本發(fā)明涉及化合物YLF466D(曾用代號(hào)C24)的一種新的疾病治療用途。具體而言，本發(fā)明公開了化合物YLF466D、其藥用鹽、藥用酯、結(jié)晶水合物、溶劑合物或它們中的多種的混合物在制備治療心肌缺血再灌注損傷藥物中的用途。

背景技術(shù)：

近年來，缺血性心臟病的發(fā)病率不斷上升，嚴(yán)重威脅人類健康。冠狀動(dòng)脈血流量降低，導(dǎo)致心肌細(xì)胞損傷甚至死亡，是導(dǎo)致缺血性心臟病的主要原因。目前的治療措施主要包括動(dòng)脈搭橋術(shù)、溶栓療法、經(jīng)皮腔內(nèi)冠脈血管成形術(shù)等現(xiàn)代技術(shù)使心臟實(shí)現(xiàn)血液再灌注?？墒切募∪毖俟嘧⒈旧硪嗫蓪?dǎo)致心肌損傷，甚至在血管開放后還會(huì)引起比血管閉塞時(shí)更嚴(yán)重的急性心肌損傷，導(dǎo)致嚴(yán)重的心律失常，心肌壞死面積擴(kuò)大，心臟破裂甚至死亡。這種在缺血基礎(chǔ)上恢復(fù)血流后組織損傷反而加重，甚至發(fā)生不可逆性損傷的現(xiàn)象稱為心肌缺血再灌注損傷(Myocardial ischemia-reperfusion injury,MIRI)。隨著動(dòng)脈搭橋術(shù)、溶栓療法、經(jīng)皮腔內(nèi)冠脈血管成形術(shù)、心臟外科體外循環(huán)、心肺腦復(fù)蘇和器官移植等方法的建立和推廣應(yīng)用，MIRI已成為阻礙心肌從再灌注療法中獲得最佳療效的主要難題，因而已成為現(xiàn)階段亟待解決的重大臨床問題(柴峰等，心肌缺血再灌注損傷所致血管功能障礙研究進(jìn)展，中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥，2014,9,259-260)。

MIRI的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，尚未完全闡明。已有研究表明，心肌缺血再灌注可導(dǎo)致線粒體能量合成障礙、Ca²⁺穩(wěn)態(tài)紊亂、大量自由基的產(chǎn)生以及炎性反應(yīng)等，最終導(dǎo)致了心肌細(xì)胞的凋亡或死亡(徐盟，心 肌缺血再灌注損傷的主要機(jī)制與相關(guān)藥物治療的研究進(jìn)展，實(shí)用藥物與臨床，2014,17,1052-1056)。圍繞這些機(jī)制，目前研究MIRI的治療藥物主要包括以下幾個(gè)方面：1)改善能量代謝障礙，如磷酸肌酸和曲美他嗪等；2)Ca²⁺拮抗劑或通道抑制劑，如選擇性NCX抑制劑SEA0400以及NHE抑制劑HOE694和KR-32570等；3)抗氧化劑，如谷胱甘肽過氧化酶、別嘌呤醇、依達(dá)拉奉、卡維地洛以及維生素E等；4)抗炎性反應(yīng)，如利多卡因。此外，一些中藥提取物以及代謝類細(xì)胞保護(hù)劑、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑以及RISK(損傷搶救激酶)途徑相關(guān)靶向藥物等，也都顯示出了一定程度的MIRI保護(hù)作用。然而遺憾的是，上面所述這些藥物在臨床應(yīng)用時(shí)效果并不顯著，甚至還帶來一定的副作用，無法獲得滿意的MIRI治療效果，因此臨床上迫切需要開發(fā)出具有新穎作用機(jī)制的MIRI治療藥物。

AMPK(單磷酸腺苷激活蛋白激酶)是調(diào)控機(jī)體細(xì)胞能量代謝的重要因子，也是當(dāng)前研發(fā)新型糖尿病治療藥物的一個(gè)重要靶點(diǎn)。研究表明AMPK的激活也是心肌細(xì)胞在應(yīng)激條件下的一種內(nèi)源性保護(hù)機(jī)制，可保護(hù)心臟免遭缺血性損傷。因此，AMPK活化劑為MIRI治療藥物的開發(fā)提供了新的契機(jī)和希望。研究顯示，一些AMPK活化劑，如內(nèi)源性AMPK活化劑脂聯(lián)素等以及一些外源性的AMPK活化劑如二甲雙胍、羅格列酮和AICAR(阿卡地新)等，可較好緩解心肌再灌注損傷(蔡懷秋等，AMPK與心肌缺血－再灌注損傷，國(guó)際心血管病雜志，2013,40,12-15)。

現(xiàn)有AMPK活化劑可分為內(nèi)源性和外源性活化劑兩類。內(nèi)源性活化劑主要有瘦素、脂聯(lián)素等細(xì)胞因子，由于它們?cè)隗w內(nèi)參與了多種生理活動(dòng)，加之這些大分子制備不易，因此與小分子化合物相比，內(nèi)源性的AMPK活化劑不宜于開發(fā)為MIRI治療藥物；外源性的AMPK活化 劑報(bào)道較多，包括雙胍類(如二甲雙胍)、噻唑啉酮類(如羅格列酮，曲格列酮和匹格列酮)以及某些天然產(chǎn)物(如小檗堿)。然而這些外源性AMPK活化劑大多是在調(diào)節(jié)其他生理效應(yīng)的過程中間接地激活了AMPK(如引起AMP/ATP比例的變化)，因此不是特異性的AMPK直接活化劑；此外，這些非特異性AMPK活化劑副作用較大，例如二甲雙胍導(dǎo)致的腸胃副作用，羅格列酮類藥物會(huì)導(dǎo)致體重增加。因此尋找并發(fā)展能特異性地作用于AMPK的外源性活化劑，可克服非特異性AMPK活化劑的不足，對(duì)于開發(fā)副作用小的新型MIRI治療藥物格外具有意義。

中國(guó)專利申請(qǐng)第201080041819號(hào)(CN102666485)公開了一類烯烴羥吲哚類化合物及其制備方法，該類化合物可作為AMPK活化劑用于制備糖尿病治療藥物。其中代表性化合物YLF466D(第57號(hào)化合物，4-{3-[1-(4-氯-苯基)-1-苯基-甲-(E)-叉]-2-氧代-2,3-二氫-吲哚-1-基-甲基}-苯甲酸)顯示了較好的激動(dòng)活性(EC₅₀為2.17μM)。

發(fā)明人通過后續(xù)深入研究，發(fā)現(xiàn)代表性化合物YLF466D(代號(hào)C24)為特異性的AMPK活化劑，其能夠在分子水平上變構(gòu)激活A(yù)MPK的三亞基異聚體和含自抑制區(qū)域的無活性形式，直接活化AMPK(Yuan-Yuan Li，Li-Fang Yu,Li-Na Zhang,Bei-Ying Qiu,Ming-Bo Su,Fang Wu,Da-Kai Chen,Tao Pang,Min Gu,Wei Zhang,Wei-Ping Ma,Hao-Wen Jiang,Jing-Ya Li,Fa-Jun Nan,Jia Li.Toxicology and Applied Pharmacology，2013,273:325-334)。更進(jìn)一步的深入研究還發(fā)現(xiàn)，化合物YLF466D(代號(hào)C24)具有較好的口服吸收和藥代參數(shù)。大鼠按劑量10mg/kg灌胃給予化合物YLF466D后，其達(dá)峰濃度Cmax為3.27μg/mL，血漿暴露量AUC0-24h為28.9μg·h/mL，口服吸收利用度(F％)為33.7％，同時(shí)測(cè)得其半衰期t1/2 為4小時(shí)；此外，化合物YLF466D(代號(hào)C24)的心臟毒性小，其對(duì)hERG鉀電流作用的半數(shù)抑制濃度(IC50)大于20μM。這些研究結(jié)果表明化合物YLF466D有望開發(fā)成為新型MIRI治療藥物。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供結(jié)構(gòu)如下所示的化合物YLF466D、其藥用鹽、藥用酯、結(jié)晶水合物、溶劑合物或它們中的多種的混合物在制備MIRI治療藥物中的用途。

本發(fā)明還提供一種治療MIRI的藥物組合物，該藥物組合物包含化合物YLF466D、其藥用鹽、藥用酯、結(jié)晶水合物和溶劑合物中的一種或多種，作為該藥物組合物的活性成分；以及一種或多種藥學(xué)上可接受的載體。所述治療MIRI的藥物組合物可進(jìn)一步包含藥學(xué)上常規(guī)的輔劑，例如分散劑、賦形劑、崩解劑、抗氧化劑、甜味劑、包衣劑等。

化合物YLF466D是特異性的AMPK活化劑，且成藥性好，具有良好的口服吸收，心臟毒性小。在大鼠MIRI藥效模型上，該類化合物對(duì)心肌MIRI顯示出顯著的治療作用，治療效果明顯優(yōu)于非特異性AMPK活化劑二甲雙胍(Metformin)。

有益效果

口服給予AMPK特異性活化劑YLF466D，對(duì)心肌MIRI顯示出顯著的治療效果，從而可用于開發(fā)制成新型MIRI治療藥物。

附圖說明

圖1為實(shí)施例一的不同試驗(yàn)組心肌肌鈣蛋白I(cTnI)濃度的柱狀圖；

圖2為實(shí)施例一中心肌染色結(jié)果(2a)以及缺血心肌所占的比重的柱狀圖(2b)；

圖3為實(shí)施例二中化合物YLF466D和二甲雙胍對(duì)心肌梗死面積的比較結(jié)果：3a為心肌染色結(jié)果；3b為梗死區(qū)域百分率的柱狀圖。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例一：化合物YLF466D的治療作用評(píng)價(jià)

采用本領(lǐng)域?qū)I(yè)人員認(rèn)可且廣泛使用的大鼠心肌缺血再灌注模型，評(píng)價(jià)化合物YLF466D對(duì)心肌MIRI的治療作用。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為健康雄性Sprague Dawley大鼠，體重250-300g。實(shí)驗(yàn)用10％水合氯醛對(duì)大鼠進(jìn)行麻醉(0.3mL/100g)，用手術(shù)剪和止血鉗分離大鼠左側(cè)的皮膚和胸大肌，暴露第2、3肋，開胸后撕開心包膜，結(jié)扎冠狀動(dòng)脈前降支(活結(jié))，此時(shí)能看到結(jié)扎部位變蒼白，心電圖ST段向上抬高，QRS波變寬增高，后將大鼠胸口縫合，30min后打開活結(jié)進(jìn)行再灌注。實(shí)驗(yàn)設(shè)置三個(gè)組別，分別為假手術(shù)(sham)組，模型(IR)組，給藥(YLF466D)組，YLF466D組在再灌注后立即通過靜脈途徑給予大鼠，給藥劑量為10mg/kg，7天后進(jìn)行藥效評(píng)價(jià)。

試驗(yàn)結(jié)果：

(1)心肌肌鈣蛋白I指標(biāo)比較。

心肌肌鈣蛋白I(cTnI)是臨床上心肌梗死的特異性檢測(cè)指標(biāo)，大鼠心肌缺血再灌注后4h取血檢測(cè)血清中cTnI的濃度。如圖1所示， 在模型組中，cTnI顯著上調(diào)，而給予化合物YLF466D能顯著抑制cTnI的上調(diào)，提示化合物YLF466D對(duì)MIRI有明顯的治療作用。

(2)心肌染色結(jié)果

TTC(2,3,5-氯化三苯基四氮唑)是脂溶性光敏感復(fù)合物，因染色后顏色較易觀察且靈敏性高，可將缺血心肌和正常心肌區(qū)分開，缺血部分不染色呈蒼白色，正常部分為鮮紅色。手術(shù)后第7天，剖取心臟連續(xù)切片，進(jìn)行TTC染色。從圖2a可以看出模型組缺血明顯，而化合物YLF466D給藥組中白色部分顯著減少。此外，將缺血部分剪下稱量，計(jì)算缺血心肌所占整個(gè)心臟的比重，可以發(fā)現(xiàn)化合物YLF466D作用后缺血心肌的比重明顯下降(圖2b)，以上結(jié)果提示化合物YLF466D對(duì)MIRI有顯著的治療作用。

實(shí)施例二：化合物YLF466D和二甲雙胍的治療效果比較

采用本領(lǐng)域?qū)I(yè)人員認(rèn)可且廣泛使用的大鼠心肌缺血再灌注模型，比較化合物YLF466D和二甲雙胍對(duì)心肌MIRI的治療效果。

實(shí)驗(yàn)用動(dòng)物為Sprague Dawley大鼠，體重250-300g，稱重后注射10％水合氯醛(ip)進(jìn)行麻醉(3ml/kg)。麻醉后置于恒溫手術(shù)臺(tái)，四肢及頭部固定仰臥于固定板上，胸部去毛，碘伏消毒。沿鎖骨中線縱行切開，分離皮膚和肌肉，暴露第2，3根肋骨。連接呼吸機(jī)(呼吸頻率：70，呼吸比：1-2，潮氣量：22),于左胸第2，3肋間開胸，用拉鉤暴露心臟，在左心耳下方找到冠狀動(dòng)脈左前降支(LAD)，用O3/84*8縫合針在距離左心耳下緣約2mm處穿過心肌表層，穿4-0手術(shù)線結(jié)扎，閉胸用2-0手術(shù)線縫合。按層次依次縫合肌肉、皮膚。假手術(shù)組只需暴露心臟穿線但不結(jié)扎。手術(shù)完畢后，立即觀測(cè)大鼠心電圖，以S-T段明顯抬高，結(jié)扎部位變蒼白為模型成功標(biāo)志。缺血30min后松開結(jié)扎，進(jìn)行再灌注。實(shí)驗(yàn)設(shè)置五個(gè)組別，分別為假手術(shù) (sham)組，模型(IR)組，YLF466D組(50mg/kg)以及二甲雙胍高低劑量組(100mg/kg，50mg/kg)。再灌注后立即通過灌胃途徑給予化合物YL466D和二甲雙胍，7天后進(jìn)行藥效評(píng)價(jià)。

心肌染色試驗(yàn)效果：

剖取大鼠心臟，使用模具從心尖部開始每隔2mm進(jìn)行切片，于2.0％TTC染液(37℃)中避光反應(yīng)15min，4％多聚甲醛固定24小時(shí)，拍照計(jì)算梗死面積，結(jié)果如圖3所示。

缺血壞死心肌呈白色，正常心肌為鮮紅色。與對(duì)照組相比，化合物YLF466D組心肌梗死區(qū)域百分率從30％降至13％，而給予50mg/kg或100mg/kg二甲雙胍對(duì)心肌梗死區(qū)域百分率無顯著影響。灌胃給予化合物YLF466D后的治療效果顯著優(yōu)于二甲雙胍。