一種生防放線菌的發(fā)酵方法及應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種生防放線菌的發(fā)酵方法及應(yīng)用，包括以下步驟：步驟(1)分別制備弗吉尼亞鏈霉菌和白淺灰鏈霉菌的種子菌液，弗吉尼亞鏈霉菌種子菌液菌量為1.2～1.5×105?6/mL，白淺灰鏈霉菌2～5×104?5/mL；步驟(2)向5L的發(fā)酵罐中加入發(fā)酵培養(yǎng)液，再加入步驟1)制備的弗吉尼亞鏈霉菌種子菌液和白淺灰鏈霉菌種子菌液進(jìn)行混合發(fā)酵培養(yǎng)獲得混合發(fā)酵液，混合發(fā)酵液菌量為2?8×106?7；所述弗吉尼亞鏈霉菌種子菌液和白淺灰鏈霉菌種子菌液體積比為1:2.2～3。本發(fā)明由于采用上述弗吉尼亞鏈霉菌種子菌液和白淺灰鏈霉菌種子菌液體積比為1:2.2～3的比例關(guān)系，可以顯示不同放線菌的混合發(fā)酵且二者繁殖生長(zhǎng)速度均較快，能夠較好的發(fā)揮其拮抗活性。
【專利說(shuō)明】
一種生防放線菌的發(fā)酵方法及應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及一種生防放線菌的發(fā)酵方法及應(yīng)用，屬于生物發(fā)酵液制備和應(yīng)用領(lǐng) 域。
【背景技術(shù)】
[0002] 放線菌是產(chǎn)生抗生素活性物質(zhì)最多的一類微生物，迄今已知的抗生素中，有2/3是 由放線菌產(chǎn)生。放線菌產(chǎn)生的許多抗生素能夠?qū)χ参锊≡a(chǎn)生很強(qiáng)的抑制殺滅作用。其 中許多抗生素已經(jīng)用于防治農(nóng)作物上的有害生物，如井閃霉素、春雷霉素等。
[0003] 近年來(lái)，利用拮抗微生物進(jìn)行生物防治越來(lái)越受到各國(guó)科學(xué)家的重視，已逐漸成 為植物病害防治研究的一大趨勢(shì)。放線菌是一類極其豐富的微生物資源，其中很多，尤其是 鏈霉菌屬能產(chǎn)生多種抗生素類物質(zhì)，用于植物病害防治有著廣闊的前景。
[0004] 但是放線菌的發(fā)酵是一個(gè)非常復(fù)雜的過(guò)程，受到很多環(huán)境條件的影響，除了培養(yǎng) 基的碳氮比、微量元素影響之外，還受培養(yǎng)時(shí)間、pH、溫度、通入空氣氣量等因素的影響。通 常在放線菌發(fā)酵的前期，是具體的生長(zhǎng)階段，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)被消耗、抗生素開(kāi)始產(chǎn)生。在發(fā)酵中 期，抗生素產(chǎn)生迅速。到后期，抗生素增長(zhǎng)緩慢，可能是由于菌體衰老、細(xì)胞開(kāi)始自溶，發(fā)酵 液中終產(chǎn)物的積累或者其它有害代謝對(duì)菌體產(chǎn)生影響，因此開(kāi)發(fā)出針對(duì)不同的生防菌選擇 不同的發(fā)酵條件的優(yōu)化是至關(guān)重要的。
[0005] 番茄最初稱之為"狼桃"。果實(shí)營(yíng)養(yǎng)豐富，具特殊風(fēng)味?？梢陨?、煮食、加工制成番 茄醬、汁或整果罐藏。番茄是全世界栽培最為普遍的果菜之一。味甘、酸，性涼，微寒。能清熱 止渴，養(yǎng)陰，涼血，歸肝、胃、肺經(jīng)。具有生津止渴，健胃消食，清熱解毒，涼血平肝，補(bǔ)血養(yǎng)血 和增進(jìn)食欲的功效。但是番茄生長(zhǎng)過(guò)程白粉病、炭疽病、黑斑病發(fā)病嚴(yán)重，大量農(nóng)藥的使用， 導(dǎo)致果實(shí)農(nóng)藥殘留超標(biāo)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明為了解決上述的技術(shù)問(wèn)題是提供一種生防放線菌的發(fā)酵方法及應(yīng)用。
[0007] 本發(fā)明解決上述技術(shù)問(wèn)題的技術(shù)方案如下：一種生防放線菌的發(fā)酵方法，特別是 涉及一種復(fù)合放線菌的發(fā)酵方法，包括以下步驟：
[0008] 步驟（1)分別制備弗吉尼亞鏈霉菌和白淺灰鏈霉菌的種子菌液，弗吉尼亞鏈霉菌 種子菌液菌量為1 ? 2~1 ? 5 X 105^/mL;白淺灰鏈霉菌2~5 X 1044/mL;
[0009] 步驟(2)向5L的發(fā)酵罐中加入1-3L發(fā)酵培養(yǎng)液，再加入步驟1)制備的弗吉尼亞鏈 霉菌種子菌液和白淺灰鏈霉菌種子菌液進(jìn)行混合發(fā)酵培養(yǎng)獲得混合發(fā)酵液，混合發(fā)酵液菌 量為 2-8X106-7/mL。
[0010]上述弗吉尼亞鏈霉菌在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心編號(hào)為： CGMCC No. 10042。白淺灰鏈霉菌在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心編號(hào)為 CGMCC No.6352〇
[0011]本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明混合發(fā)酵顯著提高發(fā)酵時(shí)間，且同時(shí)保持對(duì)病原菌 具有較好的拮抗活性。
[0012] 在上述技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，本發(fā)明還可以做如下改進(jìn)。
[0013] 本發(fā)明如上所述一種生防放線菌的發(fā)酵方法，進(jìn)一步，步驟(2)所述混合發(fā)酵培養(yǎng) 過(guò)程中，加入弗吉尼亞鏈霉菌種子菌液和白淺灰鏈霉菌種子菌液的體積比為1:2.2~3。
[0014] 采用上述進(jìn)進(jìn)一步的有益效果是：由于采用上述弗吉尼亞鏈霉菌種子菌液和白淺 灰鏈霉菌種子菌液體積比為1:2.2~3的比例關(guān)系，可以顯示不同放線菌的混合發(fā)酵且二者 繁殖生長(zhǎng)速度均較快，可以縮短至5天以內(nèi)，且能夠較好的發(fā)揮混合發(fā)酵液的拮抗活性，超 過(guò)該比例范圍，兩種菌可能由于存在互相競(jìng)爭(zhēng)或抑制的作用在相同的培養(yǎng)條件下均難以達(dá) 到其最高的拮抗活性，即對(duì)病原真菌具有較高的抑菌活性。
[0015] 本發(fā)明如上所述一種生防放線菌的發(fā)酵方法，進(jìn)一步，步驟（1)分別制備弗吉尼亞 鏈霉菌和白淺灰鏈霉菌的種子菌液的條件是分別在AAD培養(yǎng)基中28 °C、250r/min搖床培養(yǎng)3 天，分別獲得弗吉尼亞鏈霉菌和白淺灰鏈霉菌的種子菌液。所述搖床培養(yǎng)過(guò)程中通入空氣 氣量為750~850m 3/h。
[0016] 本發(fā)明如上所述一種生防放線菌的發(fā)酵方法，進(jìn)一步，所述AAD培養(yǎng)基包括可溶性 淀粉4 %，黃豆粉4%、葡萄糖2 %，酵母膏0.2 %，蛋白胨5 %，酵母膏5 %，碳酸鈣0.2 %、磷酸 二氫鉀0.2 %、氯化鈉0.2 %、硫酸鎂0.2 %，余下為水，pH 6.8-7。
[0017] 本發(fā)明如上所述一種生防放線菌的發(fā)酵方法，進(jìn)一步，步驟(2)混合發(fā)酵培養(yǎng)條件 是將弗吉尼亞鏈霉菌和白淺灰鏈霉菌在發(fā)酵培養(yǎng)液中28°C、150r-200r/min，搖培5天，獲得 混合發(fā)酵液。
[0018] 本發(fā)明如上所述一種生防放線菌的發(fā)酵方法，進(jìn)一步，搖培過(guò)程中通入空氣氣量 為750~850m3/h，通氣即通入空氣，為了微生物生長(zhǎng)提供足夠的氧氣。
[0019] 本發(fā)明如上所述一種生防放線菌的發(fā)酵方法，進(jìn)一步，所述發(fā)酵培養(yǎng)液為可溶性 淀粉5%，甘油5%，黃豆粉5%、葡萄糖5%，酵母膏5%，蛋白胨5%，酵母膏5%，碳酸鈣 0.2%、磷酸二氫鉀0.2%、氯化鈉0.2%、硫酸鎂0.2%、硫酸亞鐵0.2%，余下為水，pH 6.9。
[0020] 采用上述進(jìn)一步方案的有益效果是:采用上述特定的培養(yǎng)基配方可以顯著提高混 合放線菌生長(zhǎng)速度最快且能較好的發(fā)揮發(fā)酵液中活性物質(zhì)對(duì)病原菌的拮抗活性。
[0021] 本發(fā)明如上所述一種生防放線菌的發(fā)酵方法，進(jìn)一步，所述弗吉尼亞鏈霉菌拉丁 名為Streptomyces virginiae;所述白淺灰鏈霉菌拉丁名為Streptomyces albogriseolus〇
[0022] 本發(fā)明還提供一種生防放線菌的發(fā)酵方法制備的發(fā)酵液在防治番茄白粉病、炭疽 病、黑斑病及黃瓜枯萎病菌和黃瓜疫霉菌所致植物病菌中的應(yīng)用。
【具體實(shí)施方式】
[0023] 結(jié)合以下對(duì)本發(fā)明的原理和特征進(jìn)行描述，所舉實(shí)例只用于解釋本發(fā)明，并非用 于限定本發(fā)明的范圍。
[0024] 實(shí)施例1
[0025]本發(fā)明一種生防放線菌的發(fā)酵方法，包括以下步驟：
[0026] 步驟（1)分別制備弗吉尼亞鏈霉菌和白淺灰鏈霉菌的種子菌液，弗吉尼亞鏈霉菌 種子菌液菌量為1.2 X 105,白淺灰鏈霉菌2 X 104;具體地分別在AAD培養(yǎng)基中28°C、250r/min 搖床培養(yǎng)3天，分別獲得弗吉尼亞鏈霉菌和白淺灰鏈霉菌的種子菌液，所述搖床培養(yǎng)過(guò)程中 通入空氣氣量為850m3/h。
[0027] AAD培養(yǎng)基包括可溶性淀粉4%，黃豆粉4%、葡萄糖2%，酵母膏0.2%，蛋白胨5%， 酵母膏5%，碳酸鈣0.2%、磷酸二氫鉀0.2%、氯化鈉0.2%、硫酸鎂0.2%，余下為水，pH 6.8〇
[0028]步驟(2)向5L的發(fā)酵罐中加入1發(fā)酵培養(yǎng)液，再加入步驟1)制備的弗吉尼亞鏈霉菌 種子菌液和白淺灰鏈霉菌種子菌液進(jìn)行混合發(fā)酵培養(yǎng)獲得混合發(fā)酵液，混合發(fā)酵液菌量為 2.2 X 106;所述弗吉尼亞鏈霉菌種子菌液和白淺灰鏈霉菌種子菌液體積比為1: 2.5。具體 地，混合發(fā)酵培養(yǎng)條件是ADD培養(yǎng)基中28 °C、150r/min，搖培5天，獲得混合發(fā)酵液;搖培過(guò)程 中通入空氣的氣量為850m3/h。
[0029] 上述發(fā)酵培養(yǎng)液包括可溶性淀粉5 %，甘油5 %，黃豆粉5 %、葡萄糖5 %，酵母膏 5 %，蛋白胨5 %，酵母膏5 %，碳酸鈣0.2 %、磷酸二氫鉀0.2 %、氯化鈉0.2 %、硫酸鎂0.2 %、 硫酸亞鐵0.2%，余下為水，pH 6.9。
[0030] 實(shí)施例2
[0031] 本發(fā)明一種生防放線菌的發(fā)酵方法，包括以下步驟：
[0032] 步驟（1)分別制備弗吉尼亞鏈霉菌和白淺灰鏈霉菌的種子菌液，弗吉尼亞鏈霉菌 種子菌液菌量為1.5 X 106/mL，白淺灰鏈霉菌5 X 105/mL;具體地分別在AAD培養(yǎng)基中28°C、 250r/min搖床培養(yǎng)3天，分別獲得弗吉尼亞鏈霉菌和白淺灰鏈霉菌的種子菌液，所述搖床培 養(yǎng)過(guò)程中通入空氣氣量為850m 3/h。
[0033] 上述具體AAD培養(yǎng)基包括可溶性淀粉4%，黃豆粉4%、葡萄糖2%，酵母膏0.2%，蛋 白胨5 %，酵母膏5 %，碳酸鈣0.2 %、磷酸二氫鉀0.2 %、氯化鈉0.2 %、硫酸鎂0.2 %，余下為 水，pH 7〇
[0034]步驟(2)向5L的發(fā)酵罐中加入2L發(fā)酵培養(yǎng)液，再加入步驟1)制備的弗吉尼亞鏈霉 菌種子菌液和白淺灰鏈霉菌種子菌液進(jìn)行混合發(fā)酵培養(yǎng)獲得混合發(fā)酵液，混合發(fā)酵液菌量 為2.8 X 107/mL;所述弗吉尼亞鏈霉菌種子菌液和白淺灰鏈霉菌種子菌液體積比為1: 2.2~ 3。具體地，混合發(fā)酵培養(yǎng)條件是ADD培養(yǎng)基中28 °C、200r/min，搖培5天，獲得混合發(fā)酵液;搖 培過(guò)程中通入空氣氣量為850m3/h。
[0035] 上述發(fā)酵培養(yǎng)液包括可溶性淀粉5 %，甘油5 %，黃豆粉5 %、葡萄糖5 %，酵母膏 5 %，蛋白胨5 %，酵母膏5 %，碳酸鈣0.2 %、磷酸二氫鉀0.2 %、氯化鈉0.2 %、硫酸鎂0.2 %、 硫酸亞鐵0.2%，余下為水，pH 6.9。
[0036] 實(shí)施例3
[0037] 本發(fā)明一種生防放線菌的發(fā)酵方法，包括以下步驟：
[0038] 步驟（1)分別制備弗吉尼亞鏈霉菌和白淺灰鏈霉菌的種子菌液，弗吉尼亞鏈霉菌 種子菌液菌量為1.2 X 105/mL，白淺灰鏈霉菌5 X 104/mL;具體地分別在AAD培養(yǎng)基中28°C、 250r/min搖床培養(yǎng)3天，分別獲得弗吉尼亞鏈霉菌和白淺灰鏈霉菌的種子菌液，所述搖床培 養(yǎng)過(guò)程中通入空氣氣量為850m 3/h。
[0039]上述具體AAD培養(yǎng)基包括可溶性淀粉4%，黃豆粉4%、葡萄糖2%，酵母膏0.2%，蛋 白胨5 %，酵母膏5 %，碳酸鈣0.2 %、磷酸二氫鉀0.2 %、氯化鈉0.2 %、硫酸鎂0.2 %，余下為 水，pH 6.8。
[0040] 步驟(2)向5L的發(fā)酵罐中加入3L發(fā)酵培養(yǎng)液，再加入步驟(1)制備的弗吉尼亞鏈霉 菌種子菌液和白淺灰鏈霉菌種子菌液進(jìn)行混合發(fā)酵培養(yǎng)獲得混合發(fā)酵液，混合發(fā)酵液菌量 為8X10 6/mL;所述弗吉尼亞鏈霉菌種子菌液和白淺灰鏈霉菌種子菌液體積比為1:2.2。具 體混合發(fā)酵培養(yǎng)條件是ADD培養(yǎng)基中28 °C、150r/min，搖培5天，獲得混合發(fā)酵液;搖培過(guò)程 中通入空氣氣量為750m3/h。
[0041] 所述發(fā)酵培養(yǎng)液包括可溶性淀粉5 %，甘油5 %，黃豆粉5 %、葡萄糖5 %，酵母膏 5 %，蛋白胨5 %，酵母膏5 %，碳酸鈣0.2 %、磷酸二氫鉀0.2 %、氯化鈉0.2 %、硫酸鎂0.2 %、 硫酸亞鐵0.2%，余下為水，pH 6.9。
[0042] 實(shí)施例4
[0043] 本發(fā)明一種生防放線菌的發(fā)酵方法，特別是涉及一種復(fù)合放線菌的發(fā)酵方法，包 括以下步驟：
[0044] 步驟（1)分別制備弗吉尼亞鏈霉菌和白淺灰鏈霉菌的種子菌液，弗吉尼亞鏈霉菌 種子菌液菌量為1.2~1.5 X 106/mL，白淺灰鏈霉菌2~5 X 105/mL;具體地分別在AAD培養(yǎng)基 中28°C、250r/min搖床培養(yǎng)3天，分別獲得弗吉尼亞鏈霉菌和白淺灰鏈霉菌的種子菌液，所 述搖床培養(yǎng)過(guò)程中通入空氣氣量為750~850m 3/h。
[0045]上述具體AAD培養(yǎng)基包括可溶性淀粉4%，黃豆粉4%、葡萄糖2%，酵母膏0.2%，蛋 白胨5 %，酵母膏5 %，碳酸鈣0.2 %、磷酸二氫鉀0.2 %、氯化鈉0.2 %、硫酸鎂0.2 %，余下為 水，pH 6.8。
[0046]步驟(2)向5L的發(fā)酵罐中加入2.5L發(fā)酵培養(yǎng)液，再加入步驟1)制備的弗吉尼亞鏈 霉菌種子菌液和白淺灰鏈霉菌種子菌液進(jìn)行混合發(fā)酵培養(yǎng)獲得混合發(fā)酵液，混合發(fā)酵液菌 量為5.2X106/mL;所述弗吉尼亞鏈霉菌種子菌液和白淺灰鏈霉菌種子菌液體積比為1:3。 具體地，混合發(fā)酵培養(yǎng)條件是ADD培養(yǎng)基中28 °C、150r/min，搖培5天，獲得混合發(fā)酵液;搖培 過(guò)程中通入空氣氣量為750m3/h。
[0047]所述發(fā)酵培養(yǎng)液包括可溶性淀粉5 %，甘油5 %，黃豆粉5 %、葡萄糖5 %，酵母膏 5 %，蛋白胨5 %，酵母膏5 %，碳酸鈣0.2 %、磷酸二氫鉀0.2 %、氯化鈉0.2 %、硫酸鎂0.2 %、 硫酸亞鐵0.2%，余下為水，pH 6.9。
[0048] 對(duì)比例1
[0049] 本發(fā)明一種生防放線菌的發(fā)酵方法，特別是涉及一種復(fù)合放線菌的發(fā)酵方法，包 括以下步驟：
[0050] 步驟（1)分別制備弗吉尼亞鏈霉菌和白淺灰鏈霉菌的種子菌液，弗吉尼亞鏈霉菌 種子菌液菌量為1.5 X 106/mL，白淺灰鏈霉菌2~5 X 105/mL;具體地分別在高氏一號(hào)液體中 28°C、250r/min搖床培養(yǎng)3天，分別獲得弗吉尼亞鏈霉菌和白淺灰鏈霉菌的種子菌液，所述 搖床培養(yǎng)過(guò)程中通入空氣氣量為850m 3/h。
[0051]步驟(2)向5L的發(fā)酵罐中加入發(fā)酵培養(yǎng)液，再加入步驟1)制備的弗吉尼亞鏈霉菌 種子菌液和白淺灰鏈霉菌種子菌液進(jìn)行混合發(fā)酵培養(yǎng)獲得混合發(fā)酵液，混合發(fā)酵液菌量為 2.3 X 104/mL;所述弗吉尼亞鏈霉菌種子菌液和白淺灰鏈霉菌種子菌液體積比為1:1.具體 地，混合發(fā)酵培養(yǎng)條件是高氏一號(hào)液體中28 °C、150r/min，搖培20天，獲得混合發(fā)酵液;搖培 過(guò)程中通入空氣氣量為850m3/h。
[0052] 對(duì)比例2
[0053]本發(fā)明一種生防放線菌的發(fā)酵方法，特別是涉及一種復(fù)合放線菌的發(fā)酵方法，包 括以下步驟：
[0054] 步驟（1)制備弗吉尼亞鏈霉菌種子菌液，弗吉尼亞鏈霉菌種子菌液菌量為1.5 X 106/mL;具體地分別在高氏一號(hào)液體中28°C、250r/min搖床培養(yǎng)3天，獲得弗吉尼亞鏈霉菌， 所述搖床培養(yǎng)過(guò)程中通入空氣氣量為850m 3/h。
[0055]步驟(2)向5L的發(fā)酵罐中發(fā)酵培養(yǎng)液，再加入步驟1)制備的弗吉尼亞鏈霉菌種子 菌液進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)獲得發(fā)酵液，發(fā)酵液菌量為2.3 X 106/mL。具體地，發(fā)酵培養(yǎng)條件是高氏 一號(hào)液體中28°C、150r/min，搖培16天，獲得發(fā)酵液;搖培過(guò)程中通入空氣氣量為850m 3/h。 [0056] 對(duì)比例3
[0057]本發(fā)明一種生防放線菌的發(fā)酵方法，特別是涉及一種復(fù)合放線菌的發(fā)酵方法，包 括以下步驟：
[0058] 步驟（1)制備白淺灰鏈霉菌種子菌液，白淺灰鏈霉菌種子菌液菌量為1.5 X 106;具 體地分別在高氏一號(hào)液體中28°C、250r/min搖床培養(yǎng)3天，獲得白淺灰鏈霉菌的種子菌液， 所述搖床培養(yǎng)過(guò)程中通入空氣氣量為850m3/h。
[0059] 步驟(2)向5L的發(fā)酵罐中加入發(fā)酵培養(yǎng)液，再加入步驟1)制備的白淺灰鏈霉菌菌 液進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)獲得發(fā)酵液，發(fā)酵液菌量為2.8 X 106。具體地，發(fā)酵培養(yǎng)條件是高氏一號(hào)液 體中28°(：、15(^/1^11，搖培15天，獲得發(fā)酵液 ;搖培過(guò)程中通入空氣氣量為85〇1113/11。
[0060] 采用實(shí)施例1至4與對(duì)比例1至對(duì)比例3發(fā)酵液對(duì)番茄白粉病、炭疽病、黑斑病及黃 瓜枯萎病菌和黃瓜疫霉菌的抑菌實(shí)驗(yàn)。
[0061] 將實(shí)施例1至4與對(duì)比例1至對(duì)比例3得到的發(fā)酵液作為生測(cè)樣品，以番茄白粉病、 炭疽病、黑斑病及黃瓜枯萎病和黃瓜疫霉病為供試菌。將發(fā)酵液與PDA培養(yǎng)基以1:9的比例 混合制成平板在中央分別接入供試菌的菌餅直徑為5mm，并且以無(wú)菌水處理作為對(duì)照，培養(yǎng) 3d，采用十字交叉法測(cè)定抑菌圈直徑，每個(gè)處理重復(fù)3次。PDA培養(yǎng)基成分為馬鈴薯200g，葡 萄糖 20g，瓊脂 15-20g，水1000ml。
[0062] 實(shí)施例1至4與對(duì)比例1至對(duì)比例3制備的發(fā)酵液對(duì)番茄白粉病、炭疽病、黑斑病及 黃瓜枯萎病和黃瓜疫霉病抑制效果的實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。
[0064] 以上結(jié)果顯示，本發(fā)明混合發(fā)酵培養(yǎng)獲得的發(fā)酵液具有較好的抑制作用，與對(duì)比 例相比，可以顯著縮短發(fā)酵時(shí)間，可望制成生物農(nóng)藥，具有較高的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益。
[0065] 以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和 原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種生防放線菌的發(fā)酵方法，特別是涉及一種復(fù)合放線菌的發(fā)酵方法，其特征在于， 包括以下步驟： 步驟（1)分別制備弗吉尼亞鏈霉菌和白淺灰鏈霉菌的種子菌液，弗吉尼亞鏈霉菌種子 菌液菌量為1.2~1.5 X lO^VmL;白淺灰鏈霉菌菌量為2~5 X 1044/mL; 步驟(2)向5L的發(fā)酵罐中加入1-3L發(fā)酵培養(yǎng)液，再加入步驟1)制備的弗吉尼亞鏈霉菌 種子菌液和白淺灰鏈霉菌種子菌液進(jìn)行混合發(fā)酵培養(yǎng)獲得混合發(fā)酵液，混合發(fā)酵液菌量為 2 ~8X106-7/mL。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種生防放線菌的發(fā)酵方法，其特征在于，步驟(2)所述混合發(fā) 酵培養(yǎng)過(guò)程中，加入弗吉尼亞鏈霉菌種子菌液和白淺灰鏈霉菌種子菌液的體積比為1: 2.2 ~3〇3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種生防放線菌的發(fā)酵方法，其特征在于，步驟（1)所述弗吉尼 亞鏈霉菌和白淺灰鏈霉菌的種子菌液的條件是分別在AAD培養(yǎng)基中28°C、250r/min搖床培 養(yǎng)3天，分別獲得弗吉尼亞鏈霉菌和白淺灰鏈霉菌的種子菌液。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述一種生防放線菌的發(fā)酵方法，其特征在于，所述AAD培養(yǎng)基包括 可溶性淀粉4%，黃豆粉4%、葡萄糖2%，酵母膏0.2%，蛋白胨5%，酵母膏5%，碳酸鈣 0.2 %、磷酸二氫鉀0.2 %、氯化鈉0.2 %、硫酸鎂0.2 %，余下為水，pH 6.8-7。5. 根據(jù)權(quán)利要求1至4任一項(xiàng)所述一種生防放線菌的發(fā)酵方法，其特征在于，步驟(2)混 合發(fā)酵培養(yǎng)條件是將弗吉尼亞鏈霉菌和白淺灰鏈霉菌在發(fā)酵培養(yǎng)液中28°C、150r-200r/ min，搖培5天，獲得混合發(fā)酵液。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述一種生防放線菌的發(fā)酵方法，其特征在于，搖培過(guò)程中通氣量為 750 ~850m3/h。7. 根據(jù)權(quán)利要求5所述一種生防放線菌的發(fā)酵方法，其特征在于，所述發(fā)酵培養(yǎng)液為可 溶性淀粉5 %，甘油5 %，黃豆粉5 %、葡萄糖5 %，酵母膏5 %，蛋白胨5 %，酵母膏5 %，碳酸鈣 0.2%、磷酸二氫鉀0.2%、氯化鈉 0.2%、硫酸鎂0.2%、硫酸亞鐵0.2%，余下為水，pH 6.9。8. 根據(jù)權(quán)利要求1至4任一項(xiàng)所述一種生防放線菌的發(fā)酵方法，其特征在于，所述弗吉 尼亞鏈霉菌拉丁名為Streptomyces virginiae;所述白淺灰鏈霉菌拉丁名為Streptomyces albogriseolus〇9. 一種權(quán)利要求1至8任一項(xiàng)所述生防放線菌的發(fā)酵方法制備的發(fā)酵液在防治番茄白 粉病、炭疽病、黑斑病及黃瓜枯萎病菌和黃瓜疫霉菌所致植物病菌中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】C12N1/20GK105820974SQ201610191193
【公開(kāi)日】2016年8月3日
【申請(qǐng)日】2016年3月30日
【發(fā)明人】李立梅, 陳越渠
【申請(qǐng)人】原巍俊