本發(fā)明涉及植物提取
技術(shù)領(lǐng)域：
，尤其涉及一種鐵皮石斛提取物及其制劑的制備方法。
背景技術(shù)：
：鐵皮石斛(拉丁學(xué)名：DendrobiumofficinaleKimuraetMigo)，是我國(guó)名貴中草藥，系蘭科石斛屬植物的干燥莖，因表皮呈鐵綠色而得名，具有生津滋陰、明目養(yǎng)胃、補(bǔ)腎強(qiáng)身等功效。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，石斛屬植物中的主要藥效成分為多糖、生物堿、糖苷、菲類、聯(lián)芐類和氨基酸等。多糖在鐵皮石斛中的含量高，且具有良好的抗腫瘤、抗氧化和增強(qiáng)免疫力等作用。鐵皮石斛的鮮莖可直接食用，或燉湯，或泡茶，或浸酒，通常加工成干品，如鐵皮楓斗、鐵皮石斛功能性飲料等。近年來(lái)以鐵皮石斛為原料生產(chǎn)的高級(jí)保健品越來(lái)越多，暢銷歐美及東南亞沿海發(fā)達(dá)地區(qū)?，F(xiàn)有的鐵皮石斛提取方法大多采用有機(jī)溶劑作為提取液(例如：甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等)，采用有機(jī)溶劑對(duì)鐵皮石斛進(jìn)行提取對(duì)設(shè)備要求低，容易操作，成本低。但產(chǎn)品中有效成分的含量較低，分子量較大、且有機(jī)溶劑的殘留降低了產(chǎn)品的安全性。并且，現(xiàn)有的產(chǎn)品主要為烘干粉碎粉，水溶性較差，產(chǎn)品形態(tài)不好，影響了人體對(duì)活性物質(zhì)的吸收。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：有鑒于此，本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題在于提供一種鐵皮石斛提取物及其制劑的制備方法，本發(fā)明提供的制備方法制得的鐵皮石斛提取物中多糖含量豐富，收率較高。制得的提取物不易結(jié)塊，形態(tài)較好。本發(fā)明提供的鐵皮石斛提取物的制備方法，包括：步驟1：鐵皮石斛與4倍～12倍質(zhì)量的水混合，過(guò)膠體磨后，加熱至95℃以上保持20min～60min，然后降溫至50℃～60℃，制得漿液；步驟2：所述漿液依次經(jīng)植物水解酶和堿性蛋白酶水解后，經(jīng)加熱滅酶、冷卻后進(jìn)行超濾，取濾液；步驟3：所述濾液經(jīng)濃縮后與微晶纖維素、β-環(huán)糊精混合后，加熱至40℃保持30min，然后噴霧干燥，制得鐵皮石斛提取物；所述植物水解酶與鐵皮石斛的質(zhì)量比為(0.1～2.0)：100；所述植物水解酶水解的條件為：pH值3.0～4.0；55℃酶解50～150min；所述堿性蛋白酶與鐵皮石斛的質(zhì)量比為(0.1～2.0)：100；所述堿性蛋白酶水解的條件為：pH值8.0～8.5；50℃酶解50～150min；所述超濾的分子量為10kDa；所述濃縮至濃縮液中固形物質(zhì)量分?jǐn)?shù)為25％～40％；所述微晶纖維素與所述濃縮液的質(zhì)量比為(0.2～1.0)：100；所述β-環(huán)糊精與所述濃縮液的質(zhì)量比為(0.4～0.8)：100。本發(fā)明采用的是鐵皮石斛干燥莖(或新鮮莖)進(jìn)行提取，提取前經(jīng)洗凈、粉碎。粉碎至粒度為80～120目。一些實(shí)施例中，鐵皮石斛與4倍質(zhì)量的水混合，過(guò)膠體磨。另一些實(shí)施例中，鐵皮石斛與12倍質(zhì)量的水混合，過(guò)膠體磨。另一些實(shí)施例中，鐵皮石斛與10倍質(zhì)量的水混合，過(guò)膠體磨。本發(fā)明實(shí)施例中，所述膠體磨的功率為7.5KW，轉(zhuǎn)速為2900R/min，乳化細(xì)度為2μm。過(guò)膠體磨后，加熱至95℃～100℃。一些實(shí)施例中，保持60min后降溫至50℃；另一些實(shí)施例中，保持40min后降溫至60℃；另一些實(shí)施例中，保持20min后降溫至55℃。經(jīng)過(guò)膠體磨后，漿液中鐵皮石斛被粉碎，以便更好的進(jìn)行酶解。植物水解酶是多種酶的混合物，含有很強(qiáng)的果膠裂解酶和各種碳水化合物酶，包括阿拉伯聚糖酶、纖維素酶、葡聚糖酶、半纖維素酶和木聚糖酶等。該酶還對(duì)支鏈型果膠類似物如在大豆細(xì)胞壁中發(fā)現(xiàn)的纖維素具有活性，常用的復(fù)合植物水解酶為經(jīng)選育的曲霉屬(Aspergillusaculeatus)菌株生產(chǎn)。本發(fā)明采用的植物水解酶的酶活力為140萬(wàn)u/g。一些實(shí)施例中，所述植物水解酶與鐵皮石斛的質(zhì)量比為0.1：100；所述植物水解酶水解的條件為：pH值3.0；55℃酶解50min；所述堿性蛋白酶與鐵皮石斛的質(zhì)量比為0.1：100；所述堿性蛋白酶水解的條件為：pH值8.0；50℃酶解50min。另一些實(shí)施例中，所述植物水解酶與鐵皮石斛的質(zhì)量比為2：100；所述植物水解酶水解的條件為：pH值4.0；55℃酶解150min；所述堿性蛋白酶與鐵皮石斛的質(zhì)量比為2：100；所述堿性蛋白酶水解的條件為：pH值8.5；50℃酶解150min。另一些實(shí)施例中，所述植物水解酶與鐵皮石斛的質(zhì)量比為0.5：100；所述植物水解酶水解的條件為：pH值3.5；55℃酶解90min；所述堿性蛋白酶與鐵皮石斛的質(zhì)量比為0.5：100；所述堿性蛋白酶水解的條件為：pH值8.5；50℃酶解90min。所述滅酶的溫度為95℃以上5min～15min；一些實(shí)施例中，滅酶的溫度為95℃～100℃，時(shí)間為5min。另一些實(shí)施例中，滅酶的溫度為95℃～100℃，時(shí)間為15min。另一些實(shí)施例中，滅酶的溫度為95℃～100℃，時(shí)間為10min。所述濃縮采用真空濃縮，濃縮至固形物含量為25％～40％。一些實(shí)施例中，濃縮至固形物含量為30％；另一些實(shí)施例中，濃縮至固形物含量為40％。另一些實(shí)施例中，濃縮至固形物含量為35％。添加微晶纖維素是防止粉體結(jié)塊，添加環(huán)糊精是為了包埋，易于噴干。一些實(shí)施例中，所述微晶纖維素與所述濃縮液的質(zhì)量比為0.2：100；所述β-環(huán)糊精與所述濃縮液的質(zhì)量比為0.4：100。一些實(shí)施例中，所述微晶纖維素與所述濃縮液的質(zhì)量比為1：100；所述β-環(huán)糊精與所述濃縮液的質(zhì)量比為0.8：100。一些實(shí)施例中，所述微晶纖維素與所述濃縮液的質(zhì)量比為0.5：100；所述β-環(huán)糊精與所述濃縮液的質(zhì)量比為0.5：100。本發(fā)明所述噴霧干燥的蒸汽壓力為0.8MPa；進(jìn)風(fēng)溫度為180℃；排風(fēng)溫度為90℃；塔內(nèi)負(fù)壓為200KPa。噴干所得鐵皮石斛粉的收率為13.3％～18.8％；其中，鐵皮石斛多糖的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為為74.9％～78.1％，多肽的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3.4％～4.2％。分子量小于10kDa；不含有有機(jī)溶劑的殘留，且噴干后性狀良好，容易溶解。本發(fā)明制備方法制得的鐵皮石斛提取物。本發(fā)明制備方法制得的鐵皮石斛提取物在制備調(diào)節(jié)血糖的產(chǎn)品中的應(yīng)用。本發(fā)明中，所述鐵皮石斛提取物調(diào)節(jié)血糖的劑量為0.05～0.6g/kg/d。實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明提供的鐵皮石斛提取物能夠具有降低血糖的作用。本發(fā)明還提供了一種調(diào)節(jié)血糖的產(chǎn)品，其包括本發(fā)明所述制備方法制得的鐵皮石斛提取物與輔料。一些實(shí)施例中，其劑型為片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、湯劑、膏劑、露劑、口服液劑、滴丸劑、糖漿劑。一些具體實(shí)施例中，其為片劑，其輔料為檸檬酸、三氯蔗糖、乳糖、聚乙二醇、硬脂酸鎂和二氧化硅。具體的，顆粒劑中，各組分的質(zhì)量份為：一些具體實(shí)施例中，其為顆粒劑，其輔料為檸檬酸和三氯蔗糖。具體的，片劑中，各組分的質(zhì)量份為：鐵皮石斛提取物20.0份；檸檬酸1.0份；白砂糖59.0份。本發(fā)明提供的鐵皮石斛提取物制備過(guò)程中不使用有機(jī)溶劑，而是采用酶解技術(shù)水提，通過(guò)優(yōu)化酶的種類和用量，達(dá)到提高收率、提高純度的目的。制得產(chǎn)物分子量較小，溶解性能較好。實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明提供方法提取鐵皮石斛的收率為13.3％～18.8％；其中，鐵皮石斛多糖的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為為74.9％～78.1％，多肽的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3.4％～4.2％。具體實(shí)施方式本發(fā)明提供了一種鐵皮石斛提取物及其制劑的制備方法，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒本文內(nèi)容，適當(dāng)改進(jìn)工藝參數(shù)實(shí)現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動(dòng)對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是顯而易見(jiàn)的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明的方法及應(yīng)用已經(jīng)通過(guò)較佳實(shí)施例進(jìn)行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本
發(fā)明內(nèi)容、精神和范圍內(nèi)對(duì)本文的方法和應(yīng)用進(jìn)行改動(dòng)或適當(dāng)變更與組合，來(lái)實(shí)現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。本發(fā)明采用的試材皆為普通市售品，皆可于市場(chǎng)購(gòu)得。下面結(jié)合實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明：實(shí)施例1取鐵皮石斛10kg，洗凈，粉碎，加入4倍量的水，過(guò)兩遍膠體磨(參數(shù):功率為7.5KW，轉(zhuǎn)速為2900R/min，乳化細(xì)度為2μm。)，備用,加熱至95℃20分鐘，降溫至50℃，得漿液36kg，備用；取漿液，用20％的酸溶液調(diào)節(jié)pH值至3.0，加入鐵皮石斛重量10g的植物水解酶，55℃酶解50min；用20％的堿溶液調(diào)節(jié)pH值至8.0，加入鐵皮石斛重量10g的堿性蛋白酶，50℃酶解50min,備用。加熱至95℃5min進(jìn)行酶滅活，降溫至室溫，備用。取酶解液進(jìn)行過(guò)濾，得濾液31kg，濾液過(guò)10k道爾頓的超濾膜，得濾過(guò)液28kg，備用。取濾過(guò)液，真空濃縮至固形物為30％，得濃縮液5.2kg，備用。實(shí)施例2取鐵皮石斛10kg，洗凈，粉碎，加入12倍量的水，過(guò)兩遍膠體磨(參數(shù)：功率為7.5KW，轉(zhuǎn)速為2900R/min，乳化細(xì)度為2μm。)，備用。加熱至95℃以上60分鐘，降溫至60℃，得漿液106kg，備用；取漿液，用20％的酸溶液調(diào)節(jié)pH值至4.0，加入200g植物水解酶，55℃酶解150min,用20％的堿溶液調(diào)節(jié)pH值至8.5，加入200g的堿性蛋白酶，50℃酶解150min,備用。加熱至95℃15min進(jìn)行酶滅活，降溫至室溫，備用。取酶解液進(jìn)行過(guò)濾，得濾液98kg，濾液過(guò)10k道爾頓的超濾膜，得濾過(guò)液92kg，備用。取濾過(guò)液濃縮至固形物為40％，得濃縮液5.4kg，備用。實(shí)施例3取鐵皮石斛10kg，洗凈，粉碎，加入10倍量的水，過(guò)兩遍膠體磨(參數(shù)：功率為7.5KW，轉(zhuǎn)速為2900R/min，乳化細(xì)度為2μm。)，備用；加熱至95℃以上40分鐘，降溫至55℃，得漿液96kg，備用；取漿液，用20％的酸溶液調(diào)節(jié)pH值至3.5，加入50g的植物水解酶，55℃酶解90min,備用；用20％的堿溶液調(diào)節(jié)pH值至8.0，加入50g堿性蛋白酶，50℃酶解90min,備用。加熱至95℃以上10min進(jìn)行酶滅活，降溫至室溫，備用。取酶解液進(jìn)行過(guò)濾，得濾液90kg，濾液過(guò)10k道爾頓的超濾膜，得濾過(guò)液84kg，備用。取濾過(guò)液，濃縮至固形物為35％，得濃縮液6.2kg，備用；實(shí)施例4取實(shí)施例1濃縮液，加入10.4g的微晶纖維素及20.8g的β-環(huán)糊精，加熱至40度水浴30分鐘，噴霧干燥(參數(shù)：蒸汽壓力為0.8MPa；進(jìn)風(fēng)溫度為180℃；排風(fēng)溫度為90℃；塔內(nèi)負(fù)壓為200KPa。)，得鐵皮石斛提取物1.33kg；實(shí)施例5取實(shí)施例2濃縮液，加入540g微晶纖維素43.2gβ-環(huán)糊精，加熱至40度水浴30分鐘，噴霧干燥(參數(shù)：蒸汽壓力為0.8MPa；進(jìn)風(fēng)溫度為180℃；排風(fēng)溫度為90℃；塔內(nèi)負(fù)壓為200KPa。)，得鐵皮石斛提取物1.88kg。實(shí)施例6取實(shí)施例3濃縮液，加入31g的微晶纖維素及31g的β-環(huán)糊精，加熱至40度水浴30分鐘，噴霧干燥(參數(shù)：蒸汽壓力為0.8MPa；進(jìn)風(fēng)溫度為180℃；排風(fēng)溫度為90℃；塔內(nèi)負(fù)壓為200KPa。)，得鐵皮石斛提取物1.86kg。對(duì)比例1取實(shí)施例2濃縮液，加入540g的微晶纖維素，加熱至40度水浴30分鐘，噴霧干燥(參數(shù)：蒸汽壓力為0.8MPa；進(jìn)風(fēng)溫度為150℃；排風(fēng)溫度為75℃；塔內(nèi)負(fù)壓為200KPa。)，得鐵皮石斛提取物0.36kg。對(duì)比例2取實(shí)施例2濃縮液，加入43.2gβ-環(huán)糊精，加熱至40度水浴30分鐘，噴霧干燥(參數(shù)：蒸汽壓力為0.8MPa；進(jìn)風(fēng)溫度為200℃；排風(fēng)溫度為110℃；塔內(nèi)負(fù)壓為200KPa。)，得鐵皮石斛提取物0.58kg。對(duì)比例3取實(shí)施例2濃縮液，540g微晶纖維素43.2gβ-環(huán)糊精加熱至40度水浴30分鐘，噴霧干燥(參數(shù)：蒸汽壓力為0.8MPa；進(jìn)風(fēng)溫度為150℃；排風(fēng)溫度為75℃；塔內(nèi)負(fù)壓為200KPa。)，得鐵皮石斛提取物0.89kg。實(shí)施例7取實(shí)施例4制得鐵皮石斛提取物20.0g，加入1.0g檸檬酸，59.0g白砂糖及10.0g75％乙醇進(jìn)行濕法制粒，烘干，分裝成8g/袋的顆粒劑。實(shí)施例8取實(shí)施例4制得鐵皮石斛提取物20.0g，加入1.0檸檬酸，30.0白砂糖，20.0乳糖，0.5聚乙二醇及10.0g75％乙醇進(jìn)行濕法制粒，烘干，加入0.2g硬脂酸鎂及0.3g二氧化硅，壓片機(jī)進(jìn)行壓片，得鐵皮石斛壓片糖。實(shí)施例9取實(shí)施例5制得鐵皮石斛提取物20.0g，加入1.0g檸檬酸，59.0g白砂糖及10.0g75％乙醇進(jìn)行濕法制粒，烘干，分裝成8g/袋的顆粒劑。實(shí)施例10取實(shí)施例5制得鐵皮石斛提取物20.0g，加入1.0檸檬酸，30.0白砂糖，20.0乳糖，0.5聚乙二醇及10.0g75％乙醇進(jìn)行濕法制粒，烘干，加入0.2g硬脂酸鎂及0.3g二氧化硅，壓片機(jī)進(jìn)行壓片，得鐵皮石斛壓片糖。實(shí)施例11取實(shí)施例5制得鐵皮石斛提取物20.0g，加入1.0g檸檬酸，59.0g白砂糖及10.0g75％乙醇進(jìn)行濕法制粒，烘干，分裝成8g/袋的顆粒劑。實(shí)施例12取實(shí)施例6制得鐵皮石斛提取物20.0g，加入1.0檸檬酸，30.0白砂糖，20.0乳糖，0.5聚乙二醇及10.0g75％乙醇進(jìn)行濕法制粒，烘干，加入0.2g硬脂酸鎂及0.3g二氧化硅，壓片機(jī)進(jìn)行壓片，得鐵皮石斛壓片糖。實(shí)施例13：鐵皮石斛提取物多糖及蛋白含量檢測(cè)：一、多糖檢測(cè)方法(蒽酮—硫酸法)：(1)實(shí)驗(yàn)原理：多糖在硫酸作用下，先水解成單糖，并脫水生成糖醛衍生物，與苯酚生成橙黃色溶液，在490nm處有最大吸收，吸收值與糖含量呈線性關(guān)系。(2)試劑：濃硫酸(分析純)、5％苯酚溶液(分析純)、標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖。(3)操作步驟：①制作標(biāo)準(zhǔn)曲線：準(zhǔn)確稱取105℃烘干至恒重的葡萄糖50mg于500ml容量瓶中配成0.1mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液，用蒸餾水分別配成0、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1mg/ml。1ml標(biāo)準(zhǔn)液分別加入5％苯酚溶液1ml，并迅速加入濃硫酸5ml，靜置10min。搖勻，30℃放置30min后于490nm測(cè)定OD值，以葡萄糖含量為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，制作得到標(biāo)準(zhǔn)曲線。②樣品含量測(cè)定：吸取1.0ml樣品液，按照上述步驟操作測(cè)定OD490，并代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品的總糖含量。二、多肽檢測(cè)方法(參照GBT22492-2008)三、溶解度檢測(cè)(參照GB5413.29-2010)(4)檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)品檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)下表：表1：產(chǎn)品檢測(cè)結(jié)果多糖含量(％)多肽含量(％)溶解度(％)實(shí)施例475.33.498.2實(shí)施例578.13.699.0實(shí)施例674.94.298.7對(duì)比例154.62.878.6對(duì)比例250.52.678.5對(duì)比例351.02.579.0對(duì)比例1～3提取物中的多糖含量比實(shí)施例1～3低了20％左右，對(duì)比例1～3制得提取物的的溶解度比實(shí)施例低了20％左右，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，實(shí)施例1～3與對(duì)比例1～3之間，在多糖含量、多肽含量、溶解度水平上，都存在顯著性的差異(p<0.05)。表明本發(fā)明提供方法制備的提取物收率較高，多糖含量、多肽含量皆較高。說(shuō)明在提取過(guò)程中，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)沒(méi)有遭到破壞。所得產(chǎn)物溶解度良好，更加便于人們的食用。實(shí)施例14鐵皮石斛提取物功效驗(yàn)證鐵皮石斛調(diào)節(jié)血糖試驗(yàn)結(jié)果1樣品：采用上述各實(shí)施例4～6和度比例1～3所制備的鐵皮石斛水提粉樣品；2試驗(yàn)動(dòng)物：昆明種小鼠，由昆明醫(yī)學(xué)院試驗(yàn)動(dòng)物中心提供，體重18.0～22.0g。3試驗(yàn)方法與結(jié)果：取昆明種小鼠若干，隨機(jī)分為6組，如表1。分別為空白組、陽(yáng)性藥組(格列本脲片)、模型組、實(shí)施例1組、實(shí)施例2組及實(shí)施例3組。實(shí)驗(yàn)前禁食12小時(shí)后，尾靜脈注射70mg/kg的四氧嘧啶。4小時(shí)后尾靜脈注射5％葡萄糖0.4ml。實(shí)驗(yàn)的第3天待血糖升至高峰期的時(shí)候測(cè)血糖值，選血糖值＞16.6mmol/l的小鼠做為給藥對(duì)象。各組灌胃給予相應(yīng)的提取物，每天一次，陽(yáng)性藥早晚各一次，連續(xù)給藥7天。末次給藥2小時(shí)后測(cè)各組實(shí)驗(yàn)小鼠的血糖值。表2鐵皮石斛調(diào)節(jié)血糖作用組別小鼠數(shù)(只)劑量(g/kg)血糖平均值(mmol/l)正常對(duì)照組10--8.23模型組10--22.19實(shí)施例4100.18.34實(shí)施例5100.18.37實(shí)施例6100.18.25對(duì)比例1100.19.20對(duì)比例2100.19.33對(duì)比例3100.19.56陽(yáng)性對(duì)照100.18.02模型和空白比較有顯著性差異(P＜0.01)，此次實(shí)驗(yàn)的造模成功。而給予各實(shí)施例提取物的模型的血糖與給予對(duì)比例提取物的模型的血糖存在顯著性的差異(p<0.05)。且各實(shí)施例制得提取物在調(diào)節(jié)血糖方面的效果與陽(yáng)性藥物格列本脲的效果相似。以上僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本
技術(shù)領(lǐng)域：
的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，這些改進(jìn)和潤(rùn)飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3