環(huán)化、水解、多組分 反應等反應合成四氨嗎I噪-4-酬母體的=膚類化合物4,合成路線如下式：
[0032]
[0033] 嗎I噪酸（中間體2 )的合成：向2 50mL圓底燒瓶中加入嗎I噪酬中間體1 ( 3.3g， 0.015mol)，用50mL甲醇溶解后冰鹽浴冷卻lOmin，并逐滴滴加33%的Na0H(0.9g， 0.0225mol)溶液，攬拌O.化后，懸出大部分溶劑，用乙酸乙醋萃取S次，水層調(diào)節(jié)至抑為4， 析出大量固體嗎I噪酸（中間體2)。
[0034] 異臘的合成：向250mL圓底燒瓶中加入對氯苯胺(O. Imo 1，12.75g)和甲酸(0.2mo 1， 10.88g)，用甲苯(60mL)溶解后加熱回流4小時，冷卻后得到大量固體。稱取該固體（1.55g， 0.02mo 1)和S乙胺（0.06mol，4.2ml)于250mL圓底燒瓶中，加入二氯甲燒（20mL)溶解，冰鹽 浴冷卻后逐滴滴加 S氯氧憐(0.024mol，1.2mL)，室溫反應6小時，通過柱層析分離得到異氯 中間體(淋洗劑:V石油酸:V乙酸乙醋=10:1)。
[0035] 四氨嗎I噪-4-酬S膚類化合物（目標產(chǎn)物3)的合成：向50mL圓底燒瓶中加入胺 (0.6mmol)和醒(0.6mmol)，加入二氯甲燒(3ml)溶解，室溫反應，20min后加入異臘中間體 (0.5mmol)和嗎I噪酸中間體2(0.5mmol)，目標產(chǎn)物4通過柱層析分離(淋洗劑:V石油酸:V乙 酸乙醋= 5:1)。
[0036] 四氨嗎I噪酬類藥物的結(jié)構(gòu)分析
[0037] 儀器及試劑
[0038] 實驗儀器:叫trashied 400MHz Plus核磁共振儀（瑞:t&naker公司）、API 4000LC-MS/MS質(zhì)譜儀(德國布魯克道爾頓公司K360FT-IR型紅外光譜儀(美國Nicolet公司）。
[0039] 實驗試劑:気代氯仿-d(気原子含量99.8 %，TMS含量0.03 % V/V，10*0.5mL/盒，瑞 ±ARMAR公司）；色譜純乙臘(含量99.99%，化瓶裝，德國MILAK公司）；蒸饋水(4.5L/桶，屈臣 氏Watsons公司）；核磁管巧mm 100/pk 2ST500-8,美國Norell公司）；漠化鐘（國藥集團化學 試劑有限公司）。
[0040] 測試過程
[0041] 精確稱取IOmg目標化合物，在核磁管中用0.5mL気代氯仿溶解，通過核磁共振儀測 試其化學結(jié)構(gòu);在分析天平上取1. Omg樣品，加漠化鐘200mg在瑪瑤研鉢內(nèi)研磨均勻，烘干后 在壓片模具內(nèi)加壓制備鹽窗，在紅外光譜儀上測試化合物的紅外光譜圖；將待測樣品用色 譜乙臘溶解，配制成1.化pm的溶液，用微量注射器取樣后，在電噴霧質(zhì)譜儀上測試其質(zhì)譜。
[0042] 化合物的結(jié)構(gòu)分析
[0043] 所合成的目標產(chǎn)物均為新化合物，其結(jié)構(gòu)均經(jīng)iHNMR和1? NMR進行了確證。核磁共 振譜結(jié)果分析：目標化合物3的Ih NMR譜中，嗎I噪環(huán)的質(zhì)子在6.13-6.28ppm之間表現(xiàn)出單 峰，嗎I噪環(huán)支鏈上的甲基的質(zhì)子在1.94-2. Ilppm之間表現(xiàn)出單峰，酷胺上的質(zhì)子在6.16-8.85ppm之間表現(xiàn)出單峰。I3C NMR譜中在164.97-194.5Ippm可W觀察到目標化合物中幾基 碳的信號峰。
[0044] 四氨嗎I噪酬類藥物的體外抗腫瘤活性評價
[0045] 試劑及儀器
[0046] 實驗試劑:RPMI1640培養(yǎng)液(將10.?干粉型無酪紅RPMI640溶入1000血S蒸水中， 加入2. Og碳酸氨鋼攬拌至充分溶解，然后用0.22WI1無菌正壓過濾器過濾，分裝，再加入10 % 小牛血清、0.5 %青霉素（1 OOU/mL)和鏈霉素（1 OOjig/mL)。
[0047] 實驗儀器:超凈工作臺（北京東聯(lián)哈爾儀器制造有限公司）、超聲波清洗儀(凌波新 芝生物科技股份有限公司KTDZ4-WS型低速離屯、機(長沙平凡儀器儀表有限公司KDK-8A型 電熱恒溫水槽(上海精宏實驗設備有限公司）、自動雙蒸水蒸饋器(上海亞榮生化設備儀器 有限公司KHTC-IOOA型恒溫恒濕培養(yǎng)箱(上海S騰儀器有限公司KLDZX-30邸S型立式壓力 蒸汽滅菌器(上海申安醫(yī)療器械廠）、二氧化碳培養(yǎng)箱（日本S洋公司KStat化X-2100型酶 聯(lián)免疫檢測儀（美國Awareness公司）。
[004引實驗部分
[0049] 利用MTT方法評價四氨嗎I噪酬類藥物對人胃癌細胞HGC-27、人肝腫瘤化pG2細胞 株、人乳腺癌細胞的增殖抑制作用(細胞株均來源于中科院上海細胞庫）：采用含lOOU/mL青 鏈霉素和10%新生胎牛血清的RPMI1640作為細胞培養(yǎng)液，細胞置于37°C、5%C02的細胞培 養(yǎng)箱培養(yǎng)。細胞傳代時，調(diào)整細胞密度為5 X 104~1 X 105細胞/孔接種到96孔板，置于37°C、 5%C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。24h后加入不同濃度的藥物，另設空白對照組(培養(yǎng)液）、正常對照組 (細胞+培養(yǎng)液)和陽性對照組m抗腫瘤藥物紫杉醇為陽性對照），處理4她。實驗終止后加 MTT(5mg/mL)20化/孔37°C繼續(xù)解育4h，吸出上清液，每孔加入150化的DMS0,搖勻，測定 49化m波長時吸光度(OD) "MTT被活細胞攝取后經(jīng)線粒體代謝生成甲瑣，線粒體活力越旺盛 甲瑣生成越多，吸光度也越高，反映細胞存活情況。計算細胞抑制率，W細胞抑制率(細胞的 抑制率T/C=l-加藥細胞OD/對照細胞OD)判斷藥物是否對細胞的增殖有抑制作用。半數(shù)抑 制濃度(I巧0)，常作為反映藥物效果的定量指標，在各種藥物篩選中廣泛應用，因此利用統(tǒng) 計軟件SPSS 13.0分別計算并比較藥物作用于不同細胞的IC50,反映藥物作用效果。
[0050] 四氨嗎I噪酬類藥物的結(jié)構(gòu)-活性關系分析
[0051] 所合成的四氨嗎I噪酬類藥物的體外抗腫瘤活性結(jié)果如下表所示。
[0化2]
[nnW
[0化4] 3a-化的化學結(jié)構(gòu)式如下：
[0化5]
[0056] N-(2-(4-chIorophenyIamino)-2-0X0ethyl)-2-(2-methyl-4-〇x〇-4,5,6,7-te1:;r址y化〇-lH-indol-1-yl)-N-地enylacetamide(3a) :White solids,mp 237-239°C ;1h NMR(400MHz，CDCl3)S(wm):9.12(s，lH，NH)，7.42-7.49(m，5H，5XCH)，7.26-7.：M(m，2H，2 XCH)，7.11-7.32(m，2H，2XCH)，6.13(s，lH，CH)，4.38(s，2H，Ol2)，4.33(s，2H，ai2)，2.56-2.59(m，2H，(M2)，2.31-2.34(m，2H，(M2)，2.05(s，3H，ai3)，2.01-2.04(m，2H，ai2).i3CNMR (100MHz，CDCl3)S(ppm):194.51，167.39，165.97，144.93，141.20，136.48，130.83，130.38， 129.28,128.87,128.64,127.63,120.97,119.63,103.34,54.14,45.52,37.47,23.42, 21.69,11.80.
[005
[005 引 N-(4-chlo;rophenyl )-2-(2-(2-methyl-4-0x0-4,5,6,7-tet;r 址y 化0-lH-indol-1-yl)-N-phenylacet amido)pentanamide(3b):Yellow solids,mp 101-104°C ；NMR (400 MHz，CDCl3)S(卵m):8.83(s，lH，NH)，7.50-7.53(m，7H，7XCH)，7.38-7.41(m，2H，2X CH)，6.24(s，lH,CH),5.02-5.05(m，lH,=C-H),4.29-4.23(d，lH,C此），4.08-4.13(d，lH, CH2) ,2.50-2.53(m，2H，CH2) ,2.36-2.49(m，2H，CH2)，2.02(s,甜，-CH2CH3) ,1.32-1.43(m，4H, 2XCH2)，0.84-0.87(m，3H，CH3).i3c NMR(100 MHz，CDCl3)S(卵m):193.94，168.67，168.54, 144.04,136.98,136.27,130.28,129.77,129.23,129.17,128.87,120.89,119.92,115.02, 103.61.60.45.46.21.37.51.30.79.23.41,21.75,19.51,13.80,11.78.
[0化；
[0060] N-(2-(4-chIorophenyIamino)-2-〇xoethyI )-2-(2-methyl-4-OXO-4,5,6,7-tetr址y化〇-lH-indol-1-yl)-N-p-tolylacetamide(3c):化Ilow solids,mp 238-240°C ; Ih NMR(400 MHz，CDCl3)S(ppm):9.10(s，lH，NH)，7.35-7.37(m，4H，4XCH)，7.19-7.41(m, lH，CH)，7.26-7.28(m，lH，CH)，7.11-7.13(m，2H，2XCH)，6.15(s，lH，CH)，4.36(s，2H，CH2), 4.33(s，2H，Ol2)，2.55-2.58(m，2H，CH2)，2.39(s，3H，CH3)，2.32-2.35(m，2H，ai2)，2.06(s， 3H，CH3)，2.01-2.04(m，2H，CH2).Uc NMR(100 MHz，CDCl3)S(卵m):194.48，167.57，166.04, 144.89,139.46,138.55,136.47,130.93,130.80,128.84,128.62,127.33,120.96,119.61， 103.32,54.24,45.46,37.46