專利名稱：新霉素菌種選育快速篩選方法
新霉素菌種選育快速篩選方法本發(fā)明涉及一種新霉素菌種選育快速篩選方法，尤其涉及一種將新霉素優(yōu)良菌種 快速鑒別出來(lái)的方法。
背景技術(shù)：
新霉素菌種篩選是提高菌種質(zhì)量，穩(wěn)定發(fā)酵水平的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。長(zhǎng)期以來(lái)，新霉素菌 種選育一直采用抗生素微生物檢定法來(lái)測(cè)定不同單菌落的生產(chǎn)能力，從中選擇生產(chǎn)能力高 的菌株，淘汰生產(chǎn)能力低下的菌株。由于菌種選育要經(jīng)過初篩和復(fù)篩兩個(gè)階段，篩選的單菌 落眾多，一般在150-200，加之抗生素微生物檢定法操作繁瑣，測(cè)定時(shí)間約需20小時(shí)，且每 次測(cè)定數(shù)量有限，故要分?jǐn)?shù)批進(jìn)行測(cè)定，這不但大大降低了菌種篩選效率，還因不同條件、 不同操作人等因素的變化，增加了生物檢定法測(cè)定的誤差，降低了選育優(yōu)良菌種的準(zhǔn)確性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種新霉素菌種選育快速篩選方法，該方法能 夠縮短菌種選育的周期，提高菌種篩選效率和選育優(yōu)良菌種的準(zhǔn)確性，為新霉素發(fā)酵生產(chǎn) 提供優(yōu)良的菌種，從而提高和穩(wěn)定新霉素發(fā)酵生產(chǎn)水平。本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的一種新霉素菌種選育快速篩選方法，包括以下步 驟
(1)接種發(fā)酵瓶在無(wú)菌室內(nèi)采用挖塊接種法將新霉素單菌落斜面接于發(fā)酵瓶，將發(fā)酵 瓶放入搖床上振搖，搖床轉(zhuǎn)速250轉(zhuǎn)/分；溫度35士2度；培養(yǎng)時(shí)間135-140小時(shí)，完成發(fā)酵 瓶接種；
(2)發(fā)酵液過濾將發(fā)酵到終點(diǎn)的發(fā)酵瓶進(jìn)行過濾，取其過濾液；
(3)平板的培養(yǎng)基的準(zhǔn)備將生物檢定培養(yǎng)基預(yù)熱融化，在無(wú)菌室內(nèi)倒入平板內(nèi)，待培 養(yǎng)基凝固后，再倒入內(nèi)含敏感菌的檢定培養(yǎng)基；
(4)直接點(diǎn)樣將多個(gè)用濾紙制作成圓形紙片放置于平板培養(yǎng)基上，用進(jìn)樣器吸取發(fā)酵 液的過濾液直接點(diǎn)在圓形紙片上，所有樣品點(diǎn)完后，將平板培養(yǎng)基放入培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)， 培養(yǎng)時(shí)間14-16小時(shí)，培養(yǎng)溫度36-38度；
(5)抑菌圈的測(cè)量將培養(yǎng)24小時(shí)的平板從培養(yǎng)箱中取出，對(duì)每個(gè)抑菌圈進(jìn)行測(cè)量，根 據(jù)菌種選育確定的數(shù)量，優(yōu)先選擇抑菌圈大的菌株進(jìn)行生物效價(jià)確認(rèn)，完成新霉素菌種選 育快速篩選?？刂婆囵B(yǎng)基厚度在2_3mm之間?？刂茩z定培養(yǎng)基的厚度在2_3mm之間。本發(fā)明提供的新霉素菌種選育快速篩選方法，由于發(fā)明了菌種選育中的快速簡(jiǎn)化 的篩選方法，從而縮短菌種選育的周期，以前菌種選育周期要用5周時(shí)間，現(xiàn)在僅用一周時(shí) 間，菌種篩選效率提高的80% ；本發(fā)明提高菌種篩選效率和選育優(yōu)良菌種的準(zhǔn)確性，從而為 新霉素發(fā)酵生產(chǎn)提供優(yōu)良的菌種，為提高和穩(wěn)定發(fā)酵生產(chǎn)水平提供了可靠保證。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例
(1)接種發(fā)酵瓶在無(wú)菌室內(nèi)采用挖塊接種法將新霉素單菌落斜面接于發(fā)酵瓶，將發(fā)酵 瓶放入搖床上振搖，搖床轉(zhuǎn)速250轉(zhuǎn)/分；溫度35士2度；培養(yǎng)時(shí)間135-140小時(shí)，完成發(fā)酵 瓶接種；
(2)濾液的制備將發(fā)酵到終點(diǎn)的發(fā)酵液IOOml進(jìn)行過濾，用濾紙過濾，獲取過濾液；
(3)平板的準(zhǔn)備用不銹鋼薄板制作35X25X4cm尺寸的平板(帶蓋)，將生物檢定培養(yǎng) 基預(yù)熱融化，在無(wú)菌室內(nèi)倒入平板內(nèi)，倒入量以培養(yǎng)基厚度控制在2-3mm為宜，待培養(yǎng)基 凝固后，再倒入內(nèi)金黃色葡萄球菌作含敏感菌的檢定培養(yǎng)基，倒入量以培養(yǎng)基厚度控制在 2-3mm為宜；
(4)直接點(diǎn)樣用濾紙制作成直徑為5mm的圓形紙片，將紙片按適當(dāng)距離放置于平板培 養(yǎng)基上，后用5微升進(jìn)樣器吸取發(fā)酵液的過濾液直接點(diǎn)在圓形紙片上，樣品點(diǎn)完后，將平板 培養(yǎng)基放入培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間14 - 16小時(shí)，培養(yǎng)溫度36 - 38度。(5)抑菌圈的測(cè)量將培養(yǎng)后的平板從培養(yǎng)箱中取出，用游標(biāo)卡尺對(duì)每一個(gè)抑菌圈 進(jìn)行測(cè)量，根據(jù)菌種選育確定的數(shù)量，優(yōu)先選擇抑菌圈大的菌株進(jìn)行下一步的生物效價(jià)確 認(rèn)。實(shí)施例試驗(yàn)數(shù)據(jù)一
發(fā)酵時(shí)實(shí)際效 間 價(jià) 抑菌,直徑 平均值
丄2Hmm
140小吋 20356u/ml 2“ 23,58i_ 23.42mm
1 2 丄 l:5inm 87小時(shí) 11708u/ml 2._21.29min 21.22mm
試驗(yàn)數(shù)據(jù)一中采用的是兩個(gè)效價(jià)差別大的樣進(jìn)行對(duì)比，是在不同批次，不同發(fā)酵時(shí)間 的完成的取樣，從表中數(shù)據(jù)顯示，效價(jià)高的其抑菌圈直徑大，效價(jià)低的其抑菌圈直徑小。實(shí)施例試驗(yàn)數(shù)據(jù)二
樣品序樣品效平均直
號(hào) 價(jià) 圈1直徑圈2直徑徑
1號(hào)樣 11946u^ml 22.52mm 22.86mm22.69mm
2號(hào)樣 9233u/ml 22.39mm 22.26mm22.32mm 3號(hào)樣-8273uM ■ 22.IOmrn Tl.85mm"207η τη 4號(hào)樣‘11979'j/ml~2J3mm ~58mm22.45mm ？號(hào)祥 10674u/ml 22.24mm 22.21mm22.22mm 石號(hào)樣 9134ii/ml 21.86mm 21.38mm21.62mm
從試驗(yàn)數(shù)據(jù)二可以看到不同效價(jià)的樣，其效價(jià)高的抑菌圈直徑大，效價(jià)低的抑菌圈直 徑小。規(guī)律性較強(qiáng)，通過這一規(guī)律，可完成新霉素菌種選育快速篩選。
權(quán)利要求
一種新霉素菌種選育快速篩選方法，其特征在于包括以下步驟(1)接種發(fā)酵瓶在無(wú)菌室內(nèi)采用挖塊接種法將新霉素單菌落斜面接于發(fā)酵瓶，將發(fā)酵瓶放入搖床上振搖，搖床轉(zhuǎn)速250轉(zhuǎn)/分；溫度35±2度；培養(yǎng)時(shí)間135 140小時(shí)，完成發(fā)酵瓶接種；(2)發(fā)酵液過濾將發(fā)酵到終點(diǎn)的發(fā)酵瓶進(jìn)行過濾，取其過濾液；(3)平板的培養(yǎng)基的準(zhǔn)備將生物檢定培養(yǎng)基預(yù)熱融化，在無(wú)菌室內(nèi)倒入平板內(nèi)，待培養(yǎng)基凝固后，再倒入內(nèi)含敏感菌的檢定培養(yǎng)基；(4)直接點(diǎn)樣將多個(gè)用濾紙制作成圓形紙片放置于平板培養(yǎng)基上，用進(jìn)樣器吸取發(fā)酵液的過濾液直接點(diǎn)在圓形紙片上，所有樣品點(diǎn)完后，將平板培養(yǎng)基放入培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間14 16小時(shí)，培養(yǎng)溫度36 38度；(5)抑菌圈的測(cè)量將培養(yǎng)24小時(shí)的平板從培養(yǎng)箱中取出，對(duì)每個(gè)抑菌圈進(jìn)行測(cè)量，根據(jù)菌種選育確定的數(shù)量，優(yōu)先選擇抑菌圈大的菌株進(jìn)行生物效價(jià)確認(rèn)，完成新霉素菌種選育快速篩選。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的新霉素菌種選育快速篩選方法，其特征在于控制培養(yǎng)基厚 度在2-3mm之間。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的新霉素菌種選育快速篩選方法，其特征在于控制檢定培養(yǎng) 基的厚度在2-3mm之間。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的新霉素菌種選育快速篩選方法，其特征在于檢定培養(yǎng)基中 的敏感菌為金黃色葡萄球菌。
全文摘要
一種新霉素菌種選育快速篩選方法，通過接種發(fā)酵瓶、發(fā)酵液過濾、平板的培養(yǎng)基的準(zhǔn)備、直接點(diǎn)樣和抑菌圈的測(cè)量的步驟，根據(jù)菌種選育確定的數(shù)量，優(yōu)先選擇抑菌圈大的菌株進(jìn)行生物效價(jià)確認(rèn)，完成新霉素菌種選育快速篩選。本發(fā)明提供的新霉素菌種選育快速篩選方法，從而縮短菌種選育的周期，以前菌種選育周期要用5周時(shí)間，現(xiàn)在僅用一周時(shí)間，菌種篩選效率提高的80%；本發(fā)明提高菌種篩選效率和選育優(yōu)良菌種的準(zhǔn)確性，從而為新霉素發(fā)酵生產(chǎn)提供優(yōu)良的菌種，為提高和穩(wěn)定發(fā)酵生產(chǎn)水平提供了可靠保證。
文檔編號(hào)C12N1/00GK101974435SQ201010545450
公開日2011年2月16日 申請(qǐng)日期2010年11月16日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月16日
發(fā)明者何連明 申請(qǐng)人:宜昌三峽制藥有限公司