專利名稱：：啤酒花提取物及其制備方法與應用的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及植物提取物，具體涉及一種富含查爾酮的啤酒花提取物及其制備方法與應用。
背景技術：
：啤酒花，記載于《新疆中草藥手冊》、《中藥大辭典》等，來源于?？浦参锲【苹ǖ拇苹ㄐ?，功效利尿安神，抗癆消炎?，F(xiàn)代研究認為，啤酒花主要含有苦味酸類、揮發(fā)油、黃酮類等成分，其中黃酮類成分包括查爾酮類和二氫黃酮類。藥材中査爾酮類含量很低，只有0.3%左右。研究表明，苦味酸類成分萚草酮具有抑制血管生成作用(MARICALS，TADAHIKOH等，Biochemicalandbiophysicalresearchcommunications.2001,289:220-224)，C.L.MIRANDA、J.F.STEVENS等則報道了黃腐酚等5個查爾酮類成分以及異黃腐酚的抗乳腺癌和卵巢癌細胞增殖活性(FoodandChemicalToxicology,1999，37:27卜285)，專利02133523.0也介紹了黃腐酚D的抗腫瘤活性，8-異戊烯基柚皮素、6-異戊烯基柚皮素等黃酮類成分顯示了較強的雌激素活性(S.R.Milligan等，J.Clin.Endocrinol.Metab.1999,84:2249-2252)。由此，本發(fā)明人用不同査爾酮含量的啤酒花提取物進行的細胞試驗，結果顯示啤酒花提取物抑制腫瘤細胞生長的效果隨查爾酮類成分含量的增加而明顯提高。目前已有專利02815697.8等提供了啤酒花提取物的制備方法，但這些方法所得提取物査爾酮含量比較低。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所要解決的技術問題在于研究設計高含量査爾酮類成分的啤酒花提取物。本發(fā)明提供一種啤酒花提取物，它是通過下列方法制備的本發(fā)明提供的啤酒花提取物的制備方法，包括醇提、有機溶劑萃取、聚酰胺樹脂柱富集等步驟，具體為a)醇提啤酒花加6~12倍W/V乙醇，乙醇濃度為70%~90%，提取次數(shù)為2~4次，合并提取液減壓濃縮，壓力-0.1Mpa，溫度8(TC，減壓濃縮，壓力-0.1Mpa，溫度8(TC，濃縮至無醇味；b)萃取取步驟(a)濃縮液加入0.53倍V/V石油醚、戊烷、己烷或庚垸進行萃取，萃取次數(shù)為13次，保留萃取后的水溶液；c)富集取步驟(b)萃取后的水溶液，上聚酰胺樹脂柱，依次用0%70%濃度的乙醇由低到高濃度的程序梯度洗脫，收集最后的乙醇洗脫液，減壓濃縮，壓力-0.1Mpa，溫度8(TC，濃縮到相對密度1.15~1.20，干燥，得到啤酒花提取物。本發(fā)明優(yōu)選的啤酒花提取物的制備方法為a)醇提啤酒花加8倍量乙醇，乙醇濃度為80%，提取2次，合并提取液減壓濃縮，壓力-0.1Mpa，溫度8(TC，濃縮至無醇味；；b)萃取取步驟(a)濃縮液加入1倍量V/V石油醚萃取2次，棄去萃取液，保留萃取后的水溶液；c)富集取步驟(b)萃取后的水溶液，上聚酰胺樹脂柱，依次用0%、30%、60%乙醇洗脫，收集60%乙醇洗脫液，減壓濃縮，壓力-0.1Mpa，溫度8(TC，濃縮到相對密度1.15-1.20，干燥得到啤酒花提取物。本發(fā)明方法所述步驟c)的干燥條件為常溫干燥105°C，3小時、真空干燥-O.lMpa，80°C，3小時或噴霧干燥進風口溫度120。C，流速10ml/min。本發(fā)明所使用的啤酒花為?？浦参锲【苹℉umuluslupulus雌花序可以通過市售得到。本發(fā)明提供的啤酒花提取物，富含査爾酮類成分，包括黃腐酚、黃腐酚D等，總査爾酮類含量達20%-25%;其中黃腐酚含量為18%-22%。本發(fā)明針對查爾酮類成分進行富集，使査爾酮類成分含量達到(20%-25%)。本發(fā)明的制備方法比較簡單，所用聚酰胺樹脂可以重復使用，使成本降低。本發(fā)明所提供的提取物是有效部位的高度濃縮，適宜制成各種需要的劑型，服用量少，利于患者。本發(fā)明的又一目的是提供了上述啤酒花提取物在制備治療腫瘤藥物中的應用。為了更好地理解本發(fā)明所提供的提取物的作用，本發(fā)明人分別制備査爾酮含量為1.2%、5%、20%的啤酒花提取物，以黃腐酚為對照，用四種人腫瘤細胞株進行體外試驗,結果見下表。<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>體外試驗結果顯示，啤酒花提取物抑制腫瘤細胞生長的效果隨查爾酮類成分含量的增加而明顯提髙。具體實施方式實施例1取啤酒花1000g，加80%乙醇提取2次，每次8000ml，合并提取液，減壓濃縮，壓力-0.1Mpa，溫度80'C，濃縮至無醇味，濃縮液加石油醚萃取2次，每次1000ml，水液部分上聚酰胺樹脂柱，先用水洗脫使樣品吸附，再用30%乙醇洗脫并棄去洗脫液，最后用60%乙醇洗脫并收集洗脫液，減壓濃縮，壓力-0.1Mpa，溫度8(TC，濃縮至相對密度1.20，真空干燥，壓力-0.1Mpa，溫度8(TC，時間3小時，得到啤酒花提取物6.8g，HPLC測定黃腐酚含量為22%，UV法測定總査爾酮含量為25。/。，提取物收率為0.68%。實施例2取啤酒花1000g，加70%乙醇提取3次，每次12000ml，合并提取液，減壓濃縮，壓力-0.1Mpa，溫度80'C，濃縮至無醇味，濃縮液加3000ml庚烷萃取1次，水液部分上聚酰胺樹脂柱，先用水洗脫使樣品吸附，再依次用20%、40%乙醇洗脫并棄去洗脫液，最后用65。/。乙醇洗脫并收集洗脫液，減壓濃縮，壓力-0.1Mpa，溫度8(TC，濃縮至相對密度1.20，105'C干燥3小時，得到啤酒花提取物8.0g，HPLC測定黃腐酚含量為18%，UV法測定總查爾酮含量為22%，提取物收率為0.80%。實施例3取啤酒花1000g，加卯％乙醇提取4次，每次6000ml，合并提取液，減壓濃縮，壓力-0.1Mpa,溫度80。C濃縮至無醇味，濃縮液加己垸萃取3次，每次700ml，水液部分上聚酰胺樹脂柱，先用水洗脫使樣品吸附，再依次用10%、30%、50%乙醇洗脫并棄去洗脫液，最后用70%乙醇洗脫并收集洗脫液，減壓濃縮，壓力-0.1Mpa，溫度8(TC，濃縮至相對密度1.15，噴霧干燥進風口溫度12(TC，流速10ral/min噴霧干燥得到啤酒花提取物7.2g，HPLC測定黃腐酚含量為21%，UV法測定總査爾酮含量為23%,提取物收率為0.72%。實施例4取啤酒花1000g，加80%乙醇提取3次，每次10000ml，合并提取液，減壓濃縮，壓力-0.1Mpa，溫度8(TC濃縮至無醇味，濃縮液加戊垸萃取3次，每次1000ml，水液部分上聚酰胺樹脂柱，先用水洗脫使樣品吸附，再依次用10%、30%、45%乙醇洗脫并棄去洗脫液洗去雜質(zhì)，最后用65%乙醇洗脫并收集洗脫液，減壓濃縮，壓力-0.1Mpa，溫度80'C濃縮至相對密度1.15，噴霧干燥進風口溫度120'C，流速10ral/min，噴霧干燥得到啤酒花提取物7.3g，HPLC測定黃腐酚含量為20y。，UV法測定總査爾酮含量為22M，提取物收率為0.73%。權利要求1、一種啤酒花提取物，其特征在于該提取物中總查爾酮類含量為20％-25％；其中黃腐酚含量為18％-22％；它是通過下列方法制得a)醇提啤酒花加6～12倍W/V乙醇，乙醇濃度為70％～90％，提取次數(shù)為2～4次，合并提取液減壓濃縮，壓力-0.1Mpa，溫度80℃，減壓濃縮，壓力-0.1Mpa，溫度80℃，濃縮至無醇味；b)萃取取步驟(a)濃縮液加入0.5～3倍V/V石油醚、戊烷、己烷或庚烷進行萃取，萃取次數(shù)為1～3次，保留萃取后的水溶液；c)富集取步驟(b)萃取后的水溶液，上聚酰胺樹脂柱，依次用0％～70％濃度的乙醇由低到高濃度的程序梯度洗脫，收集最后的乙醇洗脫液，減壓濃縮，壓力-0.1Mpa，溫度80℃，濃縮至相對密度1.15～1.20，干燥，得到啤酒花提取物。2、一種啤酒花提取物的制備方法，其特征在于該方法包括下列步驟a)醇提啤酒花加6~12倍W/V乙醇，乙醇濃度為70%~90%，提取次數(shù)為2~4次，合并提取液減壓濃縮，壓力-0.1Mpa，溫度80'C濃縮至無醇味；b)萃取取步驟(a)濃縮液加入0.5-3倍V/V石油醚、戊垸、己垸或庚烷進行萃取，萃取次數(shù)為1~3次，保留萃取后的水溶液；c)富集取步驟(b)萃取后的水溶液，上聚酰胺樹脂柱，依次用0%~70%濃度的乙醇由低到高濃度的程序梯度洗脫，收集最后的乙醇洗脫液，減壓濃縮，壓力-O.lMpa，溫度80'C濃縮至相對密度1.151.20，干燥，得到啤酒花提取物。3、根據(jù)權利要求2所述啤酒花提取物的制備方法，其特征在于該方法包括下列步驟a)醇提啤酒花加8倍量乙醇，乙醇濃度為80%，提取2次，合并提取液減壓濃縮，壓力-0.1Mpa,溫度80。C，濃縮至無醇味；；b)萃取取步驟(a)濃縮液加入1倍量V/V石油醚萃取2次，棄去萃取液，保留萃取后的水溶液；c)富集取步驟(b)萃取后的水溶液，上聚酰胺樹脂柱，依次用0%、30%、60%乙醇洗脫，收集60%乙醇洗脫液，減壓濃縮，壓力-0.1Mpa，溫度80。C,濃縮至相對密度1.15~1.20，干燥得到啤酒花提取物。4、根據(jù)權利要求2或3所述啤酒花提取物的制備方法，其特征在于所述步驟c)的干燥條件為常溫干燥105°C，3小時、真空干燥-O.lMpa，8CTC，3小時或噴霧干燥進風口溫度120。C，流速10ml/min。5、一種如權利要求1所述的啤酒花提取物在制備治療乳腺癌、卵巢癌、肝癌或肺癌藥物中的應用。6、一種如權利要求1所述的啤酒花提取物在制備治療乳腺癌或卵巢癌藥物中的應用。全文摘要本發(fā)明公開一種以查爾酮為主要有效成分的啤酒花提取物，其中啤酒花總查爾酮中含查爾酮類成分含量在20％以上。本發(fā)明主要通過醇提、有機溶劑萃取、聚酰胺樹脂柱富集等步驟得到提取物。經(jīng)細胞試驗顯示本發(fā)明提取物有較好的抗乳腺癌和卵巢癌作用。文檔編號A61P35/00GK101574398SQ20081003719公開日2009年11月11日申請日期2008年5月9日優(yōu)先權日2008年5月9日發(fā)明者君林申請人:上海信誼百路達藥業(yè)有限公司