專利名稱：一種凝乳酶粉的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種凝乳酶的制備，更具體地說(shuō)涉及一種從幼小吮乳小?；蚋嵫虬櫸柑崛∧槊?又稱皺胃酶)粉的制備方法。
背景技術(shù)：
凝乳酶的作用是水解k-酶蛋白的phe105-Met106肽鍵，產(chǎn)生副k-的酶蛋白和糖巨肽，在Ca2+存在下使乳凝固，形成凝塊。雖然近年來(lái)，在市場(chǎng)上出現(xiàn)了來(lái)源于動(dòng)物、植物及微生物的各種凝乳酶，但傳統(tǒng)的小?；蚋嵫虬櫸该敢蚱淠Y(jié)牛乳的活力強(qiáng)，能得到?jīng)]有苦味，組織狀態(tài)適宜和產(chǎn)品得率高優(yōu)點(diǎn)，故至今乃是干酪生產(chǎn)中使用最多，質(zhì)量最好的凝乳酶。用小牛或羔羊皺胃浸泡提取凝乳酶由來(lái)已久，形成了許多方法。公知的提取方法是把屠宰后的小?；蚋嵫虬櫸溉〕?，清除內(nèi)含物，剝?nèi)グ櫸副砻娴闹炯敖Y(jié)締組織，洗滌干凈，將其絞碎。采用不同的方法進(jìn)行浸泡提取。例如有的用氯化鈉為提取劑，硼酸作防腐劑來(lái)提取凝乳酸，有的用氯化鈉為提取劑，乙醇作防腐劑，或用氯化鈣為提取劑，乙醇作防腐劑。這表明了他們都是浸泡出來(lái)的液體凝乳酶，因其體積大，又不易保存，如欲制得粉末，則步驟煩瑣，故多直接用于牛乳或羊乳的凝固。有的用過(guò)飽和氯化鈉將其沉淀，制成粉末，可這不但成本提高很多，而且酶的活性也有所下降，況且液體凝乳酶含有大量的雜蛋白、無(wú)機(jī)鹽和防腐劑等成分。一則使酶液混濁不清，二則也影響了干酪產(chǎn)品的質(zhì)量，會(huì)有令人不快的異味。由此可見(jiàn)，對(duì)小牛或羔羊皺胃加氯化鈉和防腐劑進(jìn)行浸泡提取還是存在一定的缺點(diǎn)和不足。目前我國(guó)用于干酪的凝乳酶生產(chǎn)還是一項(xiàng)空白，所需的凝乳酶主要依靠進(jìn)口，且價(jià)格昂貴。我們急需選擇更簡(jiǎn)便易行、在經(jīng)濟(jì)上更為合理的方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是在于避免上述已有技術(shù)的不足，提供一種從小牛或羔羊的皺胃中提取凝乳酶，制備成粉狀的一種凝乳酶粉的制備方法。
本方法有下述順序步驟a、以幼小吮乳的小?；蚋嵫虬櫸笧樵希宄齼?nèi)含物，剝?nèi)グ櫸副砻娴闹窘Y(jié)締組織，洗滌干凈，將其絞碎，然后加水，其固液比為1∶6-10。再加食鹽，其濃度為1-4mol/l，在常溫下攪拌浸泡48-120小時(shí)，進(jìn)行離心，除去殘?jiān)?，得到含酶的上清液，再進(jìn)行超濾濃縮，真空冷凍干燥，得到初步的粗制凝乳酶粉。
b、在粗制凝乳酶粉中加水，其固液比為1∶10-20，使其成為濃的含酶水溶液，然后在其中加入γ-氧化鋁，其濃度為每100毫升中加2-5克(w/v)，進(jìn)行攪拌，靜置1-10小時(shí)，再離心去掉上清液，得到γ-氧化鋁沉淀。
c、用pH為5.0-5.3的水溶液，對(duì)γ-氧化鋁沉淀進(jìn)行洗脫解析，再經(jīng)離心，去掉γ-氧化鋁殘?jiān)?，得到高純度的含酶溶液?br> d、將含酶溶液再經(jīng)超濾儀濃縮，得到含酶的濃溶液，然后用飽和氯化鈉水溶液進(jìn)行鹽析、離心，去上清液，得到酶沉淀，用蒸餾水溶解、透析，最后真空冷凍干燥得到精致的凝乳酶粉。
所述的γ-氧化鋁，其表面積為150-200m2/g，平均孔徑為150-200。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是提取方法簡(jiǎn)便易行，直接用氯化鈉液體進(jìn)行浸泡，不加防腐劑-硼酸或酒精等，用γ-氧化鋁進(jìn)行吸附，避免了對(duì)最終產(chǎn)品的污染，同時(shí)也降低了生產(chǎn)成本。酶活性高，已達(dá)1∶500,000的比例凝結(jié)牛乳。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1本方法有下述順序步驟a、用吮乳的小牛皺胃為原料，清除內(nèi)含物，剝?nèi)グ櫸副砻娴闹炯敖Y(jié)締組織，洗滌干凈。將1000克的小牛皺胃用電動(dòng)絞肉機(jī)絞碎，然后加水5000毫升，加濃度為1mol/l的食鹽，在常溫下攪拌浸泡72小時(shí)后，用4000r/min離心15min，除去殘?jiān)?，得到含酶的上清液，再進(jìn)行超濾濃縮，真空冷凍干燥，得到初步的粗制凝乳酶粉。
b、在粗制凝乳酶粉中加水500毫升，使其成為濃的含酶水溶液，然后在其中加入濃度為每100毫升中加2克(w/v)的γ-氧化鋁(γ-氧化鋁其表面積為150-200m2/g，平均孔徑為150-200)，對(duì)其進(jìn)行凝乳酶的吸附，進(jìn)行攪拌，靜置5小時(shí)，再離心去掉上清液，得到γ-氧化鋁沉淀。
c、用pH為5.3的水溶液500毫升，對(duì)γ-氧化鋁沉淀進(jìn)行洗脫解析，再經(jīng)離心，去掉γ-氧化鋁殘?jiān)?，得到含酶溶?50毫升。
d、將含酶溶液450毫升，再經(jīng)超濾儀濃縮，得到含酶的濃溶液，然后用飽和氯化鈉水溶液進(jìn)行鹽析、離心，去上清液，得到酶沉淀，用蒸餾水溶解、透析，最后真空冷凍干燥得到精致的凝乳酶粉。
實(shí)施例2本方法有下述順序步驟a、用吮乳的小牛皺胃為原料，清除內(nèi)含物，剝?nèi)グ櫸副砻娴闹炯敖Y(jié)締組織，洗滌干凈。將1000克的小牛皺胃用電動(dòng)絞肉機(jī)絞碎，然后加濃度為2mol/l氯化鈉的水溶液7000毫升，在常溫下攪拌浸泡48小時(shí)。
b、然后在其中加入濃度為每100毫升中加3克(w/v)的γ-氧化鋁(γ-氧化鋁其表面積為150-200m2/g，平均孔徑為150-200)，進(jìn)行凝乳酶的吸附，攪拌，靜置5小時(shí)，再離心去掉上清液，得到γ-氧化鋁沉淀。
c、用pH為5.3的水溶液600毫升，對(duì)γ-氧化鋁沉淀進(jìn)行洗脫解析，再經(jīng)離心，去掉γ-氧化鋁殘?jiān)?，得到含酶溶?00毫升。
d、將含酶溶液500毫升再經(jīng)超濾儀濃縮，得到含酶的濃溶液，然后用飽和氯化鈉水溶液進(jìn)行鹽析、離心，去上清液，得到酶沉淀，用蒸餾水溶解、透析，最后真空冷凍干燥得到精致的凝乳酶粉。
實(shí)施例3該實(shí)施例的方法步驟與實(shí)施例1相同，所不同的是浸泡時(shí)間為60小時(shí)，濃度每100毫升中加4克(w/v)的γ-氧化鋁(γ-氧化鋁其表面積為150-200m2/g，平均孔徑為150-200)。
最后真空冷凍干燥得到精致的凝乳酶粉，它是一種白色或淡黃色的固體粉末，有輕微的咸味和吸潮性，無(wú)異味，在干燥的狀況下酶活性穩(wěn)定。在水溶液中不穩(wěn)定，溫度15℃以下或55℃以上就會(huì)沒(méi)有活性，最適溫度為37-43℃。
權(quán)利要求
1.一種凝乳酶粉的制備方法，該方法有下述順序的步驟a、以幼小吮乳的小?；蛐⊙虬櫸笧樵?，清除內(nèi)含物，剝?nèi)グ櫸副砻娴闹窘Y(jié)締組織，洗滌干凈，將其絞碎，然后加水，其固液比為1∶6-10，再加食鹽，其濃度為1-4mol/l，在常溫下攪拌浸泡48-120小時(shí)，然后離心除去殘?jiān)?，得到含酶的上清液，再進(jìn)行超濾濃縮，真空冷凍干燥，得到初步的粗制凝乳酶粉；b、在粗制凝乳酶粉中加水，其固液比為1∶10-20，使其成為濃的含酶水溶液，然后在其中加入γ-氧化鋁，其濃度為每100毫升中加2-5克(w/v)，進(jìn)行攪拌，靜置1-10小時(shí)，再離心去掉上清液，得到γ-氧化鋁沉淀；c、用pH為5.0-5.3的水溶液，對(duì)γ-氧化鋁沉淀進(jìn)行洗脫解析，再經(jīng)離心，去掉氧化鋁殘?jiān)?，得到高純度的含酶溶液；d、將含酶溶液再經(jīng)超濾儀濃縮，得到含酶的濃溶液，然后用飽和氯化鈉水溶液進(jìn)行鹽析、離心，去上清液，得到酶沉淀，用蒸餾水溶解、透析，最后真空冷凍干燥得到精致的凝乳酶粉。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種凝乳酶粉的制備方法，其特征在于所述的γ-氧化鋁，其表面積為150-200m2/g，平均孔徑為150-200。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種凝乳酶的制備，更具體地說(shuō)涉及一種從幼小吮乳小?；蚋嵫虬櫸柑崛∧槊?又稱皺胃酶)粉的制備方法。本發(fā)明以小牛皺胃為原料，用氯化鈉作提取劑，通過(guò)氧化鋁吸附，將酶與溶液中的雜質(zhì)分開(kāi)。然后用洗脫劑將酶從γ－氧化鋁上洗脫解析下來(lái)，得高濃度的含酶溶液，再用過(guò)飽和氯化鈉鹽析、沉淀，干燥得酶活性較高的粗凝乳酶粉。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是提取方法簡(jiǎn)便易行，直接用氯化鈉液體進(jìn)行浸泡，不加防腐劑－硼酸或酒精等，用γ－氧化鋁進(jìn)行吸附，避免了對(duì)最終產(chǎn)品的污染，同時(shí)也降低了生產(chǎn)成本。酶活性高，已達(dá)1∶500,000的比例凝結(jié)牛乳。
文檔編號(hào)C12N9/64GK1800380SQ20051012450
公開(kāi)日2006年7月12日 申請(qǐng)日期2005年11月30日 優(yōu)先權(quán)日2005年11月30日
發(fā)明者馬忠仁, 印明善, 馮玉萍, 喬自林 申請(qǐng)人:馬忠仁, 印明善