啤酒花天然藥物組合物的制備方法及新用途
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了從?？浦参锲【苹ㄖ刑崛≈苽湟渣S腐酚、異黃腐酚、8-異戊烯基柚皮素、6-異戊烯基柚皮素、α-酸及β-酸為主要成分的組合物，首次經(jīng)體外實(shí)驗(yàn)證明具有抑制脂肪酶的活性，該組合物具有在制備抑制脂肪酶作用的藥物中的新用途。
【專利說(shuō)明】啤酒花天然藥物組合物的制備方法及新用途

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及以黃腐酚、異黃腐酚、8-異戊烯基柚皮素、6-異戊烯基柚皮素、α-酸 及β -酸為主要成分的組合物的制備方法及新用途，具體的說(shuō)，就是主要含有黃腐酚、異黃 腐酚、8_異戊烯基柚皮素、6-異戊烯基柚皮素 、α -酸及β -酸的啤酒花天然藥物組合物具 有抑制脂肪酶作用，本發(fā)明屬于醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002]目前脂肪酶抑制劑的來(lái)源主要有化學(xué)合成、天然植物提取物和微生物代謝產(chǎn)物 等。Gargonuri等人（1997年）發(fā)現(xiàn)化學(xué)合成的有機(jī)磷化合物對(duì)脂肪酶有明顯的抑制作用， 但這類脂肪酶抑制劑主要用于研究脂肪酶催化反應(yīng)機(jī)理。脂肪酶抑制劑就是專門用來(lái)對(duì)付 脂肪酶的降脂減肥藥。在脂肪酶抑制劑的作用下，脂肪酶將失去部分的分解能力，因而大約 有三分之一的脂肪沒(méi)有被脂肪酶分解，隨食渣一起被排出體外。脂肪酶抑制劑就是它能將 人攝入的部分脂肪在進(jìn)入體血液之前就排出了體外，這樣可以從脂肪的源頭控制脂肪在人 體內(nèi)的聚積?；瘜W(xué)脂肪酶抑制藥物主要為奧利司他，但是長(zhǎng)期服用副作用較大。目前用于 治療肥胖的脂肪酶抑制劑主要來(lái)源于植物提取物和微生物發(fā)酵產(chǎn)物。
[0003] 啤酒花為?？浦参锲【苹↙·未成熟帶花果穗。啤酒花味苦、性 平，有健胃、消食、利尿、安神、止咳化痰之功效，用于治療食欲不振、腹脹、肺結(jié)核、胸膜炎、 失眠、癔病、浮腫、膀胱炎等。啤酒花主要含有樹脂類、黃酮類及多酚類成分。黃腐酚為主 要且特殊化學(xué)成分，具有抗艾滋病毒、抗癌、抗氧化、抗炎、抗菌、抑制骨質(zhì)增生、抑制甘油二 酯?；D(zhuǎn)移酶的活性及預(yù)防動(dòng)脈硬化和糖尿病、雌激素作用，并且其食用安全(楊小蘭，食 品科學(xué)， 2〇〇7)。啤酒花含有的α-酸及β-酸也是主要化學(xué)成分，具有抗菌、抗腫瘤、抗氧 化作用（馬永花，時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,20〇7)啤酒花中含有的黃腐酚對(duì)實(shí)驗(yàn)性小鼠血糖、甘油三酸 酯、飲水量、白脂肪組織具有顯著的降低作用，提示黃腐酚具有預(yù)防、治療動(dòng)脈樣硬化和糖 尿病的作用（楊小蘭等，2007,食品科學(xué)）；劉玉梅報(bào)道了啤酒花中的苦味成分β-酸及六氫 β -酸具有降血糖的作用（劉玉梅等，2009,食品科學(xué))。
[0004] 本發(fā)明就是從天然植物啤酒花中提取分離得到以黃腐酚、異黃腐酚、8-異戊烯基 柚皮素、6-異戊烯基柚皮素、α-酸及β-酸為主要成分的組合物具有脂肪酶抑制劑作用， 長(zhǎng)期服用無(wú)毒副作用，具有廣闊的市場(chǎng)前景。
[0005] 本發(fā)明完成前未發(fā)現(xiàn)有關(guān)以黃腐酚、異黃腐酚、8-異戊烯基柚皮素、6-異戊烯基 柚皮素、α-酸及β-酸為主要成分的組合物具有脂肪酶抑制劑作用的報(bào)道。
[0006] 本發(fā)明的特點(diǎn)在于啤酒花用乙醇提取后提取液不濃縮直接上大孔樹脂柱，先分離 得到Ct-酸及β-酸，然后經(jīng)過(guò)聚酰胺樹脂分離得到黃腐酚、異黃腐酚、S-異戊烯基柚皮素、 6-異戊烯基柚皮素，操作簡(jiǎn) 單，整個(gè)生產(chǎn)工藝僅用乙醇，不使用易燃易爆和有毒溶劑，生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)單、生產(chǎn)周期短， 安全、不污染環(huán)境，成本低，收率高，特別適合產(chǎn)業(yè)化大量生產(chǎn)。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明的目的是提供一種主要含有黃腐酚、異黃腐酚、8-異戊烯基柚皮素、6-異 戊烯基柚皮素、α_酸及β_酸的啤酒花天然藥物組合物（以下簡(jiǎn)稱啤酒花組合物），該組 合物是首次從?？浦参锲【苹ㄖ兴@得；首次經(jīng)進(jìn)一步體外實(shí)驗(yàn)研究證明了本發(fā)明組合物 具有抑制脂肪酶的活性，該組合物具有在制備抑制脂肪酶作用的藥物中的新用途，是本發(fā) 明的一個(gè)主要?jiǎng)?chuàng)新點(diǎn)。
[0008]本發(fā)明目的之二是提供了主要含有黃腐酚、異黃腐酚、8-異戊烯基柚皮素、6-異 戊烯基柚皮素 、α -酸及β -酸組合物提取分離方法，以往公開(kāi)的提取啤酒花中有效成分 的方法多是石油醚脫脂和除葉綠素等脂溶性雜質(zhì)或僅限于實(shí)驗(yàn)室的分離，不適合產(chǎn)業(yè)化生 或以二氧化碳萃取脫脂，乙醇提取，提取液經(jīng)高效液相分離或硅膠柱分離或硅藻土分 離，這些分離方法提取的成分主要以黃腐酚為主。本發(fā)明組合物主要包括黃酮類成分及酸 性成分，具有本質(zhì)的區(qū)別及明顯的技術(shù)進(jìn)步。本發(fā)明采用了乙醇提取，大孔樹脂及聚酰胺柱 層析的方法純化含有黃腐酚、異黃腐酚、8-異戊烯基柚皮素、6-異戊烯基柚皮素 、α -酸及 β-酸組合物，可操作性強(qiáng)，適合工業(yè)生產(chǎn)。本發(fā)明首次采用了乙醇提取啤酒花的提取液不 經(jīng)過(guò)濃縮，直接在大孔樹脂柱上吸附純化，解決了乙醇提取液濃縮后部分有效成分與脂溶 性物質(zhì)一起析出，藥液混濁，不利于在大孔樹脂柱上吸附純化的問(wèn)題。也是本發(fā)明的創(chuàng)新點(diǎn) 之一。
[0009] 本發(fā)明有益效果在于利用釀酒的原料啤酒花，采用現(xiàn)代提取手段，制備得到本組 合物，組合物主要包括黃酮類成分及酸類成分，具有成分清楚，化學(xué)組成具有特色，長(zhǎng)期服 用無(wú)任何毒副作用。
[0010] 本發(fā)明的另一目的是提供一種從啤酒花中提取的組合物的制備方法，其特征在 于：啤酒花利用65-85%乙醇提取2-3次，每次1-3小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，直接通過(guò)處理好的 大孔吸附樹脂，先用65-90%乙醇洗脫，收集流出液及乙醇洗脫液，備用；繼用95%乙醇洗脫， 收集乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮至稠膏，冷凍干燥，得組份I ;將上述流出液及乙醇洗脫液 回收乙醇，濃縮至濃縮液中乙醇的含量為5-35%，再次通過(guò)以處理好的聚酰胺吸附樹脂，先 用5-35%乙醇洗脫再用50-85%乙醇洗脫液，收集乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮，冷凍干燥，得 到組份II ;合并組份I及組份II，混勻，即得啤酒花天然藥物組合物。
[0011] 優(yōu)選提取方法：啤酒花利用8倍量85%乙醇在60°C條件下提取2次，每次2小時(shí)， 濾過(guò)，合并濾液，直接通過(guò)處理好的AB-8大孔吸附樹脂，先用 85%乙醇洗脫3倍柱體積，收 集流出液及乙醇洗脫液，備用；繼用95%乙醇洗脫4倍柱體積，收集乙醇洗脫液，回收乙醇， 濃縮至稠膏，冷凍干燥，得組份I ;將上述流出液及乙醇洗脫液回收乙醇，濃縮至濃縮液中 乙醇的含量為25%,再次通過(guò)以處理好的聚酰胺吸附樹脂，先用25%乙醇洗脫4倍柱體積，再 用70%乙醇洗脫液4倍柱體積，收集乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮，冷凍干燥，得到組份Π ;合 并組份I及組份II，混勻，即得啤酒花天然藥物組合物。
[0012] 并且本發(fā)明還公開(kāi)了此組合物主要組成成分，主要由黃腐酚、異黃腐酚、8_異戊 烯基柚皮素、6_異戊烯基柚皮素、α-酸及β-酸組成。按重量百分比計(jì)，各化合物占百 分比為：黃腐酚30%?70%、異黃腐酚2%~1〇%、8_異戊烯基柚皮素1%~5%、6-異戊烯基柚皮素 1%?5%、α -酸 10%?50% 及 β -酸 5%~25%。
[0013] 為了實(shí)現(xiàn)以上技術(shù)方案，α-酸、β_酸及黃腐酚、異黃腐酚、異戊烯基柚皮素、 6-異戊烯基柚皮素的含量通過(guò)以下方法測(cè)定： 1、α -酸、β -酸利用高效液相色譜法測(cè)定： 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇一 〇.05%磷酸溶液（85 :15)為流動(dòng)相；檢 測(cè)波長(zhǎng)為313nm，柱溫：室溫，流速：l.〇ml/min，進(jìn)樣量1。
[0014] 對(duì)照品溶液的制備精密稱取α-酸鄰苯二胺鹽、β-酸對(duì)照品，置容量瓶中，用 甲醇溶解制成含α-酸鄰苯二胺鹽為0. 2mg/ml (相當(dāng)于α-酸0.1509 mg/ml)、β-酸為 0. lmg/ml的對(duì)照品溶液。
[0015] 供試品溶液的制備取組合物50mg，精密稱定，置l〇〇ml量瓶中，加甲醇約80ml， 超聲30min，放置至室溫，甲醇定容至刻度，搖勻，作為供試品溶液。
[0016] 測(cè)定方法分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各ι〇μ 1，注入液相色譜儀，測(cè) 定，即得。
[0017] 2、黃腐酚、異黃腐酚、8-異戊烯基柚皮素、6-異戊烯基柚皮素利用高效液相色譜 法測(cè)定： 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈一1%甲酸溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫(按照 表1進(jìn)行）;黃腐酚檢測(cè)波長(zhǎng)為370mn，異黃腐酚、8-異戊烯基柚皮素、6_異戊烯基柚皮素檢 測(cè)波長(zhǎng)為280nm ;柱溫：3(TC，流速：0. 8ml/min，進(jìn)樣量：1〇μ 1。
[0018] 表1梯度洗脫流程

【權(quán)利要求】
ι· 一種具有脂肪酶抑制作用的啤酒花天然藥物組合物，其特征在于：由黃腐酚、異黃 腐酚、8-異戊烯基柚皮素、6-異戊烯基柚皮素 、α -酸及β -酸組成。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的啤酒花天然藥物組合物，其特征在于：按重量百分比計(jì)：黃腐 酚3〇9Γ70%、異黃腐酚29Γ10%、8-異戊烯基柚皮素1%? 5%、6-異戊烯基柚皮素1%?5%、α -酸 10%?50% 及 β -酸 59Γ25%。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1-2所述的啤酒花天然藥物組合物，其制備方法為：啤酒花利用 65-85%乙醇提取2-3次，每次1-3小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，直接通過(guò)處理好的大孔吸附樹脂， 先用6 5_90%乙醇洗脫，收集流出液及乙醇洗脫液，備用；繼用95%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫 液，回收乙醇，濃縮至稠膏，冷凍干燥，得組份I ;將上述流出液及乙醇洗脫液回收乙醇，濃 縮至濃縮液中乙醇的含量為5-35%，再次通過(guò)以處理好的聚酰胺吸附樹脂，先用5-35%乙醇 洗脫再用50-85%乙醇洗脫液，收集乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮，冷凍干燥，得到組份II ;合 并組份I及組份II，混勻，即得啤酒花天然藥物組合物。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的啤酒花天然藥物組合物的制備方法，其特征在于：啤酒花利 用8倍量85%乙醇在60°C條件下提取2次，每次2小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，直接通過(guò)處理好 的AB-8大孔吸附樹脂，先用85%乙醇洗脫3倍柱體積，收集流出液及乙醇洗脫液，備用；繼 用95%乙醇洗脫4倍柱體積，收集乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮至稠膏，冷凍干燥，得組份I ; 將上述流出液及乙醇洗脫液回收乙醇，濃縮至濃縮液中乙醇的含量為25%，再次通過(guò)以處理 好的聚酰胺吸附樹脂，先用25%乙醇洗脫4倍柱體積，再用70%乙醇洗脫液4倍柱體積，收 集乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮，冷凍干燥，得到組份II ;合并組份I及組份II，混勻，即得啤 酒花天然藥物組合物。
【文檔編號(hào)】A61K36/60GK104189086SQ201410460743
【公開(kāi)日】2014年12月10日 申請(qǐng)日期:2014年9月12日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月12日
【發(fā)明者】趙全成, 南敏倫, 呂娜, 趙昱瑋, 赫玉芳, 馬吉?jiǎng)? 王蓮萍 申請(qǐng)人:趙全成