一種鱈魚(yú)硫酸魚(yú)精蛋白的制備方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明名稱(chēng)為一種鱈魚(yú)硫酸魚(yú)精蛋白的制備方法，涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域。本發(fā)明申請(qǐng)所要解決的技術(shù)問(wèn)題為克服現(xiàn)有工藝生產(chǎn)魚(yú)精蛋白周期長(zhǎng)、酒精用量大等不足，提供一種利用硫酸提取、有機(jī)溶劑純化與硅藻土吸附相結(jié)合對(duì)鱈魚(yú)魚(yú)精蛋白進(jìn)行分離純化的方法。本方法避免了傳統(tǒng)工藝中采用多次乙醇溶解再沉淀的過(guò)程，大大減少了有機(jī)溶劑的用量，降低生產(chǎn)成本的同時(shí)縮短了生產(chǎn)周期，且產(chǎn)品純度好，活性收率高。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種鱈魚(yú)硫酸魚(yú)精蛋白的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，尤其涉及一種鱈魚(yú)硫酸魚(yú)精蛋白的提取方法。
【背景技術(shù)】
[0002]魚(yú)精蛋白是一類(lèi)從魚(yú)類(lèi)的魚(yú)白組織中提取的堿性蛋白質(zhì)，臨床上可以作為胰島素的載體，延長(zhǎng)胰島素的半衰期，從而使藥物注射間隔時(shí)間延長(zhǎng)；同時(shí)，魚(yú)精蛋白可用于因肝素注射過(guò)量引起的出血，且目前無(wú)其他藥物可以代替；另外，魚(yú)精蛋白在中性和堿性介質(zhì)中顯示出很強(qiáng)的抑菌能力，并有較高的熱穩(wěn)定性，在210°C條件下加熱仍具有活性，同時(shí)其抑菌范圍和食品仿佛范圍均較廣，對(duì)枯草桿菌、芽孢桿菌、干酪乳桿菌、胚芽乳桿菌、乳酸菌、霉菌、芽孢耐熱菌和革蘭氏陽(yáng)性菌等均有較強(qiáng)的抑制作用，經(jīng)毒理實(shí)驗(yàn)證明，魚(yú)精蛋白作為防腐劑無(wú)味無(wú)臭，對(duì)人體無(wú)害，因而使用量不受任何限制，可根據(jù)需要添加到滿(mǎn)意的抑菌效果，綜上，魚(yú)精蛋白具有廣闊的市場(chǎng)。目前已有很多鯉魚(yú)、鰱魚(yú)、馬哈魚(yú)等魚(yú)精蛋白制備方法的文獻(xiàn)報(bào)道，但還沒(méi)有鱈魚(yú)魚(yú)精蛋白制備方法的報(bào)道。[0003]由于魚(yú)精蛋白通常是以核酸-蛋白質(zhì)的形式存在于魚(yú)的精子中，核蛋白結(jié)合鍵不牢固，所以現(xiàn)有的提取技術(shù)通常采用硫酸使其與核酸分離，制得魚(yú)精蛋白的硫酸鹽，即硫酸魚(yú)精蛋白，后采用有機(jī)溶劑進(jìn)行純化，申請(qǐng)?zhí)枮?0121028815991的專(zhuān)利采用硫酸提取、升溫提取、低溫析出、干燥工序的工藝進(jìn)行硫酸魚(yú)精蛋白的制備，而在硫酸提取、升溫提取和干燥工序的過(guò)程中采用了多次乙醇沉淀再溶解的方法，致使酒精用量大，使生產(chǎn)成本增高，生產(chǎn)周期較長(zhǎng)，且通過(guò)硫酸提取、有機(jī)溶劑純化的方法得到的魚(yú)精蛋白通常仍還有核酸等雜質(zhì)，產(chǎn)品活性收率低。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種利用硫酸提取、有機(jī)溶劑純化與硅藻土吸附相結(jié)合對(duì)鱈魚(yú)魚(yú)精蛋白進(jìn)行分離純化的方法，該方法克服了魚(yú)精蛋白生產(chǎn)周期長(zhǎng)、酒精用量大、活性收率低等不足。
[0005]本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下:
一種鱈魚(yú)硫酸魚(yú)精蛋白的制備方法，包括以下步驟:
(1)預(yù)處理:取解凍的鱈魚(yú)魚(yú)白置于組織搗碎機(jī)中，加入NaCl溶液，用三層紗布 過(guò)濾得漿液；
(2)離心:3500r/min15分鐘，去上清，收集沉淀;
(3)提取:向沉淀中加入硫酸進(jìn)行提?。?br> (4)過(guò)濾:收集濾液；
(5)吸附:在濾液中加入娃藻土,攪拌1-2小時(shí)；
(6)過(guò)濾:收集濾液；
(7)用乙醇進(jìn)行沉淀、脫水、干燥。
[0006]優(yōu)化地，所述步驟(1)中NaCl溶液的濃度為0.5%_3%。[0007]優(yōu)化地，所述步驟(3)中硫酸溶液濃度為3%_10%，提取時(shí)間為1-4小時(shí)。
[0008]優(yōu)化地，所述步驟(5)中所加硅藻土的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%_10%。
[0009]優(yōu)化地，所述步驟(7)中，所用乙醇的量為使得沉淀后的酒精度為60%_85%，沉淀10小時(shí)以上。
[0010]本發(fā)明的有益效果為通過(guò)采用硫酸提取、有機(jī)溶劑純化與吸附純化相結(jié)合的方式對(duì)魚(yú)精蛋白進(jìn)行提取純化，避免了傳統(tǒng)工藝中采用多次乙醇溶解再沉淀的過(guò)程，大大減少了有機(jī)溶劑的用量，降低生產(chǎn)成本的同時(shí)縮短了生產(chǎn)周期，且產(chǎn)品純度高，活性收率高。
【具體實(shí)施方式】
[0011]下面對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。
[0012]實(shí)施例1
(1)預(yù)處理:取100g解凍的鱈魚(yú)魚(yú)白置于組織搗碎機(jī)中，加入100mL0.5%NaCl溶 液，用三層紗布過(guò)濾得漿液；
(2)離心:3500r/min15分鐘，去上清，收集沉淀；
(3)提取:向沉淀中加入50ml3%的硫酸提取I小時(shí)；
(4)過(guò)濾:收集濾液；
(5)吸附:在濾液中加入1%的硅藻土，攪拌I小時(shí)；
(6)過(guò)濾:收集濾液；
(7)用乙醇進(jìn)行沉淀、脫水、干燥。濾液中加入95%的乙醇，使得酒精度為60%，靜置10小時(shí)，離心，收集沉淀，用無(wú)水乙醇脫水，真空干燥。
[0013]對(duì)產(chǎn)品各項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)，將結(jié)果記錄于表1。
[0014]實(shí)施例2
(1)預(yù)處理:取100g解凍的鱈魚(yú)魚(yú)白置于組織搗碎機(jī)中，加入300ml2%NaCl溶液，
用三層紗布過(guò)濾得漿液；
(2)離心:3500r/min15分鐘，去上清，收集沉淀；
(3)提取:向沉淀中加入150ml5%的硫酸提取2.5小時(shí)；
(4)過(guò)濾:收集濾液；
(5)吸附:在濾液中加入5%的娃藻土,攪拌1.5小時(shí)
(6)過(guò)濾:收集濾液；
(7)用乙醇進(jìn)行沉淀、脫水、干燥。濾液中加入95%的乙醇，使得酒精度為75%，靜置14小時(shí)，離心，收集沉淀，用無(wú)水乙醇脫水，真空干燥。
[0015]對(duì)產(chǎn)品各項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)，將結(jié)果記錄于表1。
[0016]實(shí)施例3
(1)預(yù)處理:取100g解凍的鱈魚(yú)魚(yú)白置于組織搗碎機(jī)中，加入500ml3%NaCl溶液，
用三層紗布過(guò)濾得漿液；
(2)離心:3500r/min15分鐘，去上清，收集沉淀；
(3)提取:向沉淀中加入300ml10%的硫酸提取4小時(shí)；
(4)過(guò)濾:收集濾液；
(5)吸附:在濾液中加入10%的硅藻土，攪拌2小時(shí)；(6)過(guò)濾:收集濾液；
(7)用乙醇進(jìn)行沉淀、脫水、干燥。濾液中加入95%的乙醇,使得酒精度為85%,靜置16小時(shí)，離心，收集沉淀，用無(wú)水乙醇脫水，真空干燥。
[0017]對(duì)產(chǎn)品各項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)，將結(jié)果記錄于表1。
[0018]對(duì)比例
(1)預(yù)處理:取100g解凍的鱈魚(yú)魚(yú)白置于組織搗碎機(jī)中，加入500ml3%NaCl溶液，
用三層紗布過(guò)濾得漿液；
(2)離心:3500r/min15分鐘，去上清，收集沉淀；
(3)提取:向沉淀中加入300ml10%的硫酸提取4小時(shí)；
(4)過(guò)濾:收集濾液；
(5)用乙醇進(jìn)行沉淀、脫水、干燥。濾液中加入95%的乙醇，使得酒精度為80%，靜置12小時(shí)，離心，收集沉淀，用無(wú)水乙醇脫水，真空干燥。
[0019]對(duì)產(chǎn)品各項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)，將結(jié)果記錄于表1。
[0020]表1
【權(quán)利要求】
1.一種鱈魚(yú)硫酸魚(yú)精蛋白的制備方法，其特征包括如下步驟: (1)預(yù)處理:取解凍的鱈魚(yú)魚(yú)白置于組織搗碎機(jī)中，加入NaCl溶液，用三層紗布 過(guò)濾得漿液； (2)(離心:3500r/min15分鐘，去上清，收集沉淀； (3)提取:向沉淀中加入硫酸進(jìn)行提取； (4)過(guò)濾:收集濾液； (5)吸附:在濾液中加入娃藻土,攪拌1-2小時(shí)； (6)過(guò)濾:收集濾液； (7 )用乙醇進(jìn)行沉淀、脫水、干燥。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種鱈魚(yú)硫酸魚(yú)精蛋白的制備方法，其特征是所述步驟(1)中NaCl溶液的濃度為0.5%-3%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種鱈魚(yú)硫酸魚(yú)精蛋白的制備方法，其特征是所述步驟(3)中硫酸溶液濃度為3%-10%，提取時(shí)間為1-4小時(shí)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種鱈魚(yú)硫酸魚(yú)精蛋白的制備方法，其特征是所述步驟(5)中所加硅藻土的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%_10%。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的 一種鱈魚(yú)硫酸魚(yú)精蛋白的制備方法，其特征是所述步驟(7)中，所用乙醇的量為使得沉淀后的酒精度為60%-85%，沉淀10小時(shí)以上。
【文檔編號(hào)】C07K14/435GK103923199SQ201310009731
【公開(kāi)日】2014年7月16日 申請(qǐng)日期:2013年1月11日 優(yōu)先權(quán)日:2013年1月11日
【發(fā)明者】李萍, 張永勤, 曲輝, 張春革 申請(qǐng)人:青島亞博生物科技有限公司