用于制備進(jìn)行檢查的細(xì)胞學(xué)樣品的系統(tǒng)和試劑盒的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及制備細(xì)胞學(xué)樣品以進(jìn)行檢查的系統(tǒng)或試劑盒，其包含固定劑以固定所述樣品中包含的細(xì)胞，細(xì)胞表面修飾劑以修飾所述樣品中包含的細(xì)胞表面，具有至少兩個(gè)面的第一樣品支持裝置，具有至少兩個(gè)面的第二樣品支持裝置，其中至少一個(gè)支持裝置上的至少一個(gè)面上沉積有細(xì)胞質(zhì)染料或核染料(圖1)。
【專利說明】用于制備進(jìn)行檢查的細(xì)胞學(xué)樣品的系統(tǒng)和試劑盒
發(fā)明領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及細(xì)胞學(xué)樣品的顯微鏡檢查領(lǐng)域。
[0002]發(fā)明背景
[0003]子宮頸癌在全世界的女性中是第二位最常見的癌癥，在發(fā)展中國(guó)家是導(dǎo)致女性因癌癥死亡的主要因素。婦女中有大約30%的癌癥是子宮頸癌，例如在印度每年診斷超過100，000個(gè)新病例。子宮頸癌病例的預(yù)計(jì)年復(fù)合增長(zhǎng)率(CAGR)是2.56%，以這個(gè)增長(zhǎng)速度在2012年將檢測(cè)到大約175，000例的子宮頸癌新病例。
[0004]篩查子宮頸癌的一種推薦工具是在帕帕尼科拉烏測(cè)試(Papanicolaou test)(也稱作Pap-涂片、Pap-試驗(yàn)、宮頸涂片或者涂片試驗(yàn))中檢測(cè)癌癥的細(xì)胞學(xué)前體，這是用于婦科學(xué)中的一種篩查檢查，用以檢測(cè)子宮頸管特別是變性帶中的惡化前和惡性病變。
[0005]在取Pap涂片時(shí)，使用陰道窺器從子宮頸的外口和宮頸內(nèi)膜取細(xì)胞。在顯微鏡下檢查細(xì)胞以觀察異常情況。該測(cè)試目的在于檢測(cè)由性傳播人乳頭瘤病毒導(dǎo)致的潛在的癌前改變。該測(cè)試仍然是早期檢測(cè)癌前和子宮頸癌的一種有效的廣泛使用的方法。該測(cè)試還可檢測(cè)宮頸內(nèi)膜和子宮內(nèi)膜中的感染和異常。
[0006]這種方法在發(fā)達(dá)國(guó)家有效地降低了子宮頸癌的發(fā)生率。然而，目前的Pap染色是冗長(zhǎng)且耗時(shí)的。此外，需要的步驟數(shù)和方法學(xué)使其整個(gè)過程非常難以自動(dòng)化，而且難以在床旁(point of care setting)實(shí)施,這意味著樣品不能在床旁分析,必須送至實(shí)驗(yàn)室分析。
[0007]發(fā)明概述
[0008]根據(jù)本發(fā)明的第一方面，提供了用于制備進(jìn)行檢查的細(xì)胞學(xué)樣品的系統(tǒng)或者試劑盒。所述系統(tǒng)或者試劑盒包含固定所述樣品中包含的細(xì)胞的固定劑，修飾所述樣品中包含的細(xì)胞表面的細(xì)胞表面修飾劑，具有至少兩個(gè)面的第一樣品支持裝置，及具有至少兩個(gè)面的第二樣品支持裝置，其中至少一個(gè)支持裝置的至少一個(gè)面上沉積有細(xì)胞質(zhì)染料或者核染料。
[0009]如本文所用，“細(xì)胞學(xué)樣品”被定義為來自生物體、優(yōu)選哺乳動(dòng)物的數(shù)量足夠進(jìn)行鑒別和/或分析的任何樣品。細(xì)胞學(xué)樣品非限制性例子包括細(xì)胞樣品、皮膚樣品、組織樣品和粘I吳樣品。
[0010]如本文所用，術(shù)語“固定劑”是指一種組合物，其可以是或者不是液體形式，其固定細(xì)胞學(xué)樣品，由此使所述細(xì)胞學(xué)樣品被附著于載玻片足夠的時(shí)間以鑒別和/或分析該細(xì)胞學(xué)樣品。
[0011]如本文所用，術(shù)語“細(xì)胞表面修飾”是指處理細(xì)胞，由此細(xì)胞是非折疊的和/或非卷曲的，和/或細(xì)胞重疊減少。在樣品制備期間細(xì)胞折疊和卷曲的減少將增強(qiáng)細(xì)胞和形態(tài)學(xué)細(xì)節(jié)的觀測(cè)，用于隨后檢測(cè)樣品中的異常細(xì)胞，例如在子宮頸癌篩查中。
[0012]細(xì)胞重疊的減少將改善細(xì)胞分散，這特別在細(xì)胞懸浮液中是重要問題，在細(xì)胞懸浮液中細(xì)胞趨于彼此重疊，特別是非常小的并趨于聚集及位于大細(xì)胞上的多形性。一般地，這兩個(gè)目的都可以通過增加細(xì)胞的表面電荷實(shí)現(xiàn)，使得各個(gè)細(xì)胞之間排斥增加及因此提供更好的分散。[0013]核染色是當(dāng)樣品沉積在所述第一樣品支持裝置上或者由所述第一樣品支持裝置覆蓋時(shí)對(duì)樣品中包含的細(xì)胞的細(xì)胞核染色。細(xì)胞質(zhì)染色是當(dāng)樣品沉積在所述第二樣品支持裝置上或者由所述第二樣品支持裝置覆蓋時(shí)對(duì)樣品中包含的細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)染色。
[0014]這種系統(tǒng)或試劑盒提供了制備細(xì)胞學(xué)樣品的選項(xiàng)，由此樣品中的細(xì)胞以適于通過顯微鏡觀測(cè)或者適于通過自動(dòng)化光學(xué)細(xì)胞分析裝置分析的形式分散。因此，本發(fā)明的一個(gè)重要特征是可以對(duì)指定樣品進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)染色，即即時(shí)(Point of Care)分析。此外，不再需要在該位點(diǎn)制備染色溶液，因?yàn)槿玖弦院线m量預(yù)先分布在樣品支持裝置上。進(jìn)一步地，不再需要進(jìn)行復(fù)雜的方案和多步驟染色程序，并且在染色期間基本上由于灰塵和雜質(zhì)所致的污染問題也被消除。再者，由于染料是以最佳染色需要的精確量分布的事實(shí)也使得例如過度染色或者染色不足等偏差最小化。
[0015]另一優(yōu)勢(shì)是pH條件可以容易控制，這是細(xì)胞質(zhì)染色(在一些情況中酸性pH是有利的)及核染色(在一些情況中堿性PH是有利的)必需的。
[0016]其上已經(jīng)沉積有染料的樣品支持裝置的使用使得可以在密閉環(huán)境中進(jìn)行染色，SP在樣品筒(cartridge)中，這進(jìn)一步消除了灰塵和雜質(zhì)并增加了染色程序的可再現(xiàn)性。
[0017]在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，提供了第一和/或第二樣品支持裝置的僅一個(gè)面具有各自的染料。然而，可以有利的是第一和/或第二樣品支持裝置的兩個(gè)面均具有染料，在這種情況中，技術(shù)人員操作該系統(tǒng)時(shí)不需要考慮該支持裝置的哪個(gè)面面對(duì)樣品。在這種實(shí)施方案中，避免了由于使用第一和/或第二樣品支持裝置的錯(cuò)誤面所致人為假象。
[0018]根據(jù)本發(fā)明的第二方面，提供了一種制備進(jìn)行檢查的細(xì)胞學(xué)樣品的方法，所述方法包括如下步驟:
[0019]用固定劑固定所述樣品中包含的細(xì)胞，
[0020]用細(xì)胞表面修飾劑修飾所述樣品中包含的細(xì)胞的表面，
[0021]提供具有至少兩個(gè)面的第一樣品支持裝置，及
[0022]具有至少兩個(gè)面的第二樣品支持裝置，其中至少一個(gè)支持裝置的至少一個(gè)面上沉積有細(xì)胞質(zhì)染料或核染料，
[0023]將細(xì)胞沉積在第一或者第二樣品支持裝置上，及
[0024]分別用第二或第一樣品支持裝置覆蓋沉積的細(xì)胞。重要的是要理解這個(gè)方法的步驟不是必須以上述順序進(jìn)行。
[0025]因此，本發(fā)明包括使用至少一種類型的預(yù)制樣品支持裝置。這些預(yù)制的樣品支持裝置用核染料或者用細(xì)胞質(zhì)染料涂覆。在本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案中，核染料沉積在第一樣品支持裝置的至少一個(gè)面，細(xì)胞質(zhì)染料沉積在第二樣品支持裝置的至少一個(gè)面。或者，兩個(gè)樣品支持裝置的僅一個(gè)用染料涂覆(例如核染料)，而另一類型染料/如細(xì)胞質(zhì)染料例如與固定劑和/或細(xì)胞表面修飾劑一起加入細(xì)胞懸浮液中。
[0026]在本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案中，第一樣品支持裝置和/或第二樣品支持裝置是載玻片和/或蓋玻片形式。
[0027]如本文所用，術(shù)語“載玻片(slide) ”是指由玻璃或塑料制成的小的透明平板，其上可以沉積樣品如細(xì)胞以在光學(xué)放大裝置如顯微鏡下檢查。
[0028]如本文所用，術(shù)語“蓋玻片(cover slip)”是指由玻璃或塑料制成的小的透明平板，其用于覆蓋樣品如細(xì)胞，之后在光學(xué)放大裝置如顯微鏡下檢查。[0029]根據(jù)一般理解，載玻片和蓋玻片的大小和厚度不同。在ISO 8255-2標(biāo)準(zhǔn)下，顯微鏡載玻片的大小為26X76mm，厚度為1mm，而蓋玻片通常大小為18X 18mm，厚度為100 -200μπ?ο然而,在本發(fā)明中，術(shù)語蓋玻片和載玻片可以互換使用。特別地,在涂片制備中,在已經(jīng)進(jìn)行涂片之后，顯微鏡載玻片用于既支持樣品又覆蓋樣品。
[0030]根據(jù)本發(fā)明另一優(yōu)選實(shí)施方案，第一樣品支持裝置和第二樣品支持裝置通過鉸鏈(hinge)彼此連接。這個(gè)實(shí)施方案進(jìn)一步便于本發(fā)明的系統(tǒng)或試劑盒的使用。這種鉸鏈可例如由在帶有第一和第二樣品支持裝置的兩個(gè)塑料框架之間的裁口接頭(rebated joint)組成。提供這種鉸鏈的其它可能性包括使用一片膠帶連接第一和第二樣品支持裝置。技術(shù)人員不需要?jiǎng)?chuàng)造性步驟就能發(fā)現(xiàn)使用這種鉸鏈的其它技術(shù)方案。
[0031]根據(jù)本發(fā)明另一優(yōu)選的實(shí)施方案，固定劑和/或細(xì)胞表面修飾劑是以液體形式提供。優(yōu)選地，固定劑包含選自如下一組的至少一種試劑:
[0032].醇
[0033]?異丙醇
[0034].醋酸(優(yōu)選冰醋酸)
[0035]?甲醒，和/或
[0036].戊二醛。
[0037]甚至更優(yōu)選地，所述固定劑包含包括乙醇、異丙醇和醋酸的混合物，優(yōu)選體積比率為 7:2:1。
[0038]基于醇的固定劑對(duì)于細(xì)胞學(xué)涂片非常有益，因?yàn)槠渥饔每焖偌疤峁┝己玫募?xì)胞核細(xì)節(jié)。優(yōu)選地，使用乙醇(70%v/v)、異丙醇(70%v/v)和冰醋酸(10%v/v)的混合物。這是一種低PH混合物，可以使用緩沖液或`者控制醋酸濃度而維持。
[0039]根據(jù)另一優(yōu)選的實(shí)施方案，所述固定劑包含戊二醛和磷酸鹽緩沖鹽水，優(yōu)選2%-20%w/w的戊二醛于0.05M-1M磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)中。優(yōu)選地，所述固定劑的pH為5-6.5。
[0040]根據(jù)本發(fā)明另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述細(xì)胞表面修飾劑包含選自如下一組的至少一種試劑:
[0041].使細(xì)胞表面具有正電荷的試劑，
[0042]?使細(xì)胞表面具有負(fù)電荷的試劑，
[0043].螯合劑，
[0044].抗凝劑，
[0045].去粘液化劑(demucifying agent),
[0046].支持細(xì)胞分散的試劑，和/或
[0047].在細(xì)胞表面產(chǎn)生微孔的試劑。
[0048]使細(xì)胞表面具有正電荷的試劑優(yōu)選是選自聚-L-鹽酸賴氨酸和聚乙烯吡咯烷酮(PVP)的至少一種水溶性化合物。
[0049]使細(xì)胞表面具有負(fù)電荷的試劑優(yōu)選是選自硫酸葡聚糖、聚4-苯乙烯磺酸鈉、聚甲基丙烯酸、羧甲基纖維素和/或聚丙烯酸鈉的至少一種水溶性化合物。
[0050]重要的是要理解在溶液中產(chǎn)生正/負(fù)電荷的任何其它分子也可用于本發(fā)明中。然而，如果所述分子是水溶性的則是有益的。[0051]所述聚合物可以不同分子量和/或不同濃度使用。高分子量聚合物似乎更好地賦予細(xì)胞高電荷。相似地，高濃度(例如5-10mg/ml的PVP于醇固定劑中提供良好作用)示出細(xì)胞表面增加的電荷(見圖5)。
[0052]所述螯合劑和/或抗凝劑優(yōu)選是選自如下一組的至少一種:乙二胺四乙酸(EDTA)、羥基乙二胺三乙酸(HEDTA)、次氮基三乙酸(nitriolotriacetic acid, NTA)、朽1檬酸鈉和/或草酸二鈉或二甲基草酸二鈉，或者其它檸檬酸鹽或草酸鹽。
[0053]所述去粘液化劑優(yōu)選是選自如下的至少一種:氫氧化鈉、N-乙酰基-L-半胱氨酸和/或次氯酸鈉。優(yōu)選地，所述細(xì)胞表面修飾劑包含2-5%w/vNa0H和0.25g/50ml N-乙?；?L-半胱氨酸，或者0.5-6%w/v NaOCl。
[0054]支持細(xì)胞分散的試劑和/或在細(xì)胞表面產(chǎn)生微孔的試劑優(yōu)選是去污劑，更優(yōu)選是選自二硫蘇糖醇和/或TritonX-1OO的至少一種。這些試劑的存在在細(xì)胞膜產(chǎn)生受控孔，使得染料快速進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核。
[0055]所述化合物支持細(xì)胞樣品的適當(dāng)固定、避免凝集及增強(qiáng)良好分散。其不影響亞甲藍(lán)、伊紅天青(EA)和橙黃G對(duì)細(xì)胞的染色(見圖6)，且?guī)椭?xì)胞保持穩(wěn)定幾乎一周時(shí)間(見圖7)。
[0056]特別優(yōu)選的是提供一種細(xì)胞制備混合物，其包含至少固定劑和細(xì)胞表面修飾劑?；蛘?，優(yōu)選在本發(fā)明方法中，固定所述樣品中包含的細(xì)胞及修飾所述樣品中包含的細(xì)胞的表面的步驟是同時(shí)進(jìn)行的。
[0057]在這些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞制備混合物同時(shí)固定樣品中的細(xì)胞及修飾細(xì)胞表面。
[0058]在另一優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述固定劑和/或細(xì)胞表面修飾劑可進(jìn)一步包含染料。
[0059]進(jìn)一步優(yōu)選的是所述核染料包含選自如下一組的至少一種:
[0060].卡紅
[0061]?亞甲藍(lán)
[0062]?中性紅/ 二苯乙烯紅
[0063].蘇木精
[0064].番紅精
[0065].尼羅藍(lán)。
[0066]同樣，優(yōu)選的是所述細(xì)胞質(zhì)染料包含選自如下一組的至少一種:
[0067].伊紅
[0068].Alician blue
[0069].二甲苯胺Hll春紅(Xylidine Ponceau)
[0070].猩紅(Biebrich scarlet)
[0071].Tartazine
[0072]?范吉遜染劑(Van Gieson's stain)(苦味酸和酸性品紅)
[0073].賴特染劑(Wright stain)。 [0074]甚至更優(yōu)選 地，可以使用染料組合，例如包含于所謂的Pap染色混合物中，其包含蘇木精、橙黃G、伊紅Y、微黃淡綠SF(Light Green SF yellowish)及有時(shí)包含俾斯麥棕Y (Bismarck Brown Y)的組合。
[0075]另一合適的染料組合是用于馬森三色(Masson’s trichrome)中，其包含W e i g e r t ’ s蘇木精、酸性品紅、二甲苯胺麗春紅、磷鑰酸和微黃淡綠S F，或者堅(jiān)牢綠FCF (Fast Green FCF)、甲基藍(lán)、水藍(lán)或者苯胺藍(lán)。
[0076]另一合適的染料組合是用于利里三色(Lillie’s trichrome)中，其與馬森三色相似，但是使用猩紅代替酸性品紅和/或二甲苯胺麗春紅。
[0077]進(jìn)一步地，也可以使用熒光染料如DAPI (V，6-二脒基-2-苯基吲哚)。
[0078]再者，也可以使用可商購(gòu)的特殊染料組合，如由Invitrogen提供的HCS cellmask?染色試劑盒。
[0079]當(dāng)樣品沉積在所述第一樣品支持裝置上或者由所述第一樣品支持裝置覆蓋時(shí)，所述細(xì)胞核染料對(duì)所述樣品中包含的細(xì)胞的細(xì)胞核染色。當(dāng)樣品沉積在所述第二樣品支持裝置上或者由所述第二樣品支持裝置覆蓋時(shí)，所述細(xì)胞質(zhì)染料對(duì)所述樣品中包含的細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)染色。
[0080]在本發(fā)明的另一優(yōu)選的實(shí)施方案中，第一和第二樣品支持裝置構(gòu)造為由自動(dòng)化裝置接受以染色樣品。
[0081]本發(fā)明的方法可優(yōu)選進(jìn)一步包含選自如下一組的至少一個(gè)步驟:
[0082]a)通過陰道鏡檢查詳細(xì)檢查子宮頸；
[0083]b)在所述生物學(xué)樣品中或者在具有相應(yīng)性質(zhì)的新樣品中進(jìn)行HPVDNA測(cè)試；
[0084]c)在所述生物學(xué)樣品中或者在`具有相應(yīng)性質(zhì)的新樣品中進(jìn)行生物標(biāo)記測(cè)試；和/或
[0085]d)由合格的病理學(xué)家對(duì)所述生物學(xué)樣品或者具有相應(yīng)性質(zhì)的新樣品進(jìn)行肉眼檢查。
[0086]根據(jù)本發(fā)明另一方面，本發(fā)明的系統(tǒng)、試劑盒或方法用于選自如下的至少一個(gè)目的:
[0087].癌癥篩查
[0088].癌癥診斷
[0089].對(duì)指定治療進(jìn)行預(yù)測(cè)
[0090].同時(shí)監(jiān)測(cè)指定癌癥治療。
[0091]優(yōu)選地，所述細(xì)胞學(xué)樣品是人樣品。優(yōu)選地，所述細(xì)胞學(xué)樣品是子宮頸樣品。然而，由于癌癥發(fā)生和細(xì)胞轉(zhuǎn)化的原理是普遍存在的，因此所述方法也可使用來自其它機(jī)體組織的需要進(jìn)行異常檢查的樣品，如乳腺樣品、前列腺樣品、肝臟樣品、肺樣品、血液樣品等等。
[0092]優(yōu)選所述細(xì)胞學(xué)樣品選自如下一組:
[0093].涂片樣品
[0094].組織切片
[0095]?液體樣品，和/或
[0096]?其它細(xì)胞學(xué)樣品。
[0097]涂片樣品例如是與帕帕尼科拉烏試驗(yàn)(也稱作Pap-涂片、Pap-試驗(yàn)、宮頸涂片或者涂片試驗(yàn))中使用的那些樣品相似或相同。組織切片例如通過切片機(jī)提供。液體樣品可優(yōu)選由細(xì)胞-例如通過涂拭獲得的細(xì)胞的懸浮液組成。[0098]其它合適的樣品包括但不限于細(xì)針穿吸細(xì)胞學(xué)(FNAC)樣品、擦試法細(xì)胞學(xué)樣品和/或鱗片樣脫落樣品(exfoliated samples)。
[0099]在許多情況中，將樣品置于載玻片上使其可進(jìn)行研究，如組織切片或者涂片。然而，其它裝置也可用于承載樣品，例如在樣品是液體樣品的情況中可以使用小杯，或者在樣品是擦拭樣品的情況中可以使用樣品筒(cartridge)。在流程圖中使用的術(shù)語切片因此不限制本發(fā)明的范圍。
[0100]實(shí)施例:具有核染料和細(xì)胞質(zhì)染料的蓋玻片和載玻片的旋涂
[0101]按照標(biāo)準(zhǔn)潔凈室方案清潔載玻片和蓋玻片。
[0102]1.染料制備
[0103]a)伊紅 Y-Azure (EA):伊紅 Y:0.23%w/v,堅(jiān)牢綠 F:0.08%w/v,俾斯麥掠:0.05%w/V，磷鎢酸；0.2%w/v，溶解于變性醇中；
[0104]b)橙黃G(OG):0G:0.3%w/v，磷鎢酸:0.01%w/v,溶解于變性醇中；
[0105]c)亞甲藍(lán)(MB)/甲酚紫(CV):MB:80g/l于甲醇中，CV:40g/L于甲醇中；
[0106]2.旋涂(Holmarc Spin Coater, India)
[0107]a)MB/CV 載玻片:lOOOrpm，20 秒(2OO μ I 染料);
[0108]b) EA/0G 蓋玻片:3OOOrpm, 20 秒(了0 μ I 染料);
[0109]3.涂層濃度及用于涂覆的旋轉(zhuǎn)速度如下:
[0110]i)蓋玻片
[0111]
【權(quán)利要求】
1.制備用于檢查的細(xì)胞學(xué)樣品的系統(tǒng)或試劑盒(100)，所述系統(tǒng)或試劑盒包含: 固定劑，用以固定所述樣品中包含的細(xì)胞， 細(xì)胞表面修飾劑，用以修飾所述樣品中包含的細(xì)胞的表面， 第一樣品支持裝置(103)，其具有至少兩個(gè)面，及 第二樣品支持裝置(105)，其具有至少兩個(gè)面， 其中至少一個(gè)所述支持裝置的至少一個(gè)面上沉積有細(xì)胞質(zhì)染料或核染料。
2.制備用于檢查的細(xì)胞學(xué)樣品的方法，所述方法包括如下步驟: 用固定劑固定所述樣品中包含的細(xì)胞， 用細(xì)胞表面修飾劑修飾所述樣品中包含的細(xì)胞的表面， 提供具有至少兩個(gè)面的第一樣品支持裝置(103)，及 具有至少兩個(gè)面的第二樣品支持裝置(105)，其中至少一個(gè)所述支持裝置的至少一個(gè)面上沉積有細(xì)胞質(zhì)染料或核染料， 使細(xì)胞沉積在第一或第二樣品支持裝置上，及 分別用第二或第一樣品支持裝置覆蓋沉積的細(xì)胞。
3.權(quán)利要求1 的系統(tǒng)或試劑盒或者權(quán)利要求2的方法，其中核染料沉積在所述第一樣品支持裝置的至少一個(gè)面上，并且細(xì)胞質(zhì)染料沉積在所述第二樣品支持裝置的至少一個(gè)面上。
4.前述任何權(quán)利要求的系統(tǒng)、試劑盒或方法，其中所述第一樣品支持裝置和/或所述第二樣品支持裝置是載玻片和/或蓋玻片形式。
5.前述任何權(quán)利要求的系統(tǒng)、試劑盒或方法，其中所述第一樣品支持裝置和所述第二樣品支持裝置通過鉸鏈彼此連接。
6.前述任何權(quán)利要求的系統(tǒng)、試劑盒或方法，其中所述固定劑和/或細(xì)胞表面修飾劑以液體形式提供。
7.前述任何權(quán)利要求的系統(tǒng)、試劑盒或方法，其中所述固定劑包含選自如下一組的至少一種試劑: ?乙醇 ?異丙醇 ?醋酸(優(yōu)選冰醋酸) ?甲醛 ?戊二醛。
8.前述任何權(quán)利要求的系統(tǒng)、試劑盒或方法，其中所述固定劑包含包括乙醇、異丙醇和冰醋酸的混合物，優(yōu)選體積比率為7:2:1。
9.前述任何權(quán)利要求的系統(tǒng)、試劑盒或方法，其中所述固定劑包含戊二醛和磷酸鹽緩沖鹽水，優(yōu)選2% - 20%w/w的戊二醛于0.1M-1M磷酸鹽緩沖鹽水中。
10.前述任何權(quán)利要求的系統(tǒng)、試劑盒或方法，其中所述固定劑的pH為5-6.5。
11.前述任何權(quán)利要求的系統(tǒng)、試劑盒或方法，其中所述細(xì)胞表面修飾劑包含選自如下一組的至少一種試劑: ?使得細(xì)胞表面具有正電荷的試劑， ?使得細(xì)胞表面具有負(fù)電荷的試劑，?螯合劑， ?抗凝劑， ?去粘液化劑； ?支持細(xì)胞分散的試劑，和/或 ?在細(xì)胞表面產(chǎn)生微孔的試劑。
12.前述任何權(quán)利要求的系統(tǒng)、試劑盒或方法，其中提供的細(xì)胞制備混合物包含至少固定劑和細(xì)胞表面修飾劑。
13.前述任何權(quán)利要求的方法，在所述方法中固定所述樣品中包含的細(xì)胞及修飾所述樣品中包含的細(xì)胞的表面的步驟是同時(shí)進(jìn)行的。
14.前述任何權(quán)利要求的系統(tǒng)、試劑盒或者方法，其中所述核染料包含選自如下一組的至少一種: ?卡紅 ?亞甲藍(lán) ?中性紅/二苯乙烯紅 ?蘇木精 ?番紅精 ?尼羅藍(lán)。
15.前述任何權(quán)利要求的系統(tǒng)、試劑盒或者方法，其中所述細(xì)胞質(zhì)染料包含選自如下一組的至少一種: ?伊紅
?Alician blue ?二甲苯胺麗春紅 ?猩紅
?Tartazine ?范吉遜染劑 ?賴特染劑。
16.前述任何權(quán)利要求的系統(tǒng)、試劑盒或者方法，其中第一和第二樣品支持裝置構(gòu)造為由自動(dòng)化裝置接受以染色樣品。
17.前述任何權(quán)利要求的方法，所述方法進(jìn)一步包括選自如下一組的至少一個(gè)步驟: a)通過陰道鏡詳細(xì)檢查子宮頸； b)在所述生物學(xué)樣品中或者在具有可比性質(zhì)的新樣品中進(jìn)行HPVDNA測(cè)試； c)在所述生物學(xué)樣品中或者在具有可比性質(zhì)的新樣品中進(jìn)行生物標(biāo)記測(cè)試；和/或 d)由合格的病理學(xué)家肉眼檢查所述生物學(xué)樣品或者具有可比性質(zhì)的新樣品。
18.根據(jù)選自如下一組的至少一個(gè)目的的系統(tǒng)、試劑盒或者方法的應(yīng)用: ?癌癥篩查 ?癌癥診斷 ?預(yù)測(cè)指定治療 ?同時(shí)監(jiān)測(cè)指定的癌癥治療。
19.前述任何權(quán)利要求的方法、系統(tǒng)或者試劑盒，其中所述細(xì)胞質(zhì)樣品是子宮頸樣品。
20.前述任何權(quán)利要求的方法、系統(tǒng)或者試劑盒，其中所述細(xì)胞學(xué)樣品選自:?涂片樣品?組織切片?液體樣品，和/或?其它細(xì)胞學(xué)樣品?！?br> 【文檔編號(hào)】G01N33/48GK103827654SQ201280044631
【公開日】2014年5月28日 申請(qǐng)日期:2012年9月6日 優(yōu)先權(quán)日:2011年9月13日
【發(fā)明者】S·庫(kù)馬爾, S·賈亞萬特, S·K·奈克, P·凱瑟沃浦, B·查克拉巴蒂 申請(qǐng)人:皇家飛利浦有限公司