一種降解環(huán)孢菌素a的方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種重要醫(yī)藥中間體環(huán)抱菌素 A的新穎、快速、高效的降解方法。
【背景技術】
[0002] 環(huán)抱菌素 A (切closporine A)化學結構如下：
環(huán)抱菌素 A (切closporine A)是一種由真菌產生的大分子天然產物，于1976年首次 分離純化得到，并于1984年首次報道化學全合成。它是由11個氨基酸組成的環(huán)狀多膚，其 中包括7個氮甲基膚鍵。其結構最大的特點是含有親環(huán)蛋白（切P A)結合區(qū)域和巧調磯酸 酶（CN)結合區(qū)域，因此在抗炎、抗病毒和免疫抑制方面有廣泛的應用前景。對其結構的修 飾改造已成為近年來的熱點，尤其在抗病毒領域。不同于一般的抗病毒藥物的作用機制， 環(huán)抱菌素 A衍生物作用于宿主自身的親環(huán)蛋白，而親環(huán)蛋白（cyclo地ilin)送一類酶的功 能是輔助細胞內其他蛋白的折疊和轉運，包括病毒復制所需蛋白的折疊和轉運，因而病毒 對此類藥物不容易產生抗藥性，送一特性與作用于直接病毒的藥物相比是一大優(yōu)勢。經結 構改造后具有抗艾滋病病毒（HIV)、己型肝炎病毒（皿V)、丙型肝炎病毒（HCV)、甲型流感病 毒、急性呼吸道綜合冠狀病毒或牛痘病毒等活性的環(huán)抱菌素衍生物已有大量報道。
[0003] 除部分文獻僅涉及對其支鏈的修飾外，大部分的改造工作都是將其開環(huán)后通過埃 德曼降解（E血an degradation)得到相應的多膚殘基，再通過縮合反應連接不同的氨基酸 或小分子膚鏈，最后關環(huán)形成環(huán)抱菌素 A的結構類似物。
[0004] 現有文獻報道中的埃德曼降解都是末端氨基與異硫氯酸苯醋反應形成硫代甲醜 胺衍生物，然后于酸性條件下降解得到脫去一個N端氨基酸的多膚，送對于含有酸敏感基 團的分子不適用。且該方法每降解一個氨基酸均需要兩步反應，如需降解四個氨基酸，則需 八步反應，總收率會大大降低。

【發(fā)明內容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種在堿性條件下、用兩步反應高效降解兩個N-端氨基 酸的環(huán)抱菌素 A降解的新方法。主要解決現有的酸性條件下降解環(huán)抱菌素存在的反應步驟 多、收率低W及不適用于含有酸敏感基團化合物等技術問題。
[0006] 本發(fā)明的技術方案；一種降解環(huán)抱菌素 A的方法，包括W下步驟： 第一步反應，W環(huán)抱菌素 A為原料，與醋酸酢反應得到己醜基保護的環(huán)抱菌素 A ; 第二步反應，己醜基保護的環(huán)抱菌素 A在H甲基氧鐵四氣測酸鹽的作用下在第H膚鍵 處發(fā)生開環(huán)反應，生成鏈狀的十一膚； 第H步反應，鏈狀十一膚的游離氨基先與異硫氯酸苯醋反應后，在堿性條件下降解一 個N-端氨基酸得到十膚，再與過量的異硫氯酸苯醋反應生成十膚的苯胺硫代甲醜胺衍生 物； 第四步反應，在酸性條件下，十膚的苯胺硫代甲醜胺衍生物發(fā)生降解生成九膚； 第五步反應，九膚的游離氨基先與異硫氯酸苯醋反應后，在堿性條件下降解一個N-端 氨基酸得到八膚，再與過量的異硫氯酸苯醋反應生成八膚的苯胺硫代甲醜胺衍生物； 第六步反應，在酸性條件下，八膚的苯胺硫代甲醜胺衍生物發(fā)生降解生成走膚。
[0007] 化學反應式如下：
第一步反應在溶劑中進行，溶劑為醋酸酢；加4-二甲氨基化巧值M巧作催化劑，4-二 甲氨基化巧的摩爾量為0. 1-1. 0當量；反應溫度為〇-8(TC ;反應時間為3-18小時。
[0008] 第二步反應在溶劑中進行，溶劑為無水二氯甲焼；加 H甲基氧鐵四氣測酸鹽作開 環(huán)試劑；H甲基氧鐵四氣測酸鹽的摩爾量為1. 0-3. 0當量；反應溫度為0-4(TC;反應時間為 6-72小時。
[0009] 第H步反應在溶劑中進行，溶劑為無水四氨巧喃、無水二氧六環(huán)或無水甲苯中的 一種；異硫氯酸苯醋的摩爾量為2. 0-3. 0當量；堿用H己胺、二異丙基己胺或1，8-二氮雜 環(huán)[5, 4, 0] ^^一帰-7 (DBU)中的一種，堿的摩爾量為3. 0-5. 0當量；并加入4-二甲氨基化 巧為催化劑，4-二甲氨基化巧的摩爾量為0.1-1.0當量；反應溫度為O-Iicrc ;反應時間為 3-18小時。
[0010] 第四步反應在溶劑中進行，溶劑為無水二氯甲焼或無水四氨巧喃中的一種；酸用 H氣己酸或鹽酸中的一種；反應溫度為0-4(TC ;反應時間為2-5小時。
[0011] 第五步反應在溶劑中進行，溶劑為無水四氨巧喃、無水二氧六環(huán)或無水甲苯中的 一種；異硫氯酸苯醋的摩爾量為2. 0-3. 0當量；堿用H己胺、二異丙基己胺或1，8-二氮雜 環(huán)拉4,0] ^^一帰-7 (DBU)中的一種，堿的摩爾量為3.0-5. 0當量；并加入4-二甲氨基化 巧為催化劑，4-二甲氨基化巧的摩爾量為0.1-1.0當量；反應溫度為O-Iicrc ;反應時間為 3-18小時。
[0012] 第六步反應在溶劑中進行，溶劑為無水二氯甲焼或無水四氨巧喃中的一種；酸用 H氣己酸或鹽酸中的一種；反應溫度為0-4(TC ;反應時間為2-5小時。
[0013] 本發(fā)明的有益效果是；本發(fā)明提供了一種環(huán)抱菌素 A開環(huán)后在堿性條件下進行埃 德曼降解（E血an degradation)的新方法和用兩步反應高效降解兩個N-端氨基酸的新合 成工藝。本發(fā)明中的新合成工藝僅用四步反應即可實現降解環(huán)抱菌素 A中四個N-端氨基 酸的目標，與現有的酸性條件下降解環(huán)抱菌素的方法相比，反應步數縮短了一半，收率也提 高了約一倍。
【具體實施方式】
[0014] W下實例有助于了解本
【發(fā)明內容】
，本發(fā)明包括但不局限于下列有關內容：
連施例I 步驟I ;化合物2的合成 環(huán)抱菌素 A-己酸醋
將化合物1 (環(huán)抱菌素 A) (600 g，0. 5 mol, 1.0當量）溶解于1.8 L醋酸酢中，在攬拌 下加入4-二甲基氨基化巧（DMAPX6 g，0. 05 mol，0. 1當量)，反應體系開始出現渾濁，該體 系于8(TC下攬拌反應3小時。通過薄層色譜法（IlX)監(jiān)測反應完成后，將該體系用冰水浴 降溫至(TC，攬拌1小時后抽濾，用少量石油離洗涂濾餅，干燥濾餅得510 g環(huán)抱菌素 A的己 酸醋，即化合物2。濾液減壓蒸出部分醋酸酢至剩余體積約500 mU用冰水浴降溫后抽濾，濾 餅洗涂、干燥后再得80 g化合物2。合并后共得到590 g化合物2 (環(huán)抱菌素 A-己酸醋)， 收率95%。該化合物無需純化直接用于下一步反應。
[001 引分子式；CeAisNiiO。;精確分子量=1243. 85 ;質譜（聲勿：1244. 80 (M+H+)。
[001引步驟2 ;化合物3的合成 N-甲基-k亮氨醜A-鄉(xiāng)氨醜-N-甲基-k亮氨醜A-丙氨醜-D-丙氨醜-N-甲 基-k亮氨醜-N-甲基-k亮氨醜-N-甲基-k鄉(xiāng)氨醜-N-甲基-了帰基-蘇氨酸（己酸 醋）-a -氨基了酸-肌氨酸甲醋
將化合物2 (400 g，0. 32 mol, 1.0當量)溶解于4.0 L無水二氯甲焼中，在攬拌下加入 H甲基氧鐵四氣測酸鹽（142.6 g，0. 96 mol, 3.0當量)，得一懸濁液，該體系于4(TC下攬拌 反應6小時。通過薄層色譜法（IlX)監(jiān)測反應完成后，將該體系用冰水浴降溫至0°C，加入 1.0 L甲醇鋼的甲醇溶液（0.3 M)，攬拌2小時后，再依次加入I L甲醇和I. 2 L稀硫酸（1.0 M)，攬拌半小時后緩慢加入飽和碳酸氨鋼水溶液使抑值到中性，然后用4. 0 L二氯甲焼萃 取H次。有機相合并，先后用水3. 0 L和飽和食鹽水3. 0 L洗涂，用無水硫酸鋼干燥，過濾， 濃縮得粗品。用快速硅膠（100-200目）色譜柱純化，洗脫液為石油離、己酸己醋和甲醇，得 到310 g化合物3 (N-甲基-k亮氨醜A-鄉(xiāng)氨醜-N-甲基-k亮氨醜A-丙氨醜-D-丙 氨醜-N-甲基-k亮氨醜-N-甲基-k亮氨醜-N-甲基-k鄉(xiāng)氨醜-N-甲基-了帰基-蘇 氨酸（己酸醋）-a-氨基了酸-肌氨酸甲醋)，收率75%。薄層色譜Rf;0.4 (展開劑體積比： 己酸己醋/甲醇=10/1)。
[0017] 分子式；〇55也術11〇14;精確分子量=1275. 88 ;質譜（聲么）：1276. 7 (M+H