二萜化合物及其制備方法和應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種新型C22二萜的制備方法和應(yīng)用，所述的新型C22二萜結(jié)構(gòu)式為：所述新型C22二萜分子式為C22H26O4，該化合物命名為perovskiaol(1)。所述制備方法是以干燥分藥花屬植物全株為原料，經(jīng)粉碎提取、有機溶劑萃取、硅膠柱層析、HPLC分離步驟。所述的應(yīng)用為perovskiaol在制備抗癌藥物中的應(yīng)用。經(jīng)細胞毒活性實驗，perovskiaol對白血病急性早幼粒NB4細胞、肺腺癌A549細胞、人體肝癌細胞瘤HepG 2細胞具有較好的細胞毒活性，IC50值分別達2.35、1.47、0.81μM。本發(fā)明化合物結(jié)構(gòu)簡單活性好，可作為抗癌藥物的先導(dǎo)性化合物，有良好的應(yīng)用前景。
【專利說明】
一種新型C22二萜化合物及其制備方法和應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于植物有效成分提取技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種新型c22二萜化合物一種及 其制備方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】 [0002] 一種
[0003] 分藥花屬(Perovskia)植物全球約7種，主要分布在伊朗、巴基斯坦、印度以及我國 的西藏和新疆。我國西藏有2種。研究表明，分藥花屬植物富含松香烷型二萜和Icetexane型 二萜。這類二萜類成分結(jié)構(gòu)新穎多樣，且具有廣泛的藥理活性，其中的丹參醌類結(jié)構(gòu)具有廣 譜強效的抗腫瘤活性。關(guān)于分藥花屬植物的研究不多，本研究組是對該屬植物研究相對深 入的研究團隊之一。在前期我們從天然產(chǎn)物中尋找抗腫瘤活性成分過程中，我們發(fā)現(xiàn)松香 烷型二萜具有較好的抗腫瘤活性。隨后選擇從濱藜葉分藥花中分離得到的部分松香烷型二 萜進行了體外抗腫瘤活性篩選，結(jié)果顯示，部分松香烷型二萜具有顯著的細胞毒活性。本發(fā) 明從濱藜葉分藥花中分離得到1個新型C 22二萜化合物，是從松香烷型二萜衍生而形成，具有 顯著的細胞毒作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的第一目的是提供一種新型C22二萜化合物；第二目的在于提供所述新型 C22二萜化合物的制備方法;第三目的在于提供所述新型C22二萜化合物在制備抗癌藥物中 的應(yīng)用。
[0005] 本發(fā)明的第一目的是這樣實現(xiàn)的，所述的新型C22二萜化合物是以干燥的分藥花屬 植物全株為原料，經(jīng)粉碎提取、有機溶劑萃取、硅膠柱層析、高壓液相色譜分離得到的，其 結(jié)構(gòu)式為：
[0007] 所述的新型C22二砲化合物的分子式為C22H26O4,該化合物命名為perovskiaol(l)
[0008] 本發(fā)明的第二目的是這樣實現(xiàn)的，所述的新型C22二萜化合物的制備方法，是以干 燥的分藥花屬植物為原料，經(jīng)粉碎提取、有機溶劑萃取、硅膠柱層析、高壓液相色譜分離獲 得，具體為：
[0009] A、粉碎提取:將干燥的分藥花屬植物全株粗粉碎到20~40目，用有機溶劑超聲提 取2~4次，每次30~60min，提取液合并;提取液過濾，減壓濃縮提取液至1/4~1/2體積時， 靜置，濾除沉淀物，濃縮成浸膏a;
[0010] B、有機溶劑萃取:浸膏a中加入重量比1~2倍量的水，用與水等體積的有機溶劑萃 取3~5次，合并有機溶劑萃取相，減壓濃縮成浸膏b;
[0011] C、硅膠柱層析:將浸膏b用重量比1.5~3倍量的氯仿溶解，然后用浸膏重0.8~1.2 倍的80~100目硅膠拌樣，然后上硅膠柱層析，裝柱硅膠為160~200目，用量為浸膏b重量6 ~8倍量；用體積比為1:0~0:1的混合有機溶劑梯度洗脫，收集梯度洗脫液、濃縮，經(jīng)TLC監(jiān) 測，合并相同的部分；
[0012] D、反相柱層析:將以20:1配比的有機溶劑進行洗脫得到的洗脫液上反相柱層析， 反相柱是用反相材料C-18裝柱；用體積含量為20~100 %的甲醇水溶液進行梯度洗脫，收集 各部分洗脫液并濃縮，經(jīng)TLC監(jiān)測，合并相同的部分；
[0013] E、高效液相色譜分離：將以體積含量70~95 %的甲醇/水溶液洗脫得到的洗脫液 經(jīng)高效液相色譜分離純化，即得所述的新型C22二砲化合物perovskiaol (1);
[0014] F、E步驟所述的高效液相色譜分離純化是以35~45%的乙腈為流動相，流速2~ 3ml/min，10.0 X 250mm，5iim的Zorbax PrepHT GF反相制備柱為固定相，紫外檢測器檢測波 長為254nm，每次進樣45~60此，收集12~15min的色譜峰，多次累加后蒸干。即得所述的新 型C22二砲化合物perovskiaol (1)。
[0015]本發(fā)明的第三目的是這樣實現(xiàn)的，所述的新型C22二砲化合物perovskiaol(l)在制 備抗癌藥物中的應(yīng)用。
[0016]本發(fā)明新型C22二砲化合物perovskiaol(l)是首次被分離出來的，通過核磁共振和 質(zhì)譜測定方法確定其結(jié)構(gòu)，并表征其具體結(jié)構(gòu)為：
[0018] 以perovskiaol(l)為原料，經(jīng)對白血病急性早幼粒NB4細胞、肺腺癌A549細胞、人 體肝癌細胞HepG 2細胞、人前列腺癌PC3細胞、人乳腺癌MCF7細胞的細胞毒活性實驗， perovskiaol (1)對NB4，A549和HepG 2細胞株具有較好的細胞毒活性，IC5Q值分別達2.35、 1.47、 0.81yM〇
[0019]本發(fā)明化合物結(jié)構(gòu)簡單活性好，可作為抗癌藥物的先導(dǎo)性化合物，有良好的應(yīng)用 前景。
【附圖說明】
[0020]圖1為化合物perovskiaol(l)的核磁共振碳譜pH NMR);
[0021]圖2為化合物perovskiaol(l)的核磁共振氫譜(13C NMR);
【具體實施方式】
[0022]下面結(jié)合附圖對本發(fā)明作進一步的說明，但不以任何方式對本發(fā)明加以限制，基 于本發(fā)明教導(dǎo)所作的任何變換或改進，均落入本發(fā)明的保護范圍。
[0023]本發(fā)明所述的新型C22二砲化合物perovskiaol(l)是以干燥的分藥花屬植物全株 為原料，經(jīng)粉碎提取、有機溶劑萃取、硅膠柱層析、高壓液相色譜分離得到的，其結(jié)構(gòu)式為：
[0025] 所述的新型C22二砲化合物的分子式為C22H26O4,該化合物命名為perovskiaol(l)。 [0026]本發(fā)明所述的新型C22二砲化合物perovskiaol (1)的制備方法，是以干燥的分藥花 屬植物全株為原料，經(jīng)浸膏提取、有機溶劑萃取、硅膠柱層析、高壓液相色譜分離獲得，具體 為：
[0027] A、粉碎提取:將干燥的分藥花屬植物全株粗粉碎到20~40目，用有機溶劑超聲提 取2~4次，每次30~60min，提取液合并;提取液過濾，減壓濃縮提取液至1/4~1/2體積時， 靜置，濾除沉淀物，濃縮成浸膏a;
[0028] B、有機溶劑萃取:浸膏a中加入重量比1~2倍量的水，用與水等體積的有機溶劑萃 取3~5次，合并有機溶劑萃取相，減壓濃縮成浸膏b;
[0029] C、硅膠柱層析:將浸膏b用重量比1.5~3倍量的氯仿溶解，然后用浸膏重0.8~1.2 倍的80~100目硅膠拌樣，然后上硅膠柱層析，裝柱硅膠為160~200目，用量為浸膏b重量6 ~8倍量；用體積比為1:0~0:1的混合有機溶劑梯度洗脫，收集梯度洗脫液、濃縮，經(jīng)TLC監(jiān) 測，合并相同的部分；
[0030] D、反相柱層析:將以20:1配比的有機溶劑進行洗脫得到的洗脫液上反相柱層析， 反相柱是用反相材料C-18裝柱；用體積含量為20~100 %的甲醇水溶液進行梯度洗脫，收集 各部分洗脫液并濃縮，經(jīng)TLC監(jiān)測，合并相同的部分；
[0031] E、高效液相色譜分離：將以體積含量70~95 %的甲醇/水溶液洗脫得到的洗脫液 經(jīng)高效液相色譜分離純化，即得所述的新型C22二砲化合物perovskiaol (1);
[0032] F、E步驟所述的高效液相色譜分離純化是以35~45%的乙腈為流動相，流速2~ 3ml/min，10.0 X 250mm，5iim的Zorbax PrepHT GF反相制備柱為固定相，紫外檢測器檢測波 長為254nm，每次進樣45~60此，收集12~15min的色譜峰，多次累加后蒸干。即得所述的新 型C22二砲化合物perovskiaol (1)。
[0033] A步驟所述的有機溶劑為80~100 %的乙醇或甲醇。
[0034] B步驟所述的有機溶劑為乙酸乙酯、氯仿、乙醚、石油醚或苯。
[0035] C步驟所述的混合有機溶劑為正己烷-丙酮、氯仿-丙酮、氯仿-甲醇、石油醚-丙酮 或石油醚-乙酸乙酯。
[0036] C步驟所述的混合有機溶劑的體積配比為1:0、20:1、9:1、8:2、3:2、1:1、1:2、0:1。
[0037] E步驟所述的高效液相色譜分離純化是以35~45%的乙腈為流動相，流速2~3ml/ min，10.0 X250mm，5iim的Zorbax PrepHT GF反相制備柱為固定相，紫外檢測器檢測波長為 254nm，每次進樣45~60此，收集12~15min的色譜峰，多次累加后蒸干。
[0038]本發(fā)明所述的新型C22二砲化合物perovskiaol (1)在制備抗癌藥物中的應(yīng)用。
[0039] 本發(fā)明所述的分藥花屬植物不受地區(qū)和品種限制，均可以實現(xiàn)本發(fā)明。
[0040] 實施例1
[00411取干燥的分藥花屬植物全株4.5kg，粗粉碎至40目，用80%的乙醇超聲提取4次，每 次60min，提取液合并;提取液過濾，減壓濃縮至體積的1/4;靜置，濾除沉淀物，濃縮成458g 浸膏a;在浸膏a中加入458g水，用與水等體積的氯仿萃取5次，合并萃取相，減壓濃縮成236g 浸膏b;用200目硅膠1888g裝柱，在浸膏b中加入708g的氯仿溶解，然后加入100目硅膠 188.8g拌樣，拌樣后上柱；用體積比分別為1:0、20 :1、9:1、8:2、3:2、1:1、1: 2、0:1的氯仿-甲醇混合有機溶劑梯度洗脫，收集梯度洗脫液、濃縮，經(jīng)TLC監(jiān)測，合并相同的部分，得到8個 部分，體積比20:1的氯仿-甲醇混合有機溶劑的洗脫液c為78g;用反相材料C-18裝柱，洗脫 液c上反相柱，以體積含量為20~100 %的甲醇水溶液進行梯度洗脫，收集各部分洗脫液并 濃縮，經(jīng)TLC監(jiān)測，合并相同的部分;取以體積含量70~95%甲醇水溶液洗脫得到的洗脫液， 再以35%的乙腈為流動相，流速31111/111；[11，10\250111111，5111]1的2〇1^1?16口1^16?反相制備柱 為固定相，紫外檢測器檢測波長為254nm，每次進樣48此，收集14.5min的色譜峰，多次累加 后蒸干，即得所述的新型C22二砲化合物perovskiaol (1)。
[0042] 實施例2
[0043]取干燥的分藥花屬植物全株5kg，粗粉碎至20目，用100%的乙醇超聲提取2次，每 次50min，提取液合并；提取液過濾，減壓濃縮至體積的1/3;靜置，濾除沉淀物，濃縮成503g 浸膏a;在浸膏a中加入503g的水，用與水等體積的氯仿萃取3次，合并萃取相，減壓濃縮成 269g浸膏b;用160目硅膠2152g裝柱，在浸膏b中加入807g的氯仿溶解，然后加入80目硅膠 215.28拌樣，拌樣后上柱 ；用體積比分別為1:0、20:1、9:1、8:2、3 :2、1:1、1:2、0:1的正己烷-丙酮混合有機溶劑梯度洗脫，收集梯度洗脫液、濃縮，經(jīng)TLC監(jiān)測，合并相同的部分；用反相 材料C-18裝柱，洗脫液c上反相柱，以體積含量為20~100 %的甲醇水溶液進行梯度洗脫，收 集各部分洗脫液并濃縮，經(jīng)TLC監(jiān)測，合并相同的部分;取以體積含量70~95%甲醇水溶液 洗脫得到的洗脫液，再以40 %的乙腈為流動相，流速3ml/min，10 X 250mm，5_的Zorbax PrepHT GF反相制備柱為固定相，紫外檢測器檢測波長為254nm，每次進樣45yL，收集 13 ? 5min的色譜峰，多次累加后蒸干，即得所述的新型C22二砲化合物perovskiaol (1)。 [0044] 實施例3
[0045]取干燥的分藥花屬植物全株6kg，粗粉碎至30目，用80%的甲醇超聲提取4次，每次 30min，提取液合并;提取液過濾，減壓濃縮至體積的1/2;靜置，濾除沉淀物，濃縮成612g浸 膏a;在浸膏a中加入1224g的水，用與水等體積的乙醚萃取4次，合并萃取相，減壓濃縮成 354g浸膏b;用180目硅膠2478g裝柱，在浸膏b中加入704g的丙酮溶解，然后加入90目硅膠 424.8g拌樣，拌樣后上柱；用體積比分別為1:0、20 :1、9:1、8:2、3:2、1:1、1:2、0:1的氯仿-丙 酮混合有機溶劑梯度洗脫，收集梯度洗脫液、濃縮，經(jīng)TLC監(jiān)測，合并相同的部分；用反相材 料C-18裝柱，洗脫液c上反相柱，以體積含量為20~100 %的甲醇水溶液進行梯度洗脫，收集 各部分洗脫液并濃縮，經(jīng)TLC監(jiān)測，合并相同的部分;取以體積含量70~95%甲醇水溶液洗 脫得到的洗脫液，再以45 %的乙腈為流動相，流速3ml/min，10 X 250mm，5_的Zorbax PrepHT GF反相制備柱為固定相，紫外檢測器檢測波長為254nm，每次進樣50yL，收集 12. Omin的色譜峰，多次累加后蒸干，即得所述的新型C22二砲化合物perovskiaol (1)。
[0046] 實施例4。
[0047]取干燥的分藥花屬植物全株5.5kg，粗粉碎至40目，用90%的乙醇超聲提取3次，每 次45min，提取液合并；提取液過濾，減壓濃縮至體積的1/4;靜置，濾除沉淀物，濃縮成548g 浸膏a;在浸膏a中加入822g的水，用與水等體積的石油醚萃取4次，合并萃取相，減壓濃縮成 275g浸膏b;用160目硅膠1650g裝柱，在浸膏b中加入412.5g的丙酮溶解，然后加入80目硅膠 275g拌樣，拌樣后上柱；用體積比分別為1:0、20 :1、9:1、8:2、3:2、1:1、1:2、0:1的石油醚-丙 酮混合有機溶劑梯度洗脫，收集梯度洗脫液、濃縮，經(jīng)TLC監(jiān)測，合并相同的部分；用反相材 料C-18裝柱，洗脫液c上反相柱，以體積含量為20~100 %的甲醇水溶液進行梯度洗脫，收集 各部分洗脫液并濃縮，經(jīng)TLC監(jiān)測，合并相同的部分;取以體積含量70~95%甲醇水溶液洗 脫得到的洗脫液，再以40 %的乙腈為流動相，流速2ml/min，10 X 250mm，5_的Zorbax PrepHT GF反相制備柱為固定相，紫外檢測器檢測波長為254nm，收集15min的色譜峰，多次 累加后蒸干，即得所述的新型C22二砲化合物perovskiaol (1)。
[0048] 實施例5
[0049] 取干燥的分藥花屬植物全株5kg，粗粉碎至20目，用100%的甲醇超聲提取4次，每 次35min，提取液合并;提取液過濾，減壓濃縮至體積的1/2;靜置，濾除沉淀物，濃縮成523g 浸膏a;在浸膏a中加入1046g的水，用與水等體積的苯萃取5次，合并萃取相，減壓濃縮成 246g浸膏b;用200目硅膠1722g裝柱，在浸膏b中加入738g的丙酮溶解，然后加入100目硅膠 196.8g拌樣，拌樣后上柱；用體積比分別為1:0、20:1、9:1、8:2、3 :2、1:1、1:2、0:1的石油醚-乙酸乙酯混合有機溶劑梯度洗脫，收集梯度洗脫液、濃縮，經(jīng)TLC監(jiān)測，合并相同的部分；用 反相材料C-18裝柱，洗脫液c上反相柱，以體積含量為20~100 %的甲醇水溶液進行梯度洗 脫，收集各部分洗脫液并濃縮，經(jīng)TLC監(jiān)測，合并相同的部分;取以體積含量70~95%甲醇水 溶液洗脫得到的洗脫液，再以45 %的乙腈為流動相，流速2ml/min，10 X 250mm，5mi的Zorbax PrepHT GF反相制備柱為固定相，紫外檢測器檢測波長為254nm，收集14.5min的色譜峰，多 次累加后蒸干，即得所述的新型C22二砲化合物perovskiaol (1)。
[0050] 實施例6
[0051 ]取實施例1制備的化合物perovskiaol(l)，為淡黃色膠狀物;測定方法為：用核磁 共振，結(jié)合其它波譜技術(shù)鑒定結(jié)構(gòu)。
[0052] (1)旋光為[a]D13.3+〇.23(c 0.29，Me0H/CHCl3l:l);
[0053] (2)紫外光譜(溶劑為甲醇），UV(Me0H)人max(loge)248(3.49)，345(2.35)nm;
[0054] (3)紅外光譜（溴化鉀壓片）vmax 3449，1743，1695，1603，1498，1454，1260，1128， 1069,993,865cm-;
[0055] (4)HRESIMS顯示本發(fā)明化合物準(zhǔn)分子離子峰m/z 377.1738[M+Na] + (計算值為 377.1728)，結(jié)合1H和13C NMR譜（圖1和圖2,碳譜氫譜數(shù)據(jù)歸屬見表1)給出其分子式為 C22H26〇4</H NMR(C5D5N，500MHz)和 13C NMR(C5D5N，125MHz)數(shù)據(jù)，見表 1。
[0056] 表 1化合物perovskiaol(l)的1H和13C NMR數(shù)據(jù)(溶劑為CDC13)(400/100MHz)

[0059] 實施例7
[0060] 取實施例2制備的化合物perovskiaol(l)按實施例6中的方法進行結(jié)構(gòu)測定，結(jié)果 為:其結(jié)構(gòu)同實施例6,分子式為C22H26O4。
[0061 ] 實施例8
[0062] 取實施例3制備的化合物perovskiaol (1)按實施例6中的方法進行結(jié)構(gòu)測定，結(jié)果 為:其其結(jié)構(gòu)同實施例6，分子式為C22H26〇4。
[0063] 實施例9
[0064] 取實施例4制備的的化合物perovskiaol (1)按實施例6中的方法進行結(jié)構(gòu)測定，結(jié) 果為:其其結(jié)構(gòu)同實施例6，分子式為C22H26〇4。
[0065] 實施例10
[0066] 取實施例5制備的化合物的化合物perovskiaol (1)按實施例6中的方法進行結(jié)構(gòu) 測定，結(jié)果為:其其結(jié)構(gòu)同實施例6，分子式為C22H26〇4。
[0067] 實施例11
[0068] 取實施例1~5所制備的任一新型C22二砲化合物perovskiaol (1)進行細胞毒活性 檢測試驗，試驗情況如下：
[0069]細胞株：白血病細胞(NB4)、肺癌細胞(A549)、人體肝癌細胞(HepG2)、前列腺癌細 胞(PC3)、乳腺癌細胞(MCF7)由中國科學(xué)院上海藥物研究所和昆明動物研究所提供。
[0070]實驗設(shè)計：以上細胞與不同濃度化合物溫育72小時，每株細胞的實驗均重復(fù)一次， 用兩次實驗的結(jié)果進行數(shù)據(jù)處理，采用改良MTT法及SRB法評價化合物對細胞增殖的抑制程 度，計算抑制率，根據(jù)抑制率采用Log i t方法計算IC5Q，比較化合物的體外抗腫瘤活性。
[0071 ]細胞的增殖抑制率=(空白對照0D值-加藥孔的0D值)/空白對照0D值X 100%。 [0072] (a)改良MTT 法
[0073] 取處于對數(shù)生長期的懸浮細胞，將細胞濃度調(diào)整為4 X104/ml，加入96孔培養(yǎng)板， 90此/孔。陽性對照為順鉑，用生理鹽水溶解。每孔分別加入lOiil不同濃度的樣品（1號試液-5號試液）。加樣組及對照組均設(shè)4個復(fù)孔，加樣組、陽性對照組的高濃度組還設(shè)培養(yǎng)基的加 藥平行孔，每塊板均設(shè)有4個空白對照孔(僅加培養(yǎng)基）。樣品的終濃度分別為1〇- 2、1(^、1、 10及 102yg/mL,相應(yīng) DMS0的終濃度分別為0.1%、0.01%、0.001%、0.0001%、0.00001%。樣 品在終濃度102yg/mL時，用0.1 %DMS0作為溶劑對照，其余濃度均用生理鹽水作陰性對照。 陽性對照藥順鉑的終濃度為1 (T1、1、1 〇yg/mL。細胞在37 °C，5 % C02培養(yǎng)箱中分別孵育48h后， 加入10'1'(511^/1111，318111&)，10吣/孔。繼續(xù)培養(yǎng)411后，加入三聯(lián)液[10%303-5%異丁醇-0.012mol/L HCL(w/V/V)]，100yL/孔，放置過夜后用酶標(biāo)儀在570nm、630nm雙波長下測定各 孔的0D值。
[0074] (b)SRB法
[0075]取處于對數(shù)生長期的貼壁細胞株，用25%胰酶常規(guī)消化后，再用15%小牛血清完 全RPMI-1640培養(yǎng)基將細胞濃度調(diào)整為5X104/mL，加入96孔培養(yǎng)板，90yL/孔。細胞在37°C， 5%C0 2培養(yǎng)箱中分別孵育24h后加入陽性對照、陰性對照以及受試樣品（各受試濃度同上 MTT法，10yL/孔），樣品的終濃度分別為10- 2、10-1、1、10、102yg/mL，相應(yīng)DMS0的終濃度分別為 0.1%、0.01%、0.001%、0.0001%、0.00001%。樣品在終濃度10 2辟/1^時用0.1%01^0作為 溶劑對照，其余濃度均用生理鹽水作陰性對照。陽性對照藥順鉑的終濃度為HT 1、1、i〇yg/ mL，陰性對照為等體積的生理鹽水。加樣組及對照組均設(shè)4復(fù)孔，加樣組、陽性對照組的高濃 度組還設(shè)培養(yǎng)基的加藥平行孔，每塊板均設(shè)有4個空白對照孔(僅加培養(yǎng)基）。將96孔培養(yǎng)板 置于37 °C，5 %⑶2培養(yǎng)箱中孵育（細胞與樣品作用）48h后，加入4°C、50 %的TCA(三氯乙酸） 50yL/孔。加完TCA后，將96孔培養(yǎng)板置于4 °C孵育1小時，取出培養(yǎng)板，輕輕傾去板內(nèi)液體。用 自來水輕輕沖洗5遍(將自來水由燒杯中輕輕倒入板中，輕晃后再將水倒去），置于空氣中風(fēng) 干至不見水痕。然后加入配制好的0.4 % SRB(用1 %乙酸稀釋），50此/孔，于室溫下靜置染色 30分鐘后傾去SRB溶液，用1%乙酸沖洗4遍，以除去未與蛋白質(zhì)結(jié)合的染料。置于空氣中風(fēng) 干至無水痕后，加入10mM未緩沖Tris(緩血氨酸）溶液150此/孔(PH10,用三蒸水配制），將 染料溶解后，于振蕩器上振蕩5分鐘，用酶標(biāo)儀在570nm波長下讀取各孔0D值。
[0076] (c)實驗結(jié)果
[0077] 實驗結(jié)果表明：經(jīng)對白血病急性早幼粒NB4細胞、肺腺癌A549細胞、人體肝癌細胞 瘤HepG 2細胞、人前列腺癌PC3細胞、人乳腺癌MCF7細胞的細胞毒活性實驗，化合物1對NB4， A549和Ifep G 2細胞株具有較好的細胞毒活性，IC5Q值分別達2.35、1.47、0.81yM。
[0078]表2化合物的細胞毒活性（IC50，yM)
[0080] NB4,白血病急性早幼粒細胞;A549,肺腺癌細胞;Hep G 2,人體肝癌細胞株;PC3， 人前列腺癌細胞;MCF7，人乳腺癌細胞。
【主權(quán)項】
1. 一種新型c22二萜化合物，其特征是:所述的新型C22二萜化合物是以干燥的分藥花屬 植物全株為原料，經(jīng)粉碎提取、有機溶劑萃取、硅膠柱層析、高壓液相色譜分離步驟得到的， 其結(jié)構(gòu)式為：2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的新型C22二萜化合物，其特征是:所述新型二萜化合物的分子式 為C22H26O4,該化合物命名為perovskiaol (1)。3. -種權(quán)利要求1所述的新型C22二萜化合物的制備方法，其特征在于是以干燥的分藥 花屬植物全株為原料，經(jīng)粉碎提取、有機溶劑萃取、硅膠柱層析、高壓液相色譜分離獲得，具 體為： A、 粉碎提取:將干燥的分藥花屬植物全株粗粉碎到20~40目，用有機溶劑超聲提取2~ 4次，每次30~60min，提取液合并;提取液過濾，減壓濃縮提取液至1/4~1/2體積時，靜置， 濾除沉淀物，濃縮成浸膏a; B、 有機溶劑萃取:浸膏a中加入重量比1~2倍量的水，用與水等體積的有機溶劑萃取3 ~5次，合并有機溶劑萃取相，減壓濃縮成浸膏b; C、 硅膠柱層析:將浸膏b用重量比1.5~3倍量的氯仿溶解，然后用浸膏重0.8~1.2倍的 80~100目硅膠拌樣，然后上硅膠柱層析，裝柱硅膠為160~200目，用量為浸膏b重量6~8倍 量;用體積比為1:0~0:1的混合有機溶劑梯度洗脫，收集梯度洗脫液、濃縮，經(jīng)TLC監(jiān)測，合 并相同的部分； D、 反相柱層析:將以20:1配比的有機溶劑進行洗脫得到的洗脫液上反相柱層析，反相 柱是用反相材料C-18裝柱;用體積含量為20~100%的甲醇水溶液進行梯度洗脫，收集各部 分洗脫液并濃縮，經(jīng)TLC監(jiān)測，合并相同的部分； E、 高效液相色譜分離:將以體積含量70~95 %的甲醇/水溶液洗脫得到的洗脫液經(jīng)高 效液相色譜分離純化，即得所述的新型C22二砲化合物perovskiaol (1); F、 E步驟所述的高效液相色譜分離純化是以35~45%的乙腈為流動相，流速2~3ml/ min，10.0 X250mm，5ym的Zorbax PrepHT GF反相制備柱為固定相，紫外檢測器檢測波長為 254nm，每次進樣45~60yL，收集12~15min的色譜峰，多次累加后蒸干。即得所述的新型C22 二砲化合物perovskiaol (1) 〇4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的新型C22二砲化合物perovskiaol (1)的制備方法，其特征是:A 步驟所述的有機溶劑為80~100 %的乙醇或甲醇。5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的新型C22二砲化合物perovskiaol (1)的制備方法，其特征是:B 步驟所述的有機溶劑為乙酸乙酯、氯仿、乙醚、石油醚或苯。6. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的新型C22二砲化合物perovskiaol (1)的制備方法，其特征是:C 步驟所述的混合有機溶劑為正己烷-丙酮、氯仿-丙酮、氯仿-甲醇、石油醚-丙酮或石油醚-乙酸乙酯。7. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的新型C22二砲化合物perovskiaol (1)的制備方法，其特征是:C 步驟所述的混合有機溶劑的體積配比為1:0、20:1、9:1、8:2、3 :2、1:1、1:2、0:1。8. -種權(quán)利要求1、2或3所述的新型C22二砲化合物perovskiaol(l)在制備抗癌藥物中 的應(yīng)用。
【文檔編號】A61P35/00GK105820044SQ201610017521
【公開日】2016年8月3日
【申請日】2016年1月12日
【發(fā)明人】江志勇, 周俊, 朱樂鈺, 高雪梅, 胡秋芬, 高路, 黃相中, 李干鵬
【申請人】云南民族大學(xué)