1.一種鑒定牛肉的方法,其特征在于,包括以下步驟:
步驟1:設(shè)計(jì)特異性識(shí)別牛細(xì)胞色素b基因片段的1對(duì)引物;
步驟2:將牛肉總DNA的濃度調(diào)至20 ng/μL作為樣品PCR檢測(cè)的模板;
步驟3:使用步驟1的引物和步驟2的模板,借助Taq DNA聚合酶PCR擴(kuò)增牛細(xì)胞色素b基因特定片段;
步驟4:通過1.2%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)步驟3的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;
步驟5:根據(jù)步驟4的電泳檢測(cè)結(jié)果,判斷樣品是否是或者是否含有牛肉或牛的其他組織成份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種鑒定牛肉的方法,其特征在于:所述牛細(xì)胞色素b基因片段的1對(duì)引物,上游引物堿基序列:5′-aatacactacacatccgacac-3′,下游引物堿基序列:5′-gacccgtaatataagcctcg -3′,濃度均為2 pmol/μL。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種鑒定牛肉的方法,其特征在于:所述Taq DNA聚合酶PCR擴(kuò)增牛細(xì)胞色素b基因特定片段的PCR反應(yīng)體系為10μL ,其中10×Buffer:1μL;10 mmol/L dNTPS:0.4μL;上、下游引物各0.5μL;模板DNA:0.5μL;5 U/μL Taq:0.1μL;滅菌純水7μL。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種鑒定牛肉的方法,其特征在于:所述Taq DNA聚合酶PCR擴(kuò)增牛細(xì)胞色素b基因特定片段的PCR程序?yàn)椋?4℃變性/25 s,63℃退火/25 s,72℃延伸反應(yīng)/25 s,30次循環(huán)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種鑒定牛肉的方法,其特征在于:所述根據(jù)步驟4的電泳檢測(cè)結(jié)果,判斷樣品是否是或含有牛肉或牛的其他組織成份,若出現(xiàn)162 bp PCR產(chǎn)物,表明檢測(cè)樣品是或含有牛肉或牛的其他組織成份;反之不是或不含有牛肉或牛的其他組織成份。