一種利用活躍鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)那西肽的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開一種利用活躍鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)那西肽的方法，包括在斜面培養(yǎng)基上進行孢子培養(yǎng)、在種子罐培養(yǎng)基上進行菌種培養(yǎng)和在發(fā)酵罐培養(yǎng)基上進行發(fā)酵三個步驟，并對各步驟培養(yǎng)或發(fā)酵參數(shù)進行了優(yōu)化。與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明優(yōu)化了活躍鏈霉菌的活化，通過不同階段培養(yǎng)活躍鏈霉菌，提高其生物活性。那西肽收率提高60％以上。
【專利說明】一種利用活躍鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)那西肽的方法

【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于微生物發(fā)酵領域，涉及一種利用活躍鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)那西肽的方法。

【背景技術】
[0002]那西肽是一種帶有5個座哇環(huán)的多肽類抗生素，其分子式為C51H43N13012S6，分子量為1222，那西肽為黃綠色物質(zhì)，呈粉末狀或細針狀結晶，熔點為310?320°C (伴隨分解)。那西肽可溶于氯仿、毗陡、二甲基酸胺、二甲基亞礬，微溶于甲醇，乙醇、乙酸乙酯和苯，不溶于水。那西肽以其相對安全性及良好的應用效果符合當前人們對飼料添加劑的要求，是一種比較理想的飼用抗生素換代品。目前，歐盟和日本已批準并廣泛使用。
[0003]那西肽是用微生物培養(yǎng)方法生產(chǎn)的，那西肽產(chǎn)生菌主要有活躍鏈霉菌(streptomyes actuosus)、抗生素鏈霉菌(S.antib1tics)和青灰色鏈霉菌(S.glaucogriseus),其中以活躍鏈霉菌為最好。
[0004]但是，現(xiàn)有的微生物發(fā)酵方法生產(chǎn)那西肽，生產(chǎn)成本高、產(chǎn)率低。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]鑒于此，本發(fā)明目的在于提供一種產(chǎn)率高的利用活躍鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)那西肽的方法。
[0006]為解決以上技術問題，本發(fā)明提供的技術方案是，提供一種利用活躍鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)那西肽的方法，包括以下步驟:
[0007]I)使用無菌接種針挖取適量砂土接種至斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)數(shù)天，向培養(yǎng)成熟的孢子斜面加入無菌水，使用無菌接種針輕輕刮下孢子；培養(yǎng)溫度為28°C，濕度40-60% ；
[0008]2)向種子罐培養(yǎng)基上接種步驟I)制備得到的孢子繁殖菌體，接種量22億，通氣比0.9，罐壓0.04Mp，溶氧控制在30%，當菌濃達到30%進行移種，移種周期25h，移種pH值為6.8 ;培養(yǎng)溫度30。。，
[0009]3)向發(fā)酵罐培養(yǎng)基上接種步驟2)繁殖的菌體，接種量10%，通氣比0.8，罐壓0.04Mp,全程流加氨水來調(diào)節(jié)pH值并補充氮源,通過調(diào)節(jié)攪拌轉速和通氣比來控制溶氧，放罐周期為180-220h，發(fā)酵結束，即得到那西肽混懸液。
[0010]進一步地，所述斜面培養(yǎng)基的組分為:可溶性淀粉2.lg/100mL,K2HPO40.08g/100mL, MgSO40.06g/100mL, FeSO40.003g/100mL, NaCl0.03g/100mL,KNO30.02g/100mL,瓊脂 2.0g/100mL。
[0011]進一步地，所述發(fā)酵罐培養(yǎng)基的組分為:可溶性淀粉6.0g/100mL,黃豆餅粉 3.5g/100mL, (NH4) 2S041.0g/100mL, CaCO3L 0g/100mL, K2HPO40.08g/100mL,NaCl0.10g/100mL，豆油 0.8g/100mL，消沫劑 0.05g/100mL。
[0012]進一步地，所述種子罐培養(yǎng)基的組分為:葡萄糖2g/100mL，黃豆餅粉2.5g/100mL,(NH4)2SO40.2g/100mL, MgSO40.03g/100mL，碳酸鈣 CaCO30.4g/100mL, K2HPO40.02g/100mL，豆油 0.3g/100mL,消沫劑 0.02g/100mL。
[0013]與現(xiàn)有技術相比,上述技術方案中的一個技術方案具有如下優(yōu)點:
[0014]1、本發(fā)明優(yōu)化了活躍鏈霉菌的活化，通過不同階段培養(yǎng)活躍鏈霉菌，提高其生物活性。
[0015]2、本發(fā)明針對不同階段，配置了更加專一的培養(yǎng)基，為活躍鏈霉菌的生長提供更加合理的碳源、氮源、以及金屬離子，充分保障菌體的正常生產(chǎn)和代謝。
[0016]3、本發(fā)明方法那西肽收率提高60%以上。

【具體實施方式】
[0017]實施例1
[0018]本實施例所用活躍鏈霉菌來源為市購。
[0019]按照以下配方制作培養(yǎng)基:斜面培養(yǎng)基、種子罐培養(yǎng)基和發(fā)酵罐培養(yǎng)基。
[0020]斜面培養(yǎng)基:可溶性淀粉2.1g/1OOmL, K2HPO40.08g/100mL, MgSO40.06g/100mL,FeSO40.003g/100mL, NaCl0.03g/100mL, KNO30.02g/100mL，瓊脂 2.0g/lOOmL ；
[0021]種子罐培養(yǎng)基:葡萄糖2g/100mL，黃豆餅粉 2.5g/100mL, (NH4)2SO40.2g/100mL,MgSO40.03g/100mL，碳酸鈣 CaCO30.4g/100mL, K2HPO40.02g/100mL，豆油 0.3g/100mL,消沫劑0.02g/100mL ；
[0022]發(fā)酵罐培養(yǎng)基:可溶性淀粉6.0g/100mL,黃豆餅粉3.5g/100mL,(NH4)2SO4L 0g/100mL, CaCO3L 0g/100mL, K2HPO40.08g/100mL, NaCl0.lOg/lOOmL,豆油0.8g/100mL,消沫劑 0.05g/100mL。
[0023]使用無菌接種針挖取適量砂土接種至斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)8天，向培養(yǎng)成熟的孢子斜面加入無菌水，使用無菌接種針輕輕刮下孢子；培養(yǎng)溫度為28°C，濕度40-60%。
[0024]向種子罐培養(yǎng)基上接種步驟I)制備得到的孢子繁殖菌體，接種量22億，通氣比0.9，罐壓0.04Mp，溶氧控制在30 %，當菌濃達到30 %進行移種，移種周期25h，移種pH值為6.8 ;培養(yǎng)溫度30。。。
[0025]向發(fā)酵罐培養(yǎng)基上接種步驟2)繁殖的菌體，接種量10 %，通氣比0.8，罐壓0.04Mp,全程流加氨水來調(diào)節(jié)pH值并補充氮源,通過調(diào)節(jié)攪拌轉速和通氣比來控制溶氧，放罐周期為180-220h，發(fā)酵結束，即得到那西肽混懸液。檢測那西肽效價為2600U/mL，相比與現(xiàn)有技術1620U/mL提高60.5 %。
【權利要求】
1.一種利用活躍鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)那西肽的方法，其特征在于，包括以下步驟: . 1)使用無菌接種針挖取砂土接種至斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)，向培養(yǎng)成熟的孢子斜面加入無菌水，使用無菌接種針刮下孢子；培養(yǎng)溫度為28°C，濕度40-60% ； .2)向種子罐培養(yǎng)基上接種步驟I)制備得到的孢子繁殖菌體，接種量22億，通氣比.0.9，罐壓0.04Mp，溶氧控制在30%，當菌濃達到30%進行移種，移種周期25h，移種pH值為.6.8 ;培養(yǎng)溫度30。。， . 3)向發(fā)酵罐培養(yǎng)基上接種步驟2)繁殖的菌體，接種量10%，通氣比0.8，罐壓0.04Mp，全程流加氨水來調(diào)節(jié)pH值并補充氮源，通過調(diào)節(jié)攪拌轉速和通氣比來控制溶氧，放罐周期為180-220h，發(fā)酵結束，得到那西肽混懸液。
2.根據(jù)權利要求1所述的利用活躍鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)那西肽的方法，其特征在于，所述斜面培養(yǎng)基的組分為:可溶性淀粉 2.1g/1OOmL, K2HPO40.08g/100mL, MgSO40.06g/100mL,
FeSO40.003g/100mL, NaCl0.03g/100mL, KNO30.02g/100mL,瓊脂 2.0g/100mL。
3.根據(jù)權利要求1所述的利用活躍鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)那西肽的方法，其特征在于，所述發(fā)酵罐培養(yǎng)基的組分為:可溶性淀粉6.0g/100mL,黃豆餅粉3.5g/100mL,(NH4)2SO4L 0g/100mL, CaCO3L 0g/100mL, K2HPO40.08g/100mL, NaCl0.lOg/lOOmL,豆油.0.8g/100mL,消沫劑 0.05g/100mL。
4.根據(jù)權利要求1所述的利用活躍鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)那西肽的方法，其特征在于，所述種子罐培養(yǎng)基的組分為:葡萄糖2g/100mL，黃豆餅粉2.5g/100mL, (NH4)2SO40.2g/100mL,MgSO40.03g/100mL，碳酸鈣 CaCO30.4g/100mL, K2HPO40.02g/100mL，豆油 0.3g/100mL,消沫劑.0.02g/100mL。
【文檔編號】C12P21/02GK104388505SQ201410681670
【公開日】2015年3月4日 申請日期:2014年11月24日 優(yōu)先權日:2014年11月24日
【發(fā)明者】金京勛 申請人:蘇州嘉禧蘿生物科技有限公司