用于位點(diǎn)特異性uPAR靶向的177-Lu標(biāo)記肽的制作方法
【專利說明】用于位點(diǎn)特異性uPAR靶向的177-Lu標(biāo)記肽 發(fā)明領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及用于位點(diǎn)特異性靶向尿激酶纖溶酶原激活物受體（uPAR)的177-Lu標(biāo) 記肽。更具體而言本發(fā)明涉及對與高uPAR表達(dá)相關(guān)的任何癌癥疾病的治療。特別是本發(fā) 明針對但不限于通過向患者施用有效量的177-Lu標(biāo)記肽對前列腺、乳腺和結(jié)腸直腸癌的 治療。
[0002] 發(fā)明背景
[0003] 多種放射性標(biāo)記肽組合物已被開發(fā)或正處于開發(fā)之中用于治療性放射性核素的 位點(diǎn)特異性靶向。總原則涉及將所選放射性核素附著到對特定器官或組織具有高特異性的 肽從而使得所述器官或組織能被治療性放射性同位素治療。這一研宄領(lǐng)域已顯示出特別適 用于腫瘤顯像和治療。特別理想的生物學(xué)位點(diǎn)包括但不限于神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤如腹部腫瘤和 小細(xì)胞肺癌、腦腫瘤、前列腺腫瘤、乳腺腫瘤、結(jié)腸腫瘤和卵巢腫瘤。
[0004] D0TA(1，4,7, 10-四（羧甲基）-1，4,7, 10四氮雜環(huán)十二烷）及其衍生物構(gòu)成用于 生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用的重要螯合劑類別，因?yàn)槠浞浅７€(wěn)定地容納多種二價(jià)和三價(jià)金屬離子。一個(gè) 新興領(lǐng)域是在診斷和治療性核腫瘤學(xué)的不同領(lǐng)域中使用螯合劑綴合的生物活性肽用放射 性金屬進(jìn)行標(biāo)記。NODAGA及其衍生物構(gòu)成用于生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用的另一類重要螯合劑。
[0005] mLu-標(biāo)記肽用于核素靶向療法被成功引入對神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤的治療，且目前正 在臨床前癌癥模型中評價(jià)若干新靶，包括整聯(lián)蛋白、Her-2、胃泌素釋放肽（GRP)和血管內(nèi) 皮生長因子（VEGF)。
[0006] uPAR PET顯像已在幾種人類癌癥異種移植物模型中開發(fā)，使用小的線性DOTA-綴 合肽，D0TA-AE105,用 64Cu (Persson et al, 2011)和 68Ga (Persson 等人，2012)作放射性標(biāo) 記。
[0007] 惡性腫瘤能夠降解周圍的胞外基質(zhì)，導(dǎo)致局部侵襲或轉(zhuǎn)移。尿激酶型纖溶酶原激 活物（uPA)及其細(xì)胞表面受體（uPAR)在體外和體內(nèi)都是細(xì)胞表面關(guān)聯(lián)的纖溶酶原激活的 中樞分子。在許多類型的人類癌癥中uPA和uPAR的高表達(dá)與惡性腫瘤生長相關(guān)且伴有差 預(yù)后，可能表明uPA/uPAR系統(tǒng)在癌癥進(jìn)展和轉(zhuǎn)移中的因果作用。免疫組化和原位雜交研宄 表明，來自uPA系統(tǒng)組分的表達(dá)水平通常在正常組織和良性病變中非常低。還已報(bào)道uPA/ uPAR系統(tǒng)通過充當(dāng)玻連蛋白的粘附受體和通過調(diào)節(jié)整聯(lián)蛋白功能而涉及調(diào)節(jié)細(xì)胞-胞外 基質(zhì)相互作用?；谶@些特性，因此認(rèn)為uPA/uPAR系統(tǒng)是引人注目的癌癥治療靶。
[0008] WO 01/25410描述了診斷或治療性標(biāo)記的uPAR靶向蛋白質(zhì)和肽。所述肽或蛋白質(zhì) 包含至少38個(gè)氨基酸殘基，包括uPA的uPAR結(jié)合位點(diǎn)的殘基13-30。
[0009] US 6, 277, 818描述了可與診斷標(biāo)記綴合的uPAR靶向環(huán)肽化合物。所述肽基于uPA 的氨基酸殘基20-30。
[0010] US 6, 514, 710也涉及對uPAR具有親和性的環(huán)肽。所述肽可攜帶可檢測標(biāo)記。所 述肽包含由連接單元相連的11個(gè)氨基酸。
[0011] Ploug等人在Biochemistry 2001，40, 12457-12168描述了 uPAR祀向肽，但不是在 顯像情境中，其包括本文件中描述的氨基酸序列。類似公開內(nèi)容提供在US 7, 026, 282中。
[0012] DADACHOVA, E. (''Cancer Therapy with Alpha-Emitters Labe led Peptides"，Seminars In Nuclear Medicine (2010)，Vol. 40,Issue 3,Pages 204-208)公 開了 213-Bi標(biāo)記的uPAR結(jié)合肽綴合物，其中肽通過DOTA與213-Bi偶聯(lián)。所述肽用于治 療癌癥。
[0013] GUHA，A. C.等人（"Tumor Biology-Guided Radiotherapy Treatment Planning:Gross Tumor Volume Versus Functional Tumor Volume"，Seminars In Nuclear Medicine(2008), Vol. 38, Issue 2, Pages 105-113)公開了放射性金屬如 177-Lu 用于標(biāo)記 抗體來用于放射免疫療法。該文件還描述了放射性金屬可通過金屬螯合劑與功能性結(jié)合劑 如uPAR結(jié)合肽綴合。
[0014] JIANG L.等人（"Preliminary evaluation of(177)Lu-labeled knottin peptides for integrin receptor-targeted radionuclide therapy^, Eur. J. NucI. Med. Mol. Imaging(2011), Vol. 38, Issue 4, pages 13-22)公開了經(jīng)改造以結(jié)合整聯(lián)蛋白受體的 半胱氨酸結(jié)肽，其經(jīng)由放射性金屬螯合劑DOTA而用177-Lu作放射性標(biāo)記，和使用這種肽對 整聯(lián)蛋白陽性腫瘤進(jìn)行放射療法。
[0015] W02007134274A2公開了通過使用與177-Lu綴合的結(jié)合uPAR的配體來殺傷癌癥干 細(xì)胞的方法。
[0016] 由于化學(xué)和生理學(xué)不確定性，在特定綴合系統(tǒng)中選擇特定放射性核素并非無關(guān)重 要。例如用177-Lu替換213-Bi并非顯而易見，因?yàn)?13-Bi是α粒子發(fā)射體并因此在臨 床上與β粒子發(fā)射體177-Lu關(guān)系疏遠(yuǎn)。
[0017] 對uPAR的有效祀向需要在化學(xué)上牢固和穩(wěn)定的選擇性高親和載體。
[0018] 發(fā)明概述
[0019] 本發(fā)明提供具有對uPAR的高親和性、在細(xì)胞結(jié)合系統(tǒng)中的高效力和經(jīng)證實(shí)的生 物學(xué)穩(wěn)定性的177-Lu標(biāo)記肽。更具體而言本發(fā)明涉及對與高uPAR表達(dá)相關(guān)的癌癥疾病的 治療。特別是本發(fā)明針對但不限于通過向患者施用有效量的177-Lu標(biāo)記肽對前列腺、乳腺 和結(jié)腸直腸癌的治療。
[0020] 在第一方面本發(fā)明涉及177-Lu標(biāo)記的uPAR結(jié)合肽綴合物，其中所述肽通過螯合 劑與177-Lu偶聯(lián)。
[0021] 在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及177-LU標(biāo)記的肽綴合物，其中所述肽通過 螯合劑與177-Lu偶聯(lián)，所述肽選自下組：
[0022] (D-Asp) - ([ β ]-環(huán)己基-L-丙氨酸）-(Phe) - (D-Ser) - (D-Arg) - (Tyr) - (Leu) - (Tr p)-(Ser),
[0023] (Ser) - (Leu) _([ β ]_ 環(huán)己基-L-丙氨酸）-(Phe) - (D-Ser) - (Gln) - (Tyr) (Leu) - (Trp) - (Ser),
[0024] (D-Glu) - ([ β ]-環(huán)己基-L-丙氨酸）-(Phe) - (D-Ser) - (D-Tyr) - (Tyr) - (Leu) - (Tr p)-(Ser),
[0025] (Asp) - ([ β ]-環(huán)己基-L-丙氨酸）-(Phe) - (D-Ser) - (D-Arg) - (Tyr) - (Leu) - (Trp) -(Ser),
[0026] (Asp) - ([ β ]-環(huán)己基-L-丙氨酸）-(Phe) - (Ser) - (D-Arg) - (Tyr) -Leu) - (Trp) - (S er),
[0027] (D-Asp) - ([ β ]-環(huán)己基-L-丙氨酸）-(Phe) - (Ser) - (D-Arg) - (Tyr) -Leu) - (Trp) -(Ser),
[0028] (D-Thr) - ([ β ]-環(huán)己基-L-丙氨酸）-(Phe) - (D-Ser) - (D-Arg) - (Tyr) - (Leu) - (Tr p)-(Ser),
[0029] (D-Asp) - ([ β ]-環(huán)己基-L-丙氨酸）-(Phe) - (D-Ser) - (D-Arg) - (Tyr) - (Leu)-([ β ]-2-萘基-L-丙氨酸）-(Ser)，
[0030] (Asp) - ([ β ]-環(huán)己基-L-丙氨酸）-(Phe) - (D-Ser) - (Arg) - (Tyr) - (Leu) - (Trp)-( Ser),
[0031] (Asp) - ([ β ]_ 環(huán)己基-L-丙氨酸）-(Phe) - (D-Se