一種環(huán)孢菌素緩釋微球制劑及其制備方法
【技術(shù)領域】
[0001] 本發(fā)明涉及環(huán)孢菌素緩釋微球。
【背景技術(shù)】
[0002] 環(huán)孢菌素（也簡稱為環(huán)孢素）是一類通常具有免疫抑制或抗炎活性的多肽，臨床 上在器官和組織移植中廣泛使用。環(huán)孢菌素可與腎上腺皮質(zhì)激素或其他免疫抑制劑合用， 也可用于治療類風濕性關節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、腎病型慢性腎炎、自身免疫性溶血性貧 血、銀屑病、葡萄膜炎等自身免疫性疾病。
[0003] 最常見的環(huán)孢菌素是環(huán)孢菌素-A。其他形式的環(huán)孢菌素包括：環(huán)孢菌素-B、-C、-D 和-G及其衍生物。應理解，本文所用術(shù)語"環(huán)孢菌素"表示一些環(huán)孢菌素衍生物或其前藥 中的任一種，或是任意上述物質(zhì)的混合物。
[0004] 環(huán)孢菌素在水中的溶解性差，而用于輸注的市售產(chǎn)品Sandimmune? (山地明 ?)被配制成含50mg/ml環(huán)孢菌素和聚乙氧基化菌麻油（polyoxylatedcastoroil, (^〇1〇?11〇出1^):)在乙醇中的濃縮物，并且在使用之前必須用氯化鈉等滲溶液或5%葡萄糖 溶液稀釋，然后緩慢靜脈輸入，時間應大約為2~6小時，一經(jīng)稀釋，溶液必須于24小時內(nèi) 使用或遺棄（環(huán)孢素注射液（山地明?)藥品說明書）。
[0005]CremophorEL是巴斯夫公司（BASFCrop)為其聚乙氧基化菌麻油版本注冊的商 標。它是通過使35摩爾環(huán)氧乙烷與每摩爾蓖麻油反應而制備的。所得產(chǎn)物是混合物（CAS 號為61791-12-6):主要組分是其中蓖麻油甘油三酯的羥基被環(huán)氧乙烷乙氧基化從而形成 聚乙二醇醚的材料。次要組分是蓖麻油酸的聚乙二醇醚、聚乙二醇和甘油的聚乙二醇醚。 CremophorEL是合成的非離子型表面活性劑。其效用來自其在水性系統(tǒng)中穩(wěn)定非極性材料 的乳液的能力。
[0006]據(jù)報道，CremophorEL?與過敏反應相關，靜脈內(nèi)施用含Crem〇Ph〇rEL?的環(huán)孢菌 素組合物與過敏反應相關，會引起從輕度皮膚反應到過敏反應和心臟衰竭的不良反應（環(huán) 孢素注射液（山地明? )藥品說明書）。因此，需要不含Cremophor?的環(huán)孢菌素組合物。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 有必要進一步開發(fā)這樣的組合物，其不含有Cremophor?和乙醇。該組合物獲得環(huán) 孢菌素治療作用的同時，避免了Cremophor?.和乙醇的不良作用，進而避免了使用皮質(zhì)類固 醇和/或抗組胺劑進行術(shù)前用藥（皮質(zhì)類固醇和/或抗組胺劑的使用會帶來不良作用同 時，還會對合并用藥的選擇產(chǎn)生影響）。
[0008] 也有必要進一步開發(fā)這樣的組合物，其通過皮下注射，避免了山地明濃縮液需稀 釋可能帶來的污染，同時給藥時間短，避免長時間輸注給藥。
[0009] 本發(fā)明提供了一種用于皮下注射的不含Cremophor的環(huán)孢菌素緩釋微球制劑，其 降低了環(huán)孢菌素的給藥頻率。本發(fā)明所敘的"微球"包括制劑學中類似球形的微囊或顆粒 微小的微囊。本發(fā)明的環(huán)孢菌素緩釋微球制劑在體內(nèi)的緩釋周期可達到7-35天。
[0010] 本發(fā)明還提供了 一種環(huán)孢菌素緩釋微球制劑的制備方法。
[0011] 本發(fā)明的環(huán)孢菌素緩釋微球制劑，包括環(huán)孢菌素、乙交酯丙交酯共聚物，其質(zhì)量百 分比為：環(huán)孢菌素0. 1% -18. 5%，乙交酯丙交酯共聚物71. 5% -99%。
[0012] 乙交酯丙交酯共聚物[poly(lactide-co-glycolide)即PLGA]是有乙交酯和丙 交酯以不同比例嵌段共聚而成的一種高分子材料，具有良好的生物相容性和可降解性，其 最終降解產(chǎn)物是二氧化碳和水。本發(fā)明中所述的乙交酯丙交酯共聚物是乙交酯：丙交酯為 25 :75~75 :25的共聚物，其分子量為2000~25000道爾頓，特性粘度為0. 1~0. 5dL/ g°
[0013] 為了實現(xiàn)環(huán)孢菌素緩釋微球具有理想的載藥量，使其在臨床上應用成為一種 可能。發(fā)明人對環(huán)孢菌素的理化性質(zhì)以及處方因素進行研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，采用環(huán)孢菌素 0. 1% -18. 5%，乙交酯丙交酯共聚物71. 5% -99%的處方制備成緩釋微球，可以實現(xiàn)載藥 量為0. 5% -10. 8%的環(huán)孢菌素緩釋微球，通過改變處方中乙交酯丙交酯共聚物的用量可 以對微球的載藥量進行調(diào)節(jié)，方便臨床用藥。
[0014] 本發(fā)明所述的環(huán)孢菌素緩釋微球制劑還包含質(zhì)量百分比為0. 1-10. 0%的保護劑， 該保護劑選自人血清白蛋白、明膠、海藻糖、庶糖、硫酸接或甘露醇中的一種或任意兩種或 兩種以上的組合。
[0015] 發(fā)明人在研究過程中發(fā)現(xiàn)，保護劑的濃度在0. 1-10. 0%時，由于加入保護劑可提 高環(huán)孢菌素的穩(wěn)定性；意外的發(fā)現(xiàn)，當保護劑的質(zhì)量百分比為0. 1-10. 0%時，可增加緩釋 微球的載藥量。
[0016] 本發(fā)明所述的環(huán)孢菌素緩釋微球制劑還包括質(zhì)量百分比為0.01% -10.0%的助 懸劑，該助懸劑選自西黃蓍膠、阿拉伯膠、海藻酸鈉、明膠、果膠、脫乙酰甲殼素、甲基纖維 素、羧甲基纖維素鈉、羥丙甲基纖維素、羥丙基纖維素、卡波姆、聚維酮、聚乙烯醇中的一種 或任意兩種或兩種以上的組合。若本發(fā)明采用復乳法（W/ 0 /W)制備環(huán)孢菌素緩釋微球 時，由于環(huán)孢菌素難溶于水，助懸劑能以降低微粒的沉降速度并增加微粒親水性。發(fā)明人在 研究過程中發(fā)現(xiàn)，當助懸劑濃度小于0. 01 %時，其增加包封率和緩釋微球的載藥量的作用 不明顯，而當其濃度大于10.0%時會由于粘度過大而微球的制備帶來困難。
[0017] 由于本發(fā)明處方組成合理，可以通過普通的緩釋微球技術(shù)制備獲得，該緩釋微球 的緩釋周期可以實現(xiàn)長達7-35天。采用復乳法（W/ 0 /W)制備環(huán)孢菌素緩釋微球會有 更好的技術(shù)效果。
[0018] 在完成本發(fā)明的過程中，申請人發(fā)現(xiàn)以下制備方法會使上述緩釋微球制劑獲得更 佳的效果，該制各方法包括以下步驟：
[0019] a)將乙交酯丙交酯共聚物溶于有機溶劑，形成油相，其中有機溶劑為二氯甲烷、乙 酸乙酯中的一種或其組合；
[0020] b)將環(huán)孢菌素、保護劑、助懸劑溶于水，形成內(nèi)水相；
[0021] c)將內(nèi)水相與所述油相混合形成初乳，并將該初乳加入到含有表面活性劑的外水 相中形成復乳。所述的表面活性劑選自聚乙烯醇、泊洛沙姆、油酸鈉、硬脂酸鈉、吐溫、或司 盤中的一種或任意兩種或兩種以上的組合。
[0022] d)持有機溶劑揮發(fā)后，得到包裹有環(huán)孢菌素的緩釋微球。
[0023] 本發(fā)明緩釋微球的制各方法a)步驟和b)步驟其目的是制備初乳所需的半成品， 所以制各方法a)步驟和b)步驟可以同時進行，可以不分先后順序的進行。
[0024] 上述制各方法優(yōu)選包括以下步驟：
[0025] 將乙交酯丙交酯共聚物溶于有機溶劑，制成所述乙交酯丙交酯共聚物濃度為 10% -40%(W/V)的油相，其中有機溶劑為二氯甲烷、乙酸乙酯中的一種或其組合物。
[0026] 將環(huán)孢菌素、保護劑、助懸劑溶于水，形成環(huán)孢菌素濃度為5% -50%(W/V)的內(nèi) 水相。
[0027] 將內(nèi)水相與所述油相混合形成初乳，并將該初乳加入到含有表面活性劑的外水 相中形成復乳。所述的表面活性劑選自聚乙烯醇、泊洛沙姆、油酸鈉、硬脂酸鈉、吐溫、或 司盤中的一種或任意兩種或兩種以上的組合。優(yōu)選的表面活性劑為聚乙烯醇，其濃度為 0? 1% -5%(w/V)。
[0028] 持有機溶劑揮發(fā)后，得到包裹有環(huán)孢菌素的緩釋微球。
[0029] 本發(fā)明中內(nèi)水相和油相的體積比、外水相和初乳的體積比均會影響到最終緩釋微 球制劑的粒徑、載藥量和藥物的釋放。發(fā)明人在研究過程中發(fā)現(xiàn)當內(nèi)水相與油相的體積比 大于1 :5時雖然會提高微球的載藥量，但藥物的包封率會下降，造成藥物的浪費；而當其體 積比小于1 :1〇〇時則會造成載藥量的下降。當外水相與初乳的體積比小于20 :1時會由于 外水相的體積過小造成微球的固化緩慢，固化時間延長，大量的藥物會進入水中，導致載藥 量下降；當其體積比大于2000 :1時會由于外水相過大而使微球固化速度過快，影響微球的 球形度和外觀。因此本發(fā)明中所述的內(nèi)水相與油相的體積比為1 :5_1 :100,外水相與初乳 的體積比20 :1-2000 :1。
[0030] 本發(fā)明中的初乳可以采用高速攪拌、高壓均質(zhì)或超聲破碎等方式制備，只要能夠 保證初乳的粒徑符合要求即可。所制備的初乳要存放在20°C以下的環(huán)境中以增加初乳的穩(wěn) 定性。
【具體實施方式】
[0031] 實施例一
[0032] 稱取800mg環(huán)孢素A和300mg明膠溶于5ml注射用水中，作為內(nèi)水相；稱取6g乙 交酯丙交酯共聚物溶于15ml的二氯甲烷中作為油相；將油相加入到內(nèi)水相中，采用高速攪 拌（23000rpm) 30秒，得初乳，存放在200°C以下的環(huán)境中；將此初乳在攪拌的狀態(tài)下加入到 6000毫升0.5%(W/V)的聚乙烯醇溶液得復乳，將此復乳持續(xù)攪拌3小時揮去二氯甲烷， 離心、洗滌、700目篩收集得到微球，收集的微球經(jīng)過一定的溫度和時間干燥后，采用150目 篩網(wǎng)分散，置于西林瓶中，-20度密封保存。微球粒徑小于100微米。載藥量為9.6%，包封 率為86. 0%。
[0033] 實施例二
[0034] 稱取200mg環(huán)孢素A、300mg羧甲基纖維素鈉和IOOmg蔗糖溶于5ml注射用水中， 作為內(nèi)水相；稱取12. 5g乙交酯丙交酯共聚物溶于50ml的二氯甲烷中作為油相；將油相加 入到內(nèi)水相中，采用高速攪拌（25000rpm)30秒，得初乳，存放在200°C以下的環(huán)境中；將此 初乳在攪拌的狀態(tài)下加入到5000毫升0.5%(W/V)的聚乙烯醇溶液得復乳，將此復乳持 續(xù)攪拌3小時揮去二氯甲烷，離心、洗滌、700目篩收集得到微球，收集的微球經(jīng)過一定的溫 度和時間干燥后，采用150目篩網(wǎng)分散，置于西林瓶中，-20度密封保存。微球粒徑小于100 微米。載藥量為0.45%，包封率32. 5%。
[0035] 實施例三
[0036] 稱取150mg環(huán)孢素A、200mg羧甲基纖維素鈉和150mg蔗糖溶于5ml注射用水中， 作為內(nèi)水相；稱取15g乙交酯丙交酯共聚物溶于50ml的二氯甲烷中作為油相；將油相加入 到內(nèi)水相中，采用高速攪拌（21000rpm)45秒，得初乳，存放在200°C以下的環(huán)境中；將此初 乳在攪拌的狀態(tài)下加入到4000毫升0.5%(W/V)的聚乙烯醇溶液得復乳，將此復乳持續(xù) 攪拌3小時揮去二氯甲烷，離心、洗滌、700目篩收集得到微球，收集的微球經(jīng)過一定的溫度 和時間干燥后，采用150目篩網(wǎng)分散，置于西林瓶中，-20度密封保存。微球粒徑小于100微 米。載藥量為30. 3%，包封率72. 5%。
[0037] 實施例四
[0038] 稱取500mg環(huán)孢素A、300mg羧甲基纖維素鈉和200mg鹿糖溶于5ml注射用水中， 作為內(nèi)水相；稱取15g乙交酯丙交酯共聚物溶于30ml的二氯甲烷中作為油相；將油相加入 到內(nèi)水相中，采用高速攪拌（1500