專利名稱：取代 1h－吲哚－2－酮類化合物及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一類取代1H-吲哚-2-酮類化合物，具體涉及一類對(duì)表皮生長(zhǎng)因子酪氨酸激酶具有抑制作用的取代1H-吲哚-2-酮類化合物，本發(fā)明還涉及該類化合物的制備方法。
背景技術(shù)：
蛋白酪氨酸激酶(PTKs)的作用是將ATP的磷酸基轉(zhuǎn)移到功能蛋白特定酪氨酸殘基上，而此酪氨酸磷酸化過(guò)程能調(diào)控細(xì)胞的生長(zhǎng)，增殖和分化等過(guò)程。蛋白酪氨酸激酶的數(shù)量預(yù)計(jì)超過(guò)1000種，其中有100種的序列已經(jīng)被測(cè)定。蛋白酪氨酸激酶在腫瘤發(fā)生過(guò)程中起到十分重要的作用，已經(jīng)知道有一半以上的原癌基因表達(dá)具備PTK活性的蛋白，蛋白酪氨酸激酶在癌細(xì)胞增殖中的重要作用使它成為極具吸引力的癌癥治療靶標(biāo)。
蛋白酪氨酸激酶中研究最廣泛的是表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)，EGFR是一個(gè)170KDa的跨膜糖蛋白，其結(jié)構(gòu)包括膜外配體結(jié)合域、跨膜域、細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域(具備PTK活性)和一個(gè)C末端結(jié)構(gòu)域。表皮生長(zhǎng)因子受體家族包括四個(gè)成員EGFR(ErbB-1)，ErbB-2(HER2)，ErbB-3(HER3)，ErbB-4(HER4)。癌癥臨床研究表明該受體和它的配體與很多腫瘤都有重要聯(lián)系，60％的癌癥中出現(xiàn)EGFR的過(guò)量表達(dá)。這種異常表現(xiàn)有很多種形式，但每種異常都可導(dǎo)致過(guò)量的酪氨酸磷酸化信號(hào)傳入細(xì)胞。在細(xì)胞系統(tǒng)里，EGF或其它ErbB家族配體經(jīng)常引起不可控制的細(xì)胞繁殖，從而使細(xì)胞由正常形態(tài)轉(zhuǎn)化為典型的異常形態(tài)。膜外配體和EGFR結(jié)合，導(dǎo)致EGFR受體形成二聚體(同型二聚體或異型二聚)，激活酪氨酸激酶，將增殖信號(hào)傳入細(xì)胞。利用藥物作用于EGFR，可以中止其所介導(dǎo)的增殖信號(hào)，從而阻止癌細(xì)胞的過(guò)量繁殖。有兩類藥物可起到這樣的作用一類是單克隆抗體，另一類是小分子藥物。單克隆抗體藥物的作用方式是占據(jù)EGFR的膜外配體，使EGF等內(nèi)源配體無(wú)法與EGFR結(jié)合，從而阻止信號(hào)傳入細(xì)胞。小分子藥物則通過(guò)阻斷EGFR胞內(nèi)酪氨酸激酶催化區(qū)，阻止酪氨酸磷酸化，從而阻斷了細(xì)胞增殖信號(hào)。
小分子EGFR抑制劑包括天然抑制劑和有機(jī)合成化合物。天然抑制劑對(duì)EGFR有較好的抑制活性，但由于細(xì)胞毒性、酶選擇性(尤其激酶選擇性)和作用機(jī)理等方面的原因，目前尚未找到有藥物開發(fā)前途的天然抑制劑母核。天然抑制劑的研究主要是通過(guò)對(duì)天然產(chǎn)物結(jié)構(gòu)修飾尋找EGFR抑制劑(Alexander J.Bridges，Chem.Rev.2001，101，2541-2571)。
有機(jī)合成類小分子抑制劑按照與EGFR的作用方式可分為可逆抑制劑和不可逆抑制劑，按照母核類型可分為4-苯氨基(雜)環(huán)并嘧啶類和4-苯氨基-3-氰基喹啉類。4-苯氨基(雜)環(huán)并嘧啶類是研究最為廣泛的一類EGFR抑制劑，包括4-苯氨基喹唑啉類、4-苯氨基吡啶并嘧啶類和4-苯氨基吡咯并嘧啶類等，其中4-苯氨基喹唑啉類最具代表性。
Zeneca公司公開了一種抑制EGFR的IC50值達(dá)到20-40nM，并且有較好的選擇性的4-苯氨基喹唑啉類化合物(歐洲專利公開號(hào)0520722A，1992)；Fry報(bào)道了一種抑制EGFR的IC50值為29pM，并且是專一的EGFR抑制劑化合物，該化合物是可逆的ATP結(jié)合域競(jìng)爭(zhēng)抑制劑，在細(xì)胞水平實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)了很好的酶選擇性，抑制EGFR自磷酸化過(guò)程的IC50值為14nM，但具有溶解性差的缺點(diǎn)。(Fry，Science，1994，2651093-1095)。
是于2003年5月獲得FDA批準(zhǔn)上市的EGFR抑制劑，屬4-苯氨基喹唑啉類化合物，是可逆的ATP結(jié)合域結(jié)合的競(jìng)爭(zhēng)抑制劑，它在酶水平的EGFR抑制活性IC50值為23nM，對(duì)EGF刺激繁殖的口腔上皮鱗癌細(xì)胞KB的抑制作用的IC50值為80nM，具備高度的EGFR酶專一性，對(duì)其他激酶的抑制能力很低。研究表明Iressa有很好的生物利用度和極低的毒性，對(duì)非小細(xì)胞肺癌和乳腺癌也有明顯的治療作用。但部分研究顯示Iressa在聯(lián)合化療時(shí)并不能提高生存率或改善癥狀；另外，在日本的一年臨床實(shí)踐發(fā)現(xiàn)有小部分患者出現(xiàn)了嚴(yán)重的毒副反應(yīng)，如間質(zhì)性肺炎(ILD)，并有部分病人死亡。Iressa主要毒副反應(yīng)包括腹瀉，惡心，嘔吐，皮疹和痤瘡等，另外可能使服用抗凝藥物華法令的患者出現(xiàn)出血癥狀。
據(jù)報(bào)道，6，7-二甲氧基-4-苯氨基-3-氰基喹啉對(duì)EGFR酶水平抑制活性IC50值為190nM；以甲酰基在母核的3位上進(jìn)行取代，其抑制活性達(dá)到μM級(jí)，但這類抑制劑在酶選擇性方面稍差，它們還有c-SRC和MEK抑制活性。(Wang Y.D.，Miller K.，Boschelli D.H.等，Bioorg.Med.Chem.Lett.2000，102477-2480；Boschelli D.H.，Yang Y.D.，Ye F.等，J.Med.Chem.2001，44822-846)此外，2，3-二氫-2-硫酮-吲哚-3-烷基羧酸化合物及2，2’-二硫雙吲哚-3-烷基羧酸均被報(bào)道作為EGFR的抑制劑(Zhang N.，Wu B.，Powell D.，Wissner A.等，Bioorg.Med.Chem.Lett.2000，102825-2829)。
上述抑制劑都是與ATP競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合的可逆抑制劑，雖然是可逆抑制，但它們與酶的解離速度很慢。研究者認(rèn)為這些“準(zhǔn)不可逆抑制劑”和受體結(jié)合后可以引起受體的所謂“疏水性崩潰”，導(dǎo)致了受體的激酶區(qū)的封閉，阻止了蛋白磷酸化進(jìn)程。ATP在細(xì)胞里的濃度是mM級(jí)的，所以在早期臨床階段可逆抑制劑的給藥量都很大，目的就是維持所需的血藥濃度，其中阻斷酶和ATP結(jié)合的最長(zhǎng)時(shí)間可以達(dá)到4小時(shí)，而且不易溶的藥物分子要比易溶的藥物分子效果好。鑒于此，有必要尋找EGFR的不可逆抑制劑。
目前已有進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段的EGFR不可逆抑制劑包括4-苯氨基喹唑啉類化合物和4-苯氨基3-氰基喹啉類化合物(Alexander J.Bridges，Chem.Rev.2001，101，2541-2571)。
EGFR抑制劑的開發(fā)仍存在很多問(wèn)題，如Iressa在日本臨床實(shí)驗(yàn)的失敗引起人們關(guān)注的4-苯氨基喹唑啉類化合物未知毒性的問(wèn)題，酶選擇性的問(wèn)題等。解決這些問(wèn)題，開發(fā)新型的EGFR抑制劑是目前世界醫(yī)藥界的熱門研究課題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一類具有抑制表皮生長(zhǎng)因子表達(dá)而達(dá)到抗腫瘤藥效作用的新型的取代1H-吲哚-2-酮類化合物。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供本發(fā)明化合物的制備方法。
本發(fā)明的再一個(gè)目的是提供本發(fā)明化合物在作為表皮生長(zhǎng)因子酪氨酸激酶的抑制劑，用作制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明所述化合物為具有下述通式(I)結(jié)構(gòu)的取代1H-吲哚-2-酮類化合物 其中R1選自氫、C1-5烷基、C2-5鏈烯基、C3-10環(huán)烷基、羥基、C1-5烷氧基、乙酰基、羧基、酰胺基、硫代酰胺基、磺?；腿u代甲磺?；?；R2、R3、R4、R5各自獨(dú)立地選自氫、C1-5烷基、C1-4烷氧基、芳基、芳氧基、C1-5烷基芳基、C1-5烷基芳氧基、C3-10環(huán)烷基、巰基、C1-5烷巰基、芳巰基、亞巰酰基、鹵素、三鹵甲基、氨基、氰基、硝基、羧基、氧羧基、酰胺基、硫代酰胺基、磺酰胺基、三鹵代甲磺?；?、N-亞磺酰胺基、S-亞磺酰胺基、三鹵代甲亞磺酰基、O-氨基甲酰基、O-硫代氨基甲?；?NR11R12，其中R3和R4、R4和R5可以結(jié)合形成六元芳環(huán)、亞甲二氧基或亞乙二氧基；R4、R5還可以同時(shí)或分別選自以下基團(tuán)
其中R13選自氫；C1-5烷基；C1-5烷氧基；芳基；芳氧基；C1-5烷基芳基；C1-5烷基芳氧基；三鹵甲基；吡啶基；嘧啶基；噻吩基；上述每一個(gè)基團(tuán)都可以被如下基團(tuán)進(jìn)行取代三氟甲氧基；氟；氯；溴；碘；C1-3-烷氧基或取代C1-3-烷氧基，其中取代C1-3-烷氧基是指在2-或3-位被氨基、C1-3-烷基胺基、2-(C1-3-烷基)胺基、苯基-(C1-3-烷基)胺基、N-(C1-3-烷基)-苯基-(C1-3-烷基)胺基、吡咯烷基或哌啶基取代；苯基-C1-3-烷基胺基-C1-3-烷基，該取代基還可以以三氟甲基、氟、氯、溴、碘、C1-5-烷基或者C1-3-烷氧基對(duì)苯基核進(jìn)行單取代或二取代，進(jìn)行二取代時(shí)，取代基可以相同，也可以不同；R6選自氫、C3-10環(huán)烷基、C1-5烷基、鹵素；R7和R8各自選自氫、C1-5烷基、C1-4烷氧基、芳氧基、C1-5烷基芳基、C1-5烷基芳氧基、三鹵代C1-5烷基、C3-10環(huán)烷基、巰基、C1-5烷巰基、芳巰基、亞巰酰基、鹵素、三鹵甲基、氨基、氰基、硝基、羧基、氧羧基、酰胺基、硫代酰胺基、磺酰胺基、三鹵代甲磺酰基、N-亞磺酰胺基、S-亞磺酰胺基、三鹵代甲亞磺?；?、O-氨基甲?；?、O-硫代氨基甲?；?NR11R12；R9選自氫、C1-5烷基、C1-5烷氧基、芳基、芳氧基、C1-5烷基芳基、C1-5烷基芳氧基、鹵素、三鹵甲基、巰基、羥基、硫代C1-5烷基和-NR11R12；R10選自氫、C3-10環(huán)烷基、C1-5烷基、C2-5鏈烯基、芳基、雜芳基、羥基和雜脂環(huán)基；R11和R12獨(dú)立選自氫、C1-5烷基、C2-5鏈烯基、C3-10環(huán)烷基、乙?；?、磺?；?、三氟甲磺?；?。
本發(fā)明化合物的一個(gè)優(yōu)選化合物為具有通式(I)結(jié)構(gòu)的1，4-二取代苯類化合物，其中R4選自C1-5烷基、鹵素、磺酰胺基、氨基、氰基、硝基、羧基和-NR11R12；R1、R2、R3、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12的定義同前述化合物的定義。
本發(fā)明化合物的另一個(gè)優(yōu)選優(yōu)選化合物為具有通式(I)結(jié)構(gòu)的1，4-二取代苯類化合物，其中R4、R5同時(shí)或分別選自以下基團(tuán) R1、R2、R3、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13的定義同前述化合物的定義。
在本發(fā)明中，芳基或含芳基的基團(tuán)中的芳基指苯基、萘基和聯(lián)苯基；雜芳基指的是單環(huán)和稠和環(huán)(即帶有相鄰對(duì)原子的環(huán))基團(tuán)，其在環(huán)上具有1-3個(gè)選自氮、氧和硫的原子并且另外具有完全連接的π-電子系統(tǒng)，例如吡咯、呋喃、噻吩、咪唑、噻唑、吡唑、吡啶、嘧啶、喹啉、異喹啉、嘌呤和咔唑等；雜脂環(huán)基指的是在環(huán)上具有選自氮、氧和硫原子的單環(huán)或稠和環(huán)(C3-15)，所述環(huán)也可含有1到7個(gè)雙鍵，然而，所述環(huán)不具有完全連接的π-電子系統(tǒng)，如哌啶、四氫呋喃、四氫吡咯、四氫噻吩、環(huán)己烷并吡咯等。
本發(fā)明優(yōu)選的化合物包括(E)-3-[(4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-1H-吲哚-2-酮；(E)-5-溴-3-[(4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-1H-吲哚-2-酮；(E)-3-[(4-甲氧基羰基甲基-2-甲氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)-5-溴-3-[(4-甲氧基羰基甲基-2-甲氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)3-[(2，5二甲基-2-乙氧基羰基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)-5-溴-3-[(2，5二甲基-2-乙氧基羰基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)-5-硝基-3-[(2，5二甲基-2-乙氧基羰基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)3-[(2，5二甲基-2-甲氧基羰基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)-5-硝基-3-[(2，5二甲基-2-甲氧基羰基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)-5-硝基-3-[(4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)-5-羧基-3-[(4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)-5-氨基磺?；?3-[(4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)-5-甲基氨基磺酰基-3-[(4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)-5-(N-嗎啉基)氨基磺?；?3-[(4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)-5-(3-氯苯基)氨基磺?；?3-[(4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)-5-(3-氟苯基)氨基磺酰基-3-[(4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)-5-二甲基氨基磺?；?3-[(4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)-5-(3-氟-4-氯苯基)氨基磺酰基-3-[(4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)-5-(六氫吡啶基)氨基磺?；?3-[(4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)-5-(3-溴苯基)氨基磺?；?3-[(4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮。
本發(fā)明化合物的制備通過(guò)下列步驟實(shí)施 本發(fā)明化合物(化合物I)由取代1H-吲哚-2-酮(化合物II)和取代3-甲?；?H-吡咯(化合物III)縮合制得在堿的催化下，等摩爾的化合物II和化合物III在有機(jī)溶劑中進(jìn)行縮合反應(yīng)，根據(jù)具體化合物的反應(yīng)情況，反應(yīng)溫度為65℃～90℃；反應(yīng)時(shí)間為3～6小時(shí)，反應(yīng)完畢后一般采用的后處理方法包括冷卻濃縮、重結(jié)晶、柱層析分離等。最終產(chǎn)物(I)用核磁共振或質(zhì)譜來(lái)檢測(cè)證明。
本發(fā)明中，有機(jī)溶劑指質(zhì)子溶劑或質(zhì)子惰性溶劑，其中質(zhì)子溶劑為水或醇類(如乙醇、甲醇、正丁醇)；質(zhì)子惰性溶劑為極性或非極性質(zhì)子惰性溶劑，質(zhì)子惰性溶劑的特征是不含有酸性氫，即不含有能與溶質(zhì)結(jié)合的氫，優(yōu)選的非極性質(zhì)子惰性溶劑為戊烷、己烷、苯、甲苯、二氯甲烷或四氯化碳，優(yōu)選的極性質(zhì)子惰性溶劑為氯仿、四氫呋喃、二甲基亞砜或二甲基甲酰胺。堿催化劑指有機(jī)氮堿和無(wú)機(jī)堿，其中有機(jī)氮堿可采用三乙胺、吡啶、六氫吡啶、三甲胺、苯胺、二異丙基胺、1，8-二氮雜二環(huán)[5.4.1]十一-7-烯、吡咯烷、哌啶等，無(wú)機(jī)堿可采用氨、堿金屬氫氧化物或堿土金屬氫氧化物(如氫氧化鋰、氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈣、氫氧化鎂、氫氧化鋇)磷酸鹽、碳酸鹽、碳酸氫鹽、硫酸氫鹽等。當(dāng)溶劑為質(zhì)子溶劑時(shí)，所述堿催化劑為堿金屬氫氧化物或堿土金屬氫氧化物。
本發(fā)明中，化合物II的合成方法參考專利方法(WO9961442)；本發(fā)明中，化合物III的合成方法參考文獻(xiàn)方法(Alan R.Battersby.，Eric Hunt et al.，J.Chem.Soc.Perk.I 19761008-1035；Woodward，R.B.J.Am.Chem.Soc.1960，82，3800-3892.)。
有益效果本發(fā)明設(shè)計(jì)與合成了一類新型的取代1H-吲哚-2-酮類化合物，對(duì)人常染色體顯性遺傳型多囊腎病(ADPKD)囊腫襯里上皮細(xì)胞、A-549人肺腺癌細(xì)胞、A-431人皮膚鱗癌細(xì)胞和MDA-MB-468人乳腺癌細(xì)胞有抑制效果，可用于制備治療過(guò)度或不正常細(xì)胞增生導(dǎo)致疾病的藥物。本發(fā)明化合物結(jié)構(gòu)相對(duì)簡(jiǎn)單，易于制備。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步闡述，但不限制本發(fā)明。
下述制備例中，熔點(diǎn)采用上海精密科學(xué)儀器有限公司生產(chǎn)的X-4型熔點(diǎn)儀測(cè)定，溫度未經(jīng)校正；核磁共振由Bruker AMX-400型和INVOA-600型核磁共振儀測(cè)定，TMS為內(nèi)標(biāo)，化學(xué)位移單位為ppm；質(zhì)譜由MAT-711型和MAT-95型質(zhì)譜儀測(cè)定；柱層析用硅膠200-300目，青島海洋化工廠生產(chǎn)；TLC硅膠板為煙臺(tái)化工廠生產(chǎn)的HSGF-254型薄層層析預(yù)制板；石油醚沸程為60-90℃；采用紫外燈，碘缸顯色。制備例中若未特別指出操作方法，所述濃縮指用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將制備化合物溶液中的溶劑蒸出；所述干燥指用DHG-9240A恒溫干燥箱在80℃將制備化合物烘干。
實(shí)施例1(E)-3-[(4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-1H-吲哚-2-酮(化合物I-1)的制備在0-10℃冰浴下，將亞硝酸鈉水溶液(亞硝酸鈉29g，水60ml)加入到2-羰基-1，3-丙二酸二乙酯(80g)的乙酸(140ml)溶液中攪拌5小時(shí)。將乙酰乙酸芐酯(76g)的乙酸(140ml)溶液加入到反應(yīng)液中，加入鋅粉(46g)和無(wú)水乙酸鈉(40g)，繼續(xù)攪拌15分鐘。撤除冰浴，用油浴加熱至80℃，攪拌4小時(shí)后，將反應(yīng)液傾倒入碎冰(1Kg)中，放置過(guò)夜，過(guò)濾，濃縮，得到60g淡黃色固體。用乙醇重結(jié)晶，得到51g白色固體3-芐氧基羰基-4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯，產(chǎn)率33％。
將3-芐氧基羰基-4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯(51g，136mmol)溶于四氫呋喃(50ml)中，加入10％鈀碳(10g)，室溫，通入氫氣，攪拌1小時(shí)后過(guò)濾掉鈀碳，用四氫呋喃(50ml)洗滌濾餅后，將濾液濃縮干燥得到36g白色固體4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-羧酸，產(chǎn)率95％。
將4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-羧酸(36g)溶于1，2-二氯乙烷(200ml)中，油浴加熱到50℃。加入碳酸氫鈉水溶液(碳酸氫鈉40g∶水200ml)，攪拌，有氣泡冒出后滴加含有碘化鈉(20g)的碘水溶液(碘240g∶水200ml)。繼續(xù)加熱攪拌半小時(shí)，薄層層析檢測(cè)法跟蹤測(cè)定反應(yīng)完全后，加入亞硫酸氫鈉除去過(guò)量的碘。分離有機(jī)層，干燥后濃縮，得到42g粗品。用1，2-二氯乙烷重結(jié)晶得到40g純品4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-3-碘代-5-甲基-1H-吡咯，白色固體，產(chǎn)率91％。
將4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-3-碘代-5-甲基-1H-吡咯(40g)溶于甲醇(200ml)中，油浴加熱至回餾。加入碘化鈉的水溶液(碘化鈉25g∶水30ml)后，加入濃鹽酸(37％)(10ml)，15分鐘后，加入亞硫酸氫鈉(500mg)除去過(guò)量的碘。將反應(yīng)液中的甲醇蒸除(75℃)，用1，2-二氯乙烷(100ml)萃取，濃縮有機(jī)層，干燥，得到29g的4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯，白色固體，產(chǎn)率87％。
將的三氯氧磷(15ml)在0～5℃下滴加入的N，N-二甲基甲酰胺(15ml)中。攪拌15分鐘后，緩慢滴加4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯(29g)的1、2-二氯乙烷(100ml)溶液，在0～5℃冰浴下繼續(xù)攪拌15分鐘后。撤除冰浴，用油浴加熱至50℃，半小時(shí)后，加入乙酸鈉的水溶液(無(wú)水乙酸鈉10g∶水50ml)。半小時(shí)后，冷卻反應(yīng)液，用分液漏斗分離有機(jī)層并濃縮，用乙酸乙酯∶石油醚＝1∶3的洗脫液在硅膠柱上分離，得到26g的4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-3-甲酰基-5-甲基-1H-吡咯，白色固體，產(chǎn)率80％。
將4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-3-甲?；?5-甲基-1H-吡咯(1g)和1H-吲哚-2-酮(0.5g)在乙醇(20ml)中混合，油浴加熱到80℃，滴加六氫吡啶(0.1g)。反應(yīng)3小時(shí)后濃縮反應(yīng)液，用1，2-二氯乙烷(10ml)溶解后用20ml水和20ml 2N鹽酸干燥洗滌后濃縮有機(jī)層，用乙酸乙酯∶石油醚＝1∶4的洗脫液在硅膠柱上純化得到1.2g的(E)-3-[(4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-1H-吲哚-2-酮，黃色固體，產(chǎn)率83％。
H1NMR(CDCl3)9.20(s，1H，N-H)9.90(s，1H，N-H)7.82(s，1H，vinyl-H)7.20(t，2H，Ph-H)7.09(t，1H，Ph-H)6.90(m，2H，Ph-H)4.33(q，2H，CO2CH2CH3)4.08(q，2H，CO2CH2CH3)3.80(s，3H，CH2CO2CH2CH3)2.21(s，3H，CH3)1.36(t，3H，CO2CH2CH3)1.20(t，3H，CO2CH2CH3)。
實(shí)施例2(E)-5-溴-3-[(4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-1H-吲哚-2-酮(化合物I-2)的制備將在乙腈(20ml)中的1H-吲哚-2-酮(1.3g)冷卻至-10℃并在攪拌下緩慢加入N-溴代琥珀酰亞胺(2g)。在-10℃下，將反應(yīng)物攪拌1小時(shí)并在0℃下攪拌2小時(shí)。收集沉淀，用20ml水洗滌并干燥，得到1.9g的5-溴-1H-吲哚-2-酮，產(chǎn)率90％。
將4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-3-甲?；?5-甲基-1H-吡咯(0.95g，3.6mmol)和5-溴-(1H)-吲哚-2-酮(0.8g，3.6mmol)在20ml乙醇中混合攪拌，油浴加熱到80℃，滴加六氫吡啶(0.1g)，反應(yīng)2.5小時(shí)后濃縮反應(yīng)液，加入1，2-二氯乙烷(10ml)，用20ml水和20ml 2N鹽酸干燥洗滌，濃縮有機(jī)層，用乙酸乙酯∶石油醚＝1∶4的洗脫液在硅膠柱上純化(Rf＝0.6)得到1.56g黃色固體(E)-5-溴-3-[(4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮，產(chǎn)率90％。
H1NMR(DMSO-d6)7.48(s，1H，vinyl-H)7.38(d，2H，Ph-H)6.96(s，1H，Ph-H)6.80(q，2H，Ph-H)4.23(q，2H，CO2CH2CH3)3.98(q，2H，CO2CH2CH3)3.75(s，CH2CO2CH2CH3)2.09(s，3H，CH3)1.36(t，3H，CO2CH2CH3)1.20(t，3H，CO2CH2CH3)。MS m/e 460(M+)。
實(shí)施例3(E)-3-[(4-甲氧基羰基甲基-2-甲氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮(化合物I-3)的制備在0-10℃冰浴下，將亞硝酸鈉水溶液(亞硝酸鈉19.8g∶水100ml)滴加到2-羰基-1，3-丙二酸二甲酯(50g，287mmol)的乙酸(150ml)溶液中，撤除冰浴，室溫?cái)嚢?小時(shí)，溶液呈棕紅色。在冰浴里，將乙酰乙酸芐酯(59g，287mmol)加入到反應(yīng)液中，然后補(bǔ)充乙酸(50ml)，加入鋅粉(25g)和無(wú)水乙酸鈉(20g)，繼續(xù)攪拌15分鐘后，撤除冰浴，用油浴加熱至80℃，固體全部溶解，攪拌4小時(shí)后，將反應(yīng)液傾倒入冰水溶液中，放置過(guò)夜，過(guò)濾，濃縮濾液，得到35g淡黃色固體。用乙醇重結(jié)晶后得到34g的3-芐氧基羰基-4-甲氧基羰基甲基-2-甲氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯，產(chǎn)率33％。Mp148℃。H1NMR(CDCl3)9.0(broad，1-H)，7.3-7.4(m，5H，Ph-H)，5.25(s，2H，CH2Ph)，4.2(s，2H，CH2CO2Me)，2.5(s，3H，CH3)，1.35(s，3H，CO2CH3)，1.2(s，3H，CO2CH3)。
將30g 3-芐氧基羰基-4-甲氧基羰基甲基-2-甲氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯(87mmol)溶于四氫呋喃(50ml)中，加入10％鈀碳(5g)，室溫，通氫氣，攪拌1小時(shí)后過(guò)濾掉鈀碳，用四氫呋喃(50ml)洗滌濾餅后，將濾液濃縮干燥得到22g的4-甲氧基羰基甲基-2-甲氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-羧酸，產(chǎn)率95％。Mp243℃。H1NMR(CDCl3)9.6(br，1-H，COOH)，3.80(s，2H，CH2CO2Me)，2.3(s，3H，CH3)，1.3(s，3H，CO2CH3)，1.2(s，3H，CO2CH2)。
將20g 4-甲氧基羰基甲基-2-甲氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-羧酸(74mmol)溶于1，2-二氯乙烷(100ml)中，油浴加熱到50℃，加入碳酸氫鈉水溶液(碳酸氫鈉24g∶水100ml)，攪拌，有氣泡冒出后滴加含有碘化鈉(20g)的碘水溶液(碘23g∶水100ml)，繼續(xù)加熱攪拌半小時(shí)，薄層層析檢測(cè)至反應(yīng)完全，加入過(guò)硫酸氫鈉除去過(guò)量的碘，用分液漏斗分離有機(jī)層，干燥后濃縮，用1，2-二氯乙烷重結(jié)晶得到23g的4-甲氧基羰基甲基-2-甲氧基羰基-3-碘代-5-甲基-1H-吡咯，產(chǎn)率91％。Mp 102℃。EIMS m/e 336(M+)。
將4-甲氧基羰基甲基-2-甲氧基羰基-3-碘代-5-甲基-1H-吡咯(23g，65mmol)溶于甲醇(100ml)中，油浴加熱至回流，攪拌，加入碘化鈉的水溶液(碘化鈉11g∶水10ml)后，加入濃鹽酸(37％)(2ml)，有碘析出，溶液迅速變成深紅色，15分鐘后，加入過(guò)硫酸氫鈉除去過(guò)量的碘，將反應(yīng)液中的甲醇蒸去，用1，2-二氯乙烷(50ml)萃取，干燥，濃縮有機(jī)層，得到12g的4-甲氧基羰基甲基-2-甲氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯，產(chǎn)率87％。Mp 238℃。H1NMR(DMSO)5.98(s，1H，3-pyrrole-H)，3.80(s，2H，CH2CO2Me)，2.3(s，3H，CH3)，1.3(s，3H，CO2CH3)，1.2(s，3H，CO2CH3)。
將三氯氧磷(8ml)在0-5℃冰浴下滴加入N，N-二甲基甲酰胺(8ml)中，在同樣溫度下攪拌15分鐘后，緩慢滴加12g的4-甲氧基羰基甲基-2-甲氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯(53mmol)的1，2-二氯乙烷(50ml)溶液，在0-5℃下繼續(xù)攪拌15分鐘后，撤除冰浴，用油浴加熱至50℃，攪拌半小時(shí)后，加入乙酸鈉的水溶液(無(wú)水乙酸鈉5g∶水20ml)，攪拌半小時(shí)后，冷卻反應(yīng)液，用分液漏斗分離有機(jī)層并濃縮，用乙酸乙酯∶石油醚＝1∶3的洗脫液在硅膠柱上分離(Rf＝0.5)，得到10g的4-甲氧基羰基甲基-2-甲氧基羰基-3-甲?；?5-甲基-1H-吡咯，產(chǎn)率80％。Mp 132℃。H1NMR(CDCl3)10.0(s，1H，CHO)，9.1(br，1H，N-H)，4.3(q，2H，CO2CH2CH3)，2.3(s，3H，CH3)，1.3(t，3H，CO2CH3)，1.2(t，3H，CO2CH3)。
將4-甲氧基羰基甲基-2-甲氧基羰基-3-甲?；?5-甲基-1H-吡咯(0.86g，3.6mmol)和5-溴-(1H)-吲哚-2-酮(0.82g，3.6mmol)在20ml乙醇中混合攪拌，油浴加熱到80℃。滴加六氫吡啶(0.1g)，反應(yīng)3小時(shí)后濃縮反應(yīng)液，加入1，2-二氯乙烷(10ml)，用20ml水和20ml 2N鹽酸洗滌，濃縮有機(jī)層，用乙酸乙酯∶石油醚＝1∶2的洗脫液在硅膠柱上純化(Rf＝0.5)得到1.16g黃色固體(E)-3-[(4-甲氧基羰基甲基-2-甲氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮，產(chǎn)率91％。Mp215℃。
H1NMR(CDCl3)9.10(s，1H，N-H)，7.70(s，1H，vinyl-H)，7.38(t，2H，Ph-H)，7.19(s，1H，Ph-H)，6.78(t，2H，Ph-H)，3.90(s，3H，CO2CH2CH3)，3.88(s，2H，CO2CH2CH3)，3.67(s，3H，CO2CH3)，2.20(s，3H，CH3)。EIMS m/e 354(M+)。
實(shí)施例4(E)-5-溴-3-[(4-甲氧基羰基甲基-2-甲氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮(化合物I-4)的制備將4-甲氧基羰基甲基-2-甲氧基羰基-3-甲?；?5-甲基-1H-吡咯(0.95g，3.6mmol)和5-溴-(1H)-吲哚-2-酮(0.8g，3.6mmol)在20ml乙醇中混合攪拌，油浴加熱到80℃，滴加六氫吡啶(0.1g)，反應(yīng)2.5小時(shí)后濃縮反應(yīng)液，加入1，2-二氯乙烷(10ml)，用20ml水和20ml 2N鹽酸洗滌，濃縮有機(jī)層，用乙酸乙酯∶石油醚＝1∶4的洗脫液在硅膠柱上純化(Rf＝0.6)得到1.4g黃色固體(E)-5-溴-3-[(4-甲氧基羰基甲基-2-甲氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮，產(chǎn)率91％。Mp 243℃。
H1NMR(CDCl3)9.10(s，1H，N-H)，7.70(s，1H，vinyl-H)，7.38(t，2H，Ph-H)，7.19(s，1H，Ph-H)，6.78(t，2H，Ph-H)，3.90(s，3H，CO2CH2CH3)，3.88(s，2H，CO2CH2CH3)，3.67(s，3H，CO2CH3)，2.20(s，3H，CH3)。EIMS m/e 432(M+)。
實(shí)施例5(E)3-[(2，5二甲基-2-乙氧基羰基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮(化合物I-5)的制備將1H-吲哚-2-酮(6.5g)溶于濃硫酸(98％)(25ml)中并將混合物維持在-10℃至-15℃滴加入發(fā)煙硝酸(20ml)。加入硝酸(20ml)后，在0℃下，將反應(yīng)混合物攪拌半小時(shí)并傾入到冰水中，通過(guò)過(guò)濾收集沉淀，并從50％乙酸重結(jié)晶然后過(guò)濾結(jié)晶產(chǎn)物，真空下干燥，得到6g的5-硝基-2-1H-吲哚-2-酮，產(chǎn)率70％。
乙酸(10ml)和氫氧化鈉(1.2g，30mmol)加熱到80℃，待氫氧化鈉完全溶解后，繼續(xù)加熱反應(yīng)液至回流。將乙酰乙酸乙酯(4.5g，34mmol)加入到反應(yīng)器中，慢慢滴加亞硝酸鈉的水溶液(8g，0.11mol，10ml水)。滴加結(jié)束后，緩慢降溫到室溫，放置四小時(shí)后有白色晶體析出，過(guò)濾。將該沉淀溶解于乙酸(10ml)中，加熱到80℃，加入乙酰丙酮(3.4g，34mmol)和Zn粉(2g)。兩小時(shí)后將反應(yīng)液倒入冰水中，有白色沉淀析出。過(guò)濾，用乙酸(10ml)洗去多余的Zn粉，干燥，得到3.6g白色固體2，5二甲基-2-乙氧基羰基-1H-吡咯，產(chǎn)率65％。Mp126℃。H1NMR(CDCl3)8.76(br，1H，N-H)，5.79(s，1H，CH)，4.29(q，2H，CH2CH3)，2.30(s，3H，CH3)，2.24(s，3H，CH3)，1.350(t，3H，CH2CH3)。
將三氯氧磷(4ml)在0-5℃冰浴下滴加入N，N-二甲基甲酰胺(4ml)中。在同樣溫度下攪拌15分鐘后，緩慢滴加2，5二甲基-2-乙氧基羰基-1H-吡咯(3g，18mmol)的1，2-二氯乙烷(20ml)溶液。在0-5℃下繼續(xù)攪拌15分鐘后，撤除冰浴，用油浴加熱至50℃，繼續(xù)攪拌半小時(shí)后，加入乙酸鈉的水溶液(無(wú)水乙酸鈉1g∶水10ml)。半小時(shí)后，冷卻反應(yīng)液，用分液漏斗分離有機(jī)層并濃縮，用乙酸乙酯∶石油醚＝1∶1的洗脫液在硅膠柱上分離(Rf＝0.5)，得到2.8g白色固體的2，5二甲基-3-甲?；?2-乙氧基羰基-1H-吡咯，產(chǎn)率80％。Mp 182℃。H1NMR(CDCl3)10.0(s，1H，CHO)，9.76(br，1H，N-H)，4.29(q，2H，CH2CH3)，2.30(s，3H，CH3)，2.24(s，3H，CH3)，1.350(t，3H，CH2CH3)。
將2，5二甲基-3-甲?；?2-乙氧基羰基-1H-吡咯(1g，5.1mmol)和2-(1H)-吲哚-2-酮(0.6g，5.1mmol)在20ml乙醇中混合攪拌，油浴加熱到80℃，滴加六氫吡啶(0.1g)，反應(yīng)4小時(shí)后濃縮反應(yīng)液，加入1，2-二氯乙烷(10ml)，用20ml水和20ml 2N鹽酸洗滌，濃縮有機(jī)層，用乙酸乙酯∶石油醚＝1∶1的洗脫液在硅膠柱上純化(Rf＝0.35)得到1.48g黃色固體的(E)3-[(2，5二甲基-2-乙氧基羰基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮，產(chǎn)率94％。Mp 185℃。
H1NMR(DMCO)7.55(s，1H，vinyl-H)，6.83-7.20(m，4H，Ph-H)，4.35(q，2H，CO2CH2CH3)，2.19(s，3H，CH3)，2.06(s，3H，CH3)，1.36(t，3H，CO2CH2CH3)。EIMS m/e 310(M+)。
實(shí)施例6(E)-5-溴-3-[(2，5二甲基-2-乙氧基羰基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮(化合物I-6)的制備將2，5二甲基-3-甲?；?2-乙氧基羰基-1H-吡咯(1g，5.1mmol)和5-溴-2-(1H)-吲哚-2-酮(1g，5.1mmol)在20ml乙醇中混合攪拌，油浴加熱到80℃，滴加六氫吡啶(0.1g)，反應(yīng)3小時(shí)后濃縮反應(yīng)液，加入1，2-二氯乙烷(10ml)，20ml水和20ml 2N鹽酸干燥洗滌，濃縮有機(jī)層，用乙酸乙酯∶石油醚＝1∶2的洗脫液在硅膠柱上純化(Rf＝0.4)得到1.8g黃色固體的(E)-5-溴-3-[(2，5二甲基-2-乙氧基羰基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮，產(chǎn)率95％。Mp 213℃。
H1NMR(CDCl3)9.08(s，1H，N-H)，7.81(s，1H，N-H)，7.72(s，1H，vinyl-H)，7.31(d，2H，Ph-H)，7.17(s，1H，Ph-H)，6.75(d，2H，Ph-H)，4.35(q，2H，CO2CH2CH3)，2.19(s，3H，CH3)，2.06(s，3H，CH3)，1.36(t，3H，CO2CH2CH3)。EIMS m/e 388(M+)。
實(shí)施例7(E)-5-硝基-3-[(2，5二甲基-2-乙氧基羰基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮(化合物I-7)的制備將2，5二甲基-3-甲酰基-2-乙氧基羰基-1H-吡咯(1g，5.1mmol)和5-硝基-2-(1H)-吲哚-2-酮(0.9g，5.1mmol)在20ml乙醇中混合攪拌，油浴加熱到80℃，滴加六氫吡啶(0.1g)，反應(yīng)3小時(shí)后濃縮反應(yīng)液，加入1，2-二氯乙烷(10ml)，20ml水和20ml 2N鹽酸干燥洗滌，濃縮有機(jī)層，用乙酸乙酯∶石油醚＝2∶1的洗脫液在硅膠柱上純化(Rf＝0.4)得到1.8g黃色固體的(E)-5-硝基-3-[(2，5二甲基-2-乙氧基羰基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮，產(chǎn)率95％。Mp 286℃。
H1NMR(DMSO-d6)8.18(d，2H，Ph-H)，7.70(s，1H，vinyl-H)，7.65(s，1H，Ph-H)，7.05(d，2H，Ph-H)，4.22(q，2H，CO2CH2CH3)，3.98(q，2H，CO2CH2CH3)，3.77(s，2H，CH2CO2CH2CH3)，2.09(s，3H，CH3)，1.36(t，3H，CO2CH2CH3)，1.20(t，3H，CO2CH2CH3)。EIMS m/e 355(M+)。
實(shí)施例8(E)3-[(2，5二甲基-2-甲氧基羰基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮(化合物I-8)的制備乙酸(10ml)和氫氧化鈉(1.2g，30mmol)加熱到80℃，待氫氧化鈉完全溶解后，繼續(xù)加熱反應(yīng)液到回流。將乙酰乙酸甲酯(4.7g，34mmol)加入到反應(yīng)器中，慢慢滴加亞硝酸鈉的水溶液(8g，0.11mol，10ml水)。滴加結(jié)束后，緩慢降溫到室溫，放置四小時(shí)后有白色晶體析出，過(guò)濾。將該沉淀溶解于乙酸(10ml)中，加熱到80℃，加入乙酰丙酮(3.4g，34mmol)和Zn粉(2g)。兩小時(shí)后將反應(yīng)液倒入冰水中，有白色沉淀析出。過(guò)濾沉淀，用乙酸(10ml)洗去多余的Zn粉，干燥，得到3.8g白色固體2，5二甲基-2-乙氧基羰基-1H-吡咯，產(chǎn)率68％。Mp 76℃。H1NMR(CDCl3)8.76(br，1H，N-H)，5.80(s，1H，CH)，3.82(s，3H，CH3)，2.30(s，3H，CH3)，2.24(s，3H，CH3)。
將三氯氧磷(4ml)在0-5℃冰浴下，滴加入N，N-二甲基甲酰胺(4ml)中。在同樣溫度下攪拌15分鐘后，緩慢滴加2，5二甲基-2-甲氧基羰基-1H-吡咯(3.4g，18mmol)的1，2-二氯乙烷(20ml)溶液。在0-5℃下繼續(xù)攪拌15分鐘后，撤除冰浴，用油浴加熱至50℃，繼續(xù)攪拌半小時(shí)后，加入乙酸鈉的水溶液(無(wú)水乙酸鈉1g∶水10ml)。半小時(shí)后，冷卻反應(yīng)液，用分液漏斗分離有機(jī)層并濃縮，用乙酸乙酯∶石油醚＝1∶1的洗脫液在硅膠柱上分離(Rf＝0.6)，得到3.1g白色固體的2，5二甲基-3-甲?；?2-甲氧基羰基-1H-吡咯，產(chǎn)率82％。H1NMR(CDCl3)9.76(s，1H，CHO)，3.82(s，3H，CH3)，2.30(s，3H，CH3)，2.24(s，3H，CH3)。
將2，5二甲基-3-甲酰基-2-甲氧基羰基-1H-吡咯(1g，5.5mmol)和2-(1H)-吲哚-2-酮(0.7g，5.1mmol)在20ml乙醇中混合攪拌，油浴加熱到80℃。滴加六氫吡啶(0.1g)，反應(yīng)4小時(shí)后濃縮反應(yīng)液，用1，2-二氯乙烷(10ml)溶解后用20ml水和20ml 2N鹽酸洗滌后濃縮有機(jī)層。用乙酸乙酯∶石油醚＝1∶1的洗脫液在硅膠柱上純化(Rf＝0.55)得到1.46g黃色固體的(E)3-[(2，5二甲基-2-甲氧基羰基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮，產(chǎn)率94％。Mp213℃。
H1NMR(DMCO)7.55(s，1H，vinyl-H)，6.83-7.20(m，4H，Ph-H)，3.75(s，CO2CH3)，2.20(s，3H，CH3)，2.06(s，3H，CH3)。EIMS m/e 296(M+)。
實(shí)施例9(E)-5-硝基-3-[(2，5二甲基-2-甲氧基羰基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮(化合物I-9)的制備將2，5二甲基-3-甲?；?2-甲氧基羰基-1H-吡咯(1g，5.5mmol)和5-硝基-2-(1H)-吲哚-2-酮(0.98g，5.5mmol)在20ml乙醇中混合攪拌，油浴加熱到80℃。滴加六氫吡啶(0.1g)，反應(yīng)3小時(shí)后濃縮反應(yīng)液，加入1，2-二氯乙烷(10ml)，用20ml水和20ml 2N鹽酸洗滌，濃縮有機(jī)層，用乙酸乙酯∶石油醚＝2∶1的洗脫液在硅膠柱上純化(Rf＝0.3)得到1.9g黃色固體的(E)-5-硝基-3-[(2，5二甲基-2-甲氧基羰基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮，產(chǎn)率95％。Mp 218℃。
H1NMR(DMSO)8.15(d，2H，Ph-H)，7.71(s，1H，vinyl-H)，7.66(s，1H，Ph-H)，7.00(d，2H，Ph-H).3.75(s，3H，CO2CH3)，2.20(s，3H，CH3)，2.06(s，3H，CH3)。EIMS m/e 341(M+)。
實(shí)施例10(E)-5-硝基-3-[(4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮(化合物I-10)的制備將4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-3-甲?；?5-甲基-1H-吡咯(1g，3.7mmol)和5-硝基-2-(1H)-吲哚-2-酮(0.78g，3.7mmol)在20ml乙醇中混合攪拌，油浴加熱到80℃。滴加六氫吡啶(0.1g)，反應(yīng)5小時(shí)后濃縮反應(yīng)液加入1，2-二氯乙烷(10ml)，20ml水和20ml 2N鹽酸干燥洗滌，濃縮有機(jī)層，用乙酸乙酯∶石油醚＝1∶1的洗脫液在硅膠柱上純化(Rf＝0.5)得到1.43g黃色固體的(E)-5-硝基-3-[(4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮，產(chǎn)率91％。Mp 341℃。
H1NMR(DMSO-d6)8.18(d，2H，Ph-H)，7.70(s，1H，vinyl-H)，7.65(s，1H，Ph-H)，7.05(d，2H，Ph-H)，4.22(q，2H，CO2CH2CH3)，3.98(q，2H，CO2CH2CH3)，3.77(s，CH2CO2CH2CH3)，2.09(s，3H，CH3)，1.36(t，3H，CO2CH2CH3)，1.20(t，3H，CO2CH2CH3)。EIMS m/e 427(M+)。
實(shí)施例11(E)-5-羧基-3-[(4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮(化合物I-11)的制備將(1H)-吲哚-2-酮(6.7g，50mmol)加入到23g三氯化鋁在30ml的1，2-二氯乙烷中的懸浮液中，緩慢加入氯乙酰氯(11.3g)并放出氯化氫氣體。攪拌10分鐘后，將反應(yīng)液加熱至40至50℃。薄層層析法(乙酸乙酯，硅膠)顯示沒(méi)有剩余的原料。將混合物冷卻至室溫并傾入到冰水中通過(guò)真空過(guò)濾收集沉淀，用水(80ml)洗滌并真空下干燥，得到10.3g的5-氯乙酰基-(1H)-吲哚-2-酮，白色固體的，產(chǎn)率98％。
在80至90℃下，將5-氯乙?；?(1H)-吲哚-2-酮(9.3g，49mmol)在吡啶(9g)中的懸浮液攪拌3小時(shí)然后，冷卻至室溫。通過(guò)真空過(guò)濾收集沉淀并用乙醇(20ml)洗滌。將固體溶解于90ml的2.5N氫氧化鈉中，并在70至80℃下攪拌3小時(shí)。將混合物冷卻至室溫并用0.5N鹽酸酸化至pH＝2。通過(guò)真空過(guò)濾收集沉淀并用水(100ml)徹底洗滌，得到作為深棕色固體的5-羧基-2-(1H)-吲哚-2-酮。將濾液放置過(guò)夜后，得到2g為黃色固體的5-羧基-(1H)-吲哚-2-酮。將深棕色產(chǎn)物溶于熱乙醇(20ml)中，通過(guò)過(guò)濾，除去不溶物并濃縮濾液，得到作為5.6g棕色固體的5-羧基-2-(1H)-吲哚-2-酮。合并的收率為97％。Mp 286℃。H1NMR(DMSO)12.56(br，1H，COOH)，10.70(s，1H，NH-1)，7.81(dd，1H，Ph-H)，7.74(s，1H，Ph-H)，3.53(s，2H，CH2)。
將4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-3-甲?；?5-甲基-1H-吡咯(1g，3.7mmol)和5-羧基-2-(1H)-吲哚-2-酮(0.65g，3.7mmol)在20ml乙醇中混合攪拌，油浴加熱到80℃。滴加六氫吡啶(0.1g)，反應(yīng)5小時(shí)后濃縮反應(yīng)液，用1，2-二氯乙烷(10ml)溶解后用20ml水和20ml 2N鹽酸洗滌后，濃縮有機(jī)層，用乙酸乙酯∶石油醚＝4∶1的洗脫液在硅膠柱上純化(Rf＝0.25)得到1.49g紅色固體的(E)-5-羧基-3-[(4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮，產(chǎn)率95％。Mp 214℃。
H1NMR(DMSO-d6)7.82(d，2H，Ph-H)，7.56(s，1H，vinyl-H)，7.54(s，1H，Ph-H)，6.98(q，2H，Ph-H)，4.21(q，2H，CO2CH2CH3)，3.98(q，2H，CO2CH2CH3)，3.77(s，2H，CH2CO2CH2CH3)，2.09(s，3H，CH3)，1.36(t，3H，CO2CH2CH3)，1.20(t，3H，CO2CH2CH3)。EIMS m/e 426(M+)。
實(shí)施例12(E)-5-氨基磺酰基-3-[(4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮(化合物I-12)的制備向盛有27ml氯磺酸的100ml燒瓶中緩慢加入13.3g(1H)-吲哚-2-酮。加入期間將反應(yīng)溫度維持在低于30℃。加入后，在室溫下將反應(yīng)混合物攪拌1.5小時(shí)，加熱至68℃，反應(yīng)1小時(shí)，冷卻，并傾入到水中，用水洗滌(50ml)沉淀并在真空烘箱中干燥，得到11g的5-氯磺?；?(1H)-吲哚-2-酮，產(chǎn)率50％。
將5-氯磺酰基-(1H)-吲哚-2-酮(2.1g)加入到在10mL乙醇的氨水(10ml)中，并在室溫下攪拌過(guò)夜。濃縮混合物并通過(guò)真空過(guò)濾收集固體，得到0.4g灰白色固體的5-氨基磺?；?(1H)-吲哚-2-酮，產(chǎn)率20％。Mp 125℃。H1NMR(DMSO)10.67(s，1H，NH-1)，7.63-7.66(m，2H，Ph-H)，7.13(s，2H，H2NSO2-5)，6.91(d，1H，Ph-H)，3.56(s，2H，CH2)。MS m/e341(M+)。
將4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-3-甲酰基-5-甲基-1H-吡咯(1g，3.7mmol)和5-氨基磺酰基-(1H)-吲哚-2-酮(0.543g，3.7mmol)，在20ml乙醇中混合攪拌，油浴加熱到80℃，滴加六氫吡啶(0.1g)，反應(yīng)5小時(shí)后濃縮反應(yīng)液，用乙酸乙酯∶石油醚＝1∶3的洗脫液在硅膠柱上純化(Rf＝0.85)得到1.2g橙黃色固體的(E)-5-氨基磺?；?3-[(4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮，產(chǎn)率70％。Mp 148-150℃。
H1NMR(CDCl3)7.60(s，1H，vinyl-H)，7.59(d，1H，Ph-H)，7.22(s，1H，Ph-H)，7.06(d，1H，Ph-H)，4.25(q，2H，CO2CH2CH3)，3.98(q，2H，CO2CH2CH3)，3.80(s，2H，CH2CO2CH2CH3)，2.10(s，3H，CH3)，1.28(t，3H，CO2CH2CH3)，1.05(t，3H，CO2CH2CH3)。EIMS m/e 461(M+)。
實(shí)施例13(E)-5-甲基氨基磺?；?3-[(4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮(化合物I-13)的制備在室溫下，將5-氯磺?；?2-(1H)-吲哚-2-酮(2.3g，10mmol)在甲基胺(10ml)的甲醇(10ml)懸浮液中攪拌4小時(shí)，其間形成白色固體。過(guò)濾收集沉淀，用氫氧化鈉(5ml，1N)和鹽酸(5ml，1N)洗滌并真空干燥過(guò)夜，得到2.2g橙色固體5-甲基氨基磺?；?2-(1H)-吲哚-2-酮，收率82％。EIMS m/e 225(M+-1)。
將4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-3-甲酰基-5-甲基-1H-吡咯(1g，3.7mmol)和5-甲基氨基磺酰基-2-(1H)-吲哚-2-酮(0.9g，3.7mmol)在20ml乙醇中混合攪拌，油浴加熱到80℃。滴加六氫吡啶(0.01g)，反應(yīng)6小時(shí)后濃縮反應(yīng)液，用乙酸乙酯∶石油醚＝1∶4的洗脫液在硅膠柱上純化(Rf＝0.55)得到1.08g黃色固體的(E)-5-甲基氨基磺酰基-3-[(4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮，產(chǎn)率67％。Mp126℃。
H1NMR(CDCl3)9.31(s，1H，N-H)，8.41(s，1H，N-H)，7.8(s，1H，vinyl-H)，7.63(d，1H，Ph-H)，7.42(s，1H，Ph-H)，7.00(d，1H，Ph-H)，4.32(q，2H，CO2CH2CH3)，4.10(q，2H，CO2CH2CH3)，3.80(s，2H，CH2CO2CH2CH3)，2.42(s，3H，NCH3)，2.10(s，3H，CH3)，1.36(t，3H，CO2CH2CH3)，1.20(t，2H，CO2CH2CH3)。EIMS m/e 475(M+)。
實(shí)施例14(E)-5-(N-嗎啉基)氨基磺?；?3-[(4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮(化合物I-14)的制備在室溫下，將5-氯磺酰基-2-(1H)-吲哚-2-酮(2.3g，10mmol)溶解于四氫呋喃(10ml)中，加入嗎啉(750mg，10mmol)，攪拌4小時(shí)，其間形成白色固體。過(guò)濾收集沉淀，用氫氧化鈉(5ml，1N)和鹽酸(5ml，IN)洗滌并真空干燥過(guò)夜，得到2.53g白色固體的5-(N-嗎啉基)氨基磺酰基-(1H)-吲哚-2-酮，收率90％。EIMS m/e 282(M+)。
將4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-3-甲酰基-5-甲基-1H-吡咯(1g，3.7mmol)和5-(N-嗎啉基)氨基磺?；?(1H)-引哚-2-酮(1.03g，3.7mmol)在20ml乙醇中混合攪拌，油浴加熱到80℃。滴加六氫吡啶(0.01g)，反應(yīng)6小時(shí)后濃縮反應(yīng)液，用乙酸乙酯∶石油醚＝1∶4的洗脫液在硅膠柱上純化(Rf＝0.75)得到1.21g黃色固體的(E)-5-(N-嗎啉基)氨基磺?；?3-[(4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮，產(chǎn)率62％。Mp185℃。
H1NMR(CDCl3)9.31(s，1H，N-H)，8.41(s，1H，N-H)，7.80(s，1H，vinyl-H)，7.63(d，1H，Ph-H)，7.42(s，1H，Ph-H)，7.00(d，1H，Ph-H)，4.32(q，2H，CO2CH2CH3)，4.10(q，2H，CO2CH2CH3)，3.80(s，2H，CH2CO2CH2CH3)，3.67(t，2H，1.4-morpholinyl)，2.90(t，2H，2.3-morpholinyl)，2.10(s，3H，CH3)，1.36(t，3H，CO2CH2CH3)，1.20(t，2H，CO2CH2CH3)。EIMS m/e 531(M+)。
實(shí)施例15(E)-5-(3-氯苯基)氨基磺?；?3-[(4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮(化合物I-15)的制備在室溫下，將5-氯磺?；?(1H)-引哚-2-酮(2.1g，9mmol)、3-氯苯胺(1.8g，14mmol)和吡啶(1.4g)在20mL二氯甲烷的懸浮液中攪拌4小時(shí)。通過(guò)真空過(guò)濾收集形成的沉淀，用15ml水洗滌兩次并于40℃下真空干燥過(guò)夜，得到2.5g粉紅色固體的5-(3-氯苯基)氨基磺?；?(1H)-吲哚-2-酮，產(chǎn)率86％。EIMS m/e 321(M+-1)。
將4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-3-甲?；?5-甲基-1H-吡咯(1g，3.7mmol)和5-(3-氯苯基)氨基磺酰基-(1H)-吲哚-2-酮(1.19g，3.7mmol)在20ml乙醇中混合攪拌，油浴加熱到80℃。滴加六氫吡啶(0.01g)，反應(yīng)6小時(shí)后濃縮反應(yīng)液，用乙酸乙酯∶石油醚＝1∶5的洗脫液在硅膠柱上純化(Rf＝0.8)得到1.52g黃色固體的(E)-5-(3-氯苯基)氨基磺酰基-3-[(4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮，產(chǎn)率72％。Mp 118-120℃。
H1NMR(DMSO)7.56(m，2H，Ph-H)，7.38(s，1H，vinyl-H)，6.80-6.98(m，5H，Ph-H)，4.21(q，2H，CO2CH2CH3)，3.98(q，2H，CO2CH2CH3)，3.77(s，2H，CH2CO2CH2CH3)，2.00(s，3H，CH3)，1.36(t，3H，CO2CH2CH3)，1.20(t，3H，CO2CH2CH3)。EIMS m/e 571(M+)。
實(shí)施例16(E)-5-(3-氟苯基)氨基磺?；?3-[(4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮(化合物I-16)的制備將4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-3-甲酰基-5-甲基-1H-吡咯(1g，3.7mmol)和5-(3-氟苯基)氨基磺?；?(1H)-吲哚-2-酮(1.13g，3.7mmol)在20ml乙醇中混合攪拌，油浴加熱到80℃。滴加六氫吡啶(0.01g)，反應(yīng)6小時(shí)后濃縮反應(yīng)液，用乙酸乙酯∶石油醚＝1∶4的洗脫液在硅膠柱上純化(Rf＝0.85)得到1.49g黃色固體的(E)-5-(3-氟苯基)氨基磺?；?3-[(4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮，產(chǎn)率73％。Mp＞130℃分解。
H1NMR(DMSO)7.55(m，2H，Ph-H)，7.39(s，1H，vinyl-H)，6.80-6.98(m，5H，Ph-H)，4.21(q，2H，CO2CH2CH3)，3.98(q，2H，CO2CH2CH3)，3.77(s，2H，CH2CO2CH2CH3)，2.00(s，3H，CH3)，1.36(t，CO2CH2CH3)，1.20(t，3H，CO2CH2CH3)。EIMS m/e 555(M+)。
實(shí)施例17(E)-5-二甲基氨基磺?；?3-[(4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮(化合物I-17)的制備在室溫下，將2.3g的5-氯磺?；?2-(1H)-吲哚-2-酮加入二甲基胺的甲醇(10mL，2M)的懸浮液，攪拌4小時(shí)，其間形成白色固體。通過(guò)真空過(guò)濾收集沉淀，用氫氧化鈉(5ml，1N)和鹽酸(5ml，IN)洗滌并真空干燥過(guò)夜，得到1.8g的5-二甲基氨基-磺?；?2-(1H)-吲哚-2-酮，產(chǎn)率77％。EIMS m/e 240(M+)。
將4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-3-甲?；?5-甲基-1H-吡咯(1g，3.7mmol)和5-二甲基氨基-磺酰基-2-(1H)-吲哚-2-酮(0.94g，3.7mmol)在20ml乙醇中混合攪拌，油浴加熱到80℃。滴加六氫吡啶(0.01g)，反應(yīng)6小時(shí)后濃縮反應(yīng)液，用乙酸乙酯∶石油醚＝1∶4的洗脫液在硅膠柱上純化(Rf＝0.60)得到1.17g黃色固體的(E)-5-二甲基氨基磺?；?3-[(4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮，產(chǎn)率65％。Mp145℃。
H1NMR(CDCl3)9.32(s，1H，N-H)，8.43(s，1H，N-H)，7.80(s，1H，vinyl-H)，7.63(d，1H，Ph-H)，7.42(s，1H，Ph-H)，7.00(d，1H，Ph-H)，4.32(q，2H，CO2CH2CH3)，4.10(q，2H，CO2CH2CH3)，3.80(s，2H，CH2CO2CH2CH3)，2.43(s，6H，N(CH3)2)，2.10(s，3H，CH3)，1.36(t，3H，CO2CH2CH3)，1.20(t，2H，CO2CH2CH3)。EIMS m/e 489(M+)。
實(shí)施例18(E)-5-(3-氟-4-氯苯基)氨基磺?；?3-[(4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮(化合物I-18)的制備在室溫下，將5-氯磺?；?(1H)-吲哚-2-酮(2.1g，9mmol)、3-氟-4-氯苯胺(2.03g，14mmol)和吡啶(1.4g)在20ml二氯甲烷中攪拌4小時(shí)。過(guò)濾，沉淀用15ml水洗滌兩次并于40℃下真空干燥過(guò)夜，得到2.5g粉紅色固體5-(3-氟-4-氯苯基)氨基磺?；?(1H)-吲哚-2-酮，產(chǎn)率80％。EIMS m/e 340(M+)。
將4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-3-甲酰基-5-甲基-1H-吡咯(1g，3.7mmol)和5-(3-氟-4-氯苯基)氨基磺?；?(1H)-吲哚-2-酮(1.25g，3.7mmol)在20ml乙醇中混合攪拌，油浴加熱到80℃。滴加六氫吡啶(0.01g)，反應(yīng)6小時(shí)后濃縮反應(yīng)液，用乙酸乙酯∶石油醚＝1∶4的洗脫液在硅膠柱上純化(Rf＝0.75)得到1.52g黃色固體(E)-5-(3-氟-4-氯苯基)氨基磺酰基-3-[(4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮，產(chǎn)率70％。Mp＞130℃分解。
H1NMR(DMSO)7.56(m，2H，Ph-H)，7.38(s，1H，vinyl-H)，6.87-6.98(m，4H，Ph-H)，4.21(q，2H，CO2CH2CH3)，3.98(q，2H，CO2CH2CH3)，3.77(s，2H，CH2CO2CH2CH3)，2.00(s，3H，CH3)，1.36(t，3H，CO2CH2CH3)，1.20(t，CO2CH2CH3)。EIMS m/e 589(M+)。
實(shí)施例19(E)-5-(六氫吡啶基)氨基磺酰基-3-[(4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮(化合物I-19)的制備在室溫下，將5-氯磺?；?2-(1H)-吲哚-2-酮(2.3g，10mmol)溶解于四氫呋喃(10ml)中，加入六氫吡啶(750mg，10mmol)，攪拌4小時(shí)，其間形成白色固體。過(guò)濾收集沉淀，用氫氧化鈉(5ml，1N)和鹽酸(5ml，1N)洗滌并真空干燥過(guò)夜，得到2.53g白色固體5-(N-六氫吡啶基)氨基磺?；?(1H)-吲哚-2-酮，收率90％。EIMS m/e 282(M+)。
將4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-3-甲?；?5-甲基-1H-吡咯(1g，3.7mmol)和5-(N-六氫吡啶基)氨基磺酰基-(1H)-吲哚-2-酮(1.03g，3.7mmol)在20ml乙醇中混合攪拌，油浴加熱到80℃。滴加六氫吡啶(0.01g)，反應(yīng)6小時(shí)后濃縮反應(yīng)液，用乙酸乙酯∶石油醚＝1∶1的洗脫液在硅膠柱上純化(Rf＝0.70)得到1.21g黃色固體(E)-5-(六氫吡啶基)氨基磺?；?3-[(4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮，產(chǎn)率60％。Mp145℃。
H1NMR(DMCO)11.20(s，1H，N-H)，9.99(s，1H，N-H)，7.70(s，1H，vinyl-H)，7.62(d，2H，Ph-H)，6.42(s，1H，Ph-H)，7.17(q，2H，Ph-H)，4.28(q，2H，CO2CH2CH3)，4.00(q，2H，CO2CH2CH3)，3.95(s，2H，CH2CO2CH2CH3)，2.11(s，3H，CH3)，1.60(m，6H，4.5-(CH2)33-hexapyridinyl)，1.42(m，4H，1.2-(CH2)2-hexapyridinyl)，1.30(t，3H，CO2CH2CH3)，1.15(t，3H，CO2CH2CH3)。EIMS m/e 530(M++1)。
實(shí)施例20(E)-5-(3-溴苯基)氨基磺?；?3-[(4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮(化合物I-20)的制備在室溫下，將5-氯磺酰基-(1H)-吲哚-2-酮(2.1g，9mmol)、3-溴苯胺(2.3g，14mmol)和吡啶(1.4g)，在20ml二氯甲烷中攪拌4小時(shí)。過(guò)濾，沉淀用15ml水洗滌兩次并于40℃下真空干燥過(guò)夜，得到2.9g粉紅色固體的5-(3-溴苯基)氨基磺酰基-(1H)-吲哚-2-酮，產(chǎn)率82％，EIMS m/e 365(M+)。
將4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-3-甲?；?5-甲基-1H-吡咯(1g，3.7mmol)和5-(3-溴苯基)氨基磺?；?(1H)-吲哚-2-酮(1.39g，3.7mmol)在20ml乙醇中混合攪拌，油浴加熱到80℃。滴加六氫吡啶(0.01g)，反應(yīng)6小時(shí)后濃縮反應(yīng)液，用乙酸乙酯∶石油醚＝1∶5的洗脫液在硅膠柱上純化(Rf＝0.65)得到1.72g黃色固體(E)-5-(3-溴苯基)氨基磺?；?3-[(4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮，產(chǎn)率73％。Mp 134-138℃。
H1NMR(DMSO)7.56(m，2H，Ph-H)，7.38(s，1H，vinyl-H)，6.80-6.98(m，5H，Ph-H)，4.21(q，2H，CO2CH2CH3)，3.98(q，2H，CO2CH2CH3)，3.77(s，2H，CH2CO2CH2CH3)，2.00(s，3H，CH3)，1.36(t，3H，CO2CH2CH3)，1.20(t，3H，CO2CH2CH3)。EIMS m/e 615(M+)。
實(shí)施例21本發(fā)明化合物對(duì)人常染色體顯性遺傳型多囊腎病(ADPKD)囊腫襯里上皮細(xì)胞的抑制效果實(shí)驗(yàn)1、試劑及儀器人類多囊腎病囊腫襯里上皮細(xì)胞株由上海長(zhǎng)征醫(yī)院腎內(nèi)科實(shí)驗(yàn)室建立并保存；DMEM∶F12(1∶1)培養(yǎng)液(GIBCO公司)；小牛血清(常州四季青公司)；重組人類表皮生長(zhǎng)因子(rhEGF)(Calbiochem公司)；酶標(biāo)儀(LabsysteEIMS MK3)待測(cè)化合物根據(jù)實(shí)施例1-16制備的化合物I-1、I-2、I-3、I-4、I-5、I-6、I-7、I-8、I-9、I-10、I-11、I-12、I-13、I-14、I-15、I-16。
待測(cè)化合物以培養(yǎng)液稀釋，濃度梯度為50μM、5μM、500nM、50nM、5nM、0.5nM、0.05nM2、實(shí)驗(yàn)方法采用MTT法測(cè)定細(xì)胞增殖。將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的囊腫襯里上皮細(xì)胞接種于96孔板(1×103/孔)，24小時(shí)后，換無(wú)血清培養(yǎng)液同步24小時(shí)，使細(xì)胞靜止于休止期。棄上清液，換用含2％小牛血清各濃度藥物溶液，每個(gè)劑量組設(shè)9個(gè)復(fù)孔，37℃孵育72小時(shí)后，各劑量組加入1ng/mlrhEGF刺激24小時(shí)(根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)確定的最佳刺激濃度)。設(shè)立無(wú)藥物處理、無(wú)EGF刺激的空白對(duì)照組，始終僅加入培養(yǎng)液(2％小牛血清)。取6個(gè)復(fù)孔，每孔加入10μl MTT，孵育4小時(shí)后棄上清，每孔加入100μl DMSO溶解結(jié)晶，用酶標(biāo)儀讀取490nm的吸光度值，實(shí)驗(yàn)重復(fù)5次。
抑制率＝(A490對(duì)照孔-A490給藥孔)/A490對(duì)照孔×100％根據(jù)各濃度抑制率，采用以競(jìng)爭(zhēng)物濃度的對(duì)數(shù)同Logit〔I〕線性回歸，求出抑制50％結(jié)合物時(shí)的競(jìng)爭(zhēng)物濃度IC50。以上每個(gè)實(shí)驗(yàn)重復(fù)2次，求出2次實(shí)驗(yàn)的平均IC50值，作為抑制能力的最終指標(biāo)，測(cè)得實(shí)驗(yàn)化合物的抑制百分率。
3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。
表1.本發(fā)明化合物在各濃度對(duì)人類多囊腎病囊腫襯里上皮細(xì)胞的抑制百分率(％)

實(shí)施例22本發(fā)明化合物對(duì)A-549人肺腺癌細(xì)胞、A-431人皮膚鱗癌細(xì)胞和MDA-MB-468人乳腺癌細(xì)胞的抑制效果實(shí)驗(yàn)1、試劑及儀器RPMII640購(gòu)自Gibco公司；磺酰羅丹明B購(gòu)自Sigma公司；三氯醋酸(TCA)、醋酸(HAC)和Tris base unbuffer均為國(guó)產(chǎn)分析純；酶標(biāo)儀(VERSAmax)。
待測(cè)化合物根據(jù)實(shí)施例1-20制備的化合物I-1、I-2、I-3、I-4、I-5、I-6、I-7、I-8、I-9、I-10、I-11、I-12、I-13、I-14、I-15、I-16、I-17、I-18、I-19、I-20。
待測(cè)化合物以DMSO稀釋，濃度梯度為10-4M、10-5M、10-6M2、實(shí)驗(yàn)方法(磺酰羅丹明B(SRB)蛋白染色法)根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)速率，分別將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的A-549人肺腺癌細(xì)胞、A-431人皮膚鱗癌細(xì)胞和MDA-MB-468人乳腺癌細(xì)胞以90μl/孔接種于96孔培養(yǎng)板，貼壁生長(zhǎng)24小時(shí)，再加藥10μl/孔。每個(gè)濃度設(shè)三復(fù)孔。并設(shè)相應(yīng)濃度的生理鹽水溶媒對(duì)照及無(wú)細(xì)胞凋零孔。腫瘤細(xì)胞在37℃、5％CO2條件下培養(yǎng)72小時(shí)，然后傾去培養(yǎng)液，用10％冷TCA固定細(xì)胞，4℃放置1小時(shí)后，用蒸餾水洗滌5次，空氣中自然干燥。然后加入由1％冰醋酸配制的SRB(Sigma)4mg/ml溶液100μl/孔，室溫中染色15分鐘，去上清液，用1％醋酸洗滌5次，空氣干燥，最后加入150μl/孔的Tris溶液，酶標(biāo)儀540nm波長(zhǎng)下測(cè)定A值。
用下列公式計(jì)算腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率抑制率＝(A540對(duì)照孔-A540給藥孔)/A540對(duì)照孔×100％3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2-4。
表2.本發(fā)明化合物對(duì)A-549人肺腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率(％)

表3.本發(fā)明化合物對(duì)A-431人皮膚鱗癌細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率(％)

表4.本發(fā)明化合物對(duì)MDA-MB-468人乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率(％)

從表1-4中可以看出，本發(fā)明化合物對(duì)富含EGFR的腫瘤細(xì)胞的抑制活性較高。在ADPKD囊腫襯里上皮細(xì)胞生長(zhǎng)抑制實(shí)驗(yàn)里有八個(gè)化合物(化合物I-4、I-5、I-15、I-6、I-12、I-3、I-9和I-11)的IC50達(dá)到了10-5M，有兩個(gè)化合物的IC50達(dá)到了10-6M，化合物I-4的IC50達(dá)到了10-7M。兩個(gè)化合物(I-7和I-8)在濃度為10-6M時(shí)，對(duì)A-549人肺腺癌細(xì)胞、A-431人皮膚鱗癌細(xì)胞和MDA-MB-468人乳腺癌細(xì)胞的抑制百分率為86％，表現(xiàn)為強(qiáng)效抑制劑。
權(quán)利要求
1.具有下述通式(I)結(jié)構(gòu)的取代1H-吲哚-2-酮類化合物 其中R1選自氫、C1-5烷基、C2-5鏈烯基、C3-10環(huán)烷基、羥基、C1-5烷氧基、乙?；Ⅳ然?、酰胺基、硫代酰胺基、磺?；腿u代甲磺酰基；R2、R3、R4、R5各自獨(dú)立的選自氫、C1-5烷基、C1-4烷氧基、芳基、芳氧基、C1-5烷基芳基、C1-5烷基芳氧基、C3-10環(huán)烷基、巰基、C1-5烷巰基、芳巰基、亞巰?；Ⅺu素、三鹵甲基、氨基、氰基、硝基、羧基、氧羧基、酰胺基、硫代酰胺基、磺酰胺基、三鹵代甲磺酰基、N-亞磺酰胺基、S-亞磺酰胺基、三鹵代甲亞磺?；-氨基甲?；-硫代氨基甲?；?NR11R12，其中R3和R4、R4和R5可以結(jié)合形成六元芳環(huán)、亞甲二氧基或亞乙二氧基；R4、R5還可以同時(shí)或分別選自以下基團(tuán) 其中R13選自氫；C1-5烷基；C1-5烷氧基；芳基；芳氧基；C1-5烷基芳基；C1-5烷基芳氧基；三鹵甲基；吡啶基；嘧啶基；噻吩基；上述每一個(gè)基團(tuán)都可以被如下基團(tuán)進(jìn)行取代三氟甲氧基；氟；氯；溴；碘；C1-3-烷氧基或取代C1-3-烷氧基，其中取代C1-3-烷氧基是指在2-或3-位被氨基、C1-3-烷基胺基、2-(C1-3-烷基)胺基、苯基-(C1-3-烷基)胺基、N-(C1-3-烷基)-苯基-(C1-3-烷基)胺基、吡咯烷基或哌啶基取代；苯基-C1-3-烷基胺基-C1-3-烷基，該取代基還可以以三氟甲基、氟、氯、溴、碘、C1-5-烷基或者C1-3-烷氧基對(duì)苯基核進(jìn)行單取代或二取代，進(jìn)行二取代時(shí)，取代基可以相同，也可以不同；R6選自氫、C3-10環(huán)烷基、C1-5烷基、鹵素；R7和R8各自選自氫、C1-5烷基、C1-4烷氧基、芳氧基、C1-5烷基芳基、C1-5烷基芳氧基、三鹵代C1-5烷基、C3-10環(huán)烷基、巰基、C1-5烷巰基、芳巰基、亞巰酰基、鹵素、三鹵甲基、氨基、氰基、硝基、羧基、氧羧基、酰胺基、硫代酰胺基、磺酰胺基、三鹵代甲磺酰基、N-亞磺酰胺基、S-亞磺酰胺基、三鹵代甲亞磺?；?、O-氨基甲?；-硫代氨基甲?；?NR11R12；R9選自氫、C1-5烷基、C1-5烷氧基、芳基、芳氧基、C1-5烷基芳基、C1-5烷基芳氧基、鹵素、三鹵甲基、巰基、羥基、硫C1-5烷基和-NR11R12；R10選自氫、C3-10環(huán)烷基、C1-5烷基、C2-5鏈烯基、芳基、雜芳基、羥基和雜脂環(huán)基；R11和R12獨(dú)立選自氫、C1-5烷基、C2-5鏈烯基、C3-10環(huán)烷基、乙?；?、磺?；?、三氟甲磺?；?。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的取代1H-吲哚-2-酮類化合物，其特征在于其中R4選自C1-5烷基、鹵素、磺酰胺基、氨基、氰基、硝基、羧基和-NR11R12。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的取代1H-吲哚-2-酮類化合物，其特征在于其中R4、R5同時(shí)或分別選自以下結(jié)構(gòu)
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的取代1H-吲哚-2-酮類化合物，其特征在于包括以下化合物(E)-3-[(4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-1H-引哚-2-酮；(E)-5-溴-3-[(4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-1H-吲哚-2-酮；(E)-3-[(4-甲氧基羰基甲基-2-甲氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)-5-溴-3-[(4-甲氧基羰基甲基-2-甲氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)-3-[(2，5二甲基-2-乙氧基羰基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)-5-溴-3-[(2，5二甲基-2-乙氧基羰基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)-5-硝基-3-[(2，5二甲基-2-乙氧基羰基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)-3-[(2，5二甲基-2-甲氧基羰基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)-5-硝基-3-[(2，5二甲基-2-甲氧基羰基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)-5-硝基-3-[(4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)-5-羧基-3-[(4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)-5-氨基磺酰基-3-[(4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)-5-甲基氨基磺?；?3-[(4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)-5-(N-嗎啉基)氨基磺?；?3-[(4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)-5-(3-氯苯基)氨基磺?；?3-[(4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)-5-(3-氟苯基)氨基磺?；?3-[(4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)-5-二甲基氨基磺酰基-3-[(4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)-5-(3-氟-4-氯苯基)氨基磺酰基-3-[(4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-引哚-2-酮；(E)-5-(六氫吡啶基)氨基磺酰基-3-[(4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)-5-(3-溴苯基)氨基磺?；?3-[(4-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)亞甲基]-(1H)-吲哚-2-酮。
5.權(quán)利要求1所述的取代1H-吲哚-2-酮類化合物的制備方法，其特征在于由在堿的催化下，化合物(I)由等摩爾的化合物II和化合物III在有機(jī)溶劑中進(jìn)行縮合反應(yīng)而制得
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的取代1H-吲哚-2-酮類化合物的制備方法，其特征在于所述的堿催化劑為有機(jī)氮堿或無(wú)機(jī)堿，有機(jī)溶劑為質(zhì)子溶劑或質(zhì)子惰性溶劑，反應(yīng)溫度為65℃～90℃；反應(yīng)時(shí)間為3～6小時(shí)。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的取代1H-吲哚-2-酮類化合物的制備方法，其特征在于有機(jī)氮堿可采用三乙胺、吡啶、六氫吡啶、三甲胺、苯胺、二異丙基胺、1，8-二氮雜二環(huán)[5.4.1]十一-7-烯、吡咯烷、哌啶，無(wú)機(jī)堿可采用氨、堿金屬氫氧化物、堿土金屬氫氧化物、磷酸鹽、碳酸鹽、碳酸氫鹽或硫酸氫鹽。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的取代1H-吲哚-2-酮類化合物的制備方法，其特征在于質(zhì)子溶劑為水或醇類，所述質(zhì)子惰性溶劑為極性或非極性質(zhì)子惰性溶劑，且不含有酸性氫，即不含有能與溶質(zhì)結(jié)合的氫，其中非極性質(zhì)子惰性溶劑可采用戊烷、己烷、苯、甲苯、二氯甲烷或四氯化碳，極性質(zhì)子惰性溶劑可采用氯仿、四氫呋喃、二甲基亞砜或二甲基甲酰胺。
9.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的取代1H-吲哚-2-酮類化合物的制備方法，其特征在于當(dāng)溶劑為質(zhì)子溶劑時(shí)，所述堿催化劑為堿金屬氫氧化物或堿土金屬氫氧化物。
10.權(quán)利要求1所述的取代1H-吲哚-2-酮類化合物作為表皮生長(zhǎng)因子受體抑制劑，在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及具有如右式結(jié)構(gòu)的新型取代1H－吲哚－2－酮類化合物及其用途，藥理實(shí)驗(yàn)表明，此類化合物具有一定的藥理學(xué)性質(zhì)，特別是對(duì)表皮生長(zhǎng)因子受體酪氨酸激酶及與其相關(guān)聯(lián)的各種腫瘤細(xì)胞的增生具有抑制作用，本發(fā)明還涉及該化合物的制備方法。
文檔編號(hào)A61K31/403GK1769284SQ20041006790
公開日2006年5月10日 申請(qǐng)日期2004年11月5日 優(yōu)先權(quán)日2004年11月5日
發(fā)明者蔣華良, 羅小民, 李海泓, 譚金芝, 丁健, 林莉萍, 柳紅, 陳凱先 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院上海藥物研究所