1.一種taqman熒光定量rt-pcr試劑盒,其特征在于,所述taqman熒光定量rt-pcr試劑盒能夠同時檢測豬繁殖與呼吸綜合征中的c-prrsv、hp-prrsv和nl-prrsv;
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種taqman熒光定量rt-pcr試劑盒,其特征在于,還包括反應(yīng)液,所述反應(yīng)液包括緩沖液和反轉(zhuǎn)錄酶。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種taqman熒光定量rt-pcr試劑盒,其特征在于,還包括陽性對照標(biāo)準(zhǔn)品,所述陽性對照標(biāo)準(zhǔn)品包括c-prrsv質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品、hp-prrsv質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品和nl-prrsv質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種taqman熒光定量rt-pcr試劑盒,其特征在于,所述c-prrsv質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品的核苷酸序列如seq?id?no.10所示;所述hp-prrsv質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品的核苷酸序列如seq?id?no.11所示;所述nl-prrsv質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品的核苷酸序列如seq?id?no.12所示。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種taqman熒光定量rt-pcr試劑盒,其特征在于,還包括陰性對照液,所述陰性對照液為去rna酶水。
6.如權(quán)利要求1~5任一項所述的一種taqman熒光定量rt-pcr試劑盒在豬繁殖與呼吸綜合征檢測中的應(yīng)用,其特征在于,檢測的毒株包括c-prrsv、hp-prrsv和nl-prrsv。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用,其特征在于,rt-pcr反應(yīng)程序為:預(yù)變性?95?℃,10?s;變性?95?℃,10?s;退火延伸?55~58?℃,30?s,40個循環(huán)。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用,其特征在于,rt-pcr反應(yīng)程序為:預(yù)變性?95?℃,10?s;變性?95?℃,10?s;退火延伸?57?℃,30?s,40個循環(huán)。
9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用,其特征在于,rt-pcr反應(yīng)體系為:用于檢測c-prrsv的上游引物和下游引物的濃度均為10?μmol/l、體積均為0.2~1.2μl,用于檢測c-prrsv的探針濃度為10?μmol/l、體積為0.1~1μl;用于檢測hp-prrsv的上游引物和下游引物的濃度均為10μmol/l、體積均為0.2~1.2μl,用于檢測hp-prrsv的探針濃度為10?μmol/l、體積為0.2~1.2μl;用于檢測nl-prrsv的上游引物和下游引物的濃度均為10?μmol/l、體積均為0.1~0.6μl,用于檢測nl-prrsv的探針濃度為10?μmol/l、體積為0.2~1.2μl。
10.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用,其特征在于,rt-pcr反應(yīng)體系為:用于檢測c-prrsv的上游引物和下游引物的濃度均為10?μmol/l、體積均為1.0μl,用于檢測c-prrsv的探針濃度為10?μmol/l、體積為0.4μl;用于檢測hp-prrsv的上游引物和下游引物的濃度均為10?μmol/l、體積均為0.6μl,用于檢測hp-prrsv的探針濃度為10?μmol/l、體積為0.8μl;用于檢測nl-prrsv的上游引物和下游引物的濃度均為10?μmol/l、體積均為0.2μl,用于檢測nl-prrsv的探針濃度為10?μmol/l、體積為0.6μl。