一種確定綠蘆筍木質(zhì)化程度及木質(zhì)素單體的顯色方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種確定綠蘆筍木質(zhì)化程度及木質(zhì)素單體的顯色方法。
【背景技術(shù)】
[0002]蘆筍，又名石刁柏、龍須菜，系百合科天門(mén)冬屬多年生宿根性草本植物。從顏色上分有白蘆筍、綠蘆筍之別，綠蘆筍進(jìn)行了充分的光合作用，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于白蘆筍。其嫩莖味美鮮嫩，富含維生素、礦物質(zhì)、氨基酸及一些功效活性成分黃酮類(lèi)物質(zhì)(主要是蘆丁)、抗壞血酸、谷光甘肽和其它的酚類(lèi)化合物，世界衛(wèi)生組織將其公布為“十大健康蔬菜之首”，是一種非常難得的營(yíng)養(yǎng)、保健價(jià)值極高的食品。
[0003]綠蘆筍采收期相對(duì)集中，采收季節(jié)多集中在4月至7月，采后呼吸旺盛，其品質(zhì)極易變劣，在常溫條件下僅能貯藏2?3 d，鮮食供應(yīng)期短。木質(zhì)化衰老是限制綠蘆筍貯藏壽命的主要因素，木質(zhì)化是植物細(xì)胞分化過(guò)程中木質(zhì)素在細(xì)胞壁積累的結(jié)果，綠蘆筍采收后貯藏期間木質(zhì)素含量迅速增加，從而導(dǎo)致綠蘆筍組織硬度增加，食用品質(zhì)迅速下降。因此，如何防止綠蘆筍的木質(zhì)化敗壞，是綠蘆筍采后貯藏中迫切需要解決的關(guān)鍵問(wèn)題。而在各種保鮮貯藏技術(shù)中，如何對(duì)綠蘆筍的木質(zhì)化程度進(jìn)行判斷，一般均是直接對(duì)木質(zhì)素含量進(jìn)行測(cè)定，且測(cè)定周期較長(zhǎng)，且測(cè)定方法較為復(fù)雜，不能快速、有效的達(dá)到判斷木質(zhì)化程度的要求。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述問(wèn)題，本發(fā)明的目的在于提供一種確定綠蘆筍木質(zhì)化程度及木質(zhì)素單體的顯色方法，實(shí)現(xiàn)了對(duì)木質(zhì)化程度高效、準(zhǔn)確的判定，且方法簡(jiǎn)單、穩(wěn)定，以解決現(xiàn)有技術(shù)不足導(dǎo)致的諸多問(wèn)題。
[0005]為了解決上述問(wèn)題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案如下:
一種確定綠蘆筍木質(zhì)化程度及木質(zhì)素單體的顯色方法，包括如下步驟:
(1)切片制作:去除待測(cè)綠蘆筍的筍尖、根部，于剩下的嫩莖部分取三份0.5cm厚樣品分別為樣品一、樣品二與樣品三，隨即將三份樣品放入用磷酸緩沖溶液配制的4%多聚甲醛溶液中進(jìn)行固定2小時(shí)以上，然后用水沖洗，繼而轉(zhuǎn)入30%的蔗糖溶液中固定12小時(shí)以上，取出三份樣品時(shí)將四周的外壁去掉，呈矩形狀，用紙吸干水分后分別轉(zhuǎn)至萊卡冰凍切片機(jī)制得切片一、切片二及切片三，箱體溫度為_(kāi)23°C，凍臺(tái)溫度為_(kāi)24°C，另設(shè)置一個(gè)新鮮綠蘆筍的對(duì)照切片；
(2)將步驟(I)中切片一用0.5%ΚΜηθ4染色5分鐘后用蒸餾水漂洗2分鐘，于12%HC1中浸泡I分鐘后用蒸餾水浸泡I分鐘，用29%氨水封片，可見(jiàn)光觀察；
(3)將步驟(I)中切片二置于載玻片上，滴加2%間苯三酚數(shù)滴，片刻后再滴數(shù)滴12%HC1，封片后可見(jiàn)光觀察；
(4)將步驟(I)中切片三與對(duì)照切片浸入1%的番紅水溶液2小時(shí)，先后用水和75%的乙醇溶液漂洗，最后用50%甘油封片，可見(jiàn)光觀察。
[0006]優(yōu)選地，所述步驟(I)切片厚度均為10-15μπι。
[0007]優(yōu)選地，所述步驟(I)樣品使用萊卡冰凍切片機(jī)切片時(shí)均使用OCT包埋劑包埋。
[0008]優(yōu)選地，所述切片均放置于防脫載玻片上。
[0009]優(yōu)選地，所述步驟(I)中樣品放入用磷酸緩沖溶液配制的4%多聚甲醛溶液中固定2-4小時(shí)，并在30%的蔗糖溶液中固定12-15小時(shí)。
[0010]優(yōu)選地，所述步驟(3)中間苯三酚由95%酒精配制，且間苯三酚的滴加量為2-4滴，12%HC1的滴加量為3-6滴。
[0011]本發(fā)明所述的確定綠蘆筍木質(zhì)化程度及木質(zhì)素單體的顯色方法的優(yōu)點(diǎn)在于:
1、方法簡(jiǎn)單，針對(duì)于待測(cè)綠蘆筍切片與對(duì)照切片采用番紅染色，呈陽(yáng)性反應(yīng)為紫色或紫紅色，根據(jù)染色面積及深度，由此判斷綠蘆筍維管束中木質(zhì)化的程度。
[0012]2、利用KMn04對(duì)切片一染色，呈陽(yáng)性反應(yīng)為黃色或暗黃色的為S-木質(zhì)素;利用間苯三酚對(duì)切片二染色，呈陽(yáng)性反應(yīng)為紅色或粉紅色的為G-木質(zhì)素。
[0013]3、對(duì)綠蘆筍的木質(zhì)化程度判定具有穩(wěn)定高效的優(yōu)點(diǎn)，所述木質(zhì)素的顯色方法具有簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確的應(yīng)用效果。
【附圖說(shuō)明】
[0014]如圖1為本實(shí)施例中切片一的KMnO4染色圖；
如圖2為本實(shí)施例中切片二的間苯三酚染色圖；
如圖3為本實(shí)施例中切片三A與對(duì)照切片B的番紅染色對(duì)照?qǐng)D。
【具體實(shí)施方式】
[0015]下面結(jié)合附圖及具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。
[0016]一種確定綠蘆筍木質(zhì)化程度及木質(zhì)素單體的顯色方法，包括如下步驟:
(1)切片制作:去除綠蘆筍筍尖、根部，于剩下的嫩莖部分取三份0.5cm厚樣品分別為樣品一、樣品二與樣品三，隨即將三份樣品放入用磷酸緩沖溶液配制的4%多聚甲醛溶液中進(jìn)行固定2小時(shí)，然后用水沖洗，繼而轉(zhuǎn)入30%的蔗糖溶液中固定12小時(shí)，取出三份樣品時(shí)將四周的外壁去掉，呈矩形狀，用紙吸干水分后分別轉(zhuǎn)至萊卡冰凍切片機(jī)制得切片一、切片二及切片三，另設(shè)置一個(gè)新鮮綠蘆筍的對(duì)照切片，箱體溫度為_(kāi)23°C，凍臺(tái)溫度為_(kāi)24°C，樣品均用OCT包埋劑包埋，切片厚度均為10-15μπι，且切片均置于防脫載玻片上；
(2)將步驟(I)中切片一用0.5%ΚΜηθ4染色5分鐘后用蒸餾水漂洗2分鐘，于12%HC1中浸泡I分鐘后用蒸餾水浸泡I分鐘，用29%氨水封片，可見(jiàn)光觀察；
(3)將步驟(I)中切片二置于載玻片上，滴加2%間苯三酚(95%酒精配制)2-4滴，片刻后再滴3-6滴12%HC1，封片后可見(jiàn)光觀察；
(4)將步驟(I)中切片三浸入1%的番紅水溶液2小時(shí)，先后用水和75%的乙醇溶液漂洗，最后用50%甘油封片，可見(jiàn)光觀察。
[0017]如圖1所示，所述切片一在可見(jiàn)光條件下觀察呈暗黃色的部分為S-木質(zhì)素；如圖2所示，所述切片二經(jīng)可見(jiàn)光條件下觀察呈粉紅色的部分為G-木質(zhì)素；如圖3所示，所述切片三與新鮮綠蘆筍對(duì)照切片經(jīng)可見(jiàn)光條件下觀察，呈紫紅色，且染色面積較大且染色較深，由此可判斷木質(zhì)化進(jìn)程較深。
[0018]基于上述，本發(fā)明所述的方法簡(jiǎn)單，針對(duì)于綠蘆筍切片三采用番紅染色，與對(duì)照切片相比，具有較大的染色面積及明顯的染色深度，可由此判斷綠蘆筍維管束中木質(zhì)化的進(jìn)程較深;利用KMn04對(duì)切片一染色，呈陽(yáng)性反應(yīng)為暗黃色的為S-木質(zhì)素，利用間苯三酚對(duì)切片二染色，呈陽(yáng)性反應(yīng)為粉紅色的為G-木質(zhì)素;對(duì)綠蘆筍的木質(zhì)化程度判定具有穩(wěn)定高效的優(yōu)點(diǎn)，所述木質(zhì)素的顯色方法具有簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確的應(yīng)用效果。
[0019]由技術(shù)常識(shí)可知，本發(fā)明可以通過(guò)其他的不脫離其精神實(shí)質(zhì)或必要特征的實(shí)施方案來(lái)實(shí)現(xiàn)。因此，上述公開(kāi)的實(shí)施方案，就各方面而言，都只是舉例說(shuō)明，并不是僅有的。所有在本發(fā)明范圍內(nèi)或在等同于本發(fā)明的范圍內(nèi)的改變均被本發(fā)明所包含。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種確定綠蘆筍木質(zhì)化程度及木質(zhì)素單體的顯色方法，其特征在于，包括如下步驟: (I)切片制作:去除待測(cè)綠蘆筍的筍尖、根部，于剩下的嫩莖部分取三份0.5cm厚樣品分別為樣品一、樣品二與樣品三，隨即將三份樣品放入用磷酸緩沖溶液配制的4%多聚甲醛溶液中進(jìn)行固定2小時(shí)以上，然后用水沖洗，繼而轉(zhuǎn)入30%的蔗糖溶液中固定12小時(shí)以上，取出三份樣品時(shí)將四周的外壁去掉，呈矩形狀，用紙吸干水分后分別轉(zhuǎn)至萊卡冰凍切片機(jī)制得切片一、切片二及切片三，箱體溫度為_(kāi)23°C，凍臺(tái)溫度為_(kāi)24°C，另設(shè)置一個(gè)新鮮綠蘆筍的對(duì)照切片； (2 )將步驟(I)中切片一用0.5%ΚΜηθ4染色5分鐘后用蒸餾水漂洗2分鐘，于12%HC1中浸泡I分鐘后用蒸餾水浸泡I分鐘，用29%氨水封片，可見(jiàn)光觀察； (3)將步驟(I)中切片二置于載玻片上，滴加2%間苯三酚數(shù)滴，片刻后再滴數(shù)滴12%HC1，封片后可見(jiàn)光觀察； (4)將步驟(I)中切片三與對(duì)照切片浸入1%的番紅水溶液2小時(shí)，先后用水和75%的乙醇溶液漂洗，最后用50%甘油封片，可見(jiàn)光觀察。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種確定綠蘆筍木質(zhì)化程度及木質(zhì)素單體的顯色方法，其特征在于，所述步驟(I)切片厚度均為10-15μηι。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種確定綠蘆筍木質(zhì)化程度及木質(zhì)素單體的顯色方法，其特征在于，所述步驟(I)樣品使用萊卡冰凍切片機(jī)切片時(shí)均使用OCT包埋劑包埋。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種確定綠蘆筍木質(zhì)化程度及木質(zhì)素單體的顯色方法，其特征在于，所述切片均放置于防脫載玻片上。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種確定綠蘆筍木質(zhì)化程度及木質(zhì)素單體的顯色方法，其特征在于，所述步驟(I)中樣品放入用磷酸緩沖溶液配制的4%多聚甲醛溶液中固定2-4小時(shí)，并在30%的蔗糖溶液中固定12-15小時(shí)。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種確定綠蘆筍木質(zhì)化程度及木質(zhì)素單體的顯色方法，其特征在于，所述步驟(3)中間苯三酚由95%酒精配制，且間苯三酚的滴加量為2-4滴，12%HC1的滴加量為3-6滴。
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種確定綠蘆筍木質(zhì)化程度及木質(zhì)素單體的顯色方法，將綠蘆筍制成超薄切片，采用番紅染色，呈陽(yáng)性反應(yīng)紫色或紫紅色，根據(jù)染色面積和深度，可由此判斷綠蘆筍維管束中木質(zhì)化的程度；利用KMnO4對(duì)切片染色，呈陽(yáng)性反應(yīng)為黃色或暗黃色的為S-木質(zhì)素，利用間苯三酚對(duì)切片染色，呈陽(yáng)性反應(yīng)為紅色或粉紅色的為G-木質(zhì)素。本方案對(duì)綠蘆筍的木質(zhì)化程度判定具有穩(wěn)定高效的優(yōu)點(diǎn)，所述木質(zhì)素的顯色方法具有簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確的應(yīng)用效果。
【IPC分類(lèi)】G01N21/78
【公開(kāi)號(hào)】CN105510317
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510877439
【發(fā)明人】陳學(xué)紅, 董玉瑋, 宋慧
【申請(qǐng)人】徐州工程學(xué)院
【公開(kāi)日】2016年4月20日
【申請(qǐng)日】2015年12月4日