以桔皮為原料發(fā)酵木霉菌的生產(chǎn)工藝的制作方法
【專利摘要】以桔皮為原料發(fā)酵木霉菌的生產(chǎn)工藝，屬于微生物【技術(shù)領(lǐng)域】。生產(chǎn)工藝包括：（1）對(duì)桔皮進(jìn)行干燥、粉碎、篩分預(yù)處理；（2）將經(jīng)過預(yù)處理的桔皮粉與麩皮和去離子水按一定比例混合，高壓蒸汽滅菌；（3）在滅菌后的物料上接種木霉進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵；（4）固體發(fā)酵產(chǎn)物經(jīng)干燥處理后即得木霉制劑產(chǎn)品。該工藝生產(chǎn)的木霉菌劑具有促進(jìn)植物生長(zhǎng)，誘導(dǎo)植物產(chǎn)生抗逆境抗病害的能力，可用于防治土傳病害和促進(jìn)污染土壤的植物修復(fù)；同時(shí)也為桔皮的資源化利用提供了一條新途徑。
【專利說明】以桔皮為原料發(fā)酵木霉菌的生產(chǎn)工藝
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于微生物發(fā)酵【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其涉及一種利用桔皮固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)木霉菌劑的方法。
[0002]
【背景技術(shù)】
[0003]木霉菌577/7)在自然界中分布廣泛,生物量大,環(huán)境適應(yīng)性強(qiáng),是一種歷史悠久的生防真菌，目前國(guó)際上已開發(fā)注冊(cè)的木霉菌劑產(chǎn)品有50多種，大多數(shù)都可以用來防治作物土傳病害和促進(jìn)植物生長(zhǎng)。近年來，亦有研究表明木霉菌具有吸附重金屬的功能，其逐漸被應(yīng)用于污染土壤的植物-微生物聯(lián)合修復(fù)技術(shù)中。由于木霉是活菌制劑，主要通過孢子來實(shí)現(xiàn)其生物活性，因此選擇廉價(jià)且產(chǎn)孢量高的發(fā)酵基質(zhì)，優(yōu)化人工發(fā)酵工藝，對(duì)于降低該活菌制劑的生產(chǎn)成本，推廣該制劑的田間應(yīng)用具有重要的意義。
[0004]我國(guó)是柑橘生產(chǎn)大國(guó)，每年都會(huì)產(chǎn)生大量的副產(chǎn)物-柑橘皮。柑橘皮富含果膠、纖維素、可溶性糖及多種礦物質(zhì)元素，是一種良好的微生物生長(zhǎng)基質(zhì)。過去這種富有營(yíng)養(yǎng)的物質(zhì)被丟棄，不但大量浪費(fèi)資源，而且污染環(huán)境。目前，對(duì)柑橘皮的研究主要集中在兩個(gè)方面:一方面是內(nèi)含成分的提取，包括果膠、香精油、橙皮苷、黃酮類、色素等物質(zhì)的提取利用；另一方面是微生物發(fā)酵，主要以柑橘皮為營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)發(fā)酵生產(chǎn)飼料和酶制劑，而以桔皮作為培養(yǎng)基來生產(chǎn)木霉菌劑的方法還未見報(bào)道。鑒此，本專利以里氏木霉FSlO-C為出發(fā)菌株，以桔皮為主要原料進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵制備木霉菌劑，不僅可以降低制劑的生產(chǎn)成本，而且還可有效解決了桔皮的資源化利用問題。
[0005]

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]解決的技術(shù)問題:本發(fā)明的目的在于提供一種利用桔皮固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)木霉菌劑的方法，該方法不僅可以降低制劑的生產(chǎn)成本，而且還可有效解決了桔皮的資源化利用問題。此外，通過本方法制得的木霉菌劑可用于防治土傳病害和促進(jìn)污染土壤的植物修復(fù)中。
[0007]技術(shù)方案:以桔皮為原料發(fā)酵木霉菌的生產(chǎn)工藝，工藝步驟如下:
(O桔皮的預(yù)處理
將收集的桔皮烘干粉碎過篩后，選擇粒徑0.84 _的桔皮粉用于后續(xù)工藝；
(2)物料滅菌
原料:桔皮粉50~65質(zhì)量份，麥麩35~50質(zhì)量份；加水，原料:水=1:0.8~1: 1.2(重量比)；將混合料采用高壓蒸汽滅菌法進(jìn)行滅菌處理:溫度121°C，時(shí)間30~50分鐘；
(3)發(fā)酵
將滅菌處理后的混合料進(jìn)行發(fā)酵，木霉菌接種量為原料重量的5%~10%，溫度為28°C，發(fā)酵周期為8~10天，從第4天起隔天攪拌一次，混勻；
(4)后處理將長(zhǎng)滿分生孢子的木霉菌固體發(fā)酵培養(yǎng)物真空冷凍干燥，包裝。
[0008]發(fā)酵時(shí)所采用的里氏木霉re^ei^SlO-C,該菌株已在國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局指定的保藏單位保藏，保藏日期為2010年07月Ol日，保藏單位名稱:中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)=CGMCC N0.3970。
[0009]有益效果(I)木霉菌劑制備方法簡(jiǎn)單，產(chǎn)孢量大:以桔皮為主要原料，加入一定量的麥麩作為輔料即得到混合培養(yǎng)基，不需要額外添加營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)即可實(shí)現(xiàn)木霉菌的高密度培養(yǎng)，制劑含孢量大于101°個(gè)/克，達(dá)到目前木霉菌固體發(fā)酵的平均水平(IX101°個(gè)/克)；
(2)桔皮麥麩作為有機(jī)質(zhì)與木霉孢子混合添加入土壤，一方面可以為孢子的萌發(fā)提供營(yíng)養(yǎng)，另一方面可以減輕土壤對(duì)孢子的抑制作用，同時(shí)增加土壤肥力；(3)采用本發(fā)明所述方法，能提高農(nóng)業(yè)廢棄物桔皮和麥麩的利用率，變廢為寶。
[0010]
【具體實(shí)施方式】
[0011]以下結(jié)合實(shí)例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的描述，但不作為對(duì)本發(fā)明實(shí)施范圍的限定。
[0012]實(shí)施例1:桔皮麥麩組合對(duì)里氏木霉(re5；Si?i)FS10-C生長(zhǎng)的促進(jìn)作用
1.1試驗(yàn)設(shè)計(jì)
(I)孢子懸液的制備:取培養(yǎng)好的里氏木霉(Trichoderma ressei ) FSlO-C種子斜面，加5mL無菌水，振蕩，將孢子洗脫到無菌三角瓶中，稀釋至孢子濃度為IO6個(gè)孢子/mL待用。
[0013](2)固態(tài)發(fā)酵:將桔 皮70°C條件下烘干，粉碎過0.84mm篩；分別取桔皮粉100份；桔皮粉50份、麥麩50份；麥麩100份，按料水重量比1:1添加去離子水調(diào)，分裝到15cm培養(yǎng)皿中，每個(gè)培養(yǎng)皿中約60g，3次重復(fù)，121°C滅菌30分鐘，冷卻至室溫；按5%被的比例接種里氏木霉ressei) FSlO-C孢子懸液,混勻置于28°C恒溫培養(yǎng)箱中靜止培養(yǎng)，定時(shí)攪拌。
[0014](3)產(chǎn)孢量測(cè)定:發(fā)酵結(jié)束后，準(zhǔn)確稱取1.0g固體培養(yǎng)物，定量稀釋，振蕩混勻后，用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，3個(gè)重復(fù)。用常壓干燥法測(cè)定發(fā)酵產(chǎn)物的含水量W，計(jì)算孢子產(chǎn)量[個(gè)/(克]。
[0015]1.2結(jié)果與分析
表1桔皮麥麩組合對(duì)里氏木霉ressei) FSlO-C生長(zhǎng)的促進(jìn)作用
【權(quán)利要求】
1.以桔皮為原料發(fā)酵木霉菌的生產(chǎn)工藝，其特征在于工藝步驟如下: (O桔皮的預(yù)處理 將收集的桔皮烘干粉碎過篩后，選擇粒徑0.84 _的桔皮粉用于后續(xù)工藝； (2)物料滅菌 原料:桔皮粉50~65質(zhì)量份，麥麩35~50質(zhì)量份；加水，原料:水=1:0.8~1: 1.2(重量比)；將混合料采用高壓蒸汽滅菌法進(jìn)行滅菌處理:溫度121°C，時(shí)間30~50分鐘； (3)發(fā)酵 將滅菌處理后的混合料進(jìn)行發(fā)酵，木霉菌接種量為原料重量的5%~10%，溫度為28°C，發(fā)酵周期為8~10天，從第4天起隔天攪拌一次，混勻； (4)后處理 將長(zhǎng)滿分生孢子的木霉菌固體發(fā)酵培養(yǎng)物真空冷凍干燥，包裝。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述以桔皮為原料發(fā)酵木霉菌的生產(chǎn)工藝，其特征在于發(fā)酵時(shí)所采用的里氏木霉(Trichoderma ressei ) FSIO-C,該菌株已在國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局指定的保藏單位保藏，保藏日期為2010年07月01日，保藏單位名稱:中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)=CGMCC N0.3970。
【文檔編號(hào)】B09C1/10GK103468629SQ201310411124
【公開日】2013年12月25日 申請(qǐng)日期:2013年9月11日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月11日
【發(fā)明者】滕應(yīng), 羅洋, 駱永明, 馬文亭, 李振高 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院南京土壤研究所