阿托西班的中間體的合成與應(yīng)用的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種阿托西班關(guān)鍵中間體的液相合成方法，即H-Ile-Thr（Bzl）-Asn-Cys（Bzl）-Pro-OH的制備方法。采用此液相接肽合成方法，反應(yīng)易監(jiān)測(cè)，較固相合成法成本低，更適合大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。主要合成步驟：采用BSA保護(hù)脯氨酸，通過(guò)N-羥基琥珀酰亞胺酯法在脯氨酸N端逐個(gè)連接S-芐基半胱氨酸、天冬酰胺、芐基保護(hù)的蘇氨酸和異亮氨酸，得到五肽中間體。
【專(zhuān)利說(shuō)明】阿托西班的中間體的合成與應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種合成阿托西班五肽中間體的液相合成方法，以及該關(guān)鍵中間體在 制備阿托西班中的應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 阿托西班是由輝凌公司（Ferring AB)研制，其結(jié)構(gòu)如下（II)，是子宮內(nèi)及蛻膜、胎 膜上受體的環(huán)狀催產(chǎn)素抑制劑，于2000年3月首次在奧地利上市。使用后可劑量相關(guān)性地 抑制宮縮，并使環(huán)狀肽催產(chǎn)素介導(dǎo)的前列腺素分泌減少，達(dá)到保胎目的。
[0003]

【權(quán)利要求】
1.阿托西班五肽中間體的液相合成方法，其特征在于，包括如下步驟： a. 以脯氨酸為原料，使用BSA保護(hù)其羧基，再與N端保護(hù)的S-芐基半胱氨酸的活性酯 連接，制得N-叔丁氧羰酰基-S-芐基半胱氨酰-脯氨酸，再于酸性條件下脫去N端保護(hù) 基得到S-芐基半胱酰氨-脯氨酸； b. 以S-芐基半胱酰氨-脯氨酸為原料，使用BSA保護(hù)脯氨酰的羧基部分，再與N端保 護(hù)的天冬酰胺的活性酯連接，制得N-叔丁氧羰?；?天冬酰胺-S-芐基半胱氨酰-脯氨酸， 再于酸性條件下脫去N端保護(hù)基得到天冬酰胺-S-芐基半胱氨酰-脯氨酸； c. 以天冬酰胺-S-芐基半胱氨酰-脯氨酸為原料，使用BSA保護(hù)脯氨酰的羧基部分，再 與N端保護(hù)的0-芐基蘇氨酸的活性酯連接，制得N-叔丁氧羰?；?0-芐基-蘇氨酰-天 冬酰胺-S-芐基半胱氨酰-脯氨酸，再于酸性條件下脫去N端保護(hù)基得到0-芐基-蘇氨 酰-天冬酰胺-S-芐基半胱氨酰-脯氨酸； d. 以0-芐基-蘇氨酰-天冬酰胺-S-芐基半胱氨酰-脯氨酸為原料，使用BSA保護(hù)脯 氨酰的羧基部分，再與N端保護(hù)的異亮氨酸的活性酯連接，制得N-叔丁氧羰酰基-異亮氨 酰-〇-芐基-蘇氨酰-天冬酰胺-S-芐基半胱氨酰-脯氨酸，再于酸性條件下脫去N端保 護(hù)基得到異亮氨酰-〇-芐基-蘇氨酰-天冬酰胺-S-芐基半胱氨酰-脯氨酸，即H-Ile-Thr (Bzl) -Asn-Cys (Bzl) -Pr〇-〇H，其結(jié)構(gòu)（I )如下 e. 具體合成路線(xiàn)如下：
其中 Rl=Boc、Cbz、Trt、Mz
R2=0Su、ONb、OBt、OOBt、OAt。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的阿托西班五肽中間體的液相合成方法，其特征在于：步驟a、 c、d中所述的N端保護(hù)基團(tuán)選自叔丁氧羰基（B0C)、芐氧羰基（Cbz)、三苯甲基（Trt)、對(duì)甲 氧芐氧羰基（Mz)。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的阿托西班五肽中間體的液相合成方法，其特征在于：用酸脫 除N端保護(hù)基時(shí)所述的酸選自包括三氟乙酸、鹽酸、氫氟酸；所用溶劑包括：二氯甲烷、四氫 呋喃、1，4-二氧六環(huán)。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的阿托西班五肽中間體的液相合成方法，其特征在于：步驟a、 b、c、d中所述的氨基酸的相應(yīng)活性酯選自N-羥基琥珀酰亞胺酯、N-羥基-5-降冰片烯-2， 3-二甲酰亞胺酯、1-羥基苯駢三氮唑酯、3-羥基-4-氧-3,4-二氫-1，2, 3-苯駢三氮唑酯、 1-羥基-7-偶氮苯并三氮唑酯。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的合成方法，其特征在于：包括如下步驟： (a)制備S-芐基半胱酰氨-脯氨酸 將BSA和L-脯氨酸加到無(wú)水二氯甲烷中，10?35°C下攪拌2?4h，滴入N-叔丁氧羰 ?；?S-芐基半胱氨酸-(N-羥基）琥珀酰亞胺酯的二氯甲烷溶液，10?35°C下反應(yīng)5? 8h，減壓蒸除溶劑，加乙醚，用5%的碳酸氫鈉水溶液萃??；合并水相，加入檸檬酸調(diào)至PH5? 7,用乙酸乙酯萃取，合并有機(jī)相，用飽和食鹽水洗滌后經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濾液減壓 濃縮至干，得淡黃色油狀物，加入無(wú)水乙醚析出白色固體；將白色固體加至無(wú)水二氯甲烷 中，0?15°C下攪拌滴加三氟乙酸至 :VCF3a)QH=l?5 :1，攪拌反應(yīng)2?5h，減壓濃縮至 干，得到淡黃色油狀物，用乙酸乙酯/乙醚重結(jié)晶，得到白色固體； (b) 制備天冬酰胺-s-芐基半胱氨酰-脯氨酸 將S-芐基半胱酰氨-脯氨酸和BSA加到無(wú)水二氯甲烷中，10?35°C下攪拌3?4h，滴 入N-叔丁氧羰?；?天冬酰胺-(N-羥基)琥珀酰亞胺酯的二氯甲烷溶液，10?35°C下攪 拌8?10h，減壓蒸除溶劑，加乙醚，用5%的碳酸氫鈉水溶液萃??；合并水相，加入檸檬酸調(diào) 至PH5?7,用乙酸乙酯萃取，合并有機(jī)相，用飽和食鹽水洗滌后經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾， 濾液減壓濃縮至干，得淡黃色油狀物，乙酸乙酯重結(jié)晶，得到的固體加至無(wú)水二氯甲烷中， 0?15°C下攪拌滴加三氟乙酸至V eH2a2 :VeF3_=l?5 :1，10?35°C下攪拌反應(yīng)2?5h，減 壓濃縮至干，得到淡黃色油狀物，用乙酸乙酯/乙醚重結(jié)晶，得到白色固體； (c) 制備0-芐基-蘇氨酰-天冬酰胺-S-芐基半胱氨酰-脯氨酸 將天冬酰胺-S-芐基半胱氨酰-脯氨酸和BSA加到無(wú)水二氯甲烷中，10?35°C下攪拌 3?4h，滴入N-叔丁氧羰?；?0-芐基-蘇氨酸-(N-羥基）琥珀酰亞胺酯的二氯甲烷溶 液，10?35°C下攪拌6?8h，減壓蒸除溶劑，加乙醚，用5%的碳酸氫鈉水溶液萃?。缓喜⑺?相，加入檸檬酸調(diào)至PH5?8,用乙酸乙酯萃取，合并有機(jī)相，用飽和食鹽水洗滌后經(jīng)無(wú)水硫 酸鈉干燥，過(guò)濾，濾液減壓濃縮至干，得淡黃色油狀物，乙酸乙酯重結(jié)晶，得到的固體加至無(wú) 水二氯甲烷中，〇?15°C下攪拌滴加三氟乙酸至:V CF3axH=l?5 :1，10?35°C下攪拌 反應(yīng)2?5h，減壓濃縮至干，用甲醇/乙醚重結(jié)晶，得到白色固體； (d) 制備異亮氨酰-0-芐基-蘇氨酰-天冬酰胺-S-芐基半胱氨酰-脯氨酸 將0-芐基-蘇氨酰-天冬酰胺-S-芐基半胱氨酰-脯氨酸和BSA加到無(wú)水二氯甲烷 中，10?35°C下攪拌3?4h，滴入N-叔丁氧羰?；?異亮氨酸-(N-羥基)琥珀酰亞胺酯 的二氯甲烷溶液，10?35°C下攪拌6?8h，減壓蒸除溶劑，加乙醚，用5%的碳酸氫鈉水溶液 萃??；合并水相，加入檸檬酸調(diào)至PH5?8,用乙酸乙酯萃取，合并有機(jī)相，用飽和食鹽水洗 滌后經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，得到的白色固體加至無(wú)水二氯甲烷中，〇?15°C下攪拌滴加 三氟乙酸至V CH2a2 :VCF3axH=l?5 :1，10?35°C下攪拌反應(yīng)2?5h，減壓濃縮至干，用甲醇/ 乙醚重結(jié)晶，得到白色固體。
【文檔編號(hào)】C07K1/02GK104098650SQ201310129543
【公開(kāi)日】2014年10月15日 申請(qǐng)日期:2013年4月15日 優(yōu)先權(quán)日:2013年4月15日
【發(fā)明者】馮文化, 劉巾瑋, 張韻 申請(qǐng)人:中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所