一種新的查爾酮衍生物及其制備方法與在自身免疫病應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種具有抗炎、免疫抑制作用的新的查爾酮衍生物及其制備方法與在制備自身免疫性疾病藥物中的應(yīng)用。本研究采用活性亞結(jié)構(gòu)拼接的方法，形成含氟查爾酮衍生物，再將含氟查爾酮衍生物與哌嗪片段連接起來，最后合成得到6個新的4’?(1?哌嗪基)查爾酮衍生物?；隗w外免疫活性篩選及2個自身免疫性疾病(多發(fā)性硬化疾病動物模型和關(guān)節(jié)炎模型)為篩選平臺。本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)這6個化合物具有顯著的免疫抑制作用，在治療自身免疫性疾病(如：多發(fā)性硬化、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和系統(tǒng)性紅斑狼瘡和腸炎)顯示出較好的藥物開發(fā)前景。
【專利說明】
一種新的查爾酮衍生物及其制備方法與在自身免疫病應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種具有免疫抑制作用的新的查爾酮衍生物及其 制備方法與在制備自身免疫性疾病藥物中的應(yīng)用。 技術(shù)背景
[0002] 自身免疫性疾病是一類難治性的免疫紊亂而造成的疾病，尤其是類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、 多發(fā)性硬化和系統(tǒng)性紅斑狼瘡等以T細(xì)胞反應(yīng)為主自身免疫性疾病一直困擾著很多病人， 這些疾病具有迀延日久、延綿難治的特點(diǎn)，一直是當(dāng)今世界醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的難題。免疫抑制劑可 通過調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答的各個環(huán)節(jié)阻斷疾病進(jìn)程來達(dá)到治療自身免疫性疾病的目的。目前我國 的免疫抑制劑主要依賴進(jìn)口，且多數(shù)免疫抑制劑對機(jī)體免疫系統(tǒng)的作用缺乏特異性和選擇 性，毒副作用大，限制了其在臨床廣泛應(yīng)用。特別在眾多類型的自身免疫性疾病的治療中， 仍然缺乏療效可靠的藥物，目前在國際上雖然有一些新型的生物技術(shù)和常規(guī)免疫抑制用于 自身免疫性疾病的治療，但藥物的種類非常有限而價格昂貴，因此研制開發(fā)具有我國自主 知識產(chǎn)權(quán)的高效低毒的抗炎和免疫抑制創(chuàng)新藥物已成為當(dāng)今醫(yī)學(xué)和藥學(xué)研究的緊迫課題。
[0003] 多發(fā)性硬化(multiple sclerosis，MS)是一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎性脫髓鞘病變?yōu)橹?要特征的自身免疫性疾病，發(fā)病原因主要在于自身免疫T細(xì)胞破壞血腦屏障，炎癥介質(zhì)進(jìn)入 并攻擊神經(jīng)系統(tǒng)，造成神經(jīng)纖維上的髓鞘脫失、神經(jīng)元及軸索損傷，炎癥細(xì)胞浸潤。如果未 及時規(guī)范診治，病情最終可導(dǎo)致失明、癱瘓、甚至死亡，因此這種病號稱"死不了的癌癥"。該 疾病白種人群較為高發(fā)，在我國發(fā)病率相對較低，但近年來呈現(xiàn)逐年增長的趨勢。由于對疾 病本身的了解有限，迄今為止沒有一種有效方法能將MS完全治愈，惟一的辦法就是靠藥物 控制病情的發(fā)展，如當(dāng)下就連臨床中可選擇的藥物也是寥寥無幾，且高昂的藥費(fèi)也絕非是 普通人可以承受的。MS治療藥物的告急，讓尋找療效好、價格低廉的藥物成為了一場激烈的 國際角逐戰(zhàn)，因此研究治療多發(fā)性硬化的藥物具有顯著的社會效益和經(jīng)濟(jì)效益。
[0004] 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)是一種以侵蝕性關(guān)節(jié)炎為主要表現(xiàn)的 全身性自身免疫病。我國大陸地區(qū)的RA患病率約為0.2%~0.4%。其主要結(jié)局是殘疾，在類 風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎自然病程中，5-10年的致殘率為60%，病程30年的致殘率為90%。壽命縮短10-15年，而伴關(guān)節(jié)外表現(xiàn)者的5年生存率僅為50%，極大影響了患病人群的生活質(zhì)量，常規(guī)治 療本病雖有一定的療效，但存在毒副作用多，如胃腸道反應(yīng)、肝腎功能損傷、骨髓抑制、皮疹 等不良反應(yīng)，患者依從性差。生物制劑雖療效顯著，但經(jīng)濟(jì)成本頗高，因此開發(fā)治療類風(fēng)濕 性關(guān)節(jié)炎的藥物具有巨大的市場前景和社會價值。
[0005]查爾酮類化合物分子結(jié)構(gòu)獨(dú)特，含有多個反應(yīng)中心，可以與多種受體結(jié)合，從而表 現(xiàn)出廣泛的生物活性，是一類非常重要的有機(jī)合成及藥物合成中間體。從天然產(chǎn)物中提取 分離以及通過化學(xué)、生物等方法合成的查爾酮類化合物，表現(xiàn)出抗腫瘤、抗炎、抗病毒、抗菌 和免疫調(diào)節(jié)等多種藥理學(xué)性質(zhì)，尤其在免疫調(diào)節(jié)方面對T、B淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和抗原遞程 細(xì)胞等具有廣泛的調(diào)節(jié)作用，因此，查爾酮類化合物的研究與開發(fā)已成為藥物化學(xué)的一個 熱點(diǎn)研究領(lǐng)域。氮雜環(huán)化合物因其廣泛的生物活性和較好的有機(jī)催化活性，一直頗受人們 的青睞。哌嗪作為含氮雜環(huán)體系中的重要一員，具有優(yōu)良的生物活性和低毒性的特點(diǎn)，其環(huán) 上的N原子可以參與生物體中氫鍵的形成，增加藥物與受體的親和力和選擇性，使該類化合 物在新藥研發(fā)方面顯示出越來越重要的作用。
[0006] 然而在免疫調(diào)節(jié)方面，單用查爾酮類化合物對免疫細(xì)胞缺乏特異性，目前查爾酮 類化合物對自身免疫性疾病動物模型缺乏深入評價，免疫調(diào)節(jié)和抗炎活性作用強(qiáng)度有限。 為進(jìn)一步提高免疫調(diào)節(jié)和抗炎活性，我們采用亞結(jié)構(gòu)拼接方法，再將查爾酮和哌嗪拼接，合 成一系列含有哌嗪的查爾酮類衍生物。經(jīng)體外活性篩選及體內(nèi)自身免疫性疾病動物模型評 價，首次發(fā)現(xiàn)含有哌嗪查爾酮類衍生物顯著抑制T淋巴細(xì)胞的增殖功能和炎癥因子的產(chǎn)生， 對風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化等以T細(xì)胞反應(yīng)為主自身免疫性疾病具有較好的治療效果，使該 類化合物在制備自身免疫性疾病藥物中具有較好的應(yīng)用前景。

【發(fā)明內(nèi)容】
：
[0007] 針對上述情況，本發(fā)明的發(fā)明目的是提供一種治療自身免疫性疾病的藥物及其制 備方法與應(yīng)用。為解決本發(fā)明的技術(shù)問題，本發(fā)明通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：
[0008] -種查爾酮衍生物的結(jié)構(gòu)如式I所示：
[0009：
所述的式I中，R可以為4-二甲氨基、3-二 甲氨基、二甲氨基、4-二乙氨基、3-二乙氨基或2-二乙氨基。
[0010] 所述的查爾酮衍生物的制備方法為：取4-氟苯乙酮與對-二甲氨基苯甲醛或3-二 甲氨基苯甲醛或2-二甲氨基苯甲醛或?qū)?二乙氨基苯甲醛或3-二乙氨基苯甲醛或2-二乙氨 基苯甲醛為原料，于反應(yīng)容器中，加入乙醇和20 %Κ0Η，室溫靜置10-24小時；加水，抽濾，所 得固體依次用水和30%乙醇洗滌2次，干燥后得橙黃色固體;將上述固體和碳酸鉀置于反應(yīng) 容器中，加入六水合哌嗪和DMF，在120°C反應(yīng)1-24小時;冷卻后將反應(yīng)物倒入水中，用DCM萃 取3次;有機(jī)相經(jīng)無水硫酸鈉干燥后濃縮，殘余物經(jīng)硅膠柱層析，以2 % CH30H/DCM為洗脫劑， 分離得到黃色固體，即為所述的查爾酮衍生物。
[0011] 所述的查爾酮衍生物的應(yīng)用在于制備治療自身免疫性疾病的免疫抑制藥物或抗 炎藥物的應(yīng)用。
[0012]進(jìn)一步地，所述的自身免疫性疾病為:多發(fā)性硬化癥。
[0013] 進(jìn)一步地，所述的自身免疫性疾病為:類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎。
[0014] 進(jìn)一步地，所述的自身免疫性疾病為:系統(tǒng)性紅斑狼瘡。
[0015] 有益效果：
[0016]本研究采用活性亞結(jié)構(gòu)拼接的方法，形成含氟查爾酮衍生物，再將含氟查爾酮衍 生物與哌嗪片段連接起來，最后合成得到6個新的4'-(1_哌嗪基)查爾酮衍生物。基于體外 免疫活性和抗炎篩選及2個自身免疫性疾病(多發(fā)性硬化疾病動物模型和關(guān)節(jié)炎模型)為篩 選平臺。首次發(fā)現(xiàn)這6個化合物具有顯著的免疫抑制作用，顯著降低多發(fā)性硬化癥經(jīng)典模 型-實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓膜炎的發(fā)病率，減少疾病臨床評分。6個化合物口服給藥顯著 減少關(guān)節(jié)炎的臨床評分。6個新的4 ' -(1-哌嗪基)查爾酮衍生物在治療自身免疫性疾病(如： 多發(fā)性硬化、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和系統(tǒng)性紅斑狼瘡等)顯示出較好的藥物開發(fā)前景。
【附圖說明】
[0017] 圖1:對實(shí)驗(yàn)性自身免疫腦脊髓炎小鼠模型發(fā)病率的影響
[0018] 圖2:對實(shí)驗(yàn)性自身免疫腦脊髓炎小鼠模型臨床神經(jīng)障礙評分的影響
【具體實(shí)施方式】
[0019] 實(shí)施例1:制備方法
[0020] 4-二甲氨基-4'-(l-哌嗪基)查爾酮(結(jié)構(gòu)式如下式Π ，簡稱化合物1)的合成方法 為:稱取4-氟苯乙酮(2.76g，20mmo 1)和對-二甲氨基苯甲醛(3.28g，22mmo 1)于100mL圓底燒 瓶中，加入30mL乙醇和20mL 20 %Κ0Η，室溫?cái)嚢柽^夜。加入50mL水，抽濾，固體依次用50mL水 和50mL 30%乙醇-水洗滌2次，干燥后得橙黃色固體。將上述固體和5.48g(40mmol)碳酸鉀 置于100mL圓底燒瓶中，加入5.8g(30mmo 1)六水合哌嗪和60mL DMF，在120°C反應(yīng)過夜。冷卻 后將反應(yīng)物倒入150mL水中，DCM萃取(30mL X 3)。有機(jī)相經(jīng)無水硫酸鈉干燥后濃縮，殘余物 經(jīng)柱層析（以2%CH30H/DCM為洗脫劑)分離得到黃色固體即為4-二甲氨基-4'-(l-哌嗪基） 查爾酮，兩步收率70%。波譜數(shù)據(jù)如下：
[0021]
[0022] 式II :4-二甲氨基-4二（1-呢嗪基）查爾酮化字結(jié)構(gòu)式
[0023] Yellow solid ^HMlRUOOMHz，CDC13) δ: 8.01(d，J = 9.0Hz，2H)，7.80((1, J = 15.3Hz，lH)，7.56(d，J = 9.0Hz，2H)，7.41(d，J=15.6Hz，lH)，6.92(d，J = 9.0Hz，2H)，6.70 (d,J = 9.0Hz,2H) ,3.33(t,J = 4.8Hz,4H) ,3.01-3.04(m,10H,NCH2) ,2.12(s,lH) ；13C NMR (75MHz,CDC13)5 :188.3,154.2,151.8,144.1,130.3,130.1,129.1,123.0,116.8,113.6, 111.8,48.5,45.9,40.2；HRMS:m/z calcd for C2iH26N30(M+H)+336.2070,found 336.2072.
[0024] 3-二甲氨基-4 ' -(1 -哌嗪基)查爾酮(結(jié)構(gòu)式如下式ΙΠ，簡稱化合物2)的合成方法 為：以4-氟苯乙酮和3-二甲氨基苯甲醛為原料，其余合成方法同4-二甲氨基哌嗪 基)查爾酮。
[0025]
12 式m : 3-二甲氨基-4' _(1-哌嗪基)查爾酮化學(xué)結(jié)構(gòu)式 2 Yellow solid;m.p.l61 ~NMR(300MHz，CDCl3)S:8.00(d，J = 8.7Hz，2H)， 7.81(d,J=15.4Hz,lH) ,7.55(d,J = 9.0Hz,2H) ,7.43(d,J=15.4Hz,lH) ,7.02(s,lH), 6·74-6.83(m，3H)，3.31-3.39(m，4H)，3.00-3.06(m，4H)，3.02(s，6H)，2.ll(s，1H); 13C NMR (75MHz,CDC13)5:188.5,155.6,152.2,144.0,131.3,129.1,128.1,126.4,123.0,121.7, 116.8,112.9,111.6,48.5,45.7,40.3；HRMS:m/z calcd for C2iH26N30(M+H)+336.2070, found 336.2067.
[0028] 2-二甲氨基-4 ' -(1-哌嗪基)查爾酮(結(jié)構(gòu)式如下式IV，簡稱化合物3)的合成方法 為：以4-氟苯乙酮和2-二甲氨基苯甲醛為原料，其余合成方法同4-二甲氨基哌嗪 基)查爾酮。
[0029]
[0030] 式IV: 2-二甲氨基-4 '_(1-哌嗪基)查爾酮化學(xué)結(jié)構(gòu)式
[0031] Pale red solid;m.p. 165~167Γ 5^^^(30010^,0)(:13)6:7.98((1,1 = 8.4^, 2H) ,7.82(d,J=15.3Hz,lH),7.55(d,J = 8.7Hz,2H),7.42(d,J=15.4Hz,lH) ,7.13(d,J = 6.8Hz,lH),7.05-7.12(m,lH),6.77-6.88(m,2H),3.34(s,4H),3.03(s,4H),3.01(s,6H), 2.10(s，lH) ;13C 匪R(75MHz，CDC13)S :188.9,155.1,152.8,141.6,134.7,132.2,130.3, 126.8,126.2,123.1,121.7,116.8,112.9,111.5,48.8,45.9,40.2；HRMS:m/z calcd for C2iH26N30(M+H)+336.2070,found 336.2071.
[0032] 4-二乙氨基-4'-(l-哌嗪基)查爾酮(結(jié)構(gòu)式如下式V，簡稱化合物4)合成方法為： 以4-氟苯乙酮和對-二乙氨基苯甲醛為原料，其余合成方法同4-二甲氨基-4'-(l-哌嗪基） 查爾酮。
[0033]
[0034] 式V:4-二乙氨基-4'-(l-哌嗪基)查爾酮化學(xué)結(jié)構(gòu)式
[0035] Pale brown solid;m.p. 166~NMR(300MHz，CDCl3)S:8.01(d，J = 9.0Hz， 2H) ,7.86(d,J=15.3Hz,lH),7.57(d,J = 8.7Hz,2H),7.45(d,J=15.3Hz,lH) ,7.03(d,J = 8.7Hz,2H),6.82(d ,J = 9.0Hz,2H),3.37(t ,J = 4.7Hz,4H),3.34(t ,J = 4.8Hz,4H),3.05(t, J = 4.9Hz，4H) ,2. ll(s, 1H)，1.24(t，J = 6.8Hz，6H) ;13C NMR(75MHz，CDC13)S: 187.7,153.6， 140.1,134.1,130.3,126.0,122.4,120.8,116.8,112.9,111 .5,48.5,46.1,45.12,12.64; HRMS:m/z calcd for C23H29N30Na(M+Na)+386.2208,found 386.2209.
[0036] 3-二乙氨基-4 ' _(1-哌嗪基)查爾酮(結(jié)構(gòu)式如下式VI，簡稱化合物5)合成方法為： 以4-氟苯乙酮和3-二乙氨基苯甲醛為原料，合成方法同4-二甲氨基-4'-(l-哌嗪基）查爾 酮。
[0037]
[0038] 式VI: 3-二乙氨基-4' _(1-哌嗪基)查爾酮化學(xué)結(jié)構(gòu)式
[0039] Brown solid;m.p.l69~ΠΙΓ;1!! NMR(300MHz，CDCl3)S:7.98(d，J = 8.9Hz，2H)， 7.85(d,J=15.4Hz,lH) ,7.56(d,J = 8.7Hz,2H) ,7.44(d,J=15.3Hz,lH) ,7.11(d,J = 6.9Hz,lH) ,7.01-7.09(m,2H),6.84(t,J = 5.4Hz,lH) ,3.37(t,J = 4.9Hz,4H) ,3.34(t,J = 4·8Ηζ，4H)，3.06(t，J = 4.7Hz，4H) ,2.12(s，lH) ,1.25(t，J = 6.8Hz，6H) ;13C 匪R(75MHz, CDC13)δ :188.9,155.1,152.8,141.6,135.2,132.6,131.1,126.3,125.0,122.9,121.4, 116.8,111.8,48.7,45.9,45.16,12.65；HRMS:m/zcalcdforC23H 3〇N3ONa(M+H)+364.2389, found364.2391.
[0040] 2-二乙氨基-4'-(1-哌嗪基)查爾酮(結(jié)構(gòu)式如下式W，簡稱化合物6)合成方法為： 以4-氟苯乙酮和2-二乙氨基苯甲醛為原料，合成方法同4-二甲氨基-4'-(l-哌嗪基）查爾 酮。
[0041]
[0042] 式W: 2-二乙氨基-4' _(1-哌嗪基)查爾酮化學(xué)結(jié)構(gòu)式
[0043] Pale yellow solid;m.p.l67~匪R(300MHz，CDCl3)S:7.99(d，J = 8·7Ηζ，2Η)，7.84(d，J=15.4Hz，lH)，7.56(d，J = 8.7Hz，2H)，7.42(d，J=15.4Hz，lH)，7.13 (d，J = 6 · 7Hz，1H)，7 · 07(t，J = 5 · 3Hz，1Η)，6· 74-6.82(m，2H)，3.36(t，J = 4.8Hz，4H) ,3.34 (t，J = 4.8Hz，4H)，3.05(t，J = 4.7Hz，4H)，2.12(s，lH)，1.23(t，J = 6.9Hz，6H) ;13C 匪R (75MHz,CDC13)5 :188.9,155.1,152.8,141.6,134.7,132.2,130.3,126.8,126.2,123.1, 121.7，116.8，112.9，111.5,48.8,46.0,45.14，12.63;HRMS:m/z calcd for C23H29N3ONa(M+ Na)+386.2208,found 386.2210.
[0044] 實(shí)施例2:體外免疫活性篩選
[0045] 1.建立篩選模型
[0046] BALB/C小鼠脾臟淋巴細(xì)胞在有絲分裂原ConA的刺激下，細(xì)胞的形態(tài)和代謝可發(fā)生 一系列的變化，轉(zhuǎn)化為母細(xì)胞，并分化增殖。本實(shí)驗(yàn)加入ConA (刀豆蛋白A) 5μg/ml誘導(dǎo)T淋巴 細(xì)胞增殖。以MTT法定量測定細(xì)胞的增殖?；罴?xì)胞內(nèi)線粒體脫氫酶能將MTT有黃色還原成藍(lán) 色的甲肷，甲肷產(chǎn)量與活細(xì)胞成正比。用有機(jī)溶劑溶解后，可用酶標(biāo)儀檢測0D值。
[0047]結(jié)果評定：淋巴細(xì)胞的增殖采用被測樣品0D值減對照孔0D值，除對照孔0D值乘 以％〇
[0048] 百分比前有負(fù)號表示此樣品對T細(xì)胞有抑制作用。
[0049] 百分比前沒有負(fù)號表示此樣品對T細(xì)胞有增強(qiáng)作用。
[0050]淋巴細(xì)胞毒性的判斷"有"，"無"，在無細(xì)胞毒的情況下，T淋巴細(xì)胞的增強(qiáng)/抑制百 分比在±15%以上，就表示有作用。
[0051 ] 2.體外免疫活性篩選的結(jié)果
[0052]實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下表1中所示:6個4'-(1_哌嗪基)查爾酮衍生物濃度依賴性抑制絲裂 原ConA誘導(dǎo)的T淋巴細(xì)胞增殖，體外顯示出對T淋巴細(xì)胞有較好的免疫抑制效應(yīng)。
[0053] 表1.查爾酮衍生物對絲裂原ConA誘導(dǎo)的T淋巴細(xì)胞增殖功能的影響(mean 土 SD，η =3)
[0054]
[0056] a'_'表明樣品有抑制活性，彡15%顯示樣品是有作用； 1 b表明細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)；
[0058] e表明絲裂原ConA誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)；
[0059]實(shí)施例3:體外抗炎活性篩選 [0060] 1.建立篩選模型
[00611 小鼠巨噬細(xì)胞株Raw 264.7細(xì)胞購自美國細(xì)胞庫（41'(：0，培養(yǎng)于含10%?83的 RPMI-1640培養(yǎng)液中。Raw264.7細(xì)胞（1X105個/孔)接種于24孔板，同時加入不同濃度的本 發(fā)明所得的查爾酮衍生物，在lμg/ml LPS刺激作用下培養(yǎng)24h，另設(shè)溶劑對照及無刺激劑本 底對照。離心收集培養(yǎng)上清(5000rpm，4°C，5min)，采用Griess法檢測上清中N(V的含量。
[0062] 表2.查爾酮衍生物抗炎活性篩選結(jié)果
[0063]
[0064]抗炎活性篩選結(jié)果如表2所示，6個查爾酮衍生物顯著抑制LPS誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞 RAW264.7炎癥因子N0,體外顯示出良好的抗炎活性。
[0065]實(shí)施例4:實(shí)驗(yàn)性自身免疫腦脊髓炎模型的建立及藥物干預(yù) [0066] 1.實(shí)驗(yàn)性自身免疫腦脊髓炎建模
[0067]將髓磷脂少突細(xì)胞糖蛋白35-55肽段(縮寫為:MOG35-55)(2mg/ml)，用PBS配置相應(yīng) 濃度，與等體積CFA(含4mg/ml H37Ra)用玻璃注射器充分乳化，用異氟醚麻醉小鼠，分三點(diǎn) 給小鼠注射乳化液，背部兩肩正中、后背部中心兩側(cè)各50μ1，最終每只小鼠皮下注射MOG 35-55 和H37Ra分別150yg和300yg。同時在第0和第2天每只小鼠腹腔注射400yg PTX。模型制備后， 按體重隨機(jī)分為EAE模型組和6個化合物給藥組(20mg/kg)，每天給藥1次。EAE的疾病評分采 用5分制。評分標(biāo)準(zhǔn)如下:0分，沒有明顯疾病癥狀；1尾巴張力消失或后肢無力；2分，尾巴張 力消失和后肢無力；3分，后肢部分癱瘓;4分，后肢完全癱瘓;5分，瀕死狀態(tài)或者死亡。免疫 后記錄小鼠狀態(tài)和疾病評分，并且每天稱體重。
[0068] 2.藥物干預(yù)的結(jié)果
[0069] 結(jié)果如說明書附圖1、圖2所示，與EAE(實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓膜炎）模型組比 較，4'-(1_哌嗪基)查爾酮衍生物(20mg/kg)給藥顯著降低疾病的發(fā)病率，減少神經(jīng)障礙評 分，顯示出對多發(fā)性硬化病的治療效果。
[0070] 實(shí)施例5:膠原關(guān)節(jié)炎模型的建立及藥物干預(yù)
[0071] 1.建模
[0072] 牛II型膠原加入0.1M的醋酸，濃度10mg/ml，提前4天4°C冰箱溶解，膠原與等體積 的弗氏完全佐劑充分乳化，待雄性DBA/1小鼠麻醉后，于其尾根部進(jìn)行致敏，每只50μ1/只，3 周后以相同劑量進(jìn)行再次免疫攻擊，肉眼觀察小鼠四肢，對關(guān)節(jié)炎的嚴(yán)重程度進(jìn)行0-4級評 分，每組小鼠四肢評分總和除以小鼠只數(shù)，取平均值作為臨床評分。[0-4級評分系統(tǒng):0 =正 常；1 = 一個或多個趾關(guān)節(jié)紅或紅腫；2 =踝關(guān)節(jié)以下中度紅腫；3 =包括膝關(guān)節(jié)在內(nèi)的嚴(yán)重 紅腫;4 =包括膝關(guān)節(jié)在內(nèi)的完全紅腫，關(guān)節(jié)變形、殘廢。每只小鼠最多評分為16分]。第0天 即為攻擊當(dāng)天。模型制備后，按臨床評分隨機(jī)分為CIA模型組和6個化合物給藥組（20mg/ kg)，每天給藥1次。
[0073] 2.藥物干預(yù)結(jié)果
[0074]結(jié)果見表3所示：與關(guān)節(jié)炎模型組比較，4'-(1_哌嗪基）查爾酮衍生物口服(20mg/ kg)顯著降低DBA/1小鼠膠原關(guān)節(jié)炎的臨床評分，顯示出對關(guān)節(jié)炎的治療效果。
[0075] 表3對膠原關(guān)節(jié)炎小鼠臨床評分的影響(mean土SD，n = 8)
[0076]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種查爾酮衍生物，其特征在于:化合物的結(jié)構(gòu)如式I所示：沂述的式I中，R可以為4-二甲氨基、3-二甲氨 基、2_二甲氛基、4_二乙氛基、3_二乙氛基或2_二乙氛基。2. -種如權(quán)利要求1所述的查爾酮衍生物的制備方法，其特征在于：取4-氟苯乙酮與 對-二甲氨基苯甲醛或3_二甲氨基苯甲醛或2-二甲氨基苯甲醛或?qū)?二乙氨基苯甲醛或3-二乙氨基苯甲醛或2-二乙氨基苯甲醛為原料，于反應(yīng)容器中，加入乙醇和20%K0H，室溫靜 置10-24小時;加水，抽濾，所得固體依次用水和30%乙醇洗滌2次，干燥后得橙黃色固體;將 上述固體和碳酸鉀置于反應(yīng)容器中，加入六水合哌嗪和DMF，在120°C反應(yīng)1-24小時;冷卻后 將反應(yīng)物倒入水中，用DCM萃取3次;有機(jī)相經(jīng)無水硫酸鈉干燥后濃縮，殘余物經(jīng)硅膠柱層 析，以2%CH 3OH/DCM為洗脫劑，分離得到黃色固體，即為所述的查爾酮衍生物。3. -種如權(quán)利要求1、2所述的查爾酮衍生物的應(yīng)用，其特征在于制備治療自身免疫性 疾病的免疫抑制藥物或抗炎藥物的應(yīng)用。4. 如權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于所述的自身免疫性疾病為:多發(fā)性硬化癥。5. 如權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于所述的自身免疫性疾病為:類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎。6. 如權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于所述的自身免疫性疾病為:系統(tǒng)性紅斑狼瘡。
【文檔編號】A61P37/06GK106008400SQ201610382524
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年6月2日
【發(fā)明人】萬春平, 毛澤偉, 鄭喜, 祁燕, 李小絲
【申請人】云南省中醫(yī)醫(yī)院