用于檢測(cè)和監(jiān)測(cè)用于創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙（ptsd）的診斷生物標(biāo)志物以及用于區(qū)分自殺式與非 ...的制作方法
【專(zhuān)利摘要】危及生命的創(chuàng)傷如恐怖襲擊、戰(zhàn)爭(zhēng)、災(zāi)難、精神打擊或身體攻擊、嚴(yán)重事故和暴力經(jīng)常激起稱(chēng)為創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙（PTSD）和與其相關(guān)的自殺的情緒和行為障礙。用于PTSD和自殺的準(zhǔn)確的診斷和治療計(jì)劃仍然是困難的。特異性標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)為鑒定當(dāng)進(jìn)行干預(yù)時(shí)可以經(jīng)歷更好結(jié)果的組的更準(zhǔn)確的臨床評(píng)估創(chuàng)造新的機(jī)會(huì)。本發(fā)明提供了在懷疑患有PTSD和/或具有自殺傾向的對(duì)象的生物樣品中檢測(cè)P-11、UBE3A、STY1、EMAP-II、SIP1、ORC5L、DCX、SCYE蛋白的方法，以及提供對(duì)性別具有特異性的其它PTSD標(biāo)志物。
【專(zhuān)利說(shuō)明】用于檢測(cè)和監(jiān)測(cè)用于創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙(PTSD)的診斷生物
標(biāo)志物以及用于區(qū)分自殺式與非自殺式障礙的方法和試劑
合
Si
[0001]相關(guān)申請(qǐng)的交叉參考
[0002]本申請(qǐng)要求2011年9月14日提交的美國(guó)臨時(shí)專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)?1/534，560和2011年12月11日遞交的美國(guó)臨時(shí)專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)?1/569，047的優(yōu)先權(quán)。每個(gè)相關(guān)申請(qǐng)?jiān)谶@里通過(guò)參考并入。
[0003]政府支持
[0004]本發(fā)明是在美國(guó)陸軍(U.S.Army)給予的DAMD17-00-1-0110號(hào)資助以及國(guó)家心理健康研究所(National Institute of Mental Health)給予的02-M-0317號(hào)資助下由政府支持作出的。政府對(duì)本發(fā)明具有一定的權(quán)利。
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0005]本發(fā)明基本涉及在患有創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙(post-traumatic stress disorder,PTSD)的對(duì)象中產(chǎn)生的標(biāo)志物的可靠的檢測(cè)和鑒定并提供用于在患有該障礙的對(duì)象中區(qū)分自殺與非自殺式神經(jīng)病理學(xué)的可靠的衡量標(biāo)準(zhǔn)。特別地，本發(fā)明涉及用于檢測(cè)PTSD及自殺的方法和試劑盒以及用于患有該障礙的患者的治療和給藥的方法。此外，本發(fā)明提供一種體外診斷裝置，其使對(duì)于PTSD和自殺的診斷和預(yù)后重要的標(biāo)志物的可靠的檢測(cè)和鑒定成為可能。
【背景技術(shù)】
[0006]創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙(Post-TraumaticStress Disorder, PTSD)影響了 7-8%的美國(guó)總?cè)丝谝约凹s15%的從戰(zhàn)爭(zhēng)返回的退伍軍人。癥狀可以持續(xù)數(shù)月或數(shù)十年。不幸的是，在患病的平民和軍人個(gè)體中PTSD經(jīng)常被誤診以及放任不治療，擾亂他們的生活質(zhì)量、他們的家庭和孩子、以及我們的醫(yī)療保健系統(tǒng)。即使確診時(shí)，PTSD進(jìn)程的嚴(yán)重程度仍然難以治療。盡管這種障礙的神經(jīng)生物學(xué)相關(guān)性的廣泛研究，以及努力去了解潛在的病理學(xué)，這種疾病的細(xì)胞和分子機(jī)制仍然知之甚少。
[0007]PTSD是一種嚴(yán)重致殘焦慮癥，可以在對(duì)象看到或經(jīng)歷涉及傷害或死亡威脅的創(chuàng)傷性事件后出現(xiàn)，可以在臨床上以急性或慢性形式被發(fā)現(xiàn)。有關(guān)的創(chuàng)傷性經(jīng)歷包括經(jīng)歷或目睹兒童虐待、交通事故、內(nèi)科合并癥、身體攻擊、自然災(zāi)害、入獄或戰(zhàn)爭(zhēng)。PTSD的癥狀包括噩夢(mèng)連連或白天回閃的侵襲，特點(diǎn)是高度焦慮；過(guò)度警覺(jué)，意為用于戰(zhàn)斗或逃跑的持續(xù)跳動(dòng)準(zhǔn)備；以及避免與可能提醒患者創(chuàng)傷的任何東西或任何人接觸。急性PTSD可能在3-6個(gè)月內(nèi)消退，然而，慢性PTSD是一種消長(zhǎng)疾病，可以持續(xù)幾個(gè)月、幾年、或幾十年。PTSD往往與其他精神疾病特別是抑郁、物質(zhì)濫用和自殺想法并存。因此，PTSD可能導(dǎo)致嚴(yán)重殘疾。
[0008]PTSD的目前的診斷建立在臨床病史和對(duì)象精神狀態(tài)檢查的基礎(chǔ)上，采用臨床結(jié)構(gòu)性訪(fǎng)談、癥狀檢查表、或病人自我報(bào)告。然而，采用這些對(duì)象測(cè)試，仍然難以區(qū)分PTSD和其他精神疾病，導(dǎo)致關(guān)于治療干預(yù)和病因?qū)W的更加明確的了解兩方面的困難的治療決定。目前的臨床評(píng)估存在的限制將大大受益于更加客觀(guān)的裝置，以提高鑒定PTSD患者的能力，并因此能夠?qū)TSD與其他精神疾病區(qū)分開(kāi)。
[0009]自殺是所有年齡段死亡的十大主要原因之一，也是15-34歲的人死亡的前三個(gè)原因之一。自殺傾向以及這些傾向的進(jìn)程是非常難以診斷的。通常自殺傾向只能通過(guò)精神狀態(tài)檢查進(jìn)行預(yù)防性診斷，但更普遍是在自殺企圖作出后。自殺是一個(gè)具有挑戰(zhàn)性的心理健康問(wèn)題，因?yàn)樗兄饕木裾系K增加自殺的風(fēng)險(xiǎn)。精神疾病，如BP、MDD、SCZ或PTSD，存在于大約90%的進(jìn)行自殺的人中，并導(dǎo)致大多數(shù)人處于自殺的危險(xiǎn)中。在自殺犧牲者中在他們死亡時(shí)這些精神障礙的發(fā)生率為87.3%?98%。
[0010]許多風(fēng)險(xiǎn)因素增加PTSD患者企圖自殺的機(jī)會(huì)，這些因素包括:1)多次住院，2)抑郁，3)在PTSD發(fā)病前存在應(yīng)激生活事件，4)在PTSD發(fā)病時(shí)比較年輕，5) PTSD癥狀發(fā)作之間沒(méi)有空閑間隔期，6)雌性，7)性行為，8) PTSD癥狀先前發(fā)作的更多次數(shù)，和9)循環(huán)情緒性格。這些特征已經(jīng)常規(guī)使用于企圖鑒定那些整個(gè)過(guò)程處于較高的自殺風(fēng)險(xiǎn)的人們。
[0011]預(yù)防自殺已成為軍事組織的另一個(gè)主要問(wèn)題。單單在美國(guó)陸軍，自殺的發(fā)生率在目前的經(jīng)濟(jì)危機(jī)以及伊拉克和阿富汗戰(zhàn)爭(zhēng)期間一直穩(wěn)步上升。雖然已經(jīng)花費(fèi)很多努力在努力理解能夠增加自殺風(fēng)險(xiǎn)的生物因素，以及鑒定發(fā)生在那些具有自我傷害傾向的人們中的生物學(xué)改變中，目前，沒(méi)有客觀(guān)的生物學(xué)標(biāo)志物以防止自殺。PTSD的最近研究發(fā)現(xiàn)在PTSD患者中自殺和自殺企圖的大幅增加的風(fēng)險(xiǎn)。62%的診斷為PTSD的個(gè)體具有自殺構(gòu)想，因?yàn)閯?chuàng)傷性事件普遍增加個(gè)人的自殺風(fēng)險(xiǎn)?；加蠵TSD的個(gè)體的自殺企圖的可能性比不患有它的個(gè)體大約高15倍。因而存在確定患有PTSD的患者的自殺風(fēng)險(xiǎn)的需要。
[0012]用于PTSD的治療包括心理治療，特別是認(rèn)知行為治療和輔助藥物治療，主要采用特異性血清素重吸收抑制劑(serotonin-specific reuptake inhibitor, SSRI ’ S)。已經(jīng)研究了許多不同的藥理學(xué)方法。一種方法是基于臨床假設(shè)，即重度抑郁癥(Major DepressiveDisorder, MDD)和PTSD可能具有很多共同點(diǎn)。例如，這些存在享有共同的風(fēng)險(xiǎn)因素，具有重疊的癥狀，并經(jīng)常一起出現(xiàn)。因此，廣泛認(rèn)為抗抑郁藥，如SSRI藥物氟西汀(百憂(yōu)解)(fluoxetine (Prozac))和帕羅西汀(賽樂(lè)特)(paroxetine (Paxil)),在治療 PTSD 的一些癥狀中是有效的。其它通常施用的SSRI抗抑郁藥包括文拉法辛(怡諾思)(venlafaxine(Effexor))和舍曲林(佐洛復(fù))(sertraline (Zoloft))。
[0013]然而，PTSD患者可能還有其它共存或并存的臨床問(wèn)題。這些并存狀況已經(jīng)導(dǎo)致其它類(lèi)型的藥物添加到醫(yī)療設(shè)備中。通常施用的抗精神病藥物包括米氮平(瑞美隆)(mirtazapine (Remeron))、奧氮平(再普樂(lè))(olanzapine (Zyprexa))和喹硫平(思瑞康)(quetiapione(Seroquel))。還使用β受體阻滯劑普萘洛爾(propranolol)用于試圖阻斷PTSD患者中記憶的形成。已經(jīng)報(bào)道哌唑嗪(Prazosin)，一種a 1-選擇性腎上腺素受體拮抗齊U，減少與PTSD相關(guān)的創(chuàng)傷有關(guān)的惡夢(mèng)和睡眠障礙。因此，共病，無(wú)論是因果關(guān)系或補(bǔ)償性的，可能使得PTSD藥物治療的可能方法變得復(fù)雜。這些問(wèn)題暗示可能需要用于PTSD的更加客觀(guān)的、基于生物學(xué)的標(biāo)準(zhǔn)。
[0014]雖然一直努力開(kāi)發(fā)臨床策略以鑒定PTSD患者，但是目前還沒(méi)有用于在患者中檢測(cè)這種風(fēng)險(xiǎn)的生物測(cè)定方法。因此，PTSD患者的診斷只建立在臨床病史和精神狀態(tài)檢查的基礎(chǔ)上，通常采用臨床結(jié)構(gòu)性訪(fǎng)談、癥狀檢查表和病人自我報(bào)告。目前的臨床評(píng)估將大大受益于更加客觀(guān)的測(cè)試。[0015]生物標(biāo)志物越來(lái)越多地使用用于及時(shí)和準(zhǔn)確地診斷疾病，以及甚至在臨床表現(xiàn)出現(xiàn)之前，鑒定處于某些疾病和傾向的高風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體。目前沒(méi)有客觀(guān)的標(biāo)志物來(lái)驗(yàn)證PTSD的診斷或作為用于PTSD治療的客觀(guān)替代指標(biāo)。在沒(méi)有用于PTSD患者的臨床使用的標(biāo)志物的情況下，診斷一直依賴(lài)于主觀(guān)臨床評(píng)估，或來(lái)自心理學(xué)家的無(wú)癥狀診斷。因?yàn)镻TSD只能通過(guò)患者的個(gè)人訪(fǎng)談進(jìn)行診斷，其中患者可能認(rèn)識(shí)到給出他們知道正確的答案，目前的方法使得難以診斷患有這些疾病的對(duì)象。其結(jié)果是，在數(shù)千名患病的個(gè)體中，經(jīng)常遺漏、誤診或放任不治療大多數(shù)PTSD病例。在遺漏這些疾病的某些情況中，公眾的安全也受到危害。
[0016]盡管當(dāng)今的標(biāo)志物分析的技術(shù)，對(duì)于能夠幫助精神疾病例如PTSD、MDD、SCZ和BP的客觀(guān)檢測(cè)的預(yù)后指標(biāo)，仍存在未滿(mǎn)足的需要。此外，在診斷那些處于自殺風(fēng)險(xiǎn)的患者時(shí)，存在提供將有助于鑒定那些患有精神疾病的患者的衡量標(biāo)準(zhǔn)的需要。此外，存在客觀(guān)地診斷PTSD的方法的需要，客觀(guān)地監(jiān)測(cè)PTSD進(jìn)程和預(yù)防自殺的需要，在臨床表現(xiàn)前檢測(cè)PTSD的方法的需要，以及通過(guò)使用體外診斷裝置以鑒定神經(jīng)化學(xué)標(biāo)志物從而指導(dǎo)恰當(dāng)?shù)闹委煰煶痰呐R床干預(yù)的需要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0017]提供了一種診斷工具,用于創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙(Post-traumatic stress disorder,PTSD)和/或自殺單獨(dú)的或與基于訪(fǎng)談的評(píng)估或用于其它疾病例如MDD、SCZ和BP的其它生物標(biāo)志物水平結(jié)合的臨床評(píng)價(jià)。此外，通過(guò)使用標(biāo)志物，提供了提高PTSD和自殺風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的客觀(guān)的衡量標(biāo)準(zhǔn)。經(jīng)過(guò)反復(fù)測(cè)試，關(guān)于生活方式或藥物治療方案的有效性提供了反饋。
[0018]本發(fā)明進(jìn)一步提供了專(zhuān)門(mén)設(shè)計(jì)和校準(zhǔn)以檢測(cè)在患有精神疾病例如PTSD、MDD、SCZ、BP和自殺的患者的樣品中差異存在的神經(jīng)元蛋白標(biāo)志物的體外診斷裝置。這些裝置提出了靈敏、快速、非侵入性的方法用于通過(guò)檢測(cè)和確定表明精神疾病的標(biāo)志物的量以幫助精神疾病的診斷。在患者樣品中這些標(biāo)志物的測(cè)量，單獨(dú)或與患者訪(fǎng)談結(jié)合，提供診斷醫(yī)師能夠關(guān)聯(lián)某個(gè)精神疾病的嚴(yán)重程度的可能的診斷的信息。
[0019]本發(fā)明進(jìn)一步提供了用于PTSD檢測(cè)的檢測(cè)性別特異和非性別特異的蛋白的方法。代表性的PTSD標(biāo)志物是選自:突觸結(jié)合蛋白I (synaptotagminl),泛素蛋白連接酶E3A (ubiquitin protein ligase E3A),聚合酶(以 DNA 為模板的)，Δ I,催化亞基 125kDa(polymerase (DNA directed), deltal, catalytic subunitl25kDa),微小誘導(dǎo)細(xì)胞因子亞家族 E,成員 I (內(nèi)皮單核細(xì)胞激活的)(small inducible cytokine subfamily E, member I(endothial monocyte-activating)),非轉(zhuǎn)移細(xì)胞 I 蛋白(Nm23A) (non-metastaticcellslprotein (Nm23A)，蛋白激酶C-類(lèi)似物1，核蛋白，共濟(jì)失調(diào)-毛細(xì)血管擴(kuò)張癥位點(diǎn)(protein kinase C-likel, nuclear protein, ataxia-telangiectasia locus),單克隆抗體K1-87鑒定的抗原,磷脂酶C, β I (磷酸肌醇特異性的)(phospholipase C，betal (phosphoinositide-specific)),電壓門(mén)控鉀通道，亞家族H (eag相關(guān)的),成員6 (potassiumvoltage-gated channel, and subfamily H(eag-related)，member6),P-ll和P2RX7 的PTSD特異性的至少一個(gè)、多個(gè)或所有性別中性蛋白、其肽、變體或片段。標(biāo)志物P-1和P2RX&還可以使用用于確定自殺患者。
[0020]代表性的雄性特異性PTSD標(biāo)志物是選自:泛素結(jié)合酶E2L3(Ubiquitin-conjugating enzyme E2L3), FAS 相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白(Fas (TNFRSF6)-associated via death domain)，蛋白激酶，AMP 激活的，β I 非催化亞基(protein kinase, AMP activated, betalnon-catalytic subunit)，激月太釋放酶 10 (kallikreinlO),絲裂原活化蛋白激酶 4 (mitogen-activated proteinkinase4)，TAF6RNA 聚合酶 II，TATA 框結(jié)合蛋白(TBP)-相關(guān)因子，80kDa (TATA boxbinding protein (TBP) -associated factor，80kDa)，蛋白激酶 C，a (protein kinaseC，alpha)，DNA 斷裂因子，45kDa，α 多妝(DNA fragmentation factor, 45kDa, alphapolypeptide)，三角形四肽重復(fù)干擾素誘導(dǎo)蛋白4 (interferon-1nduced proteinwith tetratricopeptide repeats4)，紋蛋白、隹丐調(diào)素結(jié)合蛋白(striatin，calmodulinbinding protein),憐酸肌醇-3_ 激酶，催化 α 多妝(phosphoinositide-3_kinase，catalytic alpha polypeptide)，腫瘤壞死因子受體，超家族，成員 6 (tumor necrosisfactor receptor, superfamily, member6),核自身抗原精子蛋白(組蛋白結(jié)合的)(nuclearautoantigenic sperm protein (histone binding))，ras 同源基因家方矣，成員 A (rashomolog gene family, member A)，NIMA (never in mitosis gene a)相關(guān)激酶 2(NIMA (never in mitosis gene a) -related kinase2)，SWI/SNF 相關(guān)的，基質(zhì)相關(guān)的，染色質(zhì)肌動(dòng)蛋白依賴(lài)性調(diào)節(jié)子，亞家族a，成員2(SWI/SNF related, matrix associated, actindependent regulator of chromatin, subfamily a，member2)，芳香徑受體核轉(zhuǎn)位蛋白(aryl hydrocarbon receptor nuclear translocator)，突觸相關(guān)膜蛋白，91kDa 同源物(小鼠)(synaptosomal-associated protein, 91kDa homolog (mouse) )，Gl 向 S 期轉(zhuǎn)換蛋白 2 (Glto S phase transition2)和整合素，α2 (CD49B，VLA-2 受體的 α 2 亞基)(integrin, alpha2 (CD49B，alpha2subunit of VLA_2receptor))的 PTSD 特異性的至少一個(gè)、多個(gè)或所有雄性特異性蛋白、其肽、變體或片段。
[0021]代表性的雌性特異性PTSD標(biāo)志物是選自:運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活蛋白結(jié)合蛋白
I(survival of motor neuron protein interacting proteinl)，橋粒斑菲素蛋白 2(plakophilin2)，分泌蛋白SEC8 (secretory protein SEC8)，表皮生長(zhǎng)因子受體通路底物 8 (epidermal growth factor receptor pathway substrate8)，二酸基甘油激酶，Θ IlOkDa (diacylglycerol kinase，thetallOkDa)，中心體相關(guān)蛋白 2 (centrosomalprotein2),通用轉(zhuǎn)錄因子 IIF，多妝 2，30kDa (general transcription factorHF, polypeptide2, 30kDa)，神經(jīng)源素 3 (neurogenin3),和 ADP-核糖轉(zhuǎn)移酶(NAD+，聚(ADP-核糖)聚合酶)(ADP-ribosyltransferase (NAD+; poly (ADP-ribose) polymerase))的PTSD特異性的至少一個(gè)、多個(gè)或所有雌性特異性蛋白、其肽、變體或片段。
[0022]還提供了方法，以檢測(cè)在全血、CNS組織、血清、血漿、腦脊液、唾液、汗液、淚液、尿、口腔樣品、或它們的組合物中的P-1l (膜聯(lián)蛋白II輕鏈(annexin II light chain))的蛋白或 mRNA，泛素蛋白連接酶 E3A (Ubiquitin protein ligase E3A (UBE3A))，突觸結(jié)合蛋白(Synaptotagmin(STYl))，內(nèi)皮單核細(xì)胞激活多妝(endothelial monocyte-activatingpolypeptide (EMAP-1I))，運(yùn)動(dòng)神經(jīng)兀存活蛋白結(jié)合蛋白(survival of motor neuronprotein interacting protein (SIPl))，起始識(shí)別復(fù)合物，亞基 5-類(lèi)似物(Originrecognition complex, subunit5-like (0RC5L))和雙皮質(zhì)；無(wú)腦回畸形，X-連鎖(雙皮質(zhì)素)(DCX) (Doublecortex; lissencephaly, X-1inked (doublecortin) (DCX))的水平；并將蛋白的測(cè)量水平與沒(méi)有患有這些標(biāo)志物表明任何精神或神經(jīng)疾病狀態(tài)的健康正常對(duì)象的該蛋白的測(cè)量水平進(jìn)行比較；或可選地，來(lái)自個(gè)體的歷史水平提供對(duì)比物。PTSD、自殺或其它上述疾病的診斷是當(dāng)從對(duì)象采集的樣品中的所選擇的標(biāo)志物的水平超出預(yù)先選擇的正常范圍時(shí)。對(duì)于給定的對(duì)象的正常范圍是根據(jù)患者的具體的變量，舉例包括年齡、性別、藥物負(fù)荷(medication loading),以及基于訪(fǎng)談的診斷而進(jìn)行選擇的。進(jìn)一步地,性別特異性的標(biāo)志物進(jìn)行了說(shuō)明。
[0023]檢測(cè)這些蛋白的方法是通過(guò)常規(guī)的免疫測(cè)定技術(shù)如蛋白免疫印跡(westernblot)或酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)進(jìn)行的,但優(yōu)選通過(guò)使用夾心ELISA法。另外，使用用于檢測(cè)蛋白抗原或蛋白分解產(chǎn)物的試劑如抗體。
[0024]可以理解，使用針對(duì)上述標(biāo)志物的抗原以檢測(cè)身體的自身抗體反應(yīng)。任一試劑的使用使得對(duì)象中測(cè)量的標(biāo)志物的量的檢測(cè)成為可能，提供用于檢測(cè)PTSD存在并確定患者的PTSD誘導(dǎo)的自殺傾向的衡量標(biāo)準(zhǔn)。
[0025]還使用在外周血單核細(xì)胞(peripheralblood mononuclear cells, PBMCs)中的P-1lmRNA以檢測(cè)PTSD和其它精神疾病，例如MDD，以充分了解精神疾病的進(jìn)程。這里檢測(cè)的優(yōu)選方法是通過(guò)定量實(shí)時(shí)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(quantitative real-time polymerase chainreaction, Q-PCR)進(jìn)行的，其測(cè)量來(lái)自PTSD、MDD和自殺對(duì)象的PBMCs中標(biāo)志物的mRNA水平。該方法涉及測(cè)量對(duì)象的PBMCs中P-1lmRNA水平，并與來(lái)自健康個(gè)體或非精神病患者以及PTSD或MDD的非自殺患者的樣品中P-1lmRNA的表達(dá)水平比較。
[0026]在患者樣品中的P-1l蛋白水平容易地在臨床或現(xiàn)場(chǎng)環(huán)境中在手持或即時(shí)護(hù)理平臺(tái)上基本上實(shí)時(shí)地進(jìn)行檢測(cè)。可以理解，P-ιImRNA單獨(dú)或與伴隨P-1I蛋白的標(biāo)志物相結(jié)合進(jìn)行測(cè)量。通過(guò)使用任一上述這些技術(shù)，對(duì)于患者來(lái)說(shuō)，檢測(cè)到的顯著低于正常的P-1l的水平(mRNA或蛋白)表明那些患有自殺式PTSD的患者。如果檢測(cè)到的P-1l的水平高于正常，該水平表明非自殺式PTSD、BP、MDD或SCZ。關(guān)于適于對(duì)象的治療方案的評(píng)估是基于從對(duì)象獲得的生物樣品中P-1l的測(cè)量水平進(jìn)行選擇的。經(jīng)濟(jì)報(bào)酬可以要求換取P-1l蛋白水平或其它發(fā)明標(biāo)志物的測(cè)量。至少一個(gè)所述標(biāo)志物單獨(dú)或與在這里描述的其它PTSD標(biāo)志物結(jié)合進(jìn)行測(cè)量。
[0027]進(jìn)一步可以理解，對(duì)于所討論的具體疾病，精神疾病診斷的類(lèi)型主觀(guān)地通過(guò)互補(bǔ)的精神評(píng)估或客觀(guān)地通過(guò)使用其它標(biāo)志物進(jìn)一步精確。通過(guò)舉例的方式，可以使用P2RX7蛋白，P2RX7mRNA水平或UBE3A用于診斷的精確，提供患者中PTSD和自殺的另外的指示預(yù)測(cè)因子，進(jìn)一步幫助PTSD與其它精神疾病的區(qū)分。應(yīng)當(dāng)理解，鑒定的兩個(gè)或更多個(gè)標(biāo)志物的使用提供協(xié)同的診斷測(cè)試，以準(zhǔn)確地協(xié)助對(duì)象中自殺和/或PTSD的檢測(cè)。
【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0028]圖1示出用于泛素蛋白連接酶E3A (UBE3A)的受試者操作特征(receiveroperating characteristic, ROC)曲線(xiàn)，其中，對(duì)于男性(male)和女性(female)患者，AUC均為100%。
[0029]圖2示出用于突觸結(jié)合蛋白I (STYl)的ROC曲線(xiàn)，其中，對(duì)于男性，AUC為95%，對(duì)于女性，AUC為88.8%。
[0030]圖3示出用于微小誘導(dǎo)細(xì)胞因子亞家族E (SCYEl)的ROC曲線(xiàn)，其中，對(duì)于男性，AUC 為 98.1%，對(duì)于女性，AUC 為 97.9%。[0031]圖4示出用于在對(duì)照和PTSD患者之間限定的發(fā)明標(biāo)志物的ROC曲線(xiàn)，其中，對(duì)于樣本的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，AUC是88%。
[0032]圖5顯示血漿皮質(zhì)醇的基礎(chǔ)水平在PTSD (n=13)和對(duì)照對(duì)象(n=ll)之間沒(méi)有顯著差異(PM).05)。
[0033]圖6顯示糖皮質(zhì)激素受體(glucocorticoid receptor, GR)的mRNA水平在PTSD的PBMCs中顯著低于對(duì)照對(duì)象。
[0034]圖7示出，與對(duì)照(n=14)相比，在PTSD患者中顯著較低的P-1lmRNA水平(Ρ〈0.05)。躁郁癥(bipolar, BP) (n=24)、重度抑郁癥(major depressive disorder, MDD)(n=12)、精神分裂癥(schizophrenia, SCZ) (n=12)的PBMC P_1 ImRNA水平顯著高于對(duì)照對(duì)象(n=14)中的(P〈0.001)。
[0035]圖8A示出定量實(shí)時(shí)PCR分析的結(jié)果，顯示，與對(duì)照對(duì)象相比，P-1lmRNA水平在患PTSD的企圖自殺者中顯著降低(P〈0.05)。在非自殺患者和對(duì)照對(duì)象之間在PBMC P-1lmRNA的表達(dá)水平上沒(méi)有顯著差異。
[0036]圖8B示出，與對(duì)照對(duì)象相比，在患BP的企圖自殺者和非自殺患者中P-1lmRNA水平均顯著增加(P〈0.05)。在患BP的企圖自殺者和非自殺患者之間在PBMCs P-1lmRNA的表達(dá)水平上沒(méi)有顯著差異。***P〈0.001。
[0037]圖9A?9D顯示在患PTSD的企圖自殺者和非自殺的藥物治療的患者的PBMCP-1lmRNA的表達(dá)水平和癥狀之間沒(méi)有關(guān)系。圖9A和B比較患PTSD的企圖自殺者中PBMCP-1lmRNA 的表達(dá)水平和漢密頓抑郁量表(HAMD) (Hamilton Depression Rating Scale(HAMD))或漢密爾頓焦慮量表(HARS) (Hamilton Anxiety Rating Scale (HARS))分?jǐn)?shù)。圖9C和9D比較患PTSD的非企圖自殺患者中PBMC P-1lmRNA的表達(dá)和HAMD或HARS分?jǐn)?shù)。在所有測(cè)試組中HAMD或HARS分?jǐn)?shù)和P-1lmRNA水平之間沒(méi)有顯著相關(guān)性。
[0038]圖10A?10D顯示在患BP的企圖自殺者和非自殺患者的PBMC P-1lmRNA的表達(dá)水平和癥狀之間沒(méi)有關(guān)系。
[0039]圖10A和10B比較患BP的企圖自殺者中PBMC P-1lmRNA的表達(dá)水平和HAMD或HARS分?jǐn)?shù)。
[0040]圖10C和10D比較患BP的非自殺患者中PBMC P-1lmRNA的表達(dá)和HAMD或HARS分?jǐn)?shù)。在所有測(cè)試組中HAMD或HARS分?jǐn)?shù)和P-1lmRNA水平之間沒(méi)有顯著相關(guān)性。
[0041]圖1lA和IlB示出PBMCs中P2RX7mRNA水平在對(duì)照對(duì)象、患PTSD或BP的企圖自殺者和非自殺患者之間不同。圖1lA示出定量實(shí)時(shí)PCR分析的結(jié)果，顯示與對(duì)照對(duì)象相比，P2RX7mRNA水平在患PTSD的企圖自殺者和非自殺患者中均顯著降低(P〈0.05)。圖1lB示出與對(duì)照對(duì)象或患BP的企圖自殺者相比，P2RX7mRNA水平在患BP的非自殺患者中顯著降低(P〈0.05)。與對(duì)照對(duì)象相比，在患BP的企圖自殺者中發(fā)現(xiàn)的PBMC P2RX7mRNA的表達(dá)水平?jīng)]有顯著差異。**P〈0.01 ;***P〈0.001。
[0042]圖12A-12D示出在患PTSD的非自殺患者中PBMC P2RX7mRNA表達(dá)水平之間的關(guān)系是與HAMD或HARS分?jǐn)?shù)高度相關(guān)的。根據(jù)在患PTSD的企圖自殺者和非自殺患者中PBMCP2RX7mRNA的表達(dá)水平將HAMD或HARS分?jǐn)?shù)繪制出來(lái)。在企圖自殺者中分?jǐn)?shù)與P2RX7mRNA水平不相關(guān)，但在非自殺患者中與P2RX7mRNA水平相關(guān)(P〈0.05)。
[0043]圖13A-13D示出在患BP的企圖自殺者和非自殺患者中PBMC P2RX7mRNA表達(dá)水平之間的關(guān)系是與HAMD或HARS分?jǐn)?shù)不相關(guān)的。根據(jù)在企圖自殺者和非自殺患者中PBMCP2RX7mRNA的表達(dá)水平將HAMD或HARS分?jǐn)?shù)繪制出來(lái)。在所有測(cè)試組中PBMC P2RX7mRNA表達(dá)水平和HAMD或HARS分?jǐn)?shù)之間沒(méi)有顯著相關(guān)性。
[0044]圖14描繪了定量實(shí)時(shí)PCR分析的結(jié)果,顯示與正常對(duì)照對(duì)象(control subjects,C)相比,P-1lmRNA水平在企圖自殺者(suicide attempters, S)中顯著降低,在非企圖自殺者(suicide non-attempters, NS)中顯著增加。
[0045]圖15示出對(duì)照對(duì)象、企圖自殺者和非企圖自殺者的PBMCs中P2RX7mRNA水平的差異，其中實(shí)時(shí)定量PCR分析顯示與正常對(duì)照(C)相比，在企圖自殺者(S)和非企圖自殺者(NS)中P2RX7mRNA水平顯著降低。
[0046]圖16是體外診斷裝置的示意圖。
【具體實(shí)施方式】
[0047]本發(fā)明具有用處作為用于精神疾病例如PTSD和自殺從而允許臨床干預(yù)的裝置和標(biāo)志物測(cè)試。本發(fā)明還可以使用用于檢測(cè)神經(jīng)損傷或神經(jīng)疾病，其中提供的神經(jīng)蛋白標(biāo)志物可以共存。
[0048]下面的詳細(xì)描述在本質(zhì)上僅僅是示例性的，絕不是為了限制本發(fā)明的范圍、其應(yīng)用或用途，其可以變化。本發(fā)明根據(jù)在這里包括的非限制性的定義和術(shù)語(yǔ)進(jìn)行描述。這些定義和術(shù)語(yǔ)不是旨在用作對(duì)本發(fā)明的范圍或?qū)嵺`的限制，而僅用于說(shuō)明和描述的目的而給出。在整個(gè)說(shuō)明書(shū)和權(quán)利要求書(shū)中使用的各種術(shù)語(yǔ)如下所述進(jìn)行定義，因?yàn)樗赡苡兄诶斫獗景l(fā)明。
[0049]在本發(fā)明的上下文中的“標(biāo)志物”是指與從對(duì)照對(duì)象(例如陰性診斷的人，正?；蚪】祵?duì)象)或來(lái)自患者的標(biāo)志物的歷史值采集的類(lèi)似的樣品相比，在從具有神經(jīng)損傷和/或精神疾病的患者采集的樣品中差異存在的mRNA、蛋白或降解產(chǎn)物(breakdown product,BDP )或針對(duì)上述之一的抗體。
[0050]“降解廣物”定乂為可檢測(cè)且具有足夠大小以關(guān)聯(lián)基礎(chǔ)mRNA或蛋白的mRNA或蛋白的片段。
[0051 ] 短語(yǔ)“精神疾病”在這里以最廣泛的含義進(jìn)行使用，并表示干擾日常生活中的個(gè)人行為、與其它人交互、以及工作方式的精神疾病。精神疾病的診斷與統(tǒng)計(jì)手冊(cè)(Diagnosticand Statistical Manual，DSM)，由美國(guó)精神病學(xué)協(xié)會(huì)出版，對(duì)精神疾病進(jìn)行分類(lèi)，例如PTSD、MDD、BP 和 SCZ。
[0052]術(shù)語(yǔ)“患者”，“個(gè)體”或“對(duì)象”在這里可互換使用，并且是指要治療的哺乳動(dòng)物對(duì)象，優(yōu)選人類(lèi)患者。在某些情況下，本發(fā)明的方法在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、獸醫(yī)應(yīng)用、以及脊椎動(dòng)物疾病模型的發(fā)展中發(fā)現(xiàn)用途，脊椎動(dòng)物包括但不限于包括小鼠、大鼠和倉(cāng)鼠的嚙齒動(dòng)物；鳥(niǎo)類(lèi)、魚(yú)類(lèi)爬行動(dòng)物和靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物。
[0053]術(shù)語(yǔ)“正常對(duì)象”是指哺乳動(dòng)物對(duì)象，優(yōu)選人類(lèi)患者，在精神方面不是或不具有神經(jīng)損傷表現(xiàn)，沒(méi)有過(guò)去的神經(jīng)損傷或任何精神病史。
[0054]術(shù)語(yǔ)“多肽”、“肽”和“蛋白”在這里可互換使用用于指氨基酸殘基的聚合物。該術(shù)語(yǔ)適用于氨基酸聚合物，其中一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基是對(duì)應(yīng)的天然存在的氨基酸的類(lèi)似物或模擬物，以及適用于天然存在的氨基酸聚合物，具有足夠的大小以關(guān)聯(lián)標(biāo)志物。多肽可以進(jìn)行修飾，例如通過(guò)加入碳水化合物殘基而形成糖蛋白。術(shù)語(yǔ)“多肽”、“肽”和“蛋白”包括糖蛋白、以及非糖蛋白。
[0055]“抗體”是指由一個(gè)免疫球蛋白基因或多個(gè)免疫球蛋白基因或其片段編碼的多肽配體，其特異性結(jié)合和識(shí)別表位(例如，抗原)。所識(shí)別的免疫球蛋白基因包括K和λ輕鏈恒定區(qū)基因，α，Y，δ，ε和μ重鏈恒定區(qū)基因，以及無(wú)數(shù)的免疫球蛋白可變區(qū)基因。抗體例如作為完整的免疫球蛋白或由各種肽酶消化產(chǎn)生的許多特征明確的片段存在。這包括，例如，F(xiàn)ab’和F(ab)’2片段。術(shù)語(yǔ)“抗體”，如這里所使用的，還包括通過(guò)完整抗體的修飾產(chǎn)生的或那些用重組DNA方法重新合成的抗體片段。它還包括多克隆抗體，單克隆抗體，嵌合抗體，人源化抗體，或單鏈抗體?？贵w的“Fe”部分是指免疫球蛋白重鏈部分，其包含一個(gè)或多個(gè)重鏈恒定區(qū)結(jié)構(gòu)域，CHI, CH2和CH3，但并不包括重鏈可變區(qū)。
[0056]在這里使用的“生物樣品”包括多核苷酸、多肽、肽、抗體片段和相關(guān)的降解產(chǎn)物，是體液；細(xì)胞制劑的可溶部分，或細(xì)胞在其中生長(zhǎng)的培養(yǎng)基；從細(xì)胞中分離或提取的染色體、細(xì)胞器或膜；在溶液中或結(jié)合到基質(zhì)的基因組DNA、RNA或cDNA、多肽、或肽；細(xì)胞；組織；組織印跡；指紋；皮膚；或毛發(fā)；和上述的片段。
[0057]“基質(zhì)”是指任何剛性或半剛性的支持物，核酸分子或蛋白結(jié)合其上，并且包括膜、過(guò)濾器、芯片、載玻片、晶片、纖維、磁性或非磁性珠、凝膠、毛細(xì)管或其它管件、板、聚合物和具有多種表面形式的包括孔、槽、銷(xiāo)、通道和孔隙的微粒。
[0058]“免疫測(cè)定”是使用抗體特異性結(jié)合抗原或抗原結(jié)合抗體(例如，標(biāo)志物)的測(cè)定。免疫測(cè)定的特征在于使用特定抗體的特異性結(jié)合特性來(lái)分離、靶向、和/或定量抗原。應(yīng)當(dāng)理解，存在許多免疫測(cè)定并且可以互換地使用于本發(fā)明。
[0059]如在這里使用的，術(shù)語(yǔ)“創(chuàng)傷性腦損傷(Traumatic Brain Injury)”或“TBI”是本領(lǐng)域公認(rèn)的并且旨在包括對(duì)頭部進(jìn)行創(chuàng)傷性打擊造成大腦損害，通常沒(méi)有穿透顱骨的情況。通常，最初的創(chuàng)傷可能導(dǎo)致血腫(expanding hematoma)、蛛網(wǎng)膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage)、腦水月中(cerebral edema)、盧頁(yè)壓上升(raised intracranialpressure, ICP)和腦缺氧(cerebral hypoxia),其可以反過(guò)來(lái)，由于低腦血流量(cerebralblood flow，CBF)導(dǎo)致嚴(yán)重的繼發(fā)事件。根據(jù)嚴(yán)重程度，TBI也可以分類(lèi)為嚴(yán)重、輕度或中度的。
[0060] 短語(yǔ)“特異性(或選擇性)結(jié)合”抗體或“和……特異性(或選擇性)免疫反應(yīng)”，當(dāng)指的是蛋白或肽時(shí)，是指在蛋白和其它生物制劑的異質(zhì)群體中確定蛋白存在的結(jié)合反應(yīng)。因此，在指定的免疫測(cè)定條件下，指定的抗體結(jié)合特定的蛋白至少2倍于背景，基本上不以顯著量結(jié)合存在于樣品中的其它蛋白。在這些條件下對(duì)抗體的特異性結(jié)合可能需要基于其對(duì)特定蛋白的特異性進(jìn)行選擇的抗體。例如，除了標(biāo)志物NF-200的多態(tài)變體和等位基因外，可以選擇來(lái)自特定物種例如大鼠、小鼠或人的針對(duì)標(biāo)志物NF-200培養(yǎng)的多克隆抗體，以?xún)H獲得那些與標(biāo)志物NF-200而不與其它蛋白特異性免疫反應(yīng)的多克隆抗體。該選擇可以通過(guò)去除與來(lái)自其它物種的標(biāo)志物NF-200分子交叉反應(yīng)的抗體來(lái)實(shí)現(xiàn)?？梢允褂枚喾N免疫測(cè)定形式來(lái)選擇與特定蛋白發(fā)生特異性免疫反應(yīng)的抗體。例如，常規(guī)使用固相ELISA免疫測(cè)定用于選擇與蛋白發(fā)生特異性免疫反應(yīng)的抗體(見(jiàn)，例如，Harlow&Lane, Antibodies, ALaboratory Manual(1988), for a description of immunoassay formats and conditionsthat can be used to determine specific immunoreactivity)。典型地，特異性或選擇性反應(yīng)將是至少兩倍于背景信號(hào)或噪聲，更典型地超過(guò)10至100倍于背景。
[0061]如在這里使用的，術(shù)語(yǔ)“體外診斷裝置(in vitro diagnostic)”是指任何形式的診斷測(cè)試產(chǎn)品或測(cè)試服務(wù)，包括但不限于FDA批準(zhǔn)的或準(zhǔn)許的體外診斷裝置(In VitroDiagnostic, IVD)、實(shí)驗(yàn)室開(kāi)發(fā)測(cè)試產(chǎn)品(Laboratory Developed Test, LDT)、或直面消費(fèi)者測(cè)試服務(wù)(Direct-to-Consumer, DTC),可以使用于測(cè)定樣品并檢測(cè)或表明疾病、障礙、狀況、感染的存在、傾向、或風(fēng)險(xiǎn)和/或藥物治療反應(yīng)。在一個(gè)具體實(shí)施例中，體外診斷裝置可以在實(shí)驗(yàn)室或其它健康專(zhuān)業(yè)環(huán)境中使用。在另一個(gè)具體實(shí)施例中，體外診斷裝置可以由消費(fèi)者在家使用。體外診斷測(cè)試包括那些旨在疾病或其它狀況的體外診斷中使用的試劑、儀器、和系統(tǒng)，其它狀況的體外診斷包括健康狀況的確定，以治愈、緩解、治療或預(yù)防疾病或其后遺癥。在一個(gè)具體實(shí)施例中，體外診斷產(chǎn)品可以打算在取自人體的標(biāo)本采集、制備和檢查中使用。在某些具體實(shí)施例中，體外診斷測(cè)試和產(chǎn)品可以包括一個(gè)或多個(gè)實(shí)驗(yàn)室測(cè)試，如一種或多種體外診斷測(cè)試。如在這里使用的，術(shù)語(yǔ)“實(shí)驗(yàn)室測(cè)試”是指一個(gè)或多個(gè)涉及血液、血清、血漿、腦脊液、汗液、唾液或尿、口腔樣品或其它人體組織或物質(zhì)的測(cè)試樣品的醫(yī)療或?qū)嶒?yàn)室程序。
[0062]能夠雜交靶向標(biāo)志物mRNA的核酸探針或引物或使用用于檢測(cè)和/或定量編碼用于PTSD的標(biāo)志物蛋白的mRNA。核酸探針可以是至少為10、15、30、50或100個(gè)核苷酸的長(zhǎng)度并在嚴(yán)謹(jǐn)條件下足夠特異性雜交標(biāo)志物蛋白的mRNA或其互補(bǔ)序列的寡核苷酸。核酸引物可以是至少10、15或20個(gè)核苷酸的長(zhǎng)度并在嚴(yán)謹(jǐn)條件下足夠特異性雜交mRNA或其互補(bǔ)序列的寡核苷酸。
[0063]“互補(bǔ)(complement)”和“互補(bǔ)(complementary)”是指核苷酸之間的Watson-Crick堿基對(duì)，專(zhuān)指通過(guò)經(jīng)由兩個(gè)氫鍵連接至腺嘌呤殘基的胸腺嘧啶或尿嘧啶殘基以及通過(guò)三個(gè)氫鍵連接的胞嘧啶和鳥(niǎo)嘌呤殘基而彼此連接的核苷酸氫。通常，核酸包括描述為對(duì)特定的第二核苷酸序列具有“百分比互補(bǔ)性”的核苷酸序列。例如，核苷酸序列可以對(duì)特定的第二核苷酸序列具有80%、90%、或100%的互補(bǔ)性，表示序列的10個(gè)核苷酸中8個(gè)、9個(gè)或10個(gè)核苷酸與特定的第二核苷酸序列是互補(bǔ)的。例如，核苷酸序列3’ -TCGA-5’與核苷酸序列5’ -AGCT-3’是100%互補(bǔ)的。進(jìn)一步地，核苷酸序列3’ -TCGA-是與核苷酸序列5’ -TTAGCTGG-3’的一個(gè)區(qū)域是100%互補(bǔ)的。
[0064]“雜交(Hybridization)”和“雜交(hybridizes)”是指互補(bǔ)核酸的配對(duì)和結(jié)合。雜交在兩個(gè)核酸之間以不同程度發(fā)生，取決于各種因素，如核酸的互補(bǔ)性程度、核酸的解鏈溫度Tm和雜交條件的嚴(yán)謹(jǐn)性，這是本領(lǐng)域中已知的。
[0065]“雜交條件的嚴(yán)謹(jǐn)性”是指溫度、離子強(qiáng)度、以及關(guān)于特定常見(jiàn)添加劑如甲酰胺和Denhardt溶液的雜交介質(zhì)的組成的條件。與特定核酸相關(guān)的特定雜交條件的確定是常規(guī)的和本領(lǐng)域熟知的，例如，如在 J.Sambrook and D.ff.Russell, Molecular Cloning:ALaboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press;3rd Ed., 2001;和P.M.Ausubel, Ed., Short Protocols in Molecular Biology,Current Protocols;5thEd.，2002中描述的。高度嚴(yán)謹(jǐn)?shù)碾s交條件是那些只允許基本上互補(bǔ)的核酸雜交的條件。通常情況下，具有約85-100%互補(bǔ)性的核酸被認(rèn)為是高度互補(bǔ)的，在高度嚴(yán)謹(jǐn)條件下雜交。中等嚴(yán)謹(jǐn)條件通過(guò)具有中等互補(bǔ)性，約50-84%的互補(bǔ)性的核酸以及那些具有高度互補(bǔ)性的核酸雜交的條件舉例說(shuō)明。與此相反，低嚴(yán)謹(jǐn)雜交條件是那些具有低互補(bǔ)性的核酸雜交的條件。
[0066]“特異性雜交(Specific hybridization)” 和“特異性雜交(specificallyhybridizes)”是指特定的核酸雜交至樣品中祀向核酸而基本上不雜交至除祀向核酸以外的核酸。
[0067]雜交和洗滌條件的嚴(yán)謹(jǐn)性取決于多個(gè)因素，包括探針和靶標(biāo)的Tm和雜交的離子強(qiáng)度和洗滌條件，如本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的。對(duì)實(shí)現(xiàn)期望雜交嚴(yán)謹(jǐn)性的雜交和條件進(jìn)行了描述，例如，在 Sambrook et al., Molecular Cloning:A Laboratory Manual, Cold SpringHarbor Laboratory Press,2001;和 Ausubel, F.et al., (Eds.), Short Protocols inMolecular Biology, Wiley, 2002 中。
[0068]高度嚴(yán)謹(jǐn)雜交條件的一個(gè)例子是長(zhǎng)度超過(guò)約100個(gè)核苷酸的核酸在含有Denhardt溶液和相關(guān)的化學(xué)成分例如30%甲酰胺的溶液中中在37°C下溫育過(guò)夜然后常規(guī)洗滌的雜交。
[0069]體外診斷裝置
[0070]圖16示意性地示出本發(fā)明的體外診斷裝置。發(fā)明的體外診斷裝置包括至少一個(gè)樣品采集室1603和使用于檢測(cè)精神疾病的標(biāo)志物的檢測(cè)模塊1602。體外診斷裝置可以包括手持裝置、臺(tái)式裝置或即時(shí)護(hù)理裝置。
[0071]樣品室1603可以是本領(lǐng)域中已知的用于保持生物流體的任何樣品采集裝置。在一個(gè)具體實(shí)施例中，樣品采集室可以容納這里考慮的生物流體如全血、血漿、血清、尿液、汗液、唾液或口腔樣品中的任何一種。
[0072]檢測(cè)模塊1602優(yōu)選包括可以使用用于檢測(cè)生物樣品中的蛋白抗原的測(cè)定方法，例如，通過(guò)在免疫測(cè)定中使用抗體。檢測(cè)模塊1602可以包括目前在本領(lǐng)域中已知的任何測(cè)定方法，但是應(yīng)該優(yōu)化測(cè)定方法用于使用于檢測(cè)對(duì)象中神經(jīng)損傷、神經(jīng)疾病或精神疾病的神經(jīng)標(biāo)志物的檢測(cè)。檢測(cè)模塊1602是與樣品采集室1603流體連通的。在一個(gè)具體實(shí)施例中，檢測(cè)模塊1602包括免疫測(cè)定，其中免疫測(cè)定可以是放射免疫測(cè)定、ELISA (酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定)、“夾心”免疫測(cè)定、免疫沉淀測(cè)定、沉淀反應(yīng)、凝膠擴(kuò)散沉淀反應(yīng)、免疫擴(kuò)散測(cè)定、熒光免疫測(cè)定、化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定、磷光免疫測(cè)定，或陽(yáng)極溶出伏安法免疫測(cè)定的任一項(xiàng)。在一個(gè)具體實(shí)施例中，也可以使用比色測(cè)定法，其可以?xún)H包括樣品采集室1603和測(cè)定方法的檢測(cè)模塊1602。雖然沒(méi)有具體示出，這些部件優(yōu)選容納在一個(gè)組件1607中。在一個(gè)具體實(shí)施例中，檢測(cè)模塊1602包含特定用于檢測(cè)泛素蛋白連接酶E3A (UBE3A)、突觸結(jié)合蛋白(STY1)、內(nèi)皮單核細(xì)胞激活多肽(EMAP-1I)、運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活蛋白結(jié)合蛋白(SIP1)、起始識(shí)別復(fù)合物、亞基5-類(lèi)似物(0RC5L)和雙皮質(zhì)；無(wú)腦回畸形，X-連鎖(雙皮質(zhì)素)(DCX)、P-11、P2RX7或其任何組合片段或降解產(chǎn)物。如這里所描述的，檢測(cè)模塊1602可以包含另外的試劑以檢測(cè)另外的標(biāo)志物。由于精神疾病與創(chuàng)傷性腦損傷(TBI)的共存，發(fā)明的體外診斷裝置還可以測(cè)量相同的標(biāo)志物，以將標(biāo)志物的存在或數(shù)量與TBI的存在和嚴(yán)重程度關(guān)聯(lián)。
[0073]在另一個(gè)優(yōu)選的具體實(shí)施例中，發(fā)明的體外診斷裝置包含電源1601、檢測(cè)模塊1602、樣品室1603、和數(shù)據(jù)處理模塊1605。電源1601電連接至檢測(cè)模塊和數(shù)據(jù)處理模塊。檢測(cè)模塊1602和數(shù)據(jù)處理模塊1605彼此電連通。如上所述，檢測(cè)模塊1602可以包括目前在本領(lǐng)域中已知的任何測(cè)定方法，但是應(yīng)該優(yōu)化測(cè)定方法用于使用于檢測(cè)對(duì)象中神經(jīng)損傷、神經(jīng)疾病或精神疾病的神經(jīng)標(biāo)志物的檢測(cè)。檢測(cè)模塊1602是與樣品采集室1603流體連通的。檢測(cè)模塊1602包括免疫測(cè)定，其中免疫測(cè)定可以是放射免疫測(cè)定、ELISA (酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定)、“夾心”免疫測(cè)定、免疫沉淀測(cè)定、沉淀反應(yīng)、凝膠擴(kuò)散沉淀反應(yīng)、免疫擴(kuò)散測(cè)定、熒光免疫測(cè)定、化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定、磷光免疫測(cè)定，或陽(yáng)極溶出伏安法免疫測(cè)定的任一項(xiàng)。生物樣品放置在樣品室1603中并由檢測(cè)模塊1602分析檢測(cè)精神疾病的標(biāo)志物。由檢測(cè)模塊1602測(cè)量的標(biāo)志物的數(shù)量然后電傳送至數(shù)據(jù)處理模塊1604。數(shù)據(jù)處理模塊1604可以包括本領(lǐng)域中已知的任何熟知的數(shù)據(jù)處理元件,并且可以包括芯片、中央處理單元(CPU )、或軟件包，其處理從檢測(cè)模塊1602所提供的信息。
[0074]在一個(gè)具體實(shí)施例中，數(shù)據(jù)處理模塊1604電連通顯示器1605、存儲(chǔ)裝置1606、或外部裝置1608或軟件包(如實(shí)驗(yàn)室和信息管理軟件(information management software,LIMS)。在一個(gè)具體實(shí)施例中，數(shù)據(jù)處理模塊1604使用用于將數(shù)據(jù)處理成用戶(hù)定義的可用的格式。這種格式包含在樣品中檢測(cè)的神經(jīng)標(biāo)志物的測(cè)定量，表示神經(jīng)損傷、神經(jīng)疾病、或精神疾病存在，或表示神經(jīng)損傷、神經(jīng)疾病或精神疾病的嚴(yán)重程度。來(lái)自數(shù)據(jù)處理模塊1604的信息可以在顯示器1605上示出，以機(jī)器可讀格式存儲(chǔ)至存儲(chǔ)裝置，或電連通至外部裝置1608用于進(jìn)行另外的處理或顯示。雖然沒(méi)有特別示出，這些部件優(yōu)選組裝在一個(gè)組件1607中。在一個(gè)具體實(shí)施例中，數(shù)據(jù)處理模塊1604可以進(jìn)行編程以比較從檢測(cè)模塊1602發(fā)送的標(biāo)志物的檢測(cè)量和比較器算法。比較器算法可以比較測(cè)定量和用戶(hù)限定的閾值，其可以是對(duì)用戶(hù)非常有用的任何限定。在一個(gè)具體實(shí)施例中，用戶(hù)限定的閾值被設(shè)置為在對(duì)照對(duì)象中測(cè)量的標(biāo)志物的量，或?qū)φ杖后w的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著平均值。
[0075]這里描述的方法和體外診斷測(cè)試可以表示在懷疑患有神經(jīng)損傷、神經(jīng)疾病或精神疾病的患者中包括在當(dāng)前診斷評(píng)價(jià)中的診斷信息。在另一個(gè)具體實(shí)施例中，這里描述的方法和體外診斷測(cè)試可以使用用于篩選從處于風(fēng)險(xiǎn)、可能與精神疾病相關(guān)的非特異性癥狀發(fā)展的風(fēng)險(xiǎn)和/或完全診斷的精神疾病。在某些具體實(shí)施例中，這里描述的方法和體外診斷測(cè)試可以用于排除與精神疾病具有相同癥狀的疾病和障礙的篩選。
[0076]在一個(gè)具體實(shí)施例中，體外診斷測(cè)試可以包括構(gòu)造為保持或采集來(lái)自個(gè)體的生物樣品的一個(gè)或多個(gè)裝置、工具和設(shè)備。在一個(gè)體外診斷測(cè)試的具體實(shí)施例中，采集生物樣品的工具可以包括拭子、手術(shù)刀、注射器、刮刀、容器、以及設(shè)計(jì)成便于采集、貯存，和運(yùn)輸生物樣品的其它裝置和試劑的一種或多種。在一個(gè)具體實(shí)施例中，體外診斷測(cè)試可以包括用于采集、穩(wěn)定、存儲(chǔ)和處理生物樣品的試劑或溶液。用于核苷酸采集、穩(wěn)定、存儲(chǔ)和處理的這樣的試劑和溶液是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的，并且可以通過(guò)如這里描述的體外診斷測(cè)試使用的具體方法進(jìn)行說(shuō)明。在另一個(gè)具體實(shí)施例中，這里披露的體外診斷測(cè)試可以包括微陣列裝置和試劑、流式細(xì)胞儀和試劑、多重核苷酸測(cè)序儀和試劑、以及測(cè)定遺傳樣品中某些遺傳標(biāo)志物及檢測(cè)和可視化某些生物標(biāo)志物必要的另外的硬件和軟件。
[0077]蛋白生物標(biāo)志物
[0078]本發(fā)明提供了一種檢測(cè)性別特異性和非性別特異性的蛋白以檢測(cè)精神疾病例如PTSD和自殺的方法。這些相同的神經(jīng)蛋白也可以使用用于檢測(cè)神經(jīng)損傷和神經(jīng)疾病，如TBI，其常常與許多精神疾病共存。在一個(gè)優(yōu)選的具體實(shí)施例中，對(duì)PTSD特異性的至少一個(gè)、多個(gè)或所有性別中性蛋白、其肽、變體或片段進(jìn)行檢測(cè)，并且選自:突觸結(jié)合蛋白1、泛素蛋白連接酶E3A、聚合酶(以DNA為模板的)，Al，催化亞基125kDa、微小誘導(dǎo)細(xì)胞因子亞家族E，成員I (內(nèi)皮單核細(xì)胞激活的)、非轉(zhuǎn)移細(xì)胞I蛋白(Nm23A)、蛋白激酶C-類(lèi)似物1、核蛋白，共濟(jì)失調(diào)-毛細(xì)血管擴(kuò)張癥位點(diǎn)、單克隆抗體K1-87鑒定的抗原、磷脂酶C，β? (磷酸肌醇特異性的)、電壓門(mén)控鉀通道，亞家族H (eag相關(guān)的)，成員6、泛素羧基末端酯酶 L_1 (ubiquitin carboxyl terminal esterase L_l, UCH-L1)、膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein, GFAP), a 2_ 血影蛋白降解產(chǎn)物(a 2-spectinbreakdown products)、突觸素(synaptophysin)、a-突觸核蛋白(a-synuclein)、神經(jīng)顆粒素(neurogranin)、S-100 β、神經(jīng)絲蛋白(neurofilament proteins)_F,H 和 N、微管蛋白(microtubulin proteins)、髓鞘喊性蛋白(myelin basic proteins)和腦衰蛋白反應(yīng)調(diào)節(jié)蛋白(collapsin response mediated proteins, CRMPs)、P-ll 和 P2RX7。
[0079]雄性特異性PTSD標(biāo)志物也提供在發(fā)明方法中，其中標(biāo)志物是選自:泛素結(jié)合酶E2L3，F(xiàn)AS相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白，蛋白激酶、AMP激活的、β I非催化亞基，激肽釋放酶10，絲裂原活化蛋白激酶4，TAF6RNA聚合酶II，TATA框結(jié)合蛋白(TBP)相關(guān)因子、80kDa，蛋白激酶C、a，DNA斷裂因子、45kDa、α多肽，三角形四肽重復(fù)干擾素誘導(dǎo)蛋白4，紋蛋白、鈣調(diào)素結(jié)合蛋白，磷酸肌醇-3-激酶、催化α多肽，腫瘤壞死因子受體、超家族、成員6，核自身抗原精子蛋白(組蛋白結(jié)合的)，ras同源基因家族、成員A,NIMA (never in mitosis gene a)相關(guān)激酶2，SWI/SNF相關(guān)的、基質(zhì)相關(guān)的、染色質(zhì)肌動(dòng)蛋白依賴(lài)性調(diào)節(jié)子、亞家族a、成員2，芳香烴受體核轉(zhuǎn)位蛋白，突觸相關(guān)膜蛋白、91kDa同源物(小鼠)，Gl向S期轉(zhuǎn)換蛋白2和整合素、α 2 (⑶49Β，VLA-2受體的α 2亞基)的PTSD特異性的至少一個(gè)、多個(gè)或所有雄性特異性蛋白、其肽、變體或片段。
[0080]雌性特異性PTSD標(biāo)志物也提供在發(fā)明方法中，其中標(biāo)志物是選自:運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活蛋白結(jié)合蛋白1，橋粒斑菲素蛋白2，分泌蛋白SEC8，表皮生長(zhǎng)因子受體通路底物8，二?；视图っ?、Θ IlOkDa,中心體相關(guān)蛋白2，通用轉(zhuǎn)錄因子HF、多肽2、30kDa，神經(jīng)源素3，和ADP-核糖轉(zhuǎn)移酶(NAD+，聚(ADP-核糖)聚合酶)的PTSD特異性的至少一個(gè)、多個(gè)或所有雌性特異性蛋白、其肽、變體或片段。
[0081]更進(jìn)一步地用于PTSD的標(biāo)志物包括泛素蛋白連接酶E3A (UBE3A)，突觸結(jié)合蛋白(STYl )，內(nèi)皮單核細(xì)胞激活多肽(EMAP-1I )，運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活蛋白結(jié)合蛋白(SIPl )，起始識(shí)別復(fù)合物、亞基5-類(lèi)似物(0RC5L)和雙皮質(zhì)；無(wú)腦回畸形，X-連鎖(雙皮質(zhì)素)(DCX)。
[0082]泛素蛋白連接酶E3A (UBE3A)是人大腦的高度相關(guān)基因，因?yàn)榇竽X印跡母本等位基因中的突變導(dǎo)致智力低下以及與安琪兒綜合征有關(guān)的其它癥狀。相反，野生型UBE3A基因的復(fù)制與人孤獨(dú)癥有關(guān)，人UBE3A在小鼠大腦中轉(zhuǎn)基因過(guò)度表達(dá)與樹(shù)突棘的數(shù)量和長(zhǎng)度的減少相關(guān)。一致地，小鼠大腦中UBE3A (dUBE3A)的高度保守的果蠅同源物的過(guò)度表達(dá)導(dǎo)致減少的樹(shù)突分枝。另外，印跡UBE3A基因的表達(dá)主要在海馬、以及在小腦蒲肯野細(xì)胞和嗅球中檢測(cè)到。因此，在大腦中似乎存在UBE3A表達(dá)的最優(yōu)設(shè)定值，高于或低于該值，次優(yōu)的功能變得很明顯。因此在PTSD腦脊液、血液、尿液、唾液或組織中UBE3A的高水平是異常中樞突的表現(xiàn)。該功能障礙的重點(diǎn)是在UBE3A的表達(dá)在大腦中通常最高的海馬上。本發(fā)明鑒定了與正常對(duì)照或個(gè)體的歷史水平相比，在患PTSD的患者中UBE3A在全血、血漿、血清、腦脊液、尿液、唾液、和腦組織如海馬或同側(cè)皮層)中的升高的水平。
[0083]突觸結(jié)合蛋白-1是57kDa的糖蛋白，包含與蛋白激酶C相關(guān)的兩個(gè)C2域和用于棕櫚?；敖Y(jié)合酸性磷脂、鈣、和鈣調(diào)素的位點(diǎn)。突觸結(jié)合蛋白-1通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞質(zhì)膜的局部Ca2+依賴(lài)性屈曲而參與小泡運(yùn)輸和胞吐作用的過(guò)程。突觸結(jié)合蛋白-1是突觸小泡的跨膜成分，其已牽涉在調(diào)節(jié)鈣依賴(lài)性膜融合在胞吐的神經(jīng)傳遞中發(fā)生的過(guò)程中。在人腦脊髓液中已經(jīng)鑒定出完整的65kDa突觸結(jié)合蛋白-KDavidsson et al，1996)，其中發(fā)現(xiàn)在來(lái)自早期發(fā)作阿爾茨海默病(EAD)的患者的CSF中降低。伴隨地，已經(jīng)報(bào)道在EAD患者的死后海馬和額葉皮質(zhì)中突觸結(jié)合蛋白-1的降低的水平。本發(fā)明鑒定與正常對(duì)照或個(gè)體的歷史水平相比，SYTl蛋白在患PTSD的患者中在全血、血漿、血清、腦脊液、尿液、唾液、腦組織例如海馬和同側(cè)皮層中的降低的水平，并表現(xiàn)了在PTSD大腦的海馬中出現(xiàn)的部分保護(hù)作用。
[0084]內(nèi)皮單核細(xì)胞活化蛋白(EMAP-1I)是炎性細(xì)胞因子。其前EMAP-1I前體與氨酰-tRNA合成酶復(fù)合體的輔助p43組分是相同的。在用半胱天冬酶7 (caspase7)體外消化之后，P43的EMAP-1I域容易從復(fù)合物釋放，并能誘導(dǎo)人單核吞噬細(xì)胞的遷移。P43與觸發(fā)由細(xì)胞凋亡條件下誘導(dǎo)的不可逆的細(xì)胞生長(zhǎng)/細(xì)胞死亡轉(zhuǎn)變的分子融合相比比較吻合。在p43/pro EMAP-1I組分的裂解之后，EMAP細(xì)胞因子從哺乳動(dòng)物多酶復(fù)合體釋放。
[0085]EMAP-1I也可以稱(chēng)為微小誘導(dǎo)細(xì)胞因子亞家族E，成員I (SCYE1)，根據(jù)其最初發(fā)現(xiàn)作為氨酰-tRNA合成酶復(fù)合物的一部分，以及然后作為細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)并控制血管生成、發(fā)炎和傷口愈合的蛋白，具有多個(gè)名稱(chēng)和功能。關(guān)于在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的功能，SCYEl是用于人小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的toll樣受體4 (TLR4)-依賴(lài)性趨化蛋白，以這種方式介導(dǎo)神經(jīng)損傷。大鼠中脊髓損傷與SCYEl在損傷部位積累有關(guān)，在那里延長(zhǎng)的積累導(dǎo)致繼發(fā)性損傷的病理生理學(xué)。因此，我們的意思是，至腦脊液中SCYEl蛋白在大腦的物質(zhì)中表現(xiàn)成比例表達(dá)的程度，SCYEl表達(dá)的減少將似乎落入補(bǔ)償和保護(hù)的范疇。本發(fā)明鑒定與正常對(duì)照相比，在患PTSD的患者中，SCYEI或EMAP-1I蛋白在全血、血漿、血清、腦脊液、尿液、唾液、腦組織(海馬和同側(cè)皮層)中的降低的水平。
[0086]運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活蛋白結(jié)合蛋白(SIP1 ；Gemin2)造成脊髓性肌萎縮，也與運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元退行性變有關(guān)。運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活蛋白(SMA)和SIPl兩者的生化功能是在mRNA前體的剪接中提供幫助。本發(fā)明鑒定與正常對(duì)照相比，在患PTSD的患者中，SIPl蛋白在全血、血漿、血清、腦脊液、尿液、唾液、腦組織(海馬和同側(cè)皮層)中的降低的水平。
[0087]起始識(shí)別復(fù)合物，亞基5 -類(lèi)似物(0RC5L)蛋白功能是與5個(gè)其它蛋白形成啟動(dòng)DNA復(fù)制的復(fù)合物。該蛋白具有許多其它功能，包括在基因沉默和異染色質(zhì)形成中的作用。這種蛋白在大腦中具有特定功能的原因與它的基因的位置有關(guān)，其與染色體7q22上的絡(luò)絲蛋白(reelin，RELN)緊靠并列。在RELN中的突變對(duì)于自閉癥具有遺傳危險(xiǎn)因素。然而，這些研究表明，用于RELN的單核苷酸多態(tài)性(SNP)，一側(cè)由0RC5L為側(cè)翼和另一側(cè)由第三基因?yàn)閭?cè)翼，遺傳作為與自閉癥風(fēng)險(xiǎn)連鎖不平衡的單體型。此外，在0RC5L基因中的SNPs本身也與自閉癥風(fēng)險(xiǎn)連鎖不平衡。絡(luò)絲蛋白SNPs與自閉癥風(fēng)險(xiǎn)之間的關(guān)系已經(jīng)進(jìn)行了驗(yàn)證。與自閉癥對(duì)UBE3A的連接一起，0RC5L和UBE3A兩者的平行缺失是PTSD的優(yōu)秀的單個(gè)和組合指標(biāo)。本發(fā)明鑒定與正常對(duì)照相比，在患PTSD的患者中，0RC5L蛋白在全血、血漿、血清、腦脊液、尿液、唾液、腦組織(海馬和同側(cè)皮層)中的降低的水平。
[0088]當(dāng)神經(jīng)元長(zhǎng)距離遷移到達(dá)它們最終分化的部位時(shí)，雙皮質(zhì)；無(wú)腦回畸形，X-連鎖(雙皮質(zhì)素)(DCX)DCX負(fù)責(zé)在發(fā)育皮層中導(dǎo)向神經(jīng)元。在這個(gè)基因中的突變是X-連鎖的無(wú)腦回畸形的原因。無(wú)腦回畸形，由DCX中的突變?cè)斐桑菄?yán)重的人神經(jīng)元遷移缺陷，其特點(diǎn)是光滑的腦表面、智力低下和難治性癲癇。與PTSD的睡眠有關(guān)的癥狀相關(guān)的可能是在成年大鼠的生物鐘功能所在的視交叉上核中DCX的高水平的發(fā)現(xiàn)。創(chuàng)傷性腦損傷后，DCX的上調(diào)也顯示與大鼠和孩子中更好的結(jié)果很好地關(guān)聯(lián)。因此，DCX是這些蛋白的又一個(gè)，像SIPl/Gemin2，對(duì)于其中的低水平表達(dá)，不利于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的功能。本發(fā)明鑒定與正常對(duì)照或患者中歷史水平相比，在患PTSD的患者中，DCX蛋白在全血、血漿、血清、腦脊液、尿液、唾液、腦組織如海馬和同側(cè)皮層中的降低的水平。
[0089]P-1l (膜聯(lián)蛋白II輕鏈)是S-100鈣結(jié)合蛋白家族的一個(gè)成員。P2RX7是人嘌呤受體，其功能是作為配體門(mén)控離子通道，通過(guò)對(duì)大分子可滲透的質(zhì)膜孔的形成觸發(fā)巨噬細(xì)胞的ATP-依賴(lài)性裂解。這種受體的ATP誘導(dǎo)活化可以耦合基因表達(dá)的變化。迄今為止，既不是P-1l也不是P2RX7蛋白已經(jīng)鑒定為用于PTSD、BP或自殺的新標(biāo)志物。在本發(fā)明之前，在臨床基地還沒(méi)有使用自殺生物標(biāo)志物。P-1l在PTSD中的作用，限于實(shí)驗(yàn)室結(jié)果，通過(guò)P-1I基因的啟動(dòng)子區(qū)域中的糖皮質(zhì)激素結(jié)合位點(diǎn)，應(yīng)激或應(yīng)激激素、糖皮質(zhì)激素的表達(dá)在應(yīng)激動(dòng)物大腦中上調(diào)。同時(shí)，應(yīng)激誘導(dǎo)的P-1lmRNA的表達(dá)通過(guò)糖皮質(zhì)激素受體拮抗劑RU486減弱，證明了應(yīng)激誘導(dǎo)的P-1l過(guò)度表達(dá)由糖皮質(zhì)激素受體介導(dǎo)。在應(yīng)激中P-1l的分子機(jī)制的這些發(fā)現(xiàn)導(dǎo)致了 P-1l蛋白在PTSD中的作用的理解以及診斷工具的開(kāi)發(fā)。本發(fā)明鑒定生物樣品中P-1l蛋白或mRNA的水平作為用于創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙(PTSD)的標(biāo)志物和患PTSD和MDD的對(duì)象中自殺的診斷。P2RX7蛋白或mRNA可選地使用于確定躁郁癥(bipolardisorder, BP)和否則客觀(guān)地精確患者的精神狀態(tài)。發(fā)明方法使用特異性地和獨(dú)立地結(jié)合于蛋白、mRNA或其互補(bǔ)序列的試劑測(cè)量P-1l和可選地P2RX7的水平。
[0090]檢測(cè)方法可選地使用蛋白印跡分析或酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)進(jìn)行。優(yōu)選地，當(dāng)使用ELIA時(shí)，使用夾心ELISA。P-1l蛋白水平與正?；蚍蔷癫』颊咭约盎糚TSD和BP的非企圖自殺者中蛋白或mRNA水平或同一患者的歷史水平進(jìn)行比較。本發(fā)明還可以使用用于檢測(cè)除PTSD或BP外的精神或焦慮疾病，例如MDD和SCZ。P-1l標(biāo)志物與其它標(biāo)志物，如P2RX7 —起的水平使用用于區(qū)分這些不同的精神疾病。
[0091]mRNA可選地使用作為和蛋白一起的組合標(biāo)志物。在本具體實(shí)施例中，實(shí)時(shí)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)測(cè)量來(lái)自患有精神疾病的企圖自殺者的外周血單核細(xì)胞(PBMCs)中標(biāo)志物P-1l和P2RX7的mRNA水平，并與來(lái)自正?；蚍蔷癫』颊咭约胺瞧髨D自殺者的樣品中mRNA的水平相比較。
[0092]試劑盒
[0093]診斷精神疾病的方法也可以包括作為用于使用在ELISA或Western印跡、臺(tái)式平臺(tái)、即時(shí)護(hù)理裝置、或手持裝置中用于診斷PTSD、自殺或其它精神疾病的試劑盒的一部分。PTSD標(biāo)志物也可以使用用于篩選用于治療PTSD的藥物治療靶標(biāo)以及監(jiān)測(cè)患者的進(jìn)程或從PTSD的恢復(fù)。
[0094]在某些具體實(shí)施例中，診斷方法和試劑盒包括結(jié)合至鑒定為對(duì)PTSD或自殺群特異的蛋白的一種或多種抗體。診斷方法和試劑盒還包括結(jié)合至鑒定為對(duì)PTSD群特異的蛋白的2個(gè)或更多、3個(gè)或更多、4個(gè)或更多、5個(gè)或更多、6個(gè)或更多、7個(gè)或更多、8個(gè)或更多、9個(gè)或更多、或10個(gè)或更多的試劑或抗體，以診斷患者中的PTSD。
[0095]應(yīng)當(dāng)理解，雖然在以下例子中以血液和腦脊液舉例說(shuō)明，但是用于PTSD的發(fā)明標(biāo)志物可以使用鑒定的相同的程序來(lái)同樣地檢測(cè)，唯一的區(qū)別是生物樣品如何抽樣，因?yàn)?，如本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該很容易知道的，不同的生物樣品具有不同采集方法。
[0096]發(fā)明試劑盒還提供用于輔助精神疾病的診斷，其中該試劑盒可以使用用于檢測(cè)本發(fā)明的任何數(shù)目的診斷蛋白。例如，該試劑盒可以使用用于檢測(cè)診斷蛋白標(biāo)志物是否存在于患者和正常對(duì)象的樣品中。發(fā)明試劑盒使用用于通過(guò)使用體外或體內(nèi)動(dòng)物模型從而鑒定調(diào)節(jié)一個(gè)或多個(gè)標(biāo)志物的表達(dá)的化合物以確定治療的效果。發(fā)明試劑盒包括(a) —組或一批標(biāo)志物；(b)蛋白基質(zhì)；以及(C)檢測(cè)試劑。這樣的試劑盒是由上述材料制備的，并且關(guān)于材料(如，抗體、檢測(cè)試劑、固定化支持物等)的前面的討論是完全適用于本節(jié)的，將不再重復(fù)?？蛇x地，試劑盒包括預(yù)分餾離心柱。在一些具體實(shí)施例中，試劑盒可選地進(jìn)一步包括用于將試劑與生物樣品或其它操作參數(shù)進(jìn)行反應(yīng)以提供狀態(tài)的診斷的說(shuō)明書(shū)。說(shuō)明書(shū)，是標(biāo)簽或獨(dú)立插頁(yè)的形式。
[0097]發(fā)明診斷試劑盒使用用于篩選本發(fā)明的多肽的含血清抗原。診斷試劑盒包括與多肽或多核苷酸抗原特異性免疫反應(yīng)的分離的抗體，和鑒定多核苷酸或多肽抗原與抗體結(jié)合的檢測(cè)化學(xué)物。可以理解，“分離的”包括不妨礙靶向結(jié)合的大量雜質(zhì)或觀(guān)眾物種。可以理解，抗體附著于固相支持物。可以理解，抗體可選地是單克隆抗體。試劑盒的檢測(cè)化學(xué)物可選地是第二標(biāo)記的單克隆抗體。可選地，或另外地，檢測(cè)化學(xué)物可選地包括標(biāo)記的競(jìng)爭(zhēng)抗原。
[0098]在一種診斷配置中，測(cè)試血清與具有通過(guò)本發(fā)明的方法獲得的表面結(jié)合抗原的固相試劑反應(yīng)。特異性抗原抗體結(jié)合試劑并通過(guò)洗滌去除未結(jié)合的血清成分后，試劑與化合物與報(bào)告分子-標(biāo)記的抗人抗體反應(yīng)以將報(bào)告分子以與固相支持物上結(jié)合的抗-抗原抗體的量成比例結(jié)合至試劑。再次清洗試劑，以去除未結(jié)合的標(biāo)記抗體，確定與試劑連接的報(bào)告分子的數(shù)量。通常，報(bào)告分子是酶，在合適的熒光、發(fā)光或比色底物(Sigma，St.Louis，M0.)存在下通過(guò)溫育固相進(jìn)行檢測(cè)。
[0099]在上述測(cè)定中的固體表面試劑是由已知技術(shù)將蛋白材料連接至固體支持物材料，如聚合物微球、浸棒、96孔板或過(guò)濾材料進(jìn)行制備的。這些連接方法通常包括蛋白至支持物的非特異性吸附，或通常通過(guò)自由胺基團(tuán)共價(jià)連接蛋白至固體支持物上的化學(xué)反應(yīng)基團(tuán)，例如活化的羧基、羥基、或醛基?？蛇x地，鏈親和素包被的板可選地使用在與生物素化抗原的結(jié)合中。
[0100]還提供了一種試劑盒，包括(a)其上具有吸附劑的基質(zhì)，其中吸附劑適于結(jié)合標(biāo)志物，(b)要檢測(cè)的本發(fā)明的任何標(biāo)志物，以及(C)通過(guò)將樣品與吸附劑接觸并檢測(cè)吸附劑保留的一個(gè)標(biāo)志物或多個(gè)標(biāo)志物而檢測(cè)一個(gè)標(biāo)志物或多個(gè)標(biāo)志物的說(shuō)明書(shū)。在某些具體實(shí)施例中，試劑盒包括洗脫劑(作為替代或與說(shuō)明書(shū)組合)，或用于制備洗脫劑的說(shuō)明書(shū)，其中吸附劑和洗脫劑的組合允許用氣相離子光譜法檢測(cè)標(biāo)志物。這樣的試劑盒是由上述材料制備的，并且這些材料(例如，探針底物、吸附劑、洗滌溶液等)的前面的討論是完全適用于本節(jié)并不再重復(fù)。
[0101]還提供了一種試劑盒，包括其上具有吸附劑的第一基質(zhì)，如用吸附劑功能化的顆粒，和第二基質(zhì)，第一基質(zhì)置于其上以形成可移動(dòng)和可插入氣相離子光譜儀的探針。試劑盒可選地包括單一基質(zhì)，其是可移動(dòng)和可插入探針形式，基質(zhì)上具有吸附劑。試劑盒還可選地包含預(yù)分懼離心柱(例如，辛巴藍(lán)瓊脂糖柱(Cibacron blue agarose column)、抗HSA瓊脂糖柱(ant1-HSA agarose column)、體積排阻柱(size exclusion column)、Q-陰離子交換離心柱(Q_anion exchange spin column)、單鏈DNA柱(single stranded DNA column)、夕卜源凝集素柱(lectin column)等)。[0102]可選地，試劑盒還可選地包括用于合適的操作參數(shù)的以標(biāo)簽或單獨(dú)插頁(yè)的形式的說(shuō)明書(shū)。例如，試劑盒可以具有標(biāo)準(zhǔn)說(shuō)明書(shū)，在樣品接觸探針后通知消費(fèi)者如何洗滌探針。在另一具體實(shí)施例中，試劑盒可以具有用于預(yù)分餾樣品以減少樣品中蛋白的復(fù)雜性的說(shuō)明書(shū)。在另一具體實(shí)施例中，試劑盒可以具有用于自動(dòng)化分餾或其它方法的說(shuō)明書(shū)。
[0103]例子
[0104]現(xiàn)在將對(duì)本發(fā)明的示例性的具體實(shí)施例進(jìn)行詳細(xì)參考。對(duì)這些具體實(shí)施例進(jìn)行足夠詳細(xì)地描述以使本領(lǐng)域的技術(shù)人員能夠?qū)嵤┍景l(fā)明，可以理解，可以使用其它具體實(shí)施例，并且可以進(jìn)行改變而不脫離本發(fā)明的范圍。因此，下面的描述僅僅是示例性的。
[0105]例I
[0106]患PTSD (n=13)、BP (n=23)、MDD (n=12)、SCZ (n=12)和對(duì)照(n=14)的對(duì)象由兩位精神病醫(yī)生使用來(lái)自精神疾病的診斷和統(tǒng)計(jì)手冊(cè)第四版DSM-1V (The Diagnostic andStatistical Manual of Mental Disorders fourth edition DSM-1V)的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行診斷。從每個(gè)患者獲得CSF、全血、血漿、血清、唾液和尿液的生物樣品。
[0107]患者
[0108]選擇了 14個(gè)患有慢性平民PTSD的不用藥物治療的門(mén)診患者(34.9±10.4歲，10名婦女)和10個(gè)非創(chuàng)傷健康對(duì)象(35.3±13.1歲，7名婦女)。選擇健康對(duì)象以在年齡、性別和BMI方面盡可能接近地匹配PTSD患者。前驅(qū)PTSD創(chuàng)傷在5個(gè)對(duì)象中是青春期前的，在9個(gè)對(duì)象中是成年的。從受到創(chuàng)傷經(jīng)過(guò)的時(shí)間在青春期前的創(chuàng)傷中是2±4年，在成年受創(chuàng)中是10.1±8.8年?；颊咴谄渌矫媸巧眢w健康的，在腰椎穿刺之前至少三周不使用精神藥物，之前至少六個(gè)月不符合用于酒精或物質(zhì)濫用或依賴(lài)的標(biāo)準(zhǔn)。但是，對(duì)于使用帕羅西汀的患者，用于PTSD患者所需的不用藥物治療的時(shí)間延長(zhǎng)至六周。另外，包括4個(gè)具有創(chuàng)傷歷史但沒(méi)有后續(xù)PTSD歷史的患者(三女一男)。對(duì)PTSD患者和健康對(duì)照的完整的統(tǒng)計(jì)信息總結(jié)在表I中。
[0109]表1:研究對(duì)象統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)
[0110]
【權(quán)利要求】
1.一種確定精神疾病存在的方法，其特征在于，包括: 從懷疑具有精神疾病的患病的對(duì)象采集生物樣品； 測(cè)量所述樣品中與精神疾病相關(guān)的至少一個(gè)標(biāo)志物的量，其中所述至少一個(gè)標(biāo)志物蛋白為(i)突觸結(jié)合蛋白I (STYl) ;(ii)泛素蛋白連接酶E3A;聚合酶(UBE3A)，(iii) Al，催化亞基125kDa ;(iv)微小誘導(dǎo)細(xì)胞因子亞家族E，成員I (SCYE1); (V)非轉(zhuǎn)移細(xì)胞1，蛋白(匪23A); (vi)蛋白激酶C-類(lèi)似物I ;核蛋白，共濟(jì)失調(diào)-毛細(xì)血管擴(kuò)張癥位點(diǎn)；(vii)單克隆抗體K1-67鑒定的抗原；(viii)磷脂酶C，β I (磷酸肌醇特異性的);(ix)電壓門(mén)控鉀通道，亞家族H (eag相關(guān)的)，成員6 ;(x)內(nèi)皮單核細(xì)胞激活多肽(EMAP-1I) ; (xi )運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活蛋白結(jié)合蛋白(SIPl) ; (xii)起始識(shí)別復(fù)合物，亞基5-類(lèi)似物(0RC5L) ; (xiii)雙皮質(zhì)；無(wú)腦回畸形，X-連鎖(雙皮質(zhì)素)(DCX) ; (xiv)泛素羧基末端酯酶L-1 (UCH-Ll),(XV)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)，(xvi) α 2-血影蛋白，(xvii)突觸素，(xviii) α -突觸核蛋白，(xix)神經(jīng)顆粒素，(XX) S-1OO β , (xxi)神經(jīng)絲蛋白-F,H和N, (xxii)微管蛋白，(xxiii)髓鞘堿性蛋白，(xxiv)腦衰蛋白反應(yīng)調(diào)節(jié)蛋白(CRMPs),和(xxv) P-11,和(xxvi)P2RX7，或其組合，以及 比較所述至少一個(gè)標(biāo)志物的所述量和在不具有精神疾病的正常對(duì)象中測(cè)量的所述至少一個(gè)標(biāo)志物的正常對(duì)象的量或所述至少一個(gè)標(biāo)志物的歷史的患病的對(duì)象的量； 其中所述量和所述正常量或所述歷史量之間的差異表明在所述的患病的對(duì)象中的精神疾病。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述至少一個(gè)標(biāo)志物是UBE3A、STYUEMAP-11、SIPl、OR C5L、DCX、SCYE、UCH-Ll 和 P-11 中的一種蛋白或它們的組合。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，還包括: 選擇懷疑具有創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙(PTSD)的男性患者； 在來(lái)自懷疑具有PTSD的對(duì)象的生物樣品中，測(cè)量所述樣品中與PTSD有關(guān)的至少一個(gè)PTSD標(biāo)志物的量，其中所述至少一個(gè)PTSD標(biāo)志物是泛素結(jié)合酶E2L3 ；FAS相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白；蛋白激酶，AMP激活的，β I非催化亞基；激肽釋放酶10 ;絲裂原活化蛋白激酶4;TAF6RNA聚合酶II，TATA框結(jié)合蛋白相關(guān)因子，80kDa;蛋白激酶C，a ;DNA斷裂因子，45kDa，α多肽；三角形四肽重復(fù)干擾素誘導(dǎo)蛋白4 ;紋蛋白，鈣調(diào)素結(jié)合蛋白；磷酸肌醇-3-激酶，催化的，α多肽；腫瘤壞死因子受體超家族、成員6;核自身抗原精子蛋白(組蛋白結(jié)合的)；ras同源基因家族、成員A ;NIMA (never in mitosis gene a)相關(guān)激酶2 ;SWI/SNF相關(guān)的，矩陣相關(guān)的，染色質(zhì)肌動(dòng)蛋白依賴(lài)性調(diào)節(jié)子，亞家族a，成員2 ;芳香烴受體核轉(zhuǎn)位蛋白；突觸相關(guān)膜蛋白，91kDa同源物(小鼠)；G1向S期轉(zhuǎn)換蛋白2 ;或整合素，α2(CD49B，VLA-2受體的α 2亞基)，以及 比較所述至少一個(gè)PTSD蛋白的所述量和在不具有PTSD的正常對(duì)象中測(cè)量的所述至少一個(gè)PTSD標(biāo)志物的正常對(duì)象的量或所述至少一個(gè)PTSD標(biāo)志物的歷史的患病的對(duì)象的量；其中所述量和所述正常量或所述歷史量之間的差異表明在所述的患病的對(duì)象中的PTSD。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，還包括: 選擇懷疑具有創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙(PTSD)的女性患者； 在來(lái)自懷疑具有PTSD的對(duì)象的生物樣品中，測(cè)量所述樣品中與PTSD有關(guān)的至少一個(gè)PTSD標(biāo)志物的量，其中所述至少一個(gè)PTSD標(biāo)志物是運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活蛋白結(jié)合蛋白I(SIPl);橋粒斑菲素蛋白2 ;分泌蛋白SEC8 ;表皮生長(zhǎng)因子受體通路底物8 ;二?；视图っ福?IlOkDa ;中心體相關(guān)蛋白2 ;通用轉(zhuǎn)錄因子HF，多肽2，30kDa ;神經(jīng)源素3 ;或ADP-核糖轉(zhuǎn)移酶，以及 比較所述至少一個(gè)PTSD標(biāo)志物的所述量和在不具有PTSD的正常對(duì)象中測(cè)量的所述至少一個(gè)PTSD標(biāo)志物的正常對(duì)象的量或所述至少一個(gè)PTSD標(biāo)志物的歷史的患病的對(duì)象的量; 其中所述量和所述正常量或所述歷史量之間的差異表明在所述的患病的對(duì)象中的PTSD。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，還包括: 選擇懷疑自殺性的患者； 在來(lái)自懷疑自殺性的對(duì)象的生物樣品中，測(cè)量所述樣品中與自殺性有關(guān)的至少一個(gè)自殺性標(biāo)志物的量，其中所述蛋白標(biāo)志物是P-1l或P2RX7，以及 比較所述至少一個(gè)自殺性標(biāo)志物的所述量和在不是自殺性的或患有某些其它精神疾病的正常對(duì)象中測(cè)量的所述至少一個(gè)自殺性標(biāo)志物的正常對(duì)象的量或所述至少一個(gè)自殺性標(biāo)志物的歷史的患病的對(duì)象的量； 其中所述量和所述正常量或所述歷史量之間的差異表明在所述的患病的對(duì)象中的自殺性。
6.根據(jù)權(quán)利要求1、3、4或5所述的方法，其特征在于，所述生物樣品是全血、血漿、血清、腦脊液、尿液、唾液、汗液、前額皮質(zhì)組織、海馬組織、或同側(cè)皮層組織。
7.根據(jù)權(quán)利要求1、3、4或5所述的方法，其特征在于，還包括:采集連續(xù)的生物樣品作為時(shí)間的函數(shù)并監(jiān)測(cè)在所述的患病的對(duì)象的生物樣品中的所述至少一個(gè)標(biāo)志物、PTSD標(biāo)志物或自殺性標(biāo)志物的所述量中的時(shí)間變化，直到所述量基本上等于表明恢復(fù)的所述標(biāo)志物的所述的正常對(duì)象的量或所述歷史量。
8.根據(jù)權(quán)利要求1、3、4或5所述的方法，其特征在于，還包括:施用治療藥物以治療精神疾病，以及采集連續(xù)的生物樣品作為時(shí)間的函數(shù)并監(jiān)測(cè)在所述的患病的對(duì)象的生物樣品中的所述至少一個(gè)標(biāo)志物、PTSD標(biāo)志物或自殺性標(biāo)志物的所述量中的時(shí)間變化，直到所述量基本上等于表明恢復(fù)和治療藥物的有效性的所述至少一個(gè)標(biāo)志物、PTSD標(biāo)志物或自殺性標(biāo)志物的所述的正常對(duì)象的量或所述歷史量。
9.一種使用根據(jù)權(quán)利要求1、3、4或5所述的方法的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括: 用于保持從人對(duì)象分離的生物樣品的基質(zhì)； 和精神疾病相關(guān)的所述至少一個(gè)標(biāo)志物、PTSD標(biāo)志物或自殺性標(biāo)志物特異性相互作用的試劑； 用于所述試劑和所述樣品或所述樣品的一部分反應(yīng)以檢測(cè)用于診斷對(duì)象中精神疾病的標(biāo)志物的存在或量的印刷說(shuō)明書(shū)。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑是特異性地和獨(dú)立地結(jié)合至針對(duì)所述至少一個(gè)標(biāo)志物、PTSD標(biāo)志物或自殺性標(biāo)志物的各自的自體抗體的抗原。
11.根據(jù)權(quán)利要求9所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑是特異性地和獨(dú)立地結(jié)合至所述至少一個(gè)標(biāo)志物、PTSD標(biāo)志物或自殺性標(biāo)志物的各自的蛋白的抗體。
12.根據(jù)權(quán)利要求9所述的試劑盒，其特征在于，使用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)以確定是否所述一個(gè)或多個(gè)試劑結(jié)合到所述生物樣品中的所述至少一個(gè)標(biāo)志物、PTSD標(biāo)志物或自殺性標(biāo)志物。
13.一種用于在對(duì)象中檢測(cè)精神疾病的體外診斷裝置，其特征在于，所述裝置包括: 用于保持從所述對(duì)象采集的第一生物樣品的樣品室； 與所述樣品室流體連通的檢測(cè)模塊，所述檢測(cè)模塊使用根據(jù)權(quán)利要求1、3、4或5所述的方法； 電源；以及 與所述電源和所述檢測(cè)模塊可操作通信的數(shù)據(jù)處理模塊；所述檢測(cè)模塊分析所述第一生物樣品以檢測(cè)存在于所述生物樣品中的與精神疾病相關(guān)的至少一個(gè)所述蛋白標(biāo)志物并將所述第一生物樣品中檢測(cè)到的所述標(biāo)志物的存在電子通信至所述數(shù)據(jù)處理模塊； 其中所述數(shù)據(jù)處理模塊具有涉及在對(duì)象中檢測(cè)神經(jīng)損傷或神經(jīng)疾病的輸出，所述輸出是測(cè)量的所述標(biāo)志物的量，精神疾病的存在或不存在，或精神疾病的嚴(yán)重性。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的裝置，其特征在于，還包括:在所述第一樣品采集后某個(gè)時(shí)間，分析從所述對(duì)象獲得的第二生物樣品，其中，如果所述裝置檢測(cè)到第二樣品中測(cè)量的標(biāo)志物相對(duì)于所述第一樣品的差異量，標(biāo)注時(shí)間變化的輸出由所述數(shù)據(jù)處理模塊提供。
15.根據(jù)權(quán)利要求13所述的裝置，其特征在于，還包括顯示器，與數(shù)據(jù)處理模塊電子通信并顯示所述輸出作為所述精神疾病標(biāo)志物的量、所述精神疾病標(biāo)志物的所述量和對(duì)照之間的比較、精神疾病的存在、或精神疾病的嚴(yán)重性的至少一個(gè)。
16.根據(jù)權(quán)利要求13所述的裝置，其特征在于，還包括發(fā)射器，用于將所述輸出通信至遠(yuǎn)程位置。
17.根據(jù)權(quán)利要求1所述的裝置，其特征在于，所述輸出是數(shù)字化的。
18.一種用于在對(duì)象中檢測(cè)神經(jīng)損傷或神經(jīng)疾病的體外診斷裝置，其特征在于，所述裝置包括: 用于保持來(lái)自所述對(duì)象的第一生物樣品的手持的樣品室； 與所述樣品室流體連通的檢測(cè)模塊，所述檢測(cè)模塊使用根據(jù)權(quán)利要求1、3、4或5所述的方法；以及 響應(yīng)在所述第一生物樣品中存在的至少一個(gè)測(cè)量的精神疾病標(biāo)志物而提供比色變化的染料。
【文檔編號(hào)】G01N33/53GK103959067SQ201280044530
【公開(kāi)日】2014年7月30日 申請(qǐng)日期:2012年9月14日 優(yōu)先權(quán)日:2011年9月14日
【發(fā)明者】哈維·波拉德, 張磊, 奧弗·艾德?tīng)柭? 羅伯特·J·烏爾薩諾, 李合, 蘇童平, 凱文·嘉旺·王, 羅奈爾得·L·海斯 申請(qǐng)人:促進(jìn)軍事醫(yī)學(xué)的亨利·M·杰克遜基金會(huì)公司, 班揚(yáng)生物標(biāo)記公司