合并水相，用100 mL己 酸己醋萃取兩次，將所有有機(jī)相合并，用無水硫酸鋼干燥，過濾，濃縮得9.6 g化合物7 (苯 基硫脈A-丙氨醜-D-丙氨醜-N-甲基-k亮氨醜-N-甲基-k亮氨醜-N-甲基-k鄉(xiāng)氨 醜-N-甲基-了帰基-蘇氨酸（己酸醋)-a -氨基了酸-肌氨酸甲醋)，收率95%。該化合物 無需純化直接用于下一步反應(yīng)。
[0047]分子式；CssHsAOuS ;精確分子量：1057. 62 ;質(zhì)譜（聲么）：1058. 6 (M+H+)。
[004引其余同實施例1。
[0049] 連施例10 步驟5 ;化合物7的合成 苯基硫脈-k丙氨醜-D-丙氨醜-N-甲基-k亮氨醜-N-甲基-k亮氨醜-N-甲 基-k鄉(xiāng)氨醜-N-甲基-了帰基-蘇氨酸（己酸醋）-a -氨基了酸-肌氨酸甲醋
將化合物6(10 g，0.0 l mol, 1.0當(dāng)量)溶解于100 mL無水甲苯中，在攬拌下向該溶液 中加入化合物4 (異硫氯酸苯醋，2. 7 g，0. 02 mol, 2. 0當(dāng)量)，1, 8-二氮雜環(huán)[5, 4, 0] ^ 帰-7 (D腳）（7.6 g，0. 05 mol, 5.0 當(dāng)量）和 4-二甲基氨基化巧（0.12 g，0.0 Ol mol, 0.1 當(dāng)量)。加熱該溶液至11(TC，保持回流狀態(tài)攬拌反應(yīng)12小時。通過薄層色譜法（TLC)監(jiān)測 反應(yīng)完成后，將反應(yīng)液降至室溫，減壓蒸出大部分溶劑，剩余物加150 mL己酸己醋溶解，用 80 mL水洗涂H次，合并水相，用100 mL己酸己醋萃取兩次，將所有有機(jī)相合并，用無水硫酸 鋼干燥，過濾，濃縮得9. 9 g化合物7 (苯基硫脈-k丙氨醜-D-丙氨醜-N-甲基-k亮氨 醜-N-甲基-k亮氨醜-N-甲基-k鄉(xiāng)氨醜-N-甲基-了帰基-蘇氨酸（己酸醋）-a -氨 基了酸-肌氨酸甲醋)，收率98%。該化合物無需純化直接用于下一步反應(yīng)。
[0050] 分子式=CssHsAOuS ;精確分子量：1057. 62 ;質(zhì)譜（聲么）：1058. 6 (M+H+)。
[005。 其余同實施例1。
[OOW] 連施例11 步驟6 ;化合物8的合成 k丙氨醜-D-丙氨醜-N-甲基-k亮氨醜-N-甲基-k亮氨醜-N-甲基-k鄉(xiāng)氨 醜-N-甲基-了帰基-蘇氨酸（己酸醋）-a -氨基了酸-肌氨酸甲醋
將化合物7 (10 g，0. 0095 mol, 1.0 當(dāng)量）溶解于80血無水四氨巧喃中，用冰水浴降 溫至OC，在攬拌下緩慢滴加6N鹽酸（50 mL)，約1小時滴加完畢后，緩慢升至室溫攬拌反應(yīng) 5小時。通過薄層色譜法（TLC)監(jiān)測反應(yīng)完成后，攬拌下緩慢加入飽和碳酸氨鋼水溶液使pH 值到中性，用80 mL己酸己醋萃取H次，將有機(jī)相合并，經(jīng)100 mL飽和食鹽水洗涂兩次，有 機(jī)相用無水硫酸鋼干燥，過濾，濃縮得粗品。用快速硅膠（100-200目）色譜柱純化，洗脫液 為石油離、己酸己醋和甲醇，得到5. 0 g化合物8 a-丙氨醜-D-丙氨醜-N-甲基-k亮氨 醜-N-甲基-k亮氨醜-N-甲基-k鄉(xiāng)氨醜-N-甲基-了帰基-蘇氨酸（己酸醋)-a -氨基 了酸-肌氨酸甲醋)，收率62%。薄層色譜Rf;0.2(展開劑體積比：己酸己醋/甲醇=10/1)。 [005引 分子式電3&術(shù)7010;精確分子量：851. 57 ;質(zhì)譜（曲/么）：852. 6 (M+H+)。
[0054] 其余同實施例1。
【主權(quán)項】
1. 一種降解環(huán)孢菌素 A的方法，包括以下步驟： 第一步反應(yīng)，以環(huán)孢菌素 A為原料，與醋酸酐反應(yīng)得到乙酰基保護(hù)的環(huán)孢菌素 A ; 第二步反應(yīng)，乙?；Ｗo(hù)的環(huán)孢菌素 A在三甲基氧鐺四氟硼酸鹽的作用下在第三肽鍵 處發(fā)生開環(huán)反應(yīng)，生成鏈狀的十一肽； 第三步反應(yīng)，鏈狀十一肽的游離氨基先與異硫氰酸苯酯反應(yīng)后，在堿性條件下降解一 個N-端氨基酸得到十肽，再與過量的異硫氰酸苯酯反應(yīng)生成十肽的苯胺硫代甲酰胺衍生 物； 第四步反應(yīng)，在酸性條件下，十肽的苯胺硫代甲酰胺衍生物發(fā)生降解生成九肽； 第五步反應(yīng)，九肽的游離氨基先與異硫氰酸苯酯反應(yīng)后，在堿性條件下降解一個N-端 氨基酸得到八肽，再與過量的異硫氰酸苯酯反應(yīng)生成八肽的苯胺硫代甲酰胺衍生物； 第六步反應(yīng)，在酸性條件下，八肽的苯胺硫代甲酰胺衍生物發(fā)生降解生成七肽。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種降解環(huán)孢菌素 A的方法，其特征是，第一步反應(yīng)在溶劑醋 酸酐中進(jìn)行，加4-二甲氨基吡啶作催化劑，4-二甲氨基吡啶的摩爾量為0. 1-1. 0當(dāng)量；反 應(yīng)溫度為0_80°C ;反應(yīng)時間為3-18小時。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種降解環(huán)孢菌素 A的方法，其特征是，第二步反應(yīng)在溶劑無 水二氯甲烷中進(jìn)行，加三甲基氧鐺四氟硼酸鹽作開環(huán)試劑，三甲基氧鐺四氟硼酸鹽的摩爾 量為1. 0-3. 0當(dāng)量；反應(yīng)溫度為0-40°C ;反應(yīng)時間為6-72小時。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種降解環(huán)孢菌素 A的方法，其特征是，第三步反應(yīng)在溶劑中 進(jìn)行，溶劑為無水四氫呋喃、無水二氧六環(huán)或無水甲苯中的一種；異硫氰酸苯酯的摩爾量為 2. 0-3.0當(dāng)量；堿用三乙胺、二異丙基乙胺或1，8-二氮雜環(huán)[5, 4, 0] 十一烯_7中的一種， 堿的摩爾量為3. 0-5. 0當(dāng)量；并加入4-二甲氨基吡啶為催化劑，4-二甲氨基吡啶的摩爾量 為0. 1-1. 0當(dāng)量；反應(yīng)溫度為0-1KTC ;反應(yīng)時間為3-18小時。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種降解環(huán)孢菌素 A的方法，其特征是，第四步反應(yīng)在溶劑中 進(jìn)行，溶劑為無水二氯甲烷或無水四氫呋喃中的一種；酸用三氟乙酸或鹽酸中的一種；反 應(yīng)溫度為0_40°C ;反應(yīng)時間為2-5小時。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種降解環(huán)孢菌素 A的方法，其特征是，第五步反應(yīng)在溶劑中 進(jìn)行，溶劑為無水四氫呋喃、無水二氧六環(huán)或無水甲苯中的一種；異硫氰酸苯酯的摩爾量為 2. 0-3.0當(dāng)量；堿用三乙胺、二異丙基乙胺或1，8-二氮雜環(huán)[5, 4, 0] 十一烯_7中的一種， 堿的摩爾量為3. 0-5. 0當(dāng)量；并加入4-二甲氨基吡啶為催化劑，4-二甲氨基吡啶的摩爾 量為0. 1-1. 0當(dāng)量；反應(yīng)溫度為0-1KTC ;反應(yīng)時間為3-18小時。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種降解環(huán)孢菌素 A的方法，其特征是，第六步反應(yīng)在溶劑中 進(jìn)行，溶劑為無水二氯甲烷或無水四氫呋喃中的一種；酸用三氟乙酸或鹽酸中的一種；反 應(yīng)溫度為0_40°C ;反應(yīng)時間為2-5小時。
【專利摘要】本發(fā)明涉及環(huán)孢菌素A降解方法，主要解決現(xiàn)有多肽降解中存在的反應(yīng)路線長，收率低等技術(shù)問題。該方法是從環(huán)孢菌素A<b>1</b>開始，與醋酸酐反應(yīng)得到環(huán)孢菌素A的醋酸酯<b>2</b>；化合物<b>2</b>在三甲基氧鎓四氟硼酸鹽作用下開環(huán)反應(yīng)生成鏈狀的十一肽<b>3</b>；化合物<b>3</b>的游離氨基在與異硫氰酸苯酯<b>4</b>作用后，堿性條件下降解一個N-端氨基酸得到十肽，再與異硫氰酸苯酯反應(yīng)生成十肽的苯胺硫代甲酰胺衍生物<b>5</b>；化合物<b>5</b>酸性條件下降解生成九肽<b>6</b>；化合物<b>6</b>與異硫氰酸苯酯<b>4</b>作用后堿性條件下降解一個N-端氨基酸得到八肽，再與異硫氰酸苯酯反應(yīng)生成八肽的苯胺硫代甲酰胺衍生物<b>7</b>；化合物<b>7</b>酸性條件下降解生成七肽<b>8</b>。本發(fā)明通過四步反應(yīng)降解環(huán)孢菌素A中N-端的四個氨基酸。
【IPC分類】C07K7/06
【公開號】CN105693820
【申請?zhí)枴緾N201410695242
【發(fā)明人】秦大琨, 李小林, 郭明軒, 賀海鷹, 陳曙輝
【申請人】武漢藥明康德新藥開發(fā)有限公司
【公開日】2016年6月22日
【申請日】2014年11月27日