本發(fā)明涉及保健酒技術(shù)領(lǐng)域，更具體地說(shuō)是一種具有抗風(fēng)濕活性的走馬風(fēng)提取物的制備方法。
背景技術(shù)：
走馬風(fēng)，又名紅鋪地毯，系紫金?？谱辖鹋僦参镄娜~紫金牛的全株，分布于廣西、貴州、廣東、中國(guó)臺(tái)灣等地。具有祛風(fēng)除濕，通絡(luò)止痛之功效。常用于風(fēng)濕疼痛，跌打損傷，還可用于治療肺結(jié)核，慢性支氣管炎，咳嗽氣喘，月經(jīng)不調(diào)，痛經(jīng)，產(chǎn)后惡露不盡，產(chǎn)后體弱等。公開(kāi)號(hào)為CN105030884A的發(fā)明提供了一種治療甲1型流感病毒的走馬風(fēng)提取物及其制備方法。該方法通過(guò)乙醇熱回流提取，石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，樹(shù)脂富集洗脫得到走馬風(fēng)提取物。該方法使用干燥藥材進(jìn)行熱提取法，而且提取時(shí)間短，無(wú)法將走馬風(fēng)中的有效成分充分提取出來(lái)。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的一個(gè)目的是解決至少上述問(wèn)題和/或缺陷，并提供至少后面將說(shuō)明的優(yōu)點(diǎn)。
本發(fā)明還有一個(gè)目的是提供一種具有抗風(fēng)濕活性的走馬風(fēng)提取物的制備方法，其通過(guò)將走馬風(fēng)用乙醇進(jìn)行三次長(zhǎng)時(shí)間的冷浸，然后進(jìn)行石油醚萃取和乙酸乙酯萃取，最后冷凍干燥，制得具有抗風(fēng)濕活性的走馬風(fēng)提取物，能將馬風(fēng)中的具有抗風(fēng)濕活性的有效成分充分提取出來(lái)，提高走馬風(fēng)提取物的產(chǎn)出率。
為了實(shí)現(xiàn)根據(jù)本發(fā)明的這些目的和其它優(yōu)點(diǎn)，提供了一種具有抗風(fēng)濕活性的走馬風(fēng)提取物的制備方法，包括：將新鮮走馬風(fēng)全株切成小段走馬風(fēng)，然后用體積分?jǐn)?shù)為80％的乙醇溶液作為冷浸液，進(jìn)行第一次冷浸5～7天，然后攪拌3～4h，再次進(jìn)行第二次冷浸4～6天，攪拌1～2h，最后進(jìn)行第三次冷浸3～5天，冷浸完畢后，過(guò)濾除去小段走馬風(fēng)，將乙醇減壓回收，得到第一走馬風(fēng)浸膏；然后將得到第一走馬風(fēng)浸膏進(jìn)行石油醚萃取和乙酸乙酯萃取，再將乙酸乙酯減壓回收，得到第二走馬風(fēng)浸膏；然后進(jìn)行冷凍干燥并粉碎，即制得具有抗風(fēng)濕活性的走馬風(fēng)提取物。
優(yōu)選的是，小段走馬風(fēng)的長(zhǎng)度為2～4cm。
優(yōu)選的是，冷浸過(guò)程中需確保小段走馬風(fēng)全部位于冷浸液的液面以下。
優(yōu)選的是，石油醚萃取和乙酸乙酯萃取的具體方法為：用蒸餾水將第一走馬風(fēng)浸膏完全溶解，充分?jǐn)嚢?，然后加入與蒸餾水等體積的石油醚進(jìn)行萃取，充分?jǐn)嚢?，完成萃取后將石油醚層減壓回收，繼續(xù)重復(fù)加入石油醚進(jìn)行萃取2～3次，得到含抗風(fēng)濕活性成分的水層；然后將含抗風(fēng)濕活性成分的水層用兩倍體積的水飽和的乙酸乙酯進(jìn)行萃取。
優(yōu)選的是，第一走馬風(fēng)浸膏溶解期間，若出現(xiàn)難溶物，加入占蒸餾水質(zhì)量1％～1.5％的無(wú)水乙醇進(jìn)行溶解。
優(yōu)選的是，石油醚進(jìn)行萃取的具體方法為：加入石油醚前，需靜置待蒸餾水液面平穩(wěn)后標(biāo)記液面刻度線，加入石油醚充分?jǐn)嚢韬箪o置3～5h，先用移液管和洗耳球吸取液面刻度線上方和下方的液體置于分液漏斗中，觀察液體是否分層，若分層明顯，則表示液面分層完成，然后將上層液面的石油醚層全部移取出來(lái)，將下層液面的水層繼續(xù)進(jìn)行重復(fù)萃取。
優(yōu)選的是，小段走馬風(fēng)在冷浸前需經(jīng)過(guò)以下處理：將小段走馬風(fēng)使用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5％～1.5％的醋酸溶液浸泡3～4min進(jìn)行酸化處理，然后再使用質(zhì)量分?jǐn)?shù)2％～3％的小蘇打溶液浸泡2～3min進(jìn)行堿化處理，繼續(xù)重復(fù)酸化、堿化步驟3～5次后，再用質(zhì)量分?jǐn)?shù)5％～8％的食鹽水浸泡5～10min，即可進(jìn)行下一步冷浸處理，回收使用過(guò)的醋酸溶液、小蘇打溶液和食鹽水。
優(yōu)選的是，使用過(guò)的醋酸溶液、小蘇打溶液和食鹽水的后處理方法為：將三種溶液混合制得混合液，然后將混合液與水飽和的乙酸乙酯按等體積混合進(jìn)行乙酸乙酯萃取，然后將乙酸乙酯層減壓回收，得到混合液浸膏，并在第一走馬風(fēng)浸膏進(jìn)行石油醚萃取前與第一走馬風(fēng)浸膏混合。
優(yōu)選的是，第一次冷浸完成后在攪拌期間，向冷浸液中通入SO2，待冷浸液中SO2濃度達(dá)到10～15mg/L時(shí)停止通氣。
本發(fā)明的至少包括以下有益效果：
第一、對(duì)于干燥的藥材，其可溶性成分固結(jié)吸附于組織細(xì)胞內(nèi)，浸出溶劑滲透進(jìn)入藥材必須克服化學(xué)成分之間或化學(xué)成分與組織細(xì)胞之間的吸附力，才能將其中的有效成分提取出來(lái)，而本發(fā)明選用新鮮的走馬風(fēng)作為藥材，有效減少了浸出溶劑滲透進(jìn)入藥材的阻力；
第二、通常中藥浸提采用乙醇熱回流提取，熱回流提取法容易導(dǎo)致熱不穩(wěn)定性物質(zhì)分解而丟失，同時(shí)提取時(shí)間不夠長(zhǎng)，無(wú)法將走馬風(fēng)的抗風(fēng)濕活性成分充分提取出；本發(fā)明采用乙醇冷浸法，將走馬風(fēng)第一次冷浸5～7天，然后攪拌3～4h，再次冷浸4～6天，攪拌1～2 h，最后冷浸3～5天，通過(guò)長(zhǎng)時(shí)間的冷浸能將走馬風(fēng)中的具有抗風(fēng)濕活性的有效成分充分提取出來(lái)；
第三、小段走馬風(fēng)在冷浸前需經(jīng)過(guò)重復(fù)多次的醋酸溶液浸泡酸化，小蘇打溶液浸泡堿化，以及食鹽水浸泡，酸化、堿化能將小段走馬風(fēng)莖葉的表皮細(xì)胞打破，即可方便下一步冷浸處理乙醇擴(kuò)散進(jìn)入藥材組織細(xì)胞內(nèi)；食鹽水浸泡使藥材組織細(xì)胞外的鈉離子濃度升高，從而向藥材組織細(xì)胞內(nèi)滲透，藥材內(nèi)高濃度溶液中的溶質(zhì)不斷地向周?chē)蜐舛确较驍U(kuò)散，增加藥材組織細(xì)胞的通透性，然后再進(jìn)行乙醇冷浸，從而有利于浸出抗風(fēng)濕活性成分；
第四、使用過(guò)的醋酸溶液、小蘇打溶液和食鹽水混合制得混合液，然后進(jìn)行石油醚萃取和減壓回收，得到混合液浸膏，并于第一走馬風(fēng)浸膏進(jìn)行石油醚萃取前與第一走馬風(fēng)浸膏混合，進(jìn)一步減少走馬風(fēng)中抗風(fēng)濕活性成分的丟失，減少資源的浪費(fèi)；
第五、第一次冷浸完成后在攪拌期間，向冷浸液中通入SO2，SO2是一種抗氧化劑，能保持走馬風(fēng)的天然特性，同時(shí)適量的SO2有利于冷浸液中雜質(zhì)的沉降，使冷浸液較快獲得澄清，同時(shí)也具有殺菌抑菌的作用。
本發(fā)明的其它優(yōu)點(diǎn)、目標(biāo)和特征將部分通過(guò)下面的說(shuō)明體現(xiàn)，部分還將通過(guò)對(duì)本發(fā)明的研究和實(shí)踐而為本領(lǐng)域的技術(shù)人員所理解。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做詳細(xì)說(shuō)明，以令本領(lǐng)域普通技術(shù)人員參閱本說(shuō)明書(shū)后能夠據(jù)以實(shí)施。
<實(shí)施例1>
一種具有抗風(fēng)濕活性的走馬風(fēng)提取物的制備方法，包括：將新鮮走馬風(fēng)全株切成小段走馬風(fēng)，然后用體積分?jǐn)?shù)為80％的乙醇溶液作為冷浸液，進(jìn)行第一次冷浸5天，然后攪拌3h，再次進(jìn)行第二次冷浸4天，攪拌1h，最后進(jìn)行第三次冷浸3天，冷浸完畢后，過(guò)濾除去小段走馬風(fēng)，將乙醇減壓回收，得到第一走馬風(fēng)浸膏；然后將得到第一走馬風(fēng)浸膏進(jìn)行石油醚萃取和乙酸乙酯萃取，再將乙酸乙酯減壓回收，得到第二走馬風(fēng)浸膏；然后進(jìn)行冷凍干燥并粉碎，即制得具有抗風(fēng)濕活性的走馬風(fēng)提取物(走馬風(fēng)提取物產(chǎn)出率為6.8％)。
<實(shí)施例2>
一種具有抗風(fēng)濕活性的走馬風(fēng)提取物的制備方法，包括：將新鮮走馬風(fēng)全株切成小段走馬風(fēng)，然后用體積分?jǐn)?shù)為80％的乙醇溶液作為冷浸液，進(jìn)行第一次冷浸7天，然后攪拌4h，再次進(jìn)行第二次冷6天，攪拌2h，最后進(jìn)行第三次冷浸5天，冷浸完畢后，過(guò)濾除去小段走馬風(fēng)，將乙醇減壓回收，得到第一走馬風(fēng)浸膏；然后將得到第一走馬風(fēng)浸膏進(jìn)行石油醚萃取和乙酸乙酯萃取，再將乙酸乙酯減壓回收，得到第二走馬風(fēng)浸膏；然后進(jìn)行冷凍干燥并粉碎，即制得具有抗風(fēng)濕活性的走馬風(fēng)提取物(走馬風(fēng)提取物產(chǎn)出率為7.1％)。
<實(shí)施例3>
一種具有抗風(fēng)濕活性的走馬風(fēng)提取物的制備方法，包括：將新鮮走馬風(fēng)全株切成小段走馬風(fēng)，然后用體積分?jǐn)?shù)為80％的乙醇溶液作為冷浸液，進(jìn)行第一次冷浸6天，然后攪拌3.5h，再次進(jìn)行第二次冷浸5天，攪拌1.5h，最后進(jìn)行第三次冷浸4天，冷浸完畢后，過(guò)濾除去小段走馬風(fēng)，將乙醇減壓回收，得到第一走馬風(fēng)浸膏；然后將得到第一走馬風(fēng)浸膏進(jìn)行石油醚萃取和乙酸乙酯萃取，再將乙酸乙酯減壓回收，得到第二走馬風(fēng)浸膏；然后進(jìn)行冷凍干燥并粉碎，即制得具有抗風(fēng)濕活性的走馬風(fēng)提取物(走馬風(fēng)提取物產(chǎn)出率為7.3％)。
<實(shí)施例4>
一種具有抗風(fēng)濕活性的走馬風(fēng)提取物的制備方法，包括：將新鮮走馬風(fēng)全株切成2cm小段走馬風(fēng)，然后用體積分?jǐn)?shù)為80％的乙醇溶液作為冷浸液，進(jìn)行第一次冷浸5天，然后攪拌3h，再次進(jìn)行第二次冷浸4天，攪拌1h，最后進(jìn)行第三次冷浸3天，冷浸過(guò)程中需確保小段走馬風(fēng)全部位于冷浸液的液面以下，冷浸完畢后，過(guò)濾除去小段走馬風(fēng)，將乙醇減壓回收，得到第一走馬風(fēng)浸膏；然后用蒸餾水將第一走馬風(fēng)浸膏完全溶解，溶解期間若出現(xiàn)難溶物，加入占蒸餾水質(zhì)量1％的無(wú)水乙醇進(jìn)行溶解，然后充分?jǐn)嚢?，然后加入與蒸餾水等體積的石油醚進(jìn)行萃取，充分?jǐn)嚢?，萃取完成后將石油醚層減壓回收，繼續(xù)重復(fù)萃取步驟2次，得到含抗風(fēng)濕活性成分的水層；再將得到的含抗風(fēng)濕活性成分的水層用兩倍體積的水飽和的乙酸乙酯進(jìn)行萃取，萃取完成后，將乙酸乙酯層減壓回收，得到第二走馬風(fēng)浸膏；然后進(jìn)行冷凍干燥并粉碎，即制得具有抗風(fēng)濕活性的走馬風(fēng)提取物(走馬風(fēng)提取物產(chǎn)出率為7.6％)；
其中，石油醚進(jìn)行萃取的具體方法為：加入石油醚前，需靜置待蒸餾水液面平穩(wěn)后標(biāo)記液面刻度線，加入石油醚充分?jǐn)嚢韬箪o置3h，先用移液管和洗耳球吸取液面刻度線上方和下方的液體置于分液漏斗中，觀察液體是否分層，若分層明顯，則表示液面分層完成，然后將上層液面的石油醚層全部移取出來(lái)，將下層液面的水層繼續(xù)進(jìn)行重復(fù)萃取。
<實(shí)施例5>
一種具有抗風(fēng)濕活性的走馬風(fēng)提取物的制備方法，包括：將新鮮走馬風(fēng)全株切成4cm小段走馬風(fēng)，然后用體積分?jǐn)?shù)為80％的乙醇溶液作為冷浸液，進(jìn)行第一次冷浸7天，然后攪拌4h，再次進(jìn)行第二次冷浸6天，攪拌2h，最后進(jìn)行第三次冷浸5天，冷浸過(guò)程中需確保小段走馬風(fēng)全部位于冷浸液的液面以下，冷浸完畢后，過(guò)濾除去小段走馬風(fēng)，將乙醇減壓回收，得到第一走馬風(fēng)浸膏；然后用蒸餾水將第一走馬風(fēng)浸膏完全溶解，溶解期間若出現(xiàn)難溶物，加入占蒸餾水質(zhì)量1.5％的無(wú)水乙醇進(jìn)行溶解，然后充分?jǐn)嚢?，然后加入與蒸餾水等體積的石油醚進(jìn)行萃取，充分?jǐn)嚢?，萃取完成后將石油醚層減壓回收，繼續(xù)重復(fù)萃取步驟3次，得到含抗風(fēng)濕活性成分的水層；再將得到的含抗風(fēng)濕活性成分的水層用兩倍體積的水飽和的乙酸乙酯進(jìn)行萃取，萃取完成后，將乙酸乙酯層減壓回收，得到第二走馬風(fēng)浸膏；然后進(jìn)行冷凍干燥并粉碎，即制得具有抗風(fēng)濕活性的走馬風(fēng)提取物(走馬風(fēng)提取物產(chǎn)出率為7.8％)；
其中，石油醚進(jìn)行萃取的具體方法為：加入石油醚前，需靜置待蒸餾水液面平穩(wěn)后標(biāo)記液面刻度線，加入石油醚充分?jǐn)嚢韬箪o置5h，先用移液管和洗耳球吸取液面刻度線上方和下方的液體置于分液漏斗中，觀察液體是否分層，若分層明顯，則表示液面分層完成，然后將上層液面的石油醚層全部移取出來(lái)，將下層液面的水層繼續(xù)進(jìn)行重復(fù)萃取。
<實(shí)施例6>
一種具有抗風(fēng)濕活性的走馬風(fēng)提取物的制備方法，包括：將新鮮走馬風(fēng)全株切成2～4cm小段走馬風(fēng)，然后用體積分?jǐn)?shù)為80％的乙醇溶液作為冷浸液，進(jìn)行第一次冷浸6天，然后攪拌3.5h，再次進(jìn)行第二次冷浸5天，攪拌1.5h，最后進(jìn)行第三次冷浸4天，冷浸過(guò)程中需確保小段走馬風(fēng)全部位于冷浸液的液面以下，冷浸完畢后，過(guò)濾除去小段走馬風(fēng)，將乙醇減壓回收，得到第一走馬風(fēng)浸膏；然后用蒸餾水將第一走馬風(fēng)浸膏完全溶解，溶解期間若出現(xiàn)難溶物，加入占蒸餾水質(zhì)量1.2％的無(wú)水乙醇進(jìn)行溶解，然后充分?jǐn)嚢?，然后加入與蒸餾水等體積的石油醚進(jìn)行萃取，充分?jǐn)嚢?，萃取完成后將石油醚層減壓回收，繼續(xù)重復(fù)萃取步驟2次，得到含抗風(fēng)濕活性成分的水層；再將得到的含抗風(fēng)濕活性成分的水層用兩倍體積的水飽和的乙酸乙酯進(jìn)行萃取，萃取完成后，將乙酸乙酯層減壓回收，得到第二走馬風(fēng)浸膏；然后進(jìn)行冷凍干燥并粉碎，即制得具有抗風(fēng)濕活性的走馬風(fēng)提取物(走馬風(fēng)提取物產(chǎn)出率為8％)；
其中，石油醚進(jìn)行萃取的具體方法為：加入石油醚前，需靜置待蒸餾水液面平穩(wěn)后標(biāo)記液面刻度線，加入石油醚充分?jǐn)嚢韬箪o置4h，先用移液管和洗耳球吸取液面刻度線上方和下方的液體置于分液漏斗中，觀察液體是否分層，若分層明顯，則表示液面分層完成，然后將上層液面的石油醚層全部移取出來(lái)，將下層液面的水層繼續(xù)進(jìn)行重復(fù)萃取。
<實(shí)施例7>
一種具有抗風(fēng)濕活性的走馬風(fēng)提取物的制備方法，包括：將新鮮走馬風(fēng)全株切成2cm小段走馬風(fēng)，將小段走馬風(fēng)使用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5％的醋酸溶液浸泡3min進(jìn)行酸化處理，然后再使用質(zhì)量分?jǐn)?shù)2％～3％的小蘇打溶液浸泡2～3min進(jìn)行堿化處理，繼續(xù)重復(fù)酸化、堿化步驟3次后，再用質(zhì)量分?jǐn)?shù)5％的食鹽水浸泡5min；然后用體積分?jǐn)?shù)為80％的乙醇溶液作為冷浸液，進(jìn)行第一次冷浸5天，然后攪拌3h，攪拌期間向冷浸液中通入SO2，待冷浸液中SO2濃度達(dá)到10mg/L時(shí)停止通氣；再次進(jìn)行第二次冷浸4天，攪拌1h，最后進(jìn)行第三次冷浸3天，冷浸過(guò)程中需確保小段走馬風(fēng)全部位于冷浸液的液面以下，冷浸完畢后，過(guò)濾除去小段走馬風(fēng)，將乙醇減壓回收，得到第一走馬風(fēng)浸膏；將使用過(guò)的醋酸溶液、小蘇打溶液和食鹽水混合制得混合液，然后將混合液與水飽和的乙酸乙酯按等體積混合進(jìn)行乙酸乙酯萃取，然后將乙酸乙酯層減壓回收，得到混合液浸膏，然后與第一走馬風(fēng)浸膏混合，再用蒸餾水將其完全溶解，溶解期間若出現(xiàn)難溶物，加入占蒸餾水質(zhì)量1％的無(wú)水乙醇進(jìn)行溶解，然后充分?jǐn)嚢?，然后加入與蒸餾水等體積的石油醚進(jìn)行萃取，充分?jǐn)嚢?，萃取完成后將石油醚層減壓回收，繼續(xù)重復(fù)萃取步驟2次，得到含抗風(fēng)濕活性成分的水層；再將得到的含抗風(fēng)濕活性成分的水層用兩倍體積的水飽和的乙酸乙酯進(jìn)行萃取，萃取完成后，將乙酸乙酯層減壓回收，得到第二走馬風(fēng)浸膏；然后進(jìn)行冷凍干燥并粉碎，即制得具有抗風(fēng)濕活性的走馬風(fēng)提取物(走馬風(fēng)提取物產(chǎn)出率為8.5％)；
其中，石油醚進(jìn)行萃取的具體方法為：加入石油醚前，需靜置待蒸餾水液面平穩(wěn)后標(biāo)記液面刻度線，加入石油醚充分?jǐn)嚢韬箪o置3h，先用移液管和洗耳球吸取液面刻度線上方和下方的液體置于分液漏斗中，觀察液體是否分層，若分層明顯，則表示液面分層完成，然后將上層液面的石油醚層全部移取出來(lái)，將下層液面的水層繼續(xù)進(jìn)行重復(fù)萃取。
<實(shí)施例8>
一種具有抗風(fēng)濕活性的走馬風(fēng)提取物的制備方法，包括：將新鮮走馬風(fēng)全株切成4cm小段走馬風(fēng)，將小段走馬風(fēng)使用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.5％的醋酸溶液浸泡4min進(jìn)行酸化處理，然后再使用質(zhì)量分?jǐn)?shù)3％的小蘇打溶液浸泡3min進(jìn)行堿化處理，繼續(xù)重復(fù)酸化、堿化步驟5次后，再用質(zhì)量分?jǐn)?shù)8％的食鹽水浸泡10min；然后用體積分?jǐn)?shù)為80％的乙醇溶液作為冷浸液，進(jìn)行第一次冷浸7天，然后攪拌4h，攪拌期間向冷浸液中通入SO2，待冷浸液中SO2濃度達(dá)到15mg/L時(shí)停止通氣；再次進(jìn)行第二次冷浸6天，攪拌2h，最后進(jìn)行第三次冷浸5天，冷浸過(guò)程中需確保小段走馬風(fēng)全部位于冷浸液的液面以下，冷浸完畢后，過(guò)濾除去小段走馬風(fēng)，將乙醇減壓回收，得到第一走馬風(fēng)浸膏；將使用過(guò)的醋酸溶液、小蘇打溶液和食鹽水混合制得混合液，然后將混合液與水飽和的乙酸乙酯按等體積混合進(jìn)行乙酸乙酯萃取，然后將乙酸乙酯層減壓回收，得到混合液浸膏，然后與第一走馬風(fēng)浸膏混合，再用蒸餾水將其完全溶解，溶解期間若出現(xiàn)難溶物，加入占蒸餾水質(zhì)量1.5％的無(wú)水乙醇進(jìn)行溶解，然后充分?jǐn)嚢瑁缓蠹尤肱c蒸餾水等體積的石油醚進(jìn)行萃取，充分?jǐn)嚢?，萃取完成后將石油醚層減壓回收，繼續(xù)重復(fù)萃取步驟3次，得到含抗風(fēng)濕活性成分的水層；再將得到的含抗風(fēng)濕活性成分的水層用兩倍體積的水飽和的乙酸乙酯進(jìn)行萃取，萃取完成后，將乙酸乙酯層減壓回收，得到第二走馬風(fēng)浸膏；然后進(jìn)行冷凍干燥并粉碎，即制得具有抗風(fēng)濕活性的走馬風(fēng)提取物(走馬風(fēng)提取物產(chǎn)出率為8.5％)；
其中，石油醚進(jìn)行萃取的具體方法為：加入石油醚前，需靜置待蒸餾水液面平穩(wěn)后標(biāo)記液面刻度線，加入石油醚充分?jǐn)嚢韬箪o置5h，先用移液管和洗耳球吸取液面刻度線上方和下方的液體置于分液漏斗中，觀察液體是否分層，若分層明顯，則表示液面分層完成，然后將上層液面的石油醚層全部移取出來(lái)，將下層液面的水層繼續(xù)進(jìn)行重復(fù)萃取。
<實(shí)施例9>
一種具有抗風(fēng)濕活性的走馬風(fēng)提取物的制備方法，包括：將新鮮走馬風(fēng)全株切成3cm小段走馬風(fēng)，將小段走馬風(fēng)使用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1％的醋酸溶液浸泡3.5min進(jìn)行酸化處理，然后再使用質(zhì)量分?jǐn)?shù)2.5％的小蘇打溶液浸泡2.5min進(jìn)行堿化處理，繼續(xù)重復(fù)酸化、堿化步驟4次后，再用質(zhì)量分?jǐn)?shù)6％的食鹽水浸泡8min；然后用體積分?jǐn)?shù)為80％的乙醇溶液作為冷浸液，進(jìn)行第一次冷浸6天，然后攪拌3.5h，攪拌期間向冷浸液中通入SO2，待冷浸液中SO2濃度達(dá)到12mg/L時(shí)停止通氣；再次進(jìn)行第二次冷浸5天，攪拌1.5h，最后進(jìn)行第三次冷浸4天，冷浸過(guò)程中需確保小段走馬風(fēng)全部位于冷浸液的液面以下，冷浸完畢后，過(guò)濾除去小段走馬風(fēng)，將乙醇減壓回收，得到第一走馬風(fēng)浸膏；將使用過(guò)的醋酸溶液、小蘇打溶液和食鹽水混合制得混合液，然后將混合液與與水飽和的乙酸乙酯按等體積混合進(jìn)行乙酸乙酯萃取，然后將乙酸乙酯層減壓回收，得到混合液浸膏，然后與第一走馬風(fēng)浸膏混合，再用蒸餾水將其完全溶解，溶解期間若出現(xiàn)難溶物，加入占蒸餾水質(zhì)量1.2％的無(wú)水乙醇進(jìn)行溶解，然后充分?jǐn)嚢瑁缓蠹尤肱c蒸餾水等體積的石油醚進(jìn)行萃取，充分?jǐn)嚢?，萃取完成后將石油醚層減壓回收，繼續(xù)重復(fù)萃取步驟2次，得到含抗風(fēng)濕活性成分的水層；再將得到的含抗風(fēng)濕活性成分的水層用兩倍體積的水飽和的乙酸乙酯進(jìn)行萃取，萃取完成后，將乙酸乙酯層減壓回收，得到第二走馬風(fēng)浸膏；然后進(jìn)行冷凍干燥并粉碎，即制得具有抗風(fēng)濕活性的走馬風(fēng)提取物(走馬風(fēng)提取物產(chǎn)出率為8.9％)；
其中，石油醚進(jìn)行萃取的具體方法為：加入石油醚前，需靜置待蒸餾水液面平穩(wěn)后標(biāo)記液面刻度線，加入石油醚充分?jǐn)嚢韬箪o置4h，先用移液管和洗耳球吸取液面刻度線上方和下方的液體置于分液漏斗中，觀察液體是否分層，若分層明顯，則表示液面分層完成，然后將上層液面的石油醚層全部移取出來(lái)，將下層液面的水層繼續(xù)進(jìn)行重復(fù)萃取。
<對(duì)比例1>
將新鮮走馬風(fēng)全株切成小段走馬風(fēng)，然后用體積分?jǐn)?shù)為80％的乙醇在60℃溫度下熱回流提取3h，重復(fù)3次，將回流液濃縮得到濃縮液，然后進(jìn)行石油醚萃取和乙酸乙酯萃取，萃取完后再次濃縮，冷凍干燥并粉碎，得到具有抗風(fēng)濕活性的走馬風(fēng)提取物(走馬風(fēng)提取物產(chǎn)出率為4.8％)。
<對(duì)比例2>
將新鮮走馬風(fēng)全株曬干得到干燥走馬風(fēng)藥材，然后粉碎，再用體積分?jǐn)?shù)為80％的乙醇在60℃溫度下熱回流提取3h，重復(fù)3次，將回流液濃縮至無(wú)醇味得到濃縮液，然后進(jìn)行石油醚萃取和乙酸乙酯萃取，萃取完后再次濃縮，冷凍干燥并粉碎，得到具有抗風(fēng)濕活性的走馬風(fēng)提取物(走馬風(fēng)提取物產(chǎn)出率為4.6％)。
通過(guò)將實(shí)施例1～9與對(duì)比例1～2的方法得到的具有抗風(fēng)濕活性的走馬風(fēng)提取物的產(chǎn)出率進(jìn)行對(duì)比，對(duì)比例1～2的走馬風(fēng)提取物產(chǎn)出率為4.6％～4.8％，而實(shí)施例1～3的走馬風(fēng)提取物產(chǎn)出率為6.8％～7.3％，實(shí)施例4～6的走馬風(fēng)提取物產(chǎn)出率為7.6％～8％，實(shí)施例7～9的走馬風(fēng)提取物產(chǎn)出率為8.5％～8.9％；由此可見(jiàn)通過(guò)選用新鮮走馬風(fēng)藥材經(jīng)過(guò)長(zhǎng)時(shí)間的冷浸，能有效提高具有抗風(fēng)濕活性的走馬風(fēng)提取物的產(chǎn)出率；酸化、堿化能使小段走馬風(fēng)莖葉的表皮細(xì)胞打破方便乙醇擴(kuò)散進(jìn)入藥材組織細(xì)胞內(nèi)；食鹽水浸泡使藥材組織細(xì)胞外的鈉離子濃度升高，從而向藥材組織細(xì)胞內(nèi)滲透，藥材內(nèi)高濃度溶液中的溶質(zhì)不斷地向周?chē)蜐舛确较驍U(kuò)散，增加藥材組織細(xì)胞的通透性，從而有利于浸出抗風(fēng)濕活性成分；冷浸過(guò)程中通入SO2能保持走馬風(fēng)的天然特性，同時(shí)適量的SO2有利于冷浸液中雜質(zhì)的沉降，通過(guò)這一系列的步驟進(jìn)一步提高具有抗風(fēng)濕活性的走馬風(fēng)提取物的產(chǎn)出率。
本發(fā)明的具有抗風(fēng)濕活性的走馬風(fēng)提取物可通過(guò)口服或外用的形式施用于風(fēng)濕病患者；用于口服時(shí)可將其制成片劑、緩釋片、控釋片、膠囊、滴丸、微丸、混懸劑、乳劑、散劑或顆粒劑、口服液等；外用時(shí)可制成膏藥使用。
盡管本發(fā)明的實(shí)施方案已公開(kāi)如上，但其并不僅僅限于說(shuō)明書(shū)和實(shí)施方式中所列運(yùn)用，它完全可以被適用于各種適合本發(fā)明的領(lǐng)域，對(duì)于熟悉本領(lǐng)域的人員而言，可容易地實(shí)現(xiàn)另外的修改，因此在不背離權(quán)利要求及等同范圍所限定的一般概念下，本發(fā)明并不限于特定的細(xì)節(jié)和這里示出與描述的實(shí)施例。