及氨基酸(蛋白的含量)。
[0032]2.1醇提取法:稱(chēng)取50g水牛角細(xì)粉置于5000ml圓底燒瓶中，配制50%乙醇，第一次加入8倍量50%乙醇，即400ml于圓底燒瓶中，連接冷凝回流裝置，電熱套加熱至沸騰，調(diào)壓至微沸狀態(tài)，lh。過(guò)濾，第二次(同上)第三次(同上)。
[0033]濾液用減壓回收乙醇裝置，回收乙醇，剩余少量濾液置于已烘干至恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干。于105°C烘箱內(nèi)，干燥3h，置干燥器中冷卻0.5h,稱(chēng)重。計(jì)算總提取物收率。
[0034]2.2酸提取法:稱(chēng)取50g水牛角細(xì)粉置于5000ml圓底燒瓶中，配制4mol/L硫酸溶液400ml，加入圓底燒瓶。連接冷凝回流裝置，回流水解6h，放冷后，調(diào)整溶液體積至400ml。取出200ml用50% NaOH，調(diào)整至PH4，用抽濾機(jī)過(guò)濾，再用10% NaOH調(diào)整濾液至PH7，取50ml，用透析膜透析后，置于蒸發(fā)皿中，水浴鍋蒸干，于105°C烘箱內(nèi)，干燥3h，置干燥器中冷卻0.5h,稱(chēng)重。計(jì)算總提取物收率。
[0035]2.3堿提取法:稱(chēng)取水牛角細(xì)粉50g，置5000ml圓底燒瓶中，配制4mol/L的NaOH溶液500ml，加入圓底燒瓶中。連接冷凝回流裝置，回流水解6h，放冷后，調(diào)節(jié)溶液體積至650ml，取出325ml用4mol/L的硫酸溶液，調(diào)整到PH4，抽濾，濾液用10% NaOH溶液調(diào)整至PH7，取出50ml，用透析膜透析后，置于已恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，于105°C烘箱內(nèi)，干燥3h，置干燥器中冷卻0.5h，稱(chēng)重。計(jì)算總提取物收率。
[0036]2.4酸堿提取法:將酸水解液及堿水解溶液各取1/2量(即酸水解液200mL堿水解液325ml)混合，再加50 % NaOH調(diào)至PH4，過(guò)濾，濾液用10%Na0H調(diào)至PH7，取50ml，用透析膜透析后，置于蒸發(fā)皿中，水浴鍋蒸干，于105°C烘箱內(nèi)，干燥3h，置干燥器中冷卻
0.5h,稱(chēng)重。計(jì)算總提取物收率。
[0037]2.5酶水解法:稱(chēng)取50g水牛角+0.0125g胰酶+40ml緩沖液(PH7.5、酶底比1:80、料液比1:40)置震蕩培養(yǎng)箱中，421:，311，置烘箱中105°C滅酶15min取出過(guò)濾，濾液用透析膜透析后，置恒重蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，于105°C烘箱內(nèi)，干燥3h，置干燥器中冷卻0.5h,稱(chēng)重。計(jì)算總提取物收率。
[0038]2.6本發(fā)明提取方法:取水牛角50g，刷凈表面，電刨薄片后放入液氮中冷凍后進(jìn)行粉碎。將冷凍粉碎得水牛角粉，按料液比1:2投入膠體磨進(jìn)行濕法粉碎得研磨液。將研磨液，加熱至沸騰，沸騰后微沸狀態(tài)繼續(xù)提取4h。然后分離提取液，水牛角繼續(xù)加水重復(fù)上述步驟提取2次，合并提取液濃縮后備用，水牛角粉末備用。將步驟2水提后的水牛角末，加入人工胃液(《中國(guó)藥典》附錄:稀鹽酸16.4ml，加水約800ml與胃蛋白酶10g，搖勻后，加水衡釋至100ml)進(jìn)行水解，溫度39°C，水解4小時(shí)，加熱至85°C滅活蛋白酶，過(guò)濾后上清液濃縮備用。水牛角粉末備用。將步驟4水牛角粉末，加入人工腸液(《中國(guó)藥典》附錄:取磷酸二氫鉀6.8g，加水500ml使溶解，用0.lmol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH值至6.8，取胰酶10g，加水量使溶解，將兩液混合后，加水稀釋至1000ml)進(jìn)行水解，溫度39°C,水解8小時(shí),加熱至85°C滅活蛋白酶，過(guò)濾后上清液濃縮備用。將以上2步所得的濃縮液合并后濃縮，進(jìn)行透析除鹽，除鹽后的提取液過(guò)微孔濾膜后進(jìn)行超濾，截取相對(duì)分子量分子量20000以下除去加入的蛋白酶及大分子雜質(zhì)的，收集后濃縮成水牛角提取液。濃縮，噴霧干燥，稱(chēng)量，計(jì)算總提取物收率。進(jìn)行氨基酸分析。
[0039]截留的氨基酸成分分析:水牛角提取物中含有氨基酸為:甘氨酸(Gly)、絲氨酸(Ser)、天門(mén)冬氨酸(Asp)、胱氨酸(Cly)、丙氨酸(Ala)、蘇氨酸(Thr)、鳥(niǎo)氨酸(Orn)、谷氨酸(Glu)、Y-氨基丁酸(Y-Aba)、賴(lài)氨酸(Lys)、組氨酸(His)精氨酸(Arg)、脯氨酸(Pro)、纟顏氨酸(Val)、甲硫氨酸(Met)、酪氨酸(Tyr)、異亮氨酸(lie)、亮氨酸(Leu)、苯丙氨酸(Phe),蛋氨酸(Met)，其中酪氨酸，丙氨酸、頡氨酸的含量相對(duì)較高。
[0040]總氨基酸含量測(cè)定精密稱(chēng)取各提取物IOmg,用蒸餾水配成10 mL，精密吸取0.5mL置5 mL試管中，加水至2 mL,加茚三酮試劑0.5 mL，搖勻，置沸水浴中15 min,取出以流水冷卻，加正丙醇-水(I: I)混合液至刻度，搖勻，置I mL比色池中，于570 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，以丙氨酸溶液為標(biāo)準(zhǔn)溶液繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，計(jì)算總氨基酸含量。
[0041]實(shí)驗(yàn)結(jié)果
水提浸膏率為0.58%，總氨基酸得率為0.38%。醇提浸膏率為0.79%，總氨基酸得率為
0.61%。酸提浸膏率為0.97%，總氨基酸得率為0.76%。堿提浸膏0.29%，總氨基酸得率為
1.96%。酸堿提浸膏率為1.51%，總氨基酸得率為1.18%。酶提浸膏率為10.22%，總氨基酸得率為7.98%。本法提浸膏率為25.25%，總氨基酸得率為18.98%。明顯具有優(yōu)勢(shì)。
[0042]附2:水牛角不同提取方法解熱作用的比較研究
采用皮下酵母致熱法評(píng)價(jià)了水牛角不同提取方法的解熱作用。結(jié)果表明水牛角水提液、酸提水牛角、堿提液、酶解液均可降低酵母致熱大鼠體溫，具有明顯的解熱作用。但本發(fā)明的仿生態(tài)提取方法解熱最用最佳。
[0043]實(shí)驗(yàn)方法:
將選取的健康大鼠隨機(jī)分為8組，分別為空白對(duì)照組、阿司匹林陽(yáng)性對(duì)照組、水牛角水提液、酸提水牛角、堿提液、酸堿提取液、酶解液、仿生態(tài)提取液，皮下注射酵母誘導(dǎo)發(fā)熱，5小時(shí)后開(kāi)始給藥，空白組給予等容積生理鹽水，以各時(shí)間點(diǎn)的體溫變化值作組間比較，實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)以平均值土標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。結(jié)果見(jiàn)表1，表1結(jié)果表明水牛角仿生態(tài)解熱作用最好。
[0044] 表一水牛角不同提取方法解熱作用的比較研究(X土SD，n=10)
【權(quán)利要求】
1.一種水牛角提取液的制備方法，其特征在于步驟如下: (1)將水牛角刷凈表面，電刨薄片后放入液氮中冷凍后進(jìn)行粉碎； (2)將冷凍粉碎得水牛角粉，按料液比1:1-1:10投入膠體磨進(jìn)行濕法粉碎，得研磨液； (3)將上述研磨液，加熱至沸騰，沸騰后微沸狀態(tài)繼續(xù)提取2-6h，然后分離提取液，水牛角繼續(xù)加水重復(fù)上述步驟提取2-4次，過(guò)濾后合并提取液濃縮后備用；水牛角藥渣備用； (4)將步驟3水提后的水牛角藥渣，加入人工胃液進(jìn)行水解，溫度39°C，水解4-6小時(shí)，加熱至85°C滅活蛋白酶，過(guò)濾后上清液濃縮備用，水牛角藥渣備用；所述人工胃液按《中國(guó)藥典》附錄配制:稀鹽酸16.4ml，加水800ml與胃蛋白酶10g，搖勻后，加水衡釋至100ml，用量同比例放大； (5)將步驟4水牛角藥渣，加入人工腸液進(jìn)行水解，溫度39°C，水解8小時(shí)，加熱至85°C滅活蛋白酶，過(guò)濾后上清液濃縮備用；所述人工腸液按中國(guó)藥典附錄配制:取磷酸二氫鉀，6.8g，加水500ml使溶解，用0.lmol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至6.8，取胰酶10g，加水量使溶解，將兩液混合后，加水稀釋至1000ml，用量同比例放大； (6)將步驟3、4、5所得的濃縮液合并后濃縮，進(jìn)行透析除鹽，除鹽后的提取液過(guò)微孔濾膜后進(jìn)行超濾，截取相對(duì)分子量分子量15000 - 20000，收集后濃縮成水牛角提取液； (7)濃縮液噴霧干燥，稱(chēng)量，計(jì)算總提取物收率。
2.按照權(quán)利要求1所述的水牛角提取液的制備方法，其特征在于步驟如下: (1)將水牛角刷凈表面 ，電刨薄片后放入液氮中冷凍后進(jìn)行粉碎； (2)將冷凍粉碎得水牛角 粉，按料液比1:10投入膠體磨進(jìn)行濕法粉碎，得研磨液； (3)將上述研磨液，加熱至沸騰，沸騰后微沸狀態(tài)繼續(xù)提取4h，然后分離提取液，水牛角繼續(xù)加水重復(fù)上述步驟提取4次，過(guò)濾后合并提取液濃縮后備用；水牛角藥渣備用； (4)將步驟3水提后的水牛角藥渣，加入人工胃液進(jìn)行水解，溫度39°C，水解4小時(shí)，加熱至85°C滅活蛋白酶，過(guò)濾后上清液濃縮備用，水牛角藥渣備用；所述人工胃液按《中國(guó)藥典》附錄配制:稀鹽酸16.4ml，加水800ml與胃蛋白酶10g，搖勻后，加水衡釋至100mL，用量同比例放大； (5)將步驟4水牛角藥渣，加入人工腸液進(jìn)行水解，溫度39°C，水解8小時(shí)，加熱至85°C滅活蛋白酶，過(guò)濾后上清液濃縮備用；所述人工腸液按中國(guó)藥典附錄配制:取磷酸二氫鉀，6.8g，加水500ml使溶解，用0.lmol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至6.8，取胰酶10g，加水量使溶解，將兩液混合后，加水稀釋至1000ml，用量同比例放大； (6)將步驟3、4、5所得的濃縮液合并后濃縮，進(jìn)行透析除鹽，除鹽后的提取液過(guò)微孔濾膜后進(jìn)行超濾，截取相對(duì)分子量分子量20000，收集后濃縮成水牛角提取液； (7)濃縮液噴霧干燥，稱(chēng)量，計(jì)算總提取物收率。
【文檔編號(hào)】A61K35/32GK103860596SQ201410091505
【公開(kāi)日】2014年6月18日 申請(qǐng)日期:2014年3月13日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月13日
【發(fā)明者】朱志杰, 李麗靜 申請(qǐng)人:通化金馬藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司