專利名稱：反式－3,4’,5－三羥基－1,2－二苯乙烯抗皮膚損傷用途的制作方法
一、所屬領(lǐng)域本發(fā)明屬于醫(yī)藥類，涉及一種化合物，特別涉及一種抗紫外線、燒、燙、創(chuàng)傷或化學(xué)腐蝕等所致皮膚損傷及保護(hù)皮膚健康作用的藥用化合物，其名稱是反式-3，4’，5-三羥基-1，2-二苯乙烯(trans-3，4’，5-trihydrolystilbene；Resveratrol)。
二、背景知識近些年來，職業(yè)性危害因素、生活環(huán)境惡化對人類健康所帶來的危害越來越嚴(yán)重。例如，由于大氣環(huán)境惡化導(dǎo)致過度紫外線照射所致皮膚損傷乃至癌變呈上升趨勢([1]劉揚(yáng).紫外線致癌機(jī)理的研究狀況概述[J].中國公共衛(wèi)生學(xué)報，1999，Vol 18.No.3183-186)。各種因素導(dǎo)致皮膚傷害的病案，始終遙居百病之首。提高皮膚保健與治療水平始終是醫(yī)藥領(lǐng)域藥物創(chuàng)新的熱點(diǎn)，也是社會進(jìn)步的需求。
反式-3，4’，5-三羥基-1，2-二苯乙烯來自天然植物中或通過化學(xué)合成獲得。反式-3，4’，5-三羥基-1，2-二苯乙烯廣泛存在于葡萄、落花生、虎杖、大黃、桑椹等眾多天然植物中，是虎杖等傳統(tǒng)中藥的有效成分，亦可叫做白黎蘆醇、三羥基芪、類黃酮或相應(yīng)植物多酚等?；⒄?、大黃等作為中藥方劑的有效成分用于治療皮膚損傷有著悠久的歷史，但是，迄今為止，用這些天然植物中有效成分單獨(dú)來抗皮膚損傷尚未見報導(dǎo)，用這些中藥植物的有效成分反式-3，4’，5-三羥基-1，2-二苯乙烯或藥用組合物來預(yù)防和治療皮膚損傷，同樣未見報導(dǎo)，也未查到將這種化合物及其藥用組合物用于預(yù)防或治療皮膚損傷、保護(hù)皮膚健康的專利報道。特別應(yīng)當(dāng)指出的是，與同類抗皮膚損傷藥物相比較，應(yīng)用反式-3，4’，5-三羥基-1，2-二苯乙烯抗皮膚損傷，療效快，疤痕小、預(yù)后好，質(zhì)量易控、工藝成熟，藥效穩(wěn)定、安全可靠，無毒副作用、更無一般生物技術(shù)或血液制品所帶來的感染隱患，符合中藥現(xiàn)代化、與國際接軌的發(fā)展要求。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于將化合物反式-3，4’，5-三羥基-1，2-二苯乙烯及其藥用組合物用于預(yù)防和治療人類皮膚疾病用途，特別是指用于抗由紫外線輻射、燒傷、燙傷、創(chuàng)傷或化學(xué)腐蝕所致皮膚損傷及皮膚保健用途。
反式-3，4’，5-三羥基-1，2-二苯乙烯(tran-3，4’，5-trihydrolystilbene；Resveratrol)，分子式C14H12O3化學(xué)結(jié)構(gòu)式見附

圖1理化性質(zhì)白色或淺黃色針晶粉末，可溶于甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等有機(jī)溶劑，難溶于水。
反式-3，4’，5-三羥基-1，2-二苯乙烯是通過化學(xué)合成或從天然植物中提取的化合物，目前市場已有各種純度的產(chǎn)品?，F(xiàn)代研究證明其具有眾多的藥理作用([2]劉婭、王光慈.白黎蘆醇生理活性研究進(jìn)展.中國食品添加劑[J].2002，No.619-21)，但是，關(guān)于反式-3，4’，5-三羥基-1，2-二苯乙烯及其藥用組合物抗皮膚損傷的研究尚未見報導(dǎo)。本發(fā)明通過相關(guān)動物學(xué)研究和臨床試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)并證明了該化合物及其藥用組合物具有可靠的抗皮膚損傷功能。例如，研究發(fā)現(xiàn)，該化合物能有效防治過度紫外線對皮膚的侵害、抗皮膚老化、抗皺、保濕、去色素沉著、防治痤瘡、除疤、除臭；同時，研究證實(shí)，該化合物具有治療燒、燙傷、創(chuàng)傷和治療化學(xué)腐蝕傷作用，在治療中還發(fā)現(xiàn)該化合物及其藥用組合物有鎮(zhèn)痛作用。較之含有其有效成分的相關(guān)傳統(tǒng)中藥或植物藥用部位，該化合物及其藥用組合物不僅提供了新的藥學(xué)用途，而且療效穩(wěn)定、安全和工藝質(zhì)量容易控制。研究表明，該化合物及其藥用組合物與各種原料藥用植物已經(jīng)有質(zhì)和量的差別。
根據(jù)本發(fā)明，反式-3，4’，5-三羥基-1，2-二苯乙烯作為藥用成分可以加入各種藥用基質(zhì)、賦型劑、輔助藥用成分和載體中，構(gòu)成特定藥用組合物，以通過局部恰當(dāng)給藥，達(dá)到保護(hù)皮膚健康、預(yù)防和治療或輔助治療各種原因引起的皮膚損傷。這些藥用組合物按已知的常識，可以制成膏劑、凝膠制劑、粉劑、氣溶膠、油劑、藥膜、創(chuàng)可貼型或其它適宜劑型。
根據(jù)本發(fā)明，反式-3，4’，5-三羥基-1，2-二苯乙烯，可來自天然植物，如葡萄皮、落花生根莖、虎杖根莖、桑椹果實(shí)、何首烏等，也可以通過化學(xué)合成獲得。本發(fā)明創(chuàng)造過程中使用的化合物單體，均由藥用植物虎杖根莖中提取，方法是在60℃恒溫下，40目虎杖根莖粉末在90％甲醇水溶液中(液固比1∶20)，超聲浸提40min后，回流提取3次，提取液經(jīng)過濾后真空干燥，所得濃縮液再經(jīng)乙酸乙酯萃取，提取液真空干燥濃縮后，上硅膠柱梯度淋洗，洗脫液為石油醚-乙酸乙酯，收集的組分進(jìn)一步用HPLC精提，得到反式-3，4’，5-三羥基-1，2-二苯乙烯，與標(biāo)準(zhǔn)品光譜比較確定。
具體實(shí)施例方式
為了證明本發(fā)明所述反式-3，4’，5-三羥基-1，2-二苯乙烯及其藥用組合物具有的藥物用途，以下申請人結(jié)合實(shí)施例對該化合物藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)、相關(guān)安全性評價及臨床試驗(yàn)研究進(jìn)行進(jìn)一步說明。
以下各實(shí)施例所使用的反式-3，4’，5-三羥基-1，2-二苯乙烯化合物，均系本發(fā)明人從市售中藥虎杖中提取，并與標(biāo)準(zhǔn)品光譜比較確定。標(biāo)準(zhǔn)品購自sigima公司，經(jīng)檢驗(yàn)其特征光譜與標(biāo)識相符。
實(shí)施例1反式-3，4’，5-三羥基-1，2-二苯乙烯抗過度紫外線照射所致皮膚損傷作用1材料與方法1.1試驗(yàn)動物 純白豚鼠500～600g，雌雄各半，購自吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物部。
1.2光源 采用日光紫外燈，功率30W，含長波紫外線(UVA)和中波紫外線(UVB)，購自上海富視燈泡廠。DRC-100X紫外線強(qiáng)度計(jì)由北京博朗特科技有限公司提供。JY92-II超聲波均質(zhì)機(jī)購自寧波科生儀器廠。
1.3試驗(yàn)藥物 反式-3，4’，5-三羥基-1，2-二苯乙烯，分子式C14H12O3.藥物性狀淺黃色針晶粉末。純度＞95％?；|(zhì)為醫(yī)用白凡士林油和適量小麥坯牙油、乳化劑等，實(shí)驗(yàn)時，經(jīng)過超聲均質(zhì)乳化處理，將其配成1％、5％、10％、15％、20％膏劑(以下簡稱，藥用乳膏)?；|(zhì)對照組涂有制備藥用乳膏除反式-3，4’，5-三羥基-1，2-二苯乙烯外的配方其余基質(zhì)組分。自身對照組避光處理。實(shí)驗(yàn)用藥膏和衛(wèi)生材料、器械均按常規(guī)要求經(jīng)過高壓滅菌處理。
1.4動物處理 參照有關(guān)研究([3]李文興等.納米材料氧化鈦對紫外線所致皮膚損傷的保護(hù)作用.吉林大學(xué)學(xué)報·醫(yī)學(xué)版·毒理學(xué)專輯[J].2002，Vol.28，No.4101-104)，豚鼠隨機(jī)分成藥用乳膏干預(yù)組(下簡稱，藥物干預(yù)組)各組、基質(zhì)對照組和自身對照組。實(shí)驗(yàn)動物右側(cè)背部照射，另一側(cè)為遮蓋側(cè)(即自身對照組)。照射前先將豚鼠背部照射側(cè)皮膚剃毛，暴露3cm×5cm范圍。均勻涂布。靜置5min后，在距離動物皮膚10cm處進(jìn)行紫外線光源照射。第一次正式照射前，先測定最小紅斑及光照射強(qiáng)度。
開始每日1次，每次照射量UVB為0.124J/cm2，UVA為0.237J/cm2，以后視皮膚對最小紅斑劑量適應(yīng)情況逐漸增加。照射60d后，乙醚經(jīng)呼吸道麻醉，即刻取兩組背部對應(yīng)雙側(cè)皮膚，參照有關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行組織學(xué)檢查([4]朱愉，多秀瀛.實(shí)驗(yàn)動物的疾病模型[M].天津天津科技翻譯公司出版，1991557-559；[5]杜卓民.實(shí)用組織學(xué)技術(shù)[M].第1版.北京人民衛(wèi)生出版社，20018-294)。觀察皮膚色澤、粗糙變硬程度、彈性及脫屑情況。
1.5組織學(xué)檢查 將取下的皮膚用10％中性福爾馬林固定、石蠟包埋和切片，HE染色(觀察表皮厚度改變)、Van Gieson(VG)膠原纖維染色(觀察、比較各組間真皮層膠原纖維量變化)和過碘酸-雪夫反應(yīng)(PAS)染色(觀察、比較各組間基底膜厚度、均勻程度及結(jié)構(gòu)完整性)。
2試驗(yàn)結(jié)果2.1皮膚組織觀察2.1.1外觀表現(xiàn) 肉眼觀察可見經(jīng)紫外線照射豚鼠皮膚后，基質(zhì)對照組1周后可見照射皮膚輕度紅斑形成，爾后隨累積劑量增加膚色漸漸加深，出現(xiàn)表皮增厚、脫屑、粗糙變硬、失去光澤及彈性等一系列皮膚老化癥狀。藥物干預(yù)組各組和自身對照組則無明顯異常改變。
2.1.2表皮厚度 HE染色切片顯示，藥物干預(yù)組各組、自身對照組豚鼠皮膚較薄，由基底層、棘層、粒層和角質(zhì)層組成，其中棘細(xì)胞常散在分布，真皮內(nèi)主要細(xì)胞有成纖維細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，其中藥物干預(yù)組表皮偶見輕度增厚?；|(zhì)對照組表皮呈中度增厚，且見少量炎細(xì)胞浸潤。
2.1.3真皮淺層成熟膠原纖維量 VG染色切片顯示，藥物干預(yù)組各組和自身對照組皮膚的真皮血管壁較薄，血管充盈，由結(jié)締組織及毛發(fā)、皮脂腺等皮膚附屬器官組成，膠原纖維是真皮結(jié)締組織的主要成分，呈束狀排列，在腺管周圍，纖維纖細(xì)且排列疏松?；|(zhì)對照組顯示真皮淺層膠原纖維染色減弱，纖維變細(xì)且排列稀疏，提示成熟膠原纖維減少。
2.1.4基底膜厚度 PAS染色顯示，藥物干預(yù)組各組和自身對照組鏡下無明顯變化。基質(zhì)對照組表皮與真皮交界處為基底膜帶，PAS陽性物質(zhì)增多，基底膜帶呈不規(guī)則增厚，間或有斷裂。
3試驗(yàn)結(jié)論 反式-3，5，4’-三羥基-1，2-二苯乙烯具有抗紫外線所致皮膚損傷特性。
實(shí)施例2反式-3，5，4’-三羥基-1，2-二苯乙烯安全性評價1材料和方法(1)材料來源 反式-3，5，4’-三羥基-1，2-二苯乙烯軟膏(以下簡稱，評價對象)由發(fā)明申請人提供，按實(shí)施例1.配成80％藥物乳膏，分別置于密閉容器中按常規(guī)高壓滅菌處理。實(shí)驗(yàn)動物，昆明小白鼠體重18～22g，新西蘭大耳兔體重2.4～2.8kg，白色豚鼠體重250～300g由吉林大學(xué)動物室提供。人體斑貼試驗(yàn)的健康自愿受試者共65名，男性33名，女性32名，年齡范圍18～44歲。
(2)急性毒性實(shí)驗(yàn) 將20只小白鼠雌雄各半，隨機(jī)分成兩組，禁食16h后實(shí)驗(yàn)組將評價對象按5000mg/kg劑量一次灌胃，對照組給予等量蒸餾水，連續(xù)觀察7d，按文獻(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)要求評分([6].徐鳳丹，賀錫文，秦玉慧，等.化妝品安全性評價程序和方法(GB7919-87).中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)[M]，北京國家標(biāo)準(zhǔn)出版社，1987；[7].周立國.藥物毒理學(xué)[M]，武漢湖北科技出版社，200160-80)。
(3)完整性皮膚刺激實(shí)驗(yàn)①一次皮膚刺激實(shí)驗(yàn)取白兔3只(雌性)，脊柱兩側(cè)對稱去毛3×4cm，24h后將1.0g評價對象涂在兔背右側(cè)去毛區(qū)，左側(cè)涂賦形劑作對照，另取白兔1只按同樣條件去毛后作空白對照(不施加刺激，僅作比較用)。分別包扎固定24h，去除受試物后用生理鹽水洗凈擦干，于1，24，48，72h觀察涂抹部位皮膚反應(yīng)，參照文獻(xiàn)評分[6]。②多次皮膚刺激實(shí)驗(yàn)取白兔4只(雌雄各半)，脊柱兩側(cè)對稱去毛3cm×4cm，24h后將1.0g評價對象涂在兔背右側(cè)去毛區(qū)，左側(cè)涂賦形劑作對照，連續(xù)涂7d，每天觀察皮膚反應(yīng)，于末次刺激后再觀察3d，取涂藥部位的皮膚進(jìn)行病理學(xué)、組織學(xué)檢查，參照前述文獻(xiàn)[6]評分。
(4)眼刺激試驗(yàn)①一次眼刺激試驗(yàn)取白兔4只(雌雄各半)，將評價對象0.1mg滴入其右眼結(jié)膜囊內(nèi)，5s后用生理鹽水洗凈，用熒光素鈉檢查角膜損害，用裂隙燈檢察角膜透明度、虹膜紋理改變，以左側(cè)為對照分別觀察記錄6，24，48，72h眼的刺激反應(yīng)，參照前述文獻(xiàn)[6、7]評分。②多次眼刺激試驗(yàn)取白兔4只(雌雄各半)，方法同①連續(xù)給藥7d，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后觀察7d，參照前述文獻(xiàn)[6，7]評分。
(5)皮膚光毒實(shí)驗(yàn) 取白兔8只(雌雄各半)，脊柱兩側(cè)對稱去毛4個區(qū)(各4×4cm)，按相同順序給每只白兔4個去毛區(qū)分別編號為1、2、3、4。各區(qū)均涂0.1g評價對象膏劑，用黑紙蓋住2、3、4區(qū)，紫外線照射1區(qū)10min，1、2區(qū)比較觀察。2h后用黑紙蓋住1、2、4區(qū)，紫外線照射3區(qū)10min，3、4區(qū)比較觀察。連續(xù)10d觀察皮膚反應(yīng)。參照前述文獻(xiàn)[6]評分。
(6)皮膚變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)選擇豚鼠18只，隨機(jī)分成3組，每組6只(雌雄各半)，1組給評價對象膏劑，2組空白對照(給賦形劑)，3組給陽性對照物(即2，4-二硝基氯代苯)。致敏濃度為1％，激發(fā)濃度為0.1％。實(shí)驗(yàn)前24h將豚鼠背部左側(cè)剃毛3×3cm。將0.1mg受試物均勻涂在剃毛區(qū)，6h后用清水洗凈，觀察皮膚情況，連續(xù)觀察一周，該接觸操作重復(fù)3次。于末次致敏后14d進(jìn)行激發(fā)接觸，方法同上，涂在右側(cè)剃毛區(qū)，6h后洗凈，即刻觀察，于24，48，72h后再次觀察皮膚過敏反應(yīng)。參照前述文獻(xiàn)[6、7]評分。(7)人體斑貼實(shí)驗(yàn)將評價對象膏劑0.1mg滴在2×2cm大小的四層紗布上，貼敷在受試者前臂屈側(cè)皮膚上，用玻璃紙覆蓋，再用無刺激性膠布固定貼敷24h，觀察受試者的皮膚反應(yīng)。參照前述文獻(xiàn)[6]評分。
2試驗(yàn)結(jié)果 評價對象膏劑毒理學(xué)評價實(shí)驗(yàn)結(jié)果(表1)。
表1 評價對象膏劑毒理學(xué)評價實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3試驗(yàn)結(jié)論 反式-3，5，4’-三羥基-1，-二苯乙烯藥物軟膏為微毒類物質(zhì)，符合國家強(qiáng)制性要求，可以進(jìn)入人群試驗(yàn)研究。
實(shí)施例3.反式-3，5，4’-三羥基-1，2-二苯乙烯對電光源所致II度III度光輻射燒傷的作用1材料與方法1.1實(shí)驗(yàn)動物 狗，10～15kg，雌雄各半，購自吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物部。
1.2光源 采用溴鎢燈，功率5KW，購自上海金光燈具廠。
1.3試驗(yàn)藥物 反式-3，5，4’-三羥基-1，2-二苯乙烯，按實(shí)施例1方法分別配制成10％、20％等濃度軟膏。對照為配制藥用軟膏的基質(zhì)成分。各實(shí)驗(yàn)組分分別置于密閉容器中按常規(guī)高壓滅菌處理。
1.4動物處理 試驗(yàn)前1d剪短背部的毛，用20％硫化鈉脫毛，脫毛面積約300-400cm2(一般約占體表面積的20％)，脫毛后皮膚無破損燒傷。脫毛后將每只狗背部左右劃分4個預(yù)備燒傷區(qū)，左側(cè)編為I、II燒傷區(qū)，右側(cè)編為III、IV燒傷區(qū)，每側(cè)預(yù)備燒傷區(qū)面積約為100cm2。
試驗(yàn)時，將狗用2.5％的硫噴妥鈉靜脈麻醉(注射劑量20～30mg/kg.bady)，待麻醉平穩(wěn)時，打開溴鎢燈預(yù)熱20sec，光源距離皮膚98cm，照射17sec，制造成II度光輻射燒傷。同樣預(yù)熱20sec，光源距離皮膚40cm，照射10sec，制造成III度光輻射燒傷。以上實(shí)驗(yàn)造成燒傷面積為體表面積14％的II度和III度混合光輻射燒傷。
1.5干預(yù)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)動物隨機(jī)分成反式-3，5，4’-三羥基-1，2-二苯乙烯軟膏干預(yù)組(簡稱新藥干預(yù)組)、對照軟膏組和空白對照組。新藥干預(yù)組燒傷動物模型創(chuàng)面涂有各濃度本發(fā)明化合物單體軟膏；對照軟膏組燒傷動物模型創(chuàng)面涂有配制本發(fā)明化合物軟膏的基質(zhì)成分；空白對照組燒傷創(chuàng)面不做任何處理，各組動物飲食起居條件一致，每日1次換藥，換藥后，創(chuàng)面用滅菌醫(yī)用紗布遮蓋，固定。換藥時仔細(xì)觀察創(chuàng)面變化，并記錄。
1.6序貫檢驗(yàn)法按文獻(xiàn)方法([8]金丕煥.醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)學(xué).上海上海醫(yī)科大學(xué)出版社，2000465-466)要求隨機(jī)將動物配對并依據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行新藥干預(yù)組與自身對照組和新藥干預(yù)組與基質(zhì)對照組的比較。按序貫檢驗(yàn)有效標(biāo)準(zhǔn)，列出效果表，以有效率P≥80％為有效，P≤20％為無效，α＝0.05，β＝0.05，劃出序貫線，以序貫線碰U(上邊界線、接受邊界線)、L(下邊界線、拒絕邊界線)實(shí)線判定新藥干預(yù)組優(yōu)于對照各組或兩者差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.1藥效觀察 與各對照組動物比較 第三天換藥時，新藥干預(yù)各組動物創(chuàng)面明顯開始收斂，隨后各日，創(chuàng)面紅腫向毛根收縮，時至第7日，已有傷口痊愈者，至第26日，新藥干預(yù)各組動物樣本創(chuàng)面已經(jīng)陸續(xù)痊愈，皮膚紅潤，彈性良好，毛發(fā)光澤，疤痕微小。其中，15％含量、20％含量新藥干預(yù)組療效明顯好于5％劑量組。實(shí)驗(yàn)至第26日，基質(zhì)對照組、空白對照組燒傷創(chuàng)面均無一痊愈者。實(shí)驗(yàn)至第26日結(jié)束。
2.2新藥干預(yù)組與自身對照組比較結(jié)果的統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)2.2.1有效指標(biāo) 每個配對樣本中①新藥干預(yù)后創(chuàng)面痊愈者，定為有效，記為“+”。
2.2.2新藥干預(yù)組與空白對照組按以上標(biāo)準(zhǔn)隨機(jī)配對比較，對反式-3，5，4’-三羥基-1，2-二苯乙烯軟膏進(jìn)行藥效評價，列出效果表1，按表1畫出序貫線(附圖2)，序貫檢驗(yàn)結(jié)論，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，新藥干預(yù)有效，反式-3，5，4’-三羥基-1，2-二苯乙烯具有抗皮膚燒傷特性。
表.2新藥干預(yù)組與對照組比較

2.3新藥干預(yù)組與基質(zhì)對照組比較在與自身對照樣本比較的基礎(chǔ)上，新藥干預(yù)組與軟膏基質(zhì)對照組按序貫實(shí)驗(yàn)法配對并通過比較判斷新藥是否優(yōu)于對照軟膏基質(zhì)。
2.3.1有效指標(biāo) 每對樣本之間①新藥干預(yù)組樣本創(chuàng)面痊愈，定為有效，記為“+”。
2.3.2新藥干預(yù)組與軟膏基質(zhì)對照組隨機(jī)配對按有效指標(biāo)比較，對新藥干預(yù)組作優(yōu)于對照組或兩者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的評價，所獲結(jié)果與表2一致，所劃出的序貫圖也與附圖2一致。結(jié)果證明，反式-3，5，4’-三羥基-1，2-二苯乙烯抗皮膚燒傷的能力優(yōu)于基質(zhì)對照組。
3試驗(yàn)結(jié)論 反式-3，5，4’-三羥基-1，2-二苯乙烯具有治療燒傷作用。
實(shí)施例4.反式-3，5，4’-三羥基-1，2-二苯乙烯對熱水致II度燙傷的藥效學(xué)作用。
1材料與方法1.1實(shí)驗(yàn)動物 新西蘭大耳兔，純白，體重2.4～2.8kg雌雄各半，購自吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物部。
1.2點(diǎn)狀燙傷器系統(tǒng) 為一中空紫銅圓柱，高11.6cm，底端直徑為1.5cm，自重約500g，燙傷器紫銅圓柱外用保溫泡沫棉包裹，以防止散熱；恒溫水浴鍋，容量為20000ml，上海求精醫(yī)療設(shè)備廠生產(chǎn)。
1.3試驗(yàn)藥物 反式-3，5，4’-三羥基-1，2-二苯乙烯軟膏，按實(shí)施例1方法分別配制成10％、15％、20％等濃度。對照為配制藥用軟膏的基質(zhì)成分。各實(shí)驗(yàn)組分分別置于密閉容器中按常規(guī)高壓滅菌處理。
1.4動物處理 試驗(yàn)前1d剪短白兔腹部的毛，用20％硫化鈉脫毛，脫毛面積約20×40cm(一般約800cm2)，2～3min后用溫水沖洗、揩干。脫毛后皮膚無破損燒傷。不麻醉，用點(diǎn)狀燙傷器進(jìn)行燙傷。操作前，點(diǎn)狀燙傷器進(jìn)水管接恒溫水浴鍋，調(diào)整水溫60±1℃，進(jìn)入圓柱后由側(cè)管流出，不再循環(huán)流轉(zhuǎn)利用。調(diào)整完畢，將燙傷器底端借其自重緊貼于動物腹部褪毛區(qū)皮膚，持續(xù)45sec即可造成II度燙傷，燙傷6處，每側(cè)3點(diǎn)，左右對稱。
1.5干預(yù)實(shí)驗(yàn)燙傷動物隨機(jī)分成反式-3，5，4’-三羥基-1，2-二苯乙烯軟膏干預(yù)組(簡稱新藥干預(yù)組)、對照軟膏組和空白對照組。新藥干預(yù)組燒傷動物模型創(chuàng)面涂有各濃度本發(fā)明化合物單體軟膏；對照軟膏組燙傷動物模型創(chuàng)面涂有配制本發(fā)明化合物軟膏的基質(zhì)成分；空白對照組燙傷創(chuàng)面不做任何處理，各組動物飲食起居條件一致，每日1次換藥，換藥后，創(chuàng)面用滅菌醫(yī)用紗布遮蓋，固定。換藥時仔細(xì)觀察創(chuàng)面變化，并記錄。
1.6臨床試驗(yàn) 收治臨床診斷II度燙傷患者7人(志愿者)，年齡7～36歲，3男，4女。用20％軟膏覆蓋患處，復(fù)3層醫(yī)用紗布，固定，每3日換藥1次，記錄傷口變化。
2實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.1藥效觀察 時至第7日，新藥干預(yù)各組共36只動物，傷口全部痊愈，皮膚紅潤，彈性良好，毛發(fā)光澤，疤痕微小，難以察覺，治愈率100％；此時，基質(zhì)對照組、空白對照組燒痊愈率16％，好轉(zhuǎn)率33％。實(shí)驗(yàn)至第7日結(jié)束。
2.2臨床試驗(yàn)觀察 積累7名II度燙傷患者病例，5-21天，全部治愈。脫痂褪皮后，創(chuàng)面平整，疤痕微小，難以察覺。
3試驗(yàn)結(jié)論 反式-3，5，4’-三羥基-1，2-二苯乙烯具有治療燙傷作用。
實(shí)施例5.反式-3，5，4’-三羥基-1，2-二苯乙烯治療青年痤瘡臨床試驗(yàn)隨機(jī)選取20-23歲額頭患有痤瘡的在校學(xué)生。這些人在同一食堂進(jìn)餐，健康狀況、生活習(xí)慣和食物鏈大致相近。將受試對象隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對照組。試驗(yàn)初期每組不少于70人，實(shí)驗(yàn)周期10天，每組在結(jié)束時不少于60人。選額頭部位正中劃定一2cm×3cm區(qū)域，對每位受試者皮膚痤瘡計(jì)數(shù)，并記錄自然情況。實(shí)驗(yàn)期間要求受試者每天洗臉用同一品牌中性皂，擦拭按本說明書中實(shí)施例1配制的含有1％濃度反式-3，5，4’-三羥基-1，2-二苯乙烯軟膏。對照組(空白組)給配制軟膏的基質(zhì)(同一基料、顏色，不含本發(fā)明化合物單體的有效成份)。每日二次，均在早晚進(jìn)行。10天后進(jìn)行痤瘡復(fù)檢，規(guī)定，試驗(yàn)?zāi)┢谟^察部位痤瘡未減少者記為無效，減少者記為好轉(zhuǎn)，消失者記為痊愈，并記錄整理，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析處理(結(jié)果見表3.)。
表3.本發(fā)明所述藥物治療痤瘡效果

X2檢驗(yàn)，P＜0.005。
結(jié)論，用本發(fā)明所述藥物治療痤瘡，治療效果統(tǒng)計(jì)學(xué)意義極其顯著。
實(shí)施例6.反式-3，5，4’-三羥基-1，2-二苯乙烯治療化學(xué)腐蝕傷臨床療效觀察積累因酸堿腐蝕所致皮膚損傷病例9例，年齡在22歲-44歲，一般情況良好，1例診斷為II度燒傷，8例為II、III度混合傷，傷口均在四肢。治療方案，就診清創(chuàng)，傷口涂敷給藥，3層醫(yī)用紗布固定。除一例II度化學(xué)燒傷者回家治療外，其余8例均留院觀察5d。結(jié)果全部治愈，療程7d-28d，預(yù)后良好，創(chuàng)面平整。初步表明，反式-3，4’，5-三羥基-1，2-二苯乙烯具有治療化學(xué)腐蝕傷作用。
實(shí)施例7.反式-3，5，4’-三羥基-1，2-二苯乙烯治療創(chuàng)傷臨床療效觀察臨床積累因器械所致皮膚局部損傷病例13例，年齡在7歲-32歲，一般情況良好，進(jìn)行正常清創(chuàng)縫合后，創(chuàng)口涂敷20％軟膏(見前述實(shí)施例1.)，3層醫(yī)用紗布固定，每隔10天，換藥一次，隨訪8例，傷口全部愈合，療程12d-63d；創(chuàng)面平整，疤痕微小，其余無異常。另外，傷口給藥15min內(nèi)，患者自述疼痛消失者9人，疼痛減輕者13人。觀察表明，反式-3，5，4’-三羥基-1，2-二苯乙烯有抗皮膚創(chuàng)傷作用。
實(shí)施例8.反式-3，5，4’-三羥基-1，2-二苯乙烯除臭臨床療效觀察臨床收治狐臭者7例、腳汗臭者5例，局部噴涂含有5％本發(fā)明化合物的乙醇溶液，每日3-5次，給藥10min內(nèi)，狐臭消失者4人，狐臭減輕者3人，汗腳臭消失者3人，腳臭減輕者2人。觀察表明本發(fā)明所述化合物具有除臭作用。
實(shí)施例9.反式-3，5，4’-三羥基-1，2-二苯乙烯抗色素沉著臨床療效觀察面部色素沉著者7人，女性，年齡33-52歲，政府機(jī)關(guān)職員，不分皮膚性質(zhì)。每日在患處涂抹5％的軟膏(制備同本案實(shí)施例1.)，給藥30d后觀察色素沉著消失者3人，減輕者4人；所有受試者皮膚紅潤、有光澤、彈性改善、皺紋減少。觀察表明本發(fā)明所述化合物具有抗色素沉著作用。
實(shí)施例10.反式-3，5，4’-三羥基-1，2-二苯乙烯消除疤痕療效觀察取電光源所致II度III度光輻射燒傷(本說明書實(shí)施例3.)對照組動物(狗)5只，傷愈后，在創(chuàng)面涂抹含有10％本發(fā)明所述化學(xué)單體的前述軟膏制劑，3層紗布固定，每3天換藥1次。60天后停藥，觀察，疤痕消失者2例，改善者3例，所有受試者皮膚光滑，有彈性，有大量新生毛發(fā)。觀察表明本發(fā)明所述化合物具有消除疤痕作用。
權(quán)利要求
1.一種藥用化合物，其單體化學(xué)名稱為反式-3，4’，5-三羥基-1，2-二苯乙烯(tran-3，4’，5-trihydrolystilbene；Resvertrol)，分子式C14H22O3理化性質(zhì)白色或淡黃色針晶粉末，可溶于甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等，難溶于水；其特征在于該化合物具有抗紫外線、燒、燙、創(chuàng)傷或化學(xué)腐蝕等所致皮膚損傷及保護(hù)皮膚健康的用途。
2.一種用于抗紫外線、燒、燙、創(chuàng)傷或化學(xué)腐蝕等所致皮膚損傷及保護(hù)皮膚健康的藥用組合物，其中包括做為活性成分的權(quán)利要求1的反式-3，4’，5-三羥基-1，2-二苯乙烯及適當(dāng)藥用基質(zhì)成分和添加劑。
3.權(quán)利要求2的藥物組合物，其中所述藥物組合物可以是膏劑、凝膠制劑、粉劑、氣溶膠、油劑、藥膜、創(chuàng)可貼型或其它適宜劑型。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種用抗皮膚損傷及保護(hù)皮膚健康的化合物，其單體化學(xué)名稱為反式－3，4’，5－三羥基－1，2－二苯乙烯(Resveratrol)，分子式C
文檔編號A61P17/02GK101036634SQ20071005556
公開日2007年9月19日 申請日期2007年4月24日 優(yōu)先權(quán)日2007年4月24日
發(fā)明者劉曉冬, 李文興, 王志成, 龔守良 申請人:吉林大學(xué)