劑的制備：將氯化亞隸和=氯醋酸分別溶于蒸饋水，配置亞氯化亞隸濃 度為0.OOlmol/l，=氯醋酸質量濃度為lOwt%，保持無菌環(huán)境將其分裝入5ml安飯瓶并拉 絲灌封，每個安飯瓶裝量1ml，據(jù)此制備檢測試劑1000支；
[0042] 二、對照試劑的制備：將氯化隸、氯化亞隸溶和=氯醋酸于蒸饋水，配置氯化隸的 濃度為0. 〇45mol/l，氯化亞隸的濃度為0. 001mol/l，S氯醋酸質量濃度為lOwt%在無菌環(huán) 境下將其分裝入5ml安飯瓶中并拉絲灌封，每個安飯瓶裝量1ml，據(jù)此制備對照試劑1000 支；
[0043]=、顯色試劑的制備：其中憐鶴酸的濃度為46. 5旨/1，碳酸裡的濃度為0.94mmol/ 以娃鶴酸的濃度為10. 5g/L。
[0044]a、稱取適量憐鶴酸充分溶于蒸饋水中，最后加入碳酸裡，其中憐鶴酸濃度為200g/ 以碳酸裡的濃度為300mg/l，4°C冷藏備用；
[0045] b、稱取適量娃鶴酸充分溶于蒸饋水中，其中娃鶴酸濃度為30g/l，4°C冷藏備用；
[0046] C、緩沖溶液的制備：將0. 2mol/L乙酸鋼水溶液與0. 3mol/L乙酸水溶液按 9. 1:0. 9的體積比混合，pH值為5. 6,置2°C- 8°C冷藏保存?zhèn)溆茫?br>[0047] t將a、b、c步驟所制備的試劑按1:1. 5:1. 8混合，并將混合均勻的試劑分裝入5ml 安飯瓶并拉絲灌封，每個安飯瓶裝量為4ml，制備1000支。
[0048] 四、將一、二、=制備好的安飯瓶分別按檢測試劑1支、對照試劑1支，顯色試劑1 支，即可制作試劑盒1000盒。 W49] 實施例3
[0050] 制作1000個尿液中琉基類化合物檢測試劑盒，過程如下：
[0051] 一、檢測試劑的制備：將氯化亞隸和=氯醋酸分別溶于蒸饋水，配置亞氯化亞隸濃 度為0.OOlmol/l，=氯醋酸質量濃度為10%，保持無菌環(huán)境將其分裝入5ml安飯瓶并拉絲 灌封，每個安飯瓶裝量1ml，據(jù)此制備檢測試劑1000支；
[0052] 二、對照試劑的制備：將氯化隸、氯化亞隸和=氯醋酸溶于蒸饋水，配置氯化隸的 濃度為0. 〇4mol/l，氯化亞隸的濃度為0.OOlmol/LS氯醋酸質量濃度為10%，在無菌環(huán)境 下將其分裝入5ml安飯瓶中并拉絲灌封，每個安飯瓶裝量1ml，據(jù)此制備對照試劑1000支；
[0053]=、顯色試劑的制備：其中憐鶴酸的濃度為47. 3旨/1，碳酸裡的濃度為0.89mmol/ 以娃鶴酸的濃度為20. 5g/L。
[0054]a、稱取適量憐鶴酸充分溶于蒸饋水中，最后加入碳酸裡，其中憐鶴酸濃度為180g/ 以碳酸裡的濃度為250mg/l，4°C冷藏備用； 陽化5] b、稱取適量娃鶴酸充分溶于蒸饋水中，其中娃鶴酸濃度為60g/l，4°C冷藏備用；
[0056]C、緩沖溶液的制備：將0. 2mol/L乙酸鋼水溶液與0. 3mol/L乙酸水溶液按 7. 9:2. 1的體積比混合，pH值為5. 2,置2°C- 8°C冷藏保存?zhèn)溆茫?br>[0057]t將a、b、c步驟所制備的試劑按1:1. 3:1. 5混合，并將混合均勻的試劑分裝入5ml 安飯瓶并拉絲灌封，每個安飯瓶裝量為4ml，制備1000支。
[0058] 四、將一、二、=制備好的安飯瓶分別按檢測試劑1支、對照試劑1支，顯色試劑1 支，即可制作試劑盒1000盒。
[0059] 實施例4對比例
[0060] 所述對比例參考CN104181155A中的實施例1制備獲得對比例試劑盒。
[0061] 實施例5抗干擾能力檢測
[00創(chuàng)實驗方法：人工尿樣W尿素為主要成分，含量為1. 8%，Dk半脫氨酸模擬琉基代 謝物。分別向對照試劑和檢測試劑中滴加1ml待測樣品，搖勻，靜止片刻，然后在分別滴加 2ml顯色試劑。
[0063] 實施例1的檢測結果判斷方法：觀察對照試劑和檢測試劑溶液的顏色變化，若兩 溶液均未變色則為陰性，若對照試劑未變色而檢測試劑變色則為陽性，若對照試劑和檢測 試劑均變色時則為陽性。
[0064] 實施例4的檢測結果判斷方法：若對照試劑和檢測試劑顏色一致則判斷陰性，若 兩溶液顏色不同且檢測試劑顏色顯示的藍色比對照劑顏色更深則判定為陽性。 陽0化]人工尿樣中添加無機鹽類，橫胺類藥物，尿酸和/或Vc模擬各種情況，每種樣本例 數(shù)為20,檢測結果如表1 :
[0066] 表1抗干擾能力檢測
W側實施例6效果驗證試驗
[0069] 1.試驗對象
[0070] 1)宮頸癌病變、宮頸癌（早、中、晚期）患者W及正常婦女共1057名，應用本試劑 盒進行檢測。
[0071] 2.試驗方法
[0072] 所有試驗對象均取新鮮潔凈晨尿ImL加入試劑盒中的對照試劑和檢測試劑中，搖 勻、靜置，而后在對照試劑和檢測試劑中分別加入2mL顯色試劑；自然光下觀察并將對照試 劑和檢測試劑溶液的顏色進行對比。
[0073] 檢測結果判斷方法參見實施例5。
[0074] 3.實驗結果：見表2和表3
[00巧]表2采用實施例1試劑盒檢測各組尿液結果
[0079] 陽性率是指全部檢測結果中，出現(xiàn)陽性結果的百分率。
[0080] 準確率是指有病人群中檢測為陽性的比例。
[0081] 根據(jù)W上實驗結果可W表明，本發(fā)明提供的技術方案在判斷檢測結果時更加直觀 和準確，降低了假陰性假陽性情況的發(fā)生。 陽0間 實施例7
[0083] 為進一步驗證此試劑效果，我們用實施例1所制試劑盒觀察宮頸癌部分病例的動 態(tài)變化，即治療前與治療（手術、放療、化療）后的檢測結果，詳見表4。
[0084] 表4宮頸癌動態(tài)變化
【主權項】
1. 一種尿液中巰基類化合物檢測試劑盒，包括檢測試劑、對照試劑和顯色試劑，其特征 在于，其中，所述檢測試劑為包含亞汞離子化合物和三氯醋酸的水溶液；所述對照試劑為包 含汞離子化合物、亞汞離子化合物和三氯醋酸的水溶液；所述顯色試劑為包含磷鎢酸、硅鎢 酸和鋰離子化合物的緩沖溶液。2. 根據(jù)權利要求1所述一種尿液中巰基類化合物檢測試劑盒，其特征在于，所述亞汞 離子化合物選自硝酸亞汞或氯化亞汞，優(yōu)選氯化亞汞，所述汞離子化合物選自硫酸汞、硝酸 汞或氯化汞，優(yōu)選氯化汞，所述鋰離子化合物選自硫酸鋰或碳酸鋰，優(yōu)選碳酸鋰。3. 根據(jù)權利要求1所述一種尿液中巰基類化合物檢測試劑盒，其特征在于，所述檢測 試劑中，亞汞離子的濃度為O.OOlmol/L，三氯醋酸的質量濃度為10wt% ;所述對照試劑中， 亞汞離子的濃度為〇. 001m〇l/L，汞離子的濃度為0. 04-0. 045mol/L，三氯醋酸的質量濃度 為10wt% ;所述顯色試劑中，磷鎢酸的濃度為36-57g/L，硅鎢酸的濃度為8. 5-20g/L，鋰離 子的濃度為1-2. 7mmol/L。4. 根據(jù)權利要求1所述一種尿液中巰基類化合物檢測試劑盒，其特征在于，所述緩沖 溶液為乙酸鈉/乙酸緩沖體系，pH值為4. 8-5. 6。在此區(qū)間磷鎢酸試劑有良好的顯色反應。5. 根據(jù)權利要求1所述一種尿液中巰基類化合物檢測試劑盒，其特征在于，所述檢測 試劑的量為lml，對照試劑的量為lml，顯色試劑的量為4ml。6. 權利要求1-5任一所述尿液中巰基類化合物檢測試劑盒的制備方法，其特征在于， 包括如下步驟： 1) 檢測試劑的制備：將亞汞離子化合物和三氯醋酸溶于蒸餾水中，保持無菌環(huán)境將其 分裝入5ml安瓿瓶并拉絲灌封； 2) 對照試劑的制備：將汞離子化合物、亞汞離子化合物和三氯醋酸溶于蒸餾水中，而 后在無菌環(huán)境下將其分裝入5ml安瓿瓶中并拉絲灌封； 3) 顯色試劑制備： a、 稱取磷鎢酸溶于蒸餾水中，然后加入鋰離子化合物； b、 稱取硅鎢酸溶于蒸餾水中； c、 配置乙酸鈉/乙酸緩沖體系的緩沖溶液，所述緩沖溶液中乙酸鈉濃度為0. 2mol/L， 乙酸濃度為〇? 3mol/L ; d、 將a、b、c步驟所制備的試劑案按I: (1~1. 5) : (1. 5~2. 0)的體積比混合均勾，并 分裝入5ml安瓿瓶并拉絲灌封。7. 根據(jù)權利要求6所述制備方法，其特征在于，所述顯色試劑制備中步驟a配置的試劑 中，所述磷鎢酸的濃度為160g_200g/L，所述鋰離子化合物的濃度為2. 3-4. 7mmol/L。8. 根據(jù)權利要求6所述制備方法，其特征在于，所述顯色試劑制備中步驟b配置的試劑 中，所述硅鎢酸的濃度為30g-60g/L。9. 權利要求1-5任一所述尿液中巰基類化合物檢測試劑盒在宮頸癌的篩查和輔助診 斷方面的應用。
【專利摘要】本發(fā)明涉及醫(yī)學檢驗領域的尿液檢測試劑，具體涉及一種尿液中巰基類化合物檢測試劑盒及制備方法和應用。所述尿液中巰基類化合物檢測試劑盒，包括檢測試劑、對照試劑和顯色試劑；其中，所述檢測試劑為包含亞汞離子化合物和三氯醋酸的水溶液；所述對照試劑為包含汞離子化合物、亞汞離子化合物和三氯醋酸的水溶液；所述顯色試劑為包含磷鎢酸、硅鎢酸和鋰離子化合物的緩沖溶液。上述尿液中巰基類化合物檢測試劑盒可用于宮頸癌的篩查和輔助診斷。與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明提供的技術方案工藝簡單、穩(wěn)定性高，檢測結果假陽性率和假陰性率低等特點，適合用于宮頸癌的篩查和輔助診斷。
【IPC分類】G01N21/78
【公開號】CN105115966
【申請?zhí)枴緾N201510508179
【發(fā)明人】劉 東, 鄭明彬, 黎磊
【申請人】江蘇東博生物醫(yī)藥有限公司
【公開日】2015年12月2日
【申請日】2015年8月18日