組合物。 優(yōu)選的緩沖液的抑范圍約為6. 0到8. 0,優(yōu)選為6. 5到7. 5,更優(yōu)選為6. 7-7. 0。例如，可W 使用濃度為約0. 1-0. 25mol/L、優(yōu)選0. 15-0. 2mol/L的氯化鋼來溶解或稀釋組合物。再例 女口，使用的磯酸緩沖液的濃度為0. 02-0. 2mol/l，優(yōu)選為0. 05-0. 15mol/L〇
[0027] 在某些實施方案中，本發(fā)明的抗癌活性成分膠原酶II在注射劑中的濃度 為 0. 5-250, OOOU/ml，優(yōu)選為 25-25, OOOU/ml，更優(yōu)選為 50-25, OOOU/ml，最優(yōu)選為 300-10,OOOU/ml。
[002引本發(fā)明所用的膠原酶II可W自制，也可W商購。可W是重組的蛋白，也可W是從人 及動物組織細(xì)胞分離純化的。在一優(yōu)選實施方案中，膠原酶II從Life Technologies公司 購得，冷凍干燥的膠原酶II的酶活力為34200U/100mg/支，用無熱原的鹽水重新溶解至所 需的濃度。所有酶的活性都W每mg國際單位表示。一個單位膠原酶活性的定義為在巧離 子存在時，在溫度為37C W及抑為7. 4的條件下，5小時內(nèi)能從天然膠原釋放膚（相當(dāng)于 巧H麗顏色）成1微摩爾k亮氨酸的膠原酶量?？蒞按本領(lǐng)域已知的方法確定膠原酶和 其它酶的活性。Gokcen等人的美國專利No. 5, 116, 615公開了膠原酶分析的實例，本文將其 納入作為參考。
[0029] 另一方面，提供了本發(fā)明的組合物在治療前列腺癌中的用途。
[0030] 本文所用的"治療"包括抑制、治愈和減輕前列腺癌或其癥狀W及預(yù)防或延緩前列 腺癌的轉(zhuǎn)移。
[0031] 另一方面，提供了本發(fā)明的組合物在制備用于治療前列腺癌的藥物中的用途。在 優(yōu)選的實施方案中，所述藥物的有效成分為MMP-8、MMP-12或其組合。在更優(yōu)選的實施方案 中，所述抗癌有效成分為MMP-8,即膠原酶II。
[0032] 在優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的抗癌有效成分、優(yōu)選為膠原酶II的給藥劑量為每 千克個體體重給予0.0 l到5, 000, 000U，優(yōu)選為10到500, 000U，更優(yōu)選為10-50, 000U，例如 為10-1，000U。膠原酶II的劑量在實際應(yīng)用時可W按照醫(yī)生的要求選用。
[0033] 給藥劑量可W按患者的年齡、病癥的特性、腫瘤體積、組合物的效力及給藥途徑變 化。例如，對小于5g的腫瘤，可W應(yīng)用單次灌輸?shù)膭┝?。灌輸劑量可W為3-5ml，緩慢地將 藥物注射入腫瘤，如約5-10分鐘。如果需要在此注射后還可再次注射。當(dāng)腫瘤為5到IOg 時，在第一次注射劑量后還可W再次施用較大劑量的抗癌組合物。例如，第一次施用5ml灌 注劑量。然后，緩慢地施用第二份20-40ml的相同組合物，例如給藥時間為10-20分鐘。如 果需要可W順序給藥，但一般不超過80ml總體積。例如，可W再次應(yīng)用送種治療，如每周或 每月給藥一次。對于大于10到15g的腫瘤，第一次給藥的灌注劑量可W至多為50ml，隨后 可W應(yīng)用更大的劑量，但一般不超過80ml的總體積。
[0034] 在某些實施方案中，上述藥物W注射、灌注或植入的方式給藥，優(yōu)選地，所述藥物 經(jīng)局部給藥。將此組合物局部應(yīng)用于前列腺。局部給藥包括將藥物應(yīng)用于前列腺和/或癌 細(xì)胞或腫瘤內(nèi)或其附近，優(yōu)選為腫瘤內(nèi)。局部給藥還包括用藥物包圍前列腺和/或癌性腫 瘤或?qū)⑺幬飸?yīng)用于前列腺和/或癌性腫瘤的表面。在一實施方案中，將藥物通過直接的前 列腺內(nèi)注射或灌注給藥于癌癥局部。例如，小容量如約2ml或更少的藥物通過注射給藥。而 較大的容量如6ml W上的藥物則通過緩慢灌注約10-30分鐘給藥。
[0035] 在優(yōu)選的實施方案中，所述藥物經(jīng)前列腺內(nèi)注射、前列腺癌內(nèi)或癌周注射、或前列 腺癌手術(shù)后瘤腔內(nèi)注射給藥，優(yōu)選地經(jīng)前列腺癌內(nèi)注射給藥。在另一實施方案中，所述藥物 經(jīng)前列腺內(nèi)植入、前列腺癌內(nèi)或癌周植入、或前列腺癌手術(shù)后瘤腔內(nèi)植入給藥，優(yōu)選地經(jīng)前 列腺癌內(nèi)植入給藥。
[0036] 可選地，可W通過任意其他方式，將酶特異性導(dǎo)向前列腺內(nèi)、前列腺癌內(nèi)或前列腺 癌周圍。可W選用的方式例如利用不同的載體系統(tǒng)將組合物遞送到所需的部位。通常，合適 的載體將治療劑遞送到其祀點而不會喪失特異性或反應(yīng)性。優(yōu)選地，載體能與治療性酶連 接且可保持復(fù)合物狀態(tài)直到遞送完成?？蒞應(yīng)用緩釋組合物，例如可W用緩釋植入法提供 送種制劑，或W微膠囊或吸附于生物可降解聚合物提供送種制劑。其它載體系統(tǒng)文獻已有 描述，例如將酶制劑包埋在生物可降解小泡中的方法，W保護酶的活性且有利于特異性遞 送。將組織特異性蛋白質(zhì)（單克隆抗體）附著于送些小泡，可W實現(xiàn)對細(xì)胞病理特異性位 點的定位。例如可W將酶包埋在脂質(zhì)體或其它生物可降解微膠囊中，與用于特異性定位的 組織特異性單克隆抗體相連。各種形式的酶包埋技術(shù)可用于包埋酶，包括但不限于活細(xì)胞 空胞、合成的聚合物微膠囊W及由膽固醇、卵磯脂和磯脂酸構(gòu)成的脂類小泡（脂質(zhì)體）等。 用受體本身的紅細(xì)胞遞送活性酶可W避免由潛在的在合成載體（如脂質(zhì)體和微膠囊）中應(yīng) 用酶所引起的免疫和生理問題。將聚己二醇（陽G)共價連接于酶可W使送些蛋白質(zhì)無免疫 原性，延長它們的循環(huán)半衰期，從而逃避天然酶抑制劑的抑制作用，而且可W在減少自體溶 解的情況下提高酶活性。PEG與蛋白質(zhì)的連接可W采用本領(lǐng)域公知的方法來實現(xiàn)，此外通過 超濾純化可W得到均勻的反應(yīng)產(chǎn)物。
[0037] 另一方面，提供了用本發(fā)明的組合物治療前列腺癌的方法，該方法包括給予患病 個體治療有效量的抗癌活性成分。優(yōu)選地，所述抗癌活性成分為膠原酶II、MMP-12或其組 合。更優(yōu)選地，所述抗癌活性成分為膠原酶II。
[0038] 在優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的抗癌有效成分、優(yōu)選為膠原酶II的給藥劑量為每 千克個體體重給予0.0 l到5, 000, 000U，優(yōu)選為10到500, 000U，更優(yōu)選為10-50, 000U，例如 為 10-1，000U。
[0039] 在實際應(yīng)用中，為了保證給藥的精確性，即組合物是否能施予前列腺細(xì)胞或腫瘤 的附近或進入它們，泌尿科醫(yī)生通?？蒞通過如成像得到前列腺圖像（可W在診斷過程和 前列腺活體檢查過程中得到）。
[0040] 在優(yōu)選實施方案中，局部給予治療有效量的組合物來治療前列腺癌。優(yōu)選地，該量 足W降解前列腺腫瘤、腫瘤間質(zhì)、間質(zhì)內(nèi)血管、腫瘤細(xì)胞及各種細(xì)胞因子，治愈或減輕前列 腺癌。
[0041] 如上所述，可W選擇經(jīng)前列腺內(nèi)注射藥物。前列腺內(nèi)注射可W經(jīng)腹膜或經(jīng)直腸 路徑，所應(yīng)用的組合物的給藥體積為0.0 Olml到80ml，濃度為0. 5-250, OOOU/ml，優(yōu)選為 25-25, OOOU/ml，更優(yōu)選為 50-25, OOOU/ml，最優(yōu)選為 300-10, OOOU/ml。
[0042] 為了使注射的組合物發(fā)揮最佳效應(yīng)，可W用充氣囊擴張前列腺尿道。通過膀脫鏡 插入的囊，抑制注射入的酶溶液通過多孔管道系統(tǒng)（流注入尿道）的立即溢出。送種注射 方法的優(yōu)點是此方法能直接用膀脫鏡觀察病損的瘤狀區(qū)域。在前列腺直接注射的過程中， 患者所經(jīng)受的痛苦和不適最小?？蒞選用的注射途經(jīng)在其他文獻已有描述。
[0043] 本發(fā)明抗癌組合物中的有效成分較單一，療效易于控制和確認(rèn)；伴隨的毒副作用 小。而且，在一些實施方案中，抗癌有效成分W相當(dāng)?shù)偷膭┝烤湍軌蛉〉妹黠@的抗癌功效， 例如給藥劑量為l〇U-900U/kg個體體重的膠原酶II能夠顯著抑制腫瘤的生長。
[0044] 本申請所述的"個體"，是指哺乳動物，包括但不限于靈長類動物、牛、馬、豬、綿羊、 山羊、狗、貓W及諸如大鼠和小鼠的喃齒類動物。
[0045] 本文中，有效成分、活性成分W及活性組分可W交替使用，除非另有所指。MMP-8與 膠原酶II可W交替使用。
[0046] 本說明書和權(quán)利要求書中，詞語"包括"、"包含"和"含有"意指"包括但不限于"， 且并非意圖排除其他部分、添加物、組分、或步驟。
[0047] 應(yīng)該理解，在本發(fā)明的特定方面、實施方案或?qū)嵤├忻枋龅奶卣?、特性、組分或 步驟，可適用于本文所描述的任何其他的方面、實施方案或?qū)嵤├?，除非與之矛盾。
[0048] 上述公開內(nèi)容總體上描述了本發(fā)明，通過下面的實施例進一步示例本發(fā)明。描述 送些實施例僅為說明本發(fā)明，而不是限制本發(fā)明的范圍。盡管本文中使用了特殊的術(shù)語和 值，送些術(shù)語和值同樣被理解為示例性的，并不限定本發(fā)明的范圍。除非特別指明，本說明 書中的實驗方法和技術(shù)為本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的方法和技術(shù)。
[004引 實施例
[0050] W下實施例中使用的實驗動物為體